Name: a modified surgical model of hind limb ischemia in apoe-/- mice using a miniature incision
Uploaded: 2021-05-13T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision at JoVE.com

저자는 뛰어난 기술 지원에 대한 빅토리아 스쿠드, 알렉산더 슐룬드, 펠릭스 회너에게 감사드립니다.

참고: 모든 실험 절차는 EC 지침 EC 2010/63/EU에 따라 수행되었으며 현지 독일 법률(35-9185.81/G[1]239/18)의 승인을 받았습니다. C57BL/6J 배경이 29.6-38.0g인 10마리의 수컷 아포에 마우스는 12시간 광/암흑주기에 보관되어 서양 식단(콜레스테롤 1.25%, 지방 21%)과 8주 부터 12주 동안 물 광고 리비툼을 공급하였다. HLI는 아래에 설명된 바와 같이 20주 된 마우스에 수행되었다.
1. Ap...

이 연구는 필요한 실험실 업그레이드없이 3-4mm 절개를 통해 FA의 근위 및 탈산 영역에서 이중 결찰을 사용하여ApoE-/-마우스에 HLI 모델을 확립하기 위한 수정, 단순화 및 외과 효율적인 접근법을 보고합니다. 이 방법의 주요 특징은 마우스 HLI 모델8,9,10,11,12,...

