Name: monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model
Uploaded: 2021-04-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model at JoVE.com

Vi takker alle medlemmer fra vores laboratorium og Ophthalmic Animal Laboratory of Zhongshan Ophthalmic Center for deres tekniske assistance. Vi takker også prof. Chunqiao Liu for eksperimentel støtte. Dette arbejde blev støttet af tilskud fra National Natural Science Foundation of China (NSFC: 81670872; Beijing, Kina), Natural Science Foundation of Guangdong-provinsen, Kina (tilskud nr. 2019A1515011347) og hospitalsbyggeri på højt niveau fra State Key Laboratory of Ophthalmology ved Zhongshan Ophthalmic Center (Grant No. 303020103; Guangzhou, Guangdong-provinsen, Kina).

Alle procedurer, der involverer brug af mus, blev godkendt af dyreforsøgsetisk komité ved Zhongshan Ophthalmic Center, Sun Yat-sen University, Kina (autoriseret nummer: 2020-082) og i overensstemmelse med de godkendte retningslinjer fra Animal Care and Use Committee of Zhongshan Ophthalmic Center og Association Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Erklæring til brug af dyr i oftalmisk og synsforskning.
1. Induktion af mus OIR model
<ol><li>Brug mus med en lavere grad af medfødt mi...

Musens modtagelighed for OIR påvirkes af mange faktorer. Hvalpe med forskellig genetisk baggrund og stammer kan ikke sammenlignes. I BALB/c albinomus vokser karrene hurtigt ind i VO-området med signifikant reducerede neovaskulære tufts38, hvilket medfører nogle vanskeligheder for forskningen. Hos C57BL/6-mus er der øget fotoreceptorskade sammenlignet med BALB/cJ-musestamme39,40. Det samme gælder for forskellige typer transgene mus<su...

