Name: a modified surgical model of hind limb ischemia in apoe-/- mice using a miniature incision
Uploaded: 2021-05-13T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision at JoVE.com

Yazarlar Viktoria Skude, Alexander Schlund ve Felix Hörner'e mükemmel teknik destek için teşekkür ediyor.

NOT: Tüm deneysel prosedürler EC 2010/63/EU kılavuzuna göre gerçeklenmiş ve yerel Alman mevzuatı tarafından onaylanmıştır (35-9185.81/G[1]239/18). C57BL/6J arka planı 29.6-38.0 g ağırlığındaki on erkek ApoE-/- fare, 12 saat açık / karanlık bir döngüde barındırıldı ve 8 haftalıktan itibaren 12 hafta boyunca batı diyeti (% 1.25 kolesterol ve% 21 yağ) ve su reklam libitum ile beslendi. HLI, aşağıda açıklandığı gibi 20 haftalık fareler üzerinde gerçekleştirildi.</p...

Bu çalışma, gerekli laboratuvar yükseltmeleri yapılmadan 3-4 mm'lik bir kesi yoluyla SK'nın proksimal ve distal bölgelerinde çift ligasyon kullanarak ApoE-/- farelerde HLI modeli oluşturmak için modifiye edilmiş, basitleştirilmiş ve cerrahi olarak verimli bir yaklaşım bildirmektedir. Bu yöntemin temel özelliği, fare HLI modellerini açıklayan daha önce bildirilen çalışmalara kıyasla kesiğin daha küçük boyutudur 8 ,9,10<...