말초 동맥 질환 (PAD)과 같은 혈관 질환연구를 위한 전임상 동물 모델에 대한 충족되지 않은 필요성이 있습니다. 진단 및 치료의 고급 발달에도 불구하고 2018 년1에서 PAD를 가진 2 억 명 이상의 환자가 있었고 그 수는 지속적으로 증가하고 있습니다. 비록 몇몇 새로운 치료 접근법2,3,4,5,6,7이 기술되었지만, 이러한 치료 양식의 성공적인 번역을 임상 응용 프로그램으로 성공적으로 번역하는 것은 어려운 작업으로 남아 있다. 따라서, 인간 질환 상태를 시뮬레이션하는 생체 내 실험 모델에서 안정적이고 관련성이 높은 이러한 새로운 치료 접근법의 잠재적 기전및 효율을 조사하여 PAD6,7을치료해야 한다.
고지혈증과 죽상 경화증 (AS)은 PAD의 발달을위한 주요 위험 요소입니다. ApoE-/-- 마우스(고지방 식단)는 비정상적인 지방 대사와 고지혈증을 표시하고, 이후ApoE-/-마우스를 임상적으로 관련 있는 PAD를 시뮬레이션하는 최선의 선택으로 동맥 경화성 플라크를 개발한다. 전임상 HLI 동물 모델은 전 세계8, 9,10, 11,12,13,14,15에 걸쳐 실험실에서 가장 널리 사용되는 접근법인 대퇴동맥(DLFA)의 이중 결찰을 통해 생성된다. 그러나, 이 접근은 일반적으로 상대적으로 크고 침략적인 절개를 요구합니다. 더욱이, 그것은 필연적으로 증가 된 통증 손상 및 염증으로 고통받는 동물 (특히 마우스)으로 이어지며, 이는 또한 후속 실험 결과에 영향을 미치는5,6,16,17. 이 논문은 매우 작은 절개를 사용하여APOE-/-마우스의 급성 만성 HLI 모델을 설명합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >10x Phosphate buffer saline</td>
			<td >Roth</td>
			<td >9143.1</td>
			<td >Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >30% H2O2</td>
			<td >Roth</td>
			<td >9681.2</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >6-0 absorbable sutures</td>
			<td>PROLENE</td>
			<td>8776H</td>
			<td>Used for stitching the skin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >6-0 absroable suture</td>
			<td >PROLENE</td>
			<td >EP8706</td>
			<td>Used in Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >7-0 absorbable sutures</td>
			<td>PROLENE</td>
			<td >EH8021E</td>
			<td>Used for ligating the artery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >7-0 absroable suture</td>
			<td >PROLENE</td>
			<td >EP8755</td>
			<td>Used in Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Acetic acid</td>
			<td >Roth</td>
			<td>6755.1</td>
			<td>Used for haematoxylin and eosin stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Albumin Fraktion V</td>
			<td >Roth</td>
			<td >8076.2</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Autoclave</td>
			<td >Systec GmbH</td>
			<td >Systec VX-150</td>
			<td>Used for the sterilisation of the surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Axio vert A1 microscope</td>
			<td >Carl Zeiss</td>
			<td >ZEISS Axio Vert.A1</td>
			<td>Used for viewing and taking the pictures from haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Bruker BioSpec 94/20 AVIII</td>
			<td >Bruker Biospin MRI GmbH</td>
			<td >N/A</td>
			<td>Scan the femoral artery blockage</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Buprenovet Sine 0,3mg/ml</td>
			<td >Bayer AG</td>
			<td >2542 (WDT)</td>
			<td>Used in post operative pain-management. Dose - 0.1 mg/kg body weight every 8 hours for 48 h after operation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CD31 antibody</td>
			<td >Abcam</td>
			<td >ab28364</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Eosin Y solution 0.5 % in water</td>
			<td >Roth</td>
			<td >X883.1</td>
			<td>Used for haematoxylin and eosin stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Epitope Retrieval Solution pH 6</td>
			<td >Leica Biosystems</td>
			<td >6046945</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ethanol &#8805; 99,5 %</td>
			<td >Roth</td>
			<td >5054.1</td>
			<td>Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fentanyl</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td >437-38-7</td>
			<td>Used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fine point forceps</td>
			<td >Medixplus</td>
			<td >93-4505S</td>
			<td>Used for separating the artery from nerve and vein</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass bead sterilisator</td>
			<td >Simon Keller</td>
			<td >Type 250</td>
			<td>Used for sterilisation of the surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Graefe iris forceps curved</td>
			<td >VUBU</td>
			<td >VUBU-02-72207</td>
			<td>Used for blunt separation of skin and subcutaneous tissue</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hair Remover cream, Veet (with aloe vera)</td>
			<td >Reckitt Benckiser</td>
			<td >108972</td>
			<td>Remove hair from mice hind limbs</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heating plate</td>
			<td >ST&#214;RK-TRONIC</td>
			<td >7042092</td>
			<td>Keep the satble temperature of mice</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hematoxylin</td>
			<td >Roth</td>
			<td >T865.2</td>
			<td>Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Leica surgical microscope</td>
			<td >Leica</td>
			<td >M651</td>
			<td>Enlarge the field of view to facilitate the operation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Liquid DAB+Substrate Chromogen System</td>
			<td >Dako</td>
			<td >K3468</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Male ApoE-/- mice</td>
			<td >Charles River Laboratories</td>
			<td >N/A</td>
			<td>Used for establish the Peripheral artery disease mice model</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Medetomidine</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>128366-50-7</td>
			<td>Used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micro Needle Holder</td>
			<td >Black &#38; Black Surgical</td>
			<td >B3B-18-8</td>
			<td>Holding the needle</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micro suture tying forceps</td>
			<td >Life Saver Surgical Industries</td>
			<td >PS-MSF-145</td>
			<td>Used to assist in knotting during surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microtome</td>
			<td >Biobase</td>
			<td >Bk-Mt268m</td>
			<td>Used for tissue sectioning</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Midazolam</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td>44856.01.00</td>
			<td>Used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MR-compatible Small Animal Monitoring and Gating System Model 1025</td>
			<td>SA Instruments</td>
			<td>N/a</td>
			<td>monitoring vital signs of animal during MRI scan</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Octeniderm farblos</td>
			<td >Sch&#252;lke &#38; Mayr GmbH</td>
			<td >180212</td>
			<td>used for disinfection of the skin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ointment for the eyes and nose</td>
			<td >Bayer AG</td>
			<td >1578675</td>
			<td>Keep the eyes wet under the anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paraformaldehyde</td>
			<td >Roth</td>
			<td >0335.1</td>
			<td>Used for fixation of the tissue</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Pentobarbital</td>
			<td>Nembutal</td>
			<td >76-74-4</td>
			<td>Used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Saline</td>
			<td>DeltaSelect</td>
			<td >1299.99.99</td>
			<td>Used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Spring handle scissors with fine, sharp tips</td>
			<td >Black &#38; Black Surgical</td>
			<td >B66167</td>
			<td>Used for cutting the artery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >SuperCut Scissors</td>
			<td >Black &#38; Black Surgical</td>
			<td >B55992</td>
			<td>Used for cutting the skin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Triton X-100</td>
			<td >Roth</td>
			<td >9002-93-1</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Western diet, 1.25% Cholesterol</td>
			<td >ssniff Spezialdi&#228;ten GmbH</td>
			<td >E15723-34</td>
			<td>Diet for the mice</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Xylene</td>
			<td >Roth</td>
			<td >4436.3</td>
			<td>Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified surgical model of hind limb ischemia in apoe-/- mice using a miniature incision