Retinal neovaskularisering (RNV), som er defineret som en tilstand, hvor nye patologiske kar stammer fra eksisterende retinale vener, strækker sig normalt langs nethindens indre overflade og vokser ind i det glasagtige (eller subretinale rum under nogle betingelser)1. Det er et kendetegn og fælles træk ved mange iskæmiske retinopatier, herunder retinopati af præmaturitet (ROP), retinal vene okklusion (RVO) og proliferativ diabetisk retinopati (PDR)2.
Talrige kliniske og eksperimentelle observationer har vist, at iskæmi er hovedårsagen til retinal neovaskularisering 3,4. I ROP udsættes nyfødte for ilt på højt niveau i lukkede inkubatorer for at øge overlevelsesraten, hvilket også er en vigtig drivkraft for anholdelse af vaskulær vækst. Efter behandlingen er udført, oplever nethinden hos nyfødte en relativt hypoxisk periode5. Andre situationer ses i okklusion af centrale eller gren retinale vener i RVO, og der observeres også skader på retinale kapillærer, som er forårsaget af mikroangiopati i PDR2. Hypoxi øger yderligere ekspressionen af angiogene faktorer såsom vaskulær endotelvækstfaktor (VEGF) gennem den hypoxi-inducerede faktor-1α (HIF-1α) signalvej, som igen styrer vaskulære endotelceller til at vokse ind i det hypoxiske område og danne nye kar 6,7.
ROP er en slags vaskulær proliferativ retinopati hos for tidligt fødte spædbørn og en førende årsag til barndomsblindhed 8,9, som er karakteriseret ved retinal hypoxi, retinal neovaskularisering og fibrøs hyperplasi10,11,12. I 1950'erne fandt forskere, at høj koncentration af ilt kan forbedre respiratoriske symptomer hos for tidligt fødte spædbørn13,14. Som følge heraf blev iltbehandling i stigende grad anvendt til for tidligt fødte spædbørn på det tidspunkt15. Men samtidig med den udbredte brug af iltbehandling hos for tidligt fødte spædbørn steg forekomsten af ROP år for år. Siden da har forskere knyttet ilt til ROP og udforsket forskellige dyremodeller for at forstå patogenesen af ROP og RNV16.
Hos mennesker er det meste retinal vaskulaturudvikling afsluttet før fødslen, mens retinal vaskulaturen hos gnavere udvikler sig efter fødslen, hvilket giver et tilgængeligt modelsystem til at studere angiogenese i retinal vaskulatur2. Med forskningens fortsatte fremskridt er oxygeninducerede retinopati (OIR) modeller blevet vigtige modeller til efterligning af patologisk angiogenese som følge af iskæmi. Der er ingen specifikke dyrearter i studiet af OIR-modellen, og modellen er udviklet i forskellige dyrearter, herunder killing 17, rotte18, mus19, beaglehvalp 20 og zebrafisk21. Alle modellerne deler den samme mekanisme, hvormed de udsættes for hyperoxi under tidlig retinal udvikling og derefter vender tilbage til det normoxiske miljø. Smith et al. observerede, at udsættelse af museunger for hyperoxi fra P7 i 5 dage inducerede en ekstrem form for karregression i den centrale nethinde og bragte dem tilbage til rumluften ved P12 udløste gradvist neovaskulære tufts, som voksede mod glaslegemet19. Dette var en standardiseret OIR-musemodel, der også blev navngivet som Smith-model. Connor et al. optimerede protokollen yderligere og leverede en universelt anvendelig metode til kvantificering af arealet af VO (vaso-obliteration) og NV (neovaskularisering) i 2009, hvilket øgede accepten og udnyttelsen af model22. OIR-musemodellen er stadig den mest anvendte model nu på grund af dens lille størrelse, hurtige reproduktion, klare genetiske baggrund, gode repeterbarhed og høje succesrate.
Hos mus starter retinal vaskularisering efter fødslen med indvækst af kar fra det optiske nervehoved ind i den indre nethinde mod ora serrata. Under normal retinal udvikling spirer de første retinale kar fra synsnervehovedet omkring fødslen og danner et ekspanderende netværk (den primære plexus), der når periferien omkring postnatal dag 7 (P7) 23. Derefter begynder karrene at vokse ind i nethinden for at danne et dybt lag, trænge ind i nethinden og etablere et laminært netværk omkring det indre nukleare lag (INL) som hos menneske24. Ved udgangen af den tredje postnatale uge (P21) er dybere plexusudvikling næsten afsluttet. For OIR-musemodellen forekommer vaskulær okklusion altid i den centrale nethinden på grund af den hurtige degeneration af et stort antal umodne vaskulære netværk i det centrale område under hyperoxi-eksponering. Så væksten af patologisk neovaskularisering forekommer også i den midterste perifere nethinde, som er grænsen for ikke-perfusionsområdet og det vaskulære område. Imidlertid er menneskelige retinale kar næsten dannet før fødslen. Hvad angår for tidligt fødte spædbørn, er den perifere nethinde ikke fuldstændigt vaskulariseret, når den udsættes for hyperoxi25,26. Så vaskulær okklusion og neovaskularisering forekommer hovedsageligt i den perifere nethinde27,28. På trods af disse forskelle rekapitulerer musens OIR-model nøje de patologiske hændelser, der opstår under iskæmi-induceret neovaskularisering.