Periferik arter hastalığı (PAD) gibi damar hastalıklarında araştırma için klinik öncesi hayvan modellerinin karşılanmamış bir ihtiyacı vardır. Tanı ve tedavideki ileri gelişmelere rağmen, 2018'de 200 milyondan fazla PAD hastası vardı1ve sayıları sürekli artmaktadır. Çeşitli yeni terapötik yaklaşımlar2,3,4,5,6,7 tanımlanmış olsada,bu terapötik yöntemlerin klinik uygulamaya başarılı bir şekilde çevrilmeleri göz korkutucu bir görev olmaya devam etmektedir. Bu nedenle, pad6,7tedavi etmek için bu yeni terapötik yaklaşımların potansiyel mekanizmasını ve verimliliğini araştırmak için insan hastalığı durumunu simüle eden güvenilir ve ilgili in vivo deneysel modeller gereklidir.
Hiperlipidemi ve ateroskleroz (AS) PAD gelişimi için başlıca risk faktörleridir. ApoE-/- fareler (yüksek yağlı bir diyette) anormal yağ metabolizması ve hiperlipidemi gösterir ve daha sonra klinik olarak ilgili PAD'i simüle etmek için en iyi seçim olarak ApoE-/- fareleri işleyen aterosklerotik plaklar geliştirir. Preklinik HLI hayvan modelleri, tüm dünyadaki laboratuvarlarda en yaygın kullanılan yaklaşım olan femoral arterin (DLFA) çift ligasyonu yoluyla üretilir8, 9,10,11,12,13,14,15 akut-kronik iskemiyi simüle etmek için. Bununla birlikte, bu yaklaşım genellikle nispeten büyük ve invaziv bir kesi gerektirir. Ayrıca, kaçınılmaz olarak hayvanlara (özellikle farelere) artan ağrı yaralanması ve iltihaplanmadan muzdariptir, bu da sonraki deneysel sonuçları etkiler 5,6,16,17. Bu makalede, APOE-/- farelerde akut-kronik HLI modeli çok küçük bir kesi kullanılarak açıklanmaktadır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >10x Phosphate buffer saline</td>
			<td >Roth</td>
			<td >9143.1</td>
			<td >Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >30% H2O2</td>
			<td >Roth</td>
			<td >9681.2</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >6-0 absorbable sutures</td>
			<td>PROLENE</td>
			<td>8776H</td>
			<td>Used for stitching the skin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >6-0 absroable suture</td>
			<td >PROLENE</td>
			<td >EP8706</td>
			<td>Used in Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >7-0 absorbable sutures</td>
			<td>PROLENE</td>
			<td >EH8021E</td>
			<td>Used for ligating the artery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >7-0 absroable suture</td>
			<td >PROLENE</td>
			<td >EP8755</td>
			<td>Used in Surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Acetic acid</td>
			<td >Roth</td>
			<td>6755.1</td>
			<td>Used for haematoxylin and eosin stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Albumin Fraktion V</td>
			<td >Roth</td>
			<td >8076.2</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Autoclave</td>
			<td >Systec GmbH</td>
			<td >Systec VX-150</td>
			<td>Used for the sterilisation of the surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Axio vert A1 microscope</td>
			<td >Carl Zeiss</td>
			<td >ZEISS Axio Vert.A1</td>
			<td>Used for viewing and taking the pictures from haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Bruker BioSpec 94/20 AVIII</td>
			<td >Bruker Biospin MRI GmbH</td>
			<td >N/A</td>
			<td>Scan the femoral artery blockage</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Buprenovet Sine 0,3mg/ml</td>
			<td >Bayer AG</td>
			<td >2542 (WDT)</td>
			<td>Used in post operative pain-management. Dose - 0.1 mg/kg body weight every 8 hours for 48 h after operation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CD31 antibody</td>
			<td >Abcam</td>
			<td >ab28364</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Eosin Y solution 0.5 % in water</td>
			<td >Roth</td>
			<td >X883.1</td>
			<td>Used for haematoxylin and eosin stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Epitope Retrieval Solution pH 6</td>
			<td >Leica Biosystems</td>
			<td >6046945</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ethanol &#8805; 99,5 %</td>
			<td >Roth</td>
			<td >5054.1</td>
			<td>Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fentanyl</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td >437-38-7</td>
			<td>Used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fine point forceps</td>
			<td >Medixplus</td>
			<td >93-4505S</td>
			<td>Used for separating the artery from nerve and vein</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass bead sterilisator</td>
			<td >Simon Keller</td>
			<td >Type 250</td>
			<td>Used for sterilisation of the surgical instruments</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Graefe iris forceps curved</td>
			<td >VUBU</td>
			<td >VUBU-02-72207</td>
			<td>Used for blunt separation of skin and subcutaneous tissue</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hair Remover cream, Veet (with aloe vera)</td>
			<td >Reckitt Benckiser</td>
			<td >108972</td>
			<td>Remove hair from mice hind limbs</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Heating plate</td>
			<td >ST&#214;RK-TRONIC</td>
			<td >7042092</td>
			<td>Keep the satble temperature of mice</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hematoxylin</td>
			<td >Roth</td>
			<td >T865.2</td>
			<td>Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Leica surgical microscope</td>
			<td >Leica</td>
			<td >M651</td>
			<td>Enlarge the field of view to facilitate the operation</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Liquid DAB+Substrate Chromogen System</td>
			<td >Dako</td>
			<td >K3468</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Male ApoE-/- mice</td>
			<td >Charles River Laboratories</td>
			<td >N/A</td>
			<td>Used for establish the Peripheral artery disease mice model</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Medetomidine</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>128366-50-7</td>
			<td>Used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micro Needle Holder</td>
			<td >Black &#38; Black Surgical</td>
			<td >B3B-18-8</td>
			<td>Holding the needle</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micro suture tying forceps</td>
			<td >Life Saver Surgical Industries</td>
			<td >PS-MSF-145</td>
			<td>Used to assist in knotting during surgery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microtome</td>
			<td >Biobase</td>
			<td >Bk-Mt268m</td>
			<td>Used for tissue sectioning</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Midazolam</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td>44856.01.00</td>
			<td>Used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >MR-compatible Small Animal Monitoring and Gating System Model 1025</td>
			<td>SA Instruments</td>
			<td>N/a</td>
			<td>monitoring vital signs of animal during MRI scan</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Octeniderm farblos</td>
			<td >Sch&#252;lke &#38; Mayr GmbH</td>
			<td >180212</td>
			<td>used for disinfection of the skin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Ointment for the eyes and nose</td>
			<td >Bayer AG</td>
			<td >1578675</td>
			<td>Keep the eyes wet under the anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paraformaldehyde</td>
			<td >Roth</td>
			<td >0335.1</td>
			<td>Used for fixation of the tissue</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Pentobarbital</td>
			<td>Nembutal</td>
			<td >76-74-4</td>
			<td>Used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Saline</td>
			<td>DeltaSelect</td>
			<td >1299.99.99</td>
			<td>Used for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Spring handle scissors with fine, sharp tips</td>
			<td >Black &#38; Black Surgical</td>
			<td >B66167</td>
			<td>Used for cutting the artery</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >SuperCut Scissors</td>
			<td >Black &#38; Black Surgical</td>
			<td >B55992</td>
			<td>Used for cutting the skin</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Triton X-100</td>
			<td >Roth</td>
			<td >9002-93-1</td>
			<td>Used for immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Western diet, 1.25% Cholesterol</td>
			<td >ssniff Spezialdi&#228;ten GmbH</td>
			<td >E15723-34</td>
			<td>Diet for the mice</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Xylene</td>
			<td >Roth</td>
			<td >4436.3</td>
			<td>Used for haematoxylin and eosin stain and immunohistochemistry stain</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a modified surgical model of hind limb ischemia in apoe-/- mice using a miniature incision