이 연구의 목적은 대부분의 동물 실험실에서 구현 될 수있는 마우스에서 급성 허혈을 유도하기 위해 수정 된 수술 방법을 도입하고 평가하는 것입니다. 대퇴동맥(DLFA)의 이중 결찰에 대한 기존의 접근법과는 달리, DLFA를 수행하기 위해 근위 대퇴동맥(FA)을 노출시키기 위해 올바른 인게날 부위에 대한 작은 절개가 이루어졌다. 이어서, 7-0 봉합사를 사용하여, 절개는 말단 FA를 노출하기 위해 무릎 영역으로 끌려갔다. 수술 후 0, 1, 3, 5 및 7일 동안, 뒷사지의 기능적 회복은 탈로프 스케일을 사용하여 시각적으로 평가되고 등급화되었다. 히스토로지평가는 DLFA 이후 7일 후에 동물을 안락사한 후 수행되었다. 절차는 성공적으로 10 ApoE-/- 마우스에 있는 오른쪽 다리에, 그리고 어떤 마우스는 후속 관찰 도중 정지했습니다. 10마리의 마우스 의 절개 크기는 5mm(4.2± 0.63mm) 미만이었다. MRI 결과는 허혈성 측의 FA 혈류가 명확하게 차단되었다는 것을 보여주었습니다. Tarlov 스케일 결과는 수술 후 뒷다리 기능이 현저히 감소하고 다음 7일 동안 서서히 회복되었다는 것을 보여주었습니다. 조직학적 평가는 허혈성 측에 상당한 염증 반응을 보였고 허혈성 뒷두발의 미세 혈관 밀도를 감소시키는 것으로 나타났다. 결론적으로, 이 연구는 DLFA를 사용하여 뒷다리 허혈 (HLI)을 수행하기 위해 소형 절개를 사용하여 수정 된 기술을 소개합니다.

아포에의 특성-/-- 마우스 DLFA 수술은 HLI 모델을 확립하기 위해 10마리의 마우스에서 성공적으로 수행되었으며, 수술 후 마우스 중 누구도 사망하지 않았습니다. 체중의 변화를 따르기 위해, 마우스는 DLFA 절차 (PRE DLFA) 및 DLFA 수술 후 7 일 전에 무게를 측정했다 (포스트 DLFA). 사전 DLFA 가중치는 29.6에서 38.0g(평균 34.74 ± 2.47g)이며, DLFA 이후 의 무게는 26...

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A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

이 문서는 작은 절개를 가진 마우스에 있는 심각한 허혈을 확립하기 위하여 능률적인 외과 접근을 보여줍니다. 이 방법은 실험실 업그레이드없이 대부분의 연구 그룹에 의해 적용 될 수있다.

ApoE에서 뒷다리 허혈의 변형 된 수술 모델-/- 소형 절개를 사용하여 마우스

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most ...