Induktionen af OIR-modellen kan opdeles i to faser29: i fase 1 (hyperoxifase) arresteres eller forsinkes retinal vaskulær udvikling med okklusion og regression af blodkar som følge af faldet i VEGF og apoptose af endotelceller 24,30; I fase 2 (hypoxifase) vil nethindens iltforsyning blive utilstrækkelig under rumluftforhold29, hvilket er afgørende for neural udvikling og homeostase 19,31. Denne iskæmiske situation resulterer normalt i ureguleret, unormal neovaskularisering.
I øjeblikket er den almindeligt anvendte modelleringsmetode skiftevis høj / lav ilteksponering: Mødre og deres hvalpe udsættes for 75% ilt i 5 dage ved P7 efterfulgt af 5 dage i rumluft, indtil P17 viste sammenlignelige resultater22, hvilket er endepunktet for OIR-musemodelinduktion. (Figur 1). Ud over at simulere ROP kan denne iskæmi-medierede patologiske neovaskularisering også bruges til at studere andre iskæmiske retinale sygdomme. De vigtigste målinger af denne model omfatter kvantificering af arealet af VO og NV, som analyseres fra retinale flade monteringer ved immunfluorescensfarvning eller FITC-dextranperfusion. Hver mus kan kun studeres én gang på grund af den dødelige operation. På nuværende tidspunkt er der få metoder til at observere dynamiske ændringer af retinal vaskulatur kontinuerligt under processen med vaskulær regression og patologisk angiogenese32. I dette papir giver vi en detaljeret protokol for OIR-modelinduktion, analyse af retinale flade monteringer samt en arbejdsgang af fluorescein fundus angiografi (FFA) på mus, hvilket ville være nyttigt for at få en mere omfattende forståelse af vaskulære dynamiske ændringer i to faser af OIR-musemodellen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL sterile syringe</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>YA0550</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts and intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215; Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Transgen Biotech</td>
			<td>&#160;FG701-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml Microcentrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MCT-200-C</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48 Well Clear TC-Treated Multiple Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive microscope slides</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop CC 2019</td>
			<td>Adobe Inc.</td>
			<td></td>
			<td>For image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide gas</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For sacrifice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14127</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI staining solution</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab228549</td>
			<td>For labeling nucleus on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olmpus</td>
			<td>SZ61</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6377</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Microscope</td>
			<td>&#160;Zeiss</td>
			<td>AxioImager.Z2</td>
			<td>For acquisition of fluorescence images of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G Mounting media</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>&#160;0100-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxypropyl Methylcellulose</td>
			<td>Maya</td>
			<td>89161</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolectin B4 594 antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I21413</td>
			<td>For labeling retinal vasculature on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice C57/BL6J</td>
			<td>GemPharmatech of Jiangsu Province</td>
			<td></td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro dissecting scissors-straight blade</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503242</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No.4 straight forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>&#160;501978-6</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7475</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2 sensor</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For monitoring the level of O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OxyCycler</td>
			<td>Biospherix</td>
			<td>A84XOV</td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148-1KG</td>
			<td>For tissue fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soda lime</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For absorbing excess CO2 in the oxygen chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPECTRALIS HRA+OCT</td>
			<td>Heidelberg</td>
			<td>HC00500002</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPSS Statistics 22.0</td>
			<td>IBM</td>
			<td></td>
			<td>For statistical analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tansference decloring shaker</td>
			<td>Kylin-Bell</td>
			<td>ZD-2008</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish (Low attachment)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3261-20EA</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;SLBW6818</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Imaging Software</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td>For image acquisition and export</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model