Bu çalışmanın amacı, çoğu hayvan laboratuvarında uygulanabilen farelerde akut iskemiyi teşvik etmek için modifiye edilmiş bir cerrahi yaklaşım tanıtmak ve değerlendirmektir. Femoral arterin (DLFA) çift ligasyonu için konvansiyonel yaklaşımın aksine, DLFA yapmak için proksimal femoral arteri (FA) ortaya çıkarmak için sağ kasık bölgesinde daha küçük bir kesi yapıldı. Daha sonra 7-0'lık bir dikiş kullanılarak kesi diz bölgesine sürüklenerek distal FA'yı ortaya çıkardı. Ameliyattan 0, 1, 3, 5 ve 7 gün sonra, arka uzuvların fonksiyonel iyileşmesi tarlov ölçeği kullanılarak görsel olarak değerlendirildi ve derecelendirildi. Histolojik değerlendirme, DLFA'dan 7 gün sonra hayvanlara ötenazi yapıldıktan sonra yapıldı. İşlemler on ApoE-/- farede sağ bacakta başarıyla gerçekleştirildi ve sonraki gözlem sırasında hiçbir fare ölmedi. 10 farenin tamamında kesi boyutları 5 mm'den (4,2 ± 0,63 mm) azdı. MR sonuçları iskemik taraftaki SK kan akışının açıkça tıkandığını gösterdi. Tarlov ölçeği sonuçları, işlemden sonra arka eks uzuv fonksiyonlarının önemli ölçüde azaldığını ve takip eden 7 gün boyunca yavaşça iyileştiğini göstermiştir. Histolojik değerlendirmede iskemik tarafta anlamlı bir inflamatuar yanıt ve iskemik arka ektremitede mikrovasküler yoğunlukta azalma saptadı. Sonuç olarak, bu çalışma DLFA kullanarak arka ekstrepsiyon iskemisini (HLI) gerçekleştirmek için minyatür bir kesi kullanarak değiştirilmiş bir teknik tanıtmaktadır.

ApoE-/- farelerin özellikleri DLFA ameliyatları HLI modelini oluşturmak için 10 fare üzerinde başarıyla yapıldı ve işlemden sonra farelerin hiçbiri ölmedi. Vücut ağırlığındaki değişiklikleri takip etmek için, fareler DLFA prosedüründen önce (Pre-DLFA) ve DLFA ameliyatından 7 gün sonra (Post-DLFA) tartıldı. DLFA öncesi ağırlıklar 29,6 ila 38,0 g (ortalama 34,74 ± 2,47 g) ve DLFA sonrası ağırlıklar 26 g arasında değişm...

Watch this Scientific Journal Video about A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision at JoVE.com

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

Bu makale, küçük bir kesi ile farelerde akut iskemi kurmak için etkili bir cerrahi yaklaşım göstermektedir. Bu yaklaşım, laboratuvar yükseltmesi yapılmadan çoğu araştırma grubu tarafından uygulanabilir.

ApoE'de Hind Limb iskemisinin Modifiye Cerrahi Modeli-/- Minyatür Kesi Kullanan Fareler

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most ...