우리가 오늘 소개한 것은 ApoE 마우스에 뒷다리 이혈증을 확립하기 위하여 단순화된 수정되고 외과적으로 능률적인 방법입니다. 이 방법은 모든 동물 시설에서 구현할 수 있습니다. 용압 방법의 주요 장점은 5 밀리미터 미만의 절개를 사용하여 낮은 침습성입니다.이 방법에는 학습 hof가 있습니다. 따라서 최종 분석에 포함될 동물에 대해 작업하기 전에 미세 수술 모델을 연습하는 것이 좋습니다. 이 방법은 의학 의사인 Kaixuan Yan과 제 실험실의 학생에 의해 입증될 것입니다.수술에 필요한 장비와 도구를 준비하여 시작합니다. 마우스에 마취를 투여 한 후, 건조를 방지하기 위해 눈에 그 연고를 적용합니다. 그런 다음 마우스를 가열 패드에 놓고 코어 체온을 섭씨 약 37도에서 유지합니다.면 봉면과 제모 크림을 사용하여 오른쪽의 뒷다리 피부에서 모발을 조심스럽게 제거합니다. 해부 현미경아래 가열 패드의 척추 위치에 마우스를 놓습니다. 알코올을 사용하여 피부를 소독하고 절개 의 식물 측에서 멀리 면으로 닦아.뾰족한 집게와 외과 가위를 사용하여 인구이날 부위의 한가운데에서 약 3~4밀리미터절개를 한다. 조심스럽게 근위 대퇴 신경 혈관 번들을 노출하는 미세 뾰족한 집게의 도움으로 피하 지방 조직을 제거합니다. 식염수로 촉촉한 면봉을 사용하여 대퇴동맥을 대퇴신경과 대퇴정맥에서 조심스럽게 옮겨서 움직입니다.그런 다음 7.0 봉합사의 끝을 사용하여 대퇴 칼집의 막을 조심스럽게 관통합니다. 그런 다음 근위 대퇴 동맥을 통해 7-0 흡수 가능한 봉합사에 전달하고 스프링 가위를 사용하여 이중 매듭을 만듭니다. 그 후 두 관계 사이의 대퇴 동맥을 분리.절개 하부 가장자리를 통해 6-0 흡수 가능한 봉합사를 통과하고 후드 사지의 무릎 오른쪽 부위로 절개를 부드럽게 드래그하여 태아 동맥을 노출시합니다. 조심스럽게 피하 조직을 옆으로 움직여 신경 혈관 번들을 노출시합니다. 대퇴정맥과 대퇴신경으로부터 대퇴동맥을 해부하고 면화로 신경을 보호한다.그런 다음 7.0 봉합사의 끝을 사용하여 대퇴 칼집의 막을 관통합니다. 두 개의 7-0 흡수 성 봉합사를 탈모 성 동맥을 통과하고 스프링 가위를 사용하여 두 개의 동점 사이의 대퇴동맥을 트랜스포메이크합니다. 그 후, 6-0 흡수성 봉합사를 사용하여 절개를 바느질한다.깨끗한 케이지에 가열 패드에 마우스를 놓고 복구 될 때까지 중요한 매개 변수를 계속 모니터링합니다. MRI를 통해 다음 날 대퇴동맥 또는 DLFA의 이중 결찰의 성공을 결정합니다. DLFA 절차 전에, 마우스의 무게는 29.6에서 38.0 그램에 구역 수색했습니다.DLFA 수술 후 7 일, 무게범위 26.5 받는 사람의 34.1 그램, 이전 DLFA 무게 보다 훨씬 낮은. 오른쪽 FA의 근위 및 탈구 영역은 더 많은 구류를 보여주지 않았다. 탈로프 스케일 결과는 수술 후 하루 만에 크게 감소했습니다.그(것)들은 다음 일 동안 천천히 증가하더라도, 7 일까지 기준선 보다는 아직도 낮았습니다. 7마리의 마우스에 있는 허혈성 뒷다리의 발은 반대로 측에 비해 자연적으로 스트레칭할 수 없었습니다. 또한, 마우스 의 4개는 반대로 측에 비해 발의 약간의 변색을 나타냈다.오른쪽 GM 근육의 H&E 염색은 불규칙한 허혈성 괴사를 전시하는 근섬유를 밝혔는데, 여기서 확산위성 세포가 괴사 심섬유를 대체하고 질량또는 정기적인 분산으로 분배되었다. 다핵대식 세포에 의한 염증성 침투를 나타내는 근섬유는 정상적인 형태학적 특성을 잃었으며, 재생된 근섬유가 거의 존재하지 않았다. 이 재생된 근섬유의 횡단 구간은 둥글게 진행되었다.세포질은 적색으로 염색되었고 하나의 작은 핵 또는 다중 핵이 중앙에 위치했다. 그러나, 염증 패턴의이 종류는 왼쪽 GM에서 관찰 되지 않았다. CD31 항체 염색은 미세 혈관 밀도를 관찰하기 위해 수행, 허혈성 뒷다리가 비 허혈성 측보다 훨씬 더 많은 미세 혈관 밀도를 나타냈다. 가장 중요한 것은 대퇴동맥의 해부입니다.작업자는 미세 수술 기술뿐만 아니라 마우스 뒷다리 해부학에 익숙해져야합니다. 원칙적으로,이 방법은 또한 다리에 이혈 혈증 -reperfusion 부상을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이에 따라, 동맥은 재퍼퓨전을 허용하기 전에 부드러운 용기 클램프로 가려질 수 있다.

Research

JoVE Journal

Biology

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