Bugün tanıttığımız şey, ApoE farelerinde arka ekstre iskemi kurmak için basitleştirilmiş modifiye edilmiş ve cerrahi olarak verimli bir yöntemdir. Bu yöntem herhangi bir hayvan tesisinde uygulanabilir. Sinovyal yöntemin ana avantajı, beş milimetreden daha az bir kesi kullanarak düşük bir invazivliktir.Yöntemin bir öğrenme hof'una sahiptir. Bu nedenle, son analize dahil edilecek hayvanlar üzerinde çalışmadan önce mikrocerrahi modeller üzerinde pratik yapmanızı tavsiye ediyoruz. Yöntem kaixuan Yan tarafından gösterilecek, bir tıp doktoru ve laboratuvarımdan öğrenci.Ameliyat için gerekli ekipman ve aletleri hazırlayarak başlayın. Anesteziyi fareye uyguladıktan sonra, kuruluğu önlemek için bu merhemi gözlere uygulayın. Ardından, çekirdek vücut sıcaklığını yaklaşık 37 santigrat derecede tutmak için fareyi bir ısıtma yastığına yerleştirin.Pamuklu çubuk ve epilasyon kremi kullanarak, sağ taraftaki arka uzuv derisinden saçları dikkatlice çıkarın. Fareyi, bir diseksiyon mikroskobu altında ısıtma yastığı üzerindeki supine konumuna yerleştirin. Cildi dezenfekte etmek için alkol kullanın ve pamukla kesiğin bitki tarafından silin.Sivri uçlu ve cerrahi makas kullanarak kasık bölgesinin ortasında yaklaşık üç ila dört milimetrelik bir kesi yapar. Proksimal femoral nörovasküler demetini ortaya çıkarmak için ince sivri tokmaklar yardımıyla deri altı yağ dokusunu dikkatlice çıkarın. Salin ile nemlendirilmiş bir pamuklu çubuk kullanarak, femoral arteri femoral sinir ve femoral damardan dikkatlice uzaklaştırın.Daha sonra 7.0 dikişinin ucunu kullanarak, femoral kılıfın zarını dikkatlice delin. Daha sonra proksimal femoral arterden 7-0 emilebilir dikişe geçin ve yay makasını kullanarak çift düğüm yapın. Daha sonra iki bağ arasındaki femoral arteri transekte edin.6-0 emilebilir dikişi kesiğin alt kenarından geçirin ve distal femoral arteri ortaya çıkarmak için kesiği arka uzvun dizininin sağ tarafının bölgesine hafifçe sürükleyin. Nörovasküler demeti açığa çıkarmak için deri altı dokusunu dikkatlice bir kenara hareket ettirin. Femoral arteri femoral damar ve femoral sinirden parçalara ayrıştırın ve siniri korumak için pamuk kullanın.Daha sonra 7.0 dikişinin ucunu kullanarak, femoral kılıfın zarını delin. Distal femoral arterden iki adet 7-0 emilebilir dikiş geçirin ve iki bağ arasındaki uyluk atardamarını transkripsiyon için yay makasını kullanarak çift düğüm yapın. Daha sonra, 6-0 emilebilir dikişleri kullanarak kesiği dikin.Fareyi temiz bir kafeste bir ısıtma yastığına yerleştirin ve iyileşene kadar hayati parametrelerini izlemeye devam edin. Ertesi gün MRI ile femoral arter veya DLFA'nın çift ligasyon başarısını belirleyin. DLFA prosedüründen önce, farelerin ağırlıkları 29.6 ila 38.0 gram arasında değişmektedir.DLFA ameliyatından yedi gün sonra, ağırlıklar 26,5 ila 34,1 gram arasında değişmekte dır, DLFA öncesi ağırlıklardan önemli ölçüde daha düşüktür. Sağ SK'nın proksimal ve distal bölgelerinde perfüzyon saptanmamıştır. Tarlov ölçeği sonuçları ameliyattan bir gün sonra önemli ölçüde azaldı.İlerleyen günlerde yavaş yavaş artsalar da, yedinci güne kadar taban çizgisine göre hala daha düşüktüler. Yedi faredeki iskemik arka bacakların pençeleri, kontralteral tarafa kıyasla doğal olarak esneyemedi. Ek olarak, farelerden dördü, karşıt tarafa kıyasla pençelerin hafif renk değişikliği gösterdi.Sağ GM kasının H&E lekesi, çoğalan uydu hücrelerinin nekrotik miyoberlerin yerini aldığı ve bir kütle içinde veya düzenli bir dağılımla dağıtıldığı düzensiz iskemik nekroz sergileyen miyoberleri ortaya çıkardı. Çok sayıda makrofajla enflamatuar infiltrasyon sergileyen miyofiberler normal morfolojik özelliklerini kaybetmiş, çok az sayıda yenilenmiş miyofiber mevcuttu. Bu yenilenmiş miyofiberlerin enine bölümleri yuvarlaktı.Sitoplazm kırmızıya boyanmış ve merkezde küçük bir çekirdek veya birden fazla çekirdek bulunuyordu. Ancak sol GM'de bu tür inflamatuar örüntü gözlenmedi. Mikrovasküler yoğunluğu gözlemlemek için yapılan CD31 antikor lekeleme, iskemik arka uzuvların iskemik olmayan tarafa göre önemli ölçüde daha fazla mikrovasküler yoğunluk gösterdiğini gösterdi. En önemli şey femoral arterin diseksiyonudur.Operatörün mikrocerrahi tekniklerde deneyimli olması ve fare arka plan anatomisine aşina olması gerekir. Prensip olarak, bu yöntem bacaktaki iskemi-reperfüzyon yaralanmasını incelemek için de kullanılabilir. Bu nedenle, arter reperfüzyona izin vermeden önce yumuşak bir damar kelepçesi ile tıkanabilir.

Research

JoVE Journal

Biology

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

Preventing the Spread of Malaria and Dengue Fever Using Genetically Modified Mosquitoes

Genetiği Değiştirilmiş Sivrisinekler kullanarak Sıtma ve Dang Ateşi Yayılması Önleme

In this candid interview, Anthony A. James explains how mosquito genetics can be exploited to control malaria and dengue transmission.   Population ...

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

Murin Model Hindlimb İskemi

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

Iskemi / reperfüzyon içinde bir anoksisi-açlık Modeli<em&gt; C. elegans</em

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...

MicroRNA Expression Profiles of Human iPS Cells, Retinal Pigment Epithelium Derived From iPS, and Fetal Retinal Pigment Epithelium

İnsan iPS Hücreleri MicroRNA İfade Profilleri, iPS Kaynaklanan Retina pigment epiteli ve Fetal Retina pigment epiteli

The objective of this report is to describe the protocols for comparing the microRNA (miRNA) profiles of human induced-pluripotent stem (iPS) cells, ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Fare Modeli Doğrulanması Hücre-spesifik şekilde LINC kompleksler bozacak

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

EYFP etiketli CENP-A (EYFP-CENP-A) Ubiquitylation tanımlamak için Kütle Spektrometresi Analizi

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

Development of a Cell Co-Culture Model to Mimic Cardiac Ischemia/Reperfusion In Vitro

Development of a Cell Co-Culture Model to Mimic Cardiac Ischemia/Reperfusion In Vitro

Kardiyak İskemi / Reperfüzyonu In Vitro Taklit Etmek için Bir Hücre Ko-Kültür Modelinin Geliştirilmesi

Ischemic heart disease is the leading cause of death and disability worldwide. Reperfusion causes additional injury beyond ischemia. Endothelial cells ...

Tail Vein Transection Bleeding Model in Fully Anesthetized Hemophilia A Mice

Tam Anestezi Uygulanan Hemofili A Farelerinde Kuyruk Ven Transeksiyonu Kanama Modeli

Tail bleeding models are important tools in hemophilia research, specifically for the assessment of procoagulant effects. The tail vein transection (TVT) ...

Generation of Hook Ischemia-Reperfusion Model using a Three-Day Developing Chick Embryo

Üç Günlük Gelişmekte Olan Civciv Embriyosu Kullanılarak Hook İskemi-Reperfüzyon Modelinin Üretimi

Ischemia and reperfusion (I/R) disorders, such as myocardial infarction, stroke, and peripheral vascular disease, are a few of the leading causes of ...