Oxygeninduceret retinopati (OIR) anvendes i vid udstrækning til at studere unormal karvækst i iskæmiske retinale sygdomme, herunder retinopati af præmaturitet (ROP), proliferativ diabetisk retinopati (PDR) og retinal veneokklusion (RVO). De fleste OIR-undersøgelser observerer retinal neovaskularisering på bestemte tidspunkter; Imidlertid er den dynamiske fartøjsvækst hos levende mus langs et tidsforløb, som er afgørende for at forstå de OIR-relaterede karsygdomme, blevet undervurderet. Her beskriver vi en trin-for-trin protokol til induktion af OIR-musemodellen, fremhæver de potentielle faldgruber og giver en forbedret metode til hurtigt at kvantificere områder med vaso-udslettelse (VO) og neovaskularisering (NV) ved hjælp af immunfluorescensfarvning. Endnu vigtigere overvågede vi fartøjsgenvækst hos levende mus fra P15 til P25 ved at udføre fluorescein fundus angiografi (FFA) i OIR-musemodellen. Anvendelsen af FFA på OIR-musemodellen giver os mulighed for at observere ombygningsprocessen under genvækst af fartøjer.

I OIR-musemodellen er det vigtigste og grundlæggende resultat kvantificeringen af VO- og NV-området. Efter at have levet i hyperoxia-miljøet i 5 dage fra P7, viste hvalpenes centrale nethinde det største ikke-perfusionsområde. Under stimulering af hypoxi i yderligere 5 dage blev retinal neovaskularisering gradvist produceret, som fluorescerede mere intenst end omgivende normale kar. Efter P17 regresserede fluorescenssignalet for patologisk neovaskularisering hurtigt som ombygning af nethinden (f...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model at JoVE.com

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Denne protokol beskriver en detaljeret metode til fremstilling og immunfluorescensfarvning af mus retinale flade monteringer og analyse. Brugen af fluorescein fundus angiografi (FFA) til museunger og billedbehandling er også beskrevet detaljeret.

Overvågning af dynamisk vækst af retinale kar i oxygeninduceret retinopati musemodel

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...

Denne protokol kan hjælpe forskere med let at adskille musenes nethinder og observere de dynamiske ændringer i retinal vaskulaturen i OIR-musemodellen. De vigtigste fordele ved denne metode er bevarelse af integriteten af de adskilte nethinder og tillader hver mus at tjene som sin egen kontrol, hvilket gør resultaterne mere sammenlignelige. Forskere, der prøver denne metode for første gang, kan kæmpe, mens de tager de fem orienteringsbilleder, fordi det er lidt svært at placere hvalpe i den rigtige position.For at samle vævet til retinal hel montering skal du bruge buet saks til at afbryde øjenkuglerne fra orbitalvævet i en aflivet C57-Black / 6 hvalp. Indsæt derefter buede tang i den bageste del af øjeæblet, klem synsnerven og løft hurtigt øjet ud fra kredsløbet. Placer øjenkuglerne i forkølet PBS for at fjerne hår og blod fra overfladen.Når alle øjenkuglerne er opsamlet, overføres de rensede øjenkugler til et to-milliliter mikrocentrifugerør indeholdende 4% paraformaldehyd og inkuberes i 15 minutter ved stuetemperatur og 12 til 15 omdrejninger pr. Minut. I slutningen af inkubationen tilsættes en dråbe PBS til midten af en kulturskål under et dissekerende mikroskop og placerer et øjeæble i dråben. Hold øjeæblet med et par tang, brug en en-milliliter sprøjtenål til omhyggeligt at punktere hornhinden ved hornhinden.Indsæt spidsen af en saks i punkteringen, og skær hornhinden langs hornhinden, og pas på ikke at skære nethinden. Brug tang til at fjerne iris og linse, og placer den resterende øjenkop i 4% paraformaldehyd til en 45-minutters inkubation ved stuetemperatur på rysteren. I slutningen af inkubationen placeres den faste øjenkop i en frisk dråbe PBS i midten af en ny kulturskål.Hold øjenkoppen med et par tang, brug et andet par tang til forsigtigt at adskille nethinden og sclera lagene. Placer spidsen af saksen mellem nethinden og sclera-lagene, og skær sclera mod synsnerven. Skræl sclera af nethinden for at få nethinden.Brug tang til at frigive forbindelsen mellem de radiale hyaloidbeholdere og perifer nethinden. Brug en to-milliliter pipette med spidsen afskåret til at overføre nethindekoppen til en brønd på en 48-brøndplade til tre fem minutters vask i stuetemperatur PBS på rysteren. Efter den sidste vask inkuberes koppen i 1% Triton X-100 og 5% normalt æselserum i PBS natten over ved fire grader Celsius.For at mærke retinal vaskulaturen med isolectin B4, inkubere nethinden i en brønd af en 48-brøndplade i 400 mikroliter 0,1% normalt æselserum suppleret med isolectin B4-594 natten over ved 4 grader Celsius på en ryster. Om nødvendigt kan et andet primært antistof tilsættes på samme tid. Den følgende dag vaskes nethinden med tre 20-minutters vask i 0,1% PBST på rysteren.Efter den sidste vask inkuberes nethinden med et passende sekundært antistof med høj affinitet i en time ved stuetemperatur, før prøven mærkes med DAPI i 20 til 25 minutter. Ved afslutningen af inkubationen vaskes nethinden med tre 30-minutters vask i 0,1% PBST ved stuetemperatur med omrystning. Efter den sidste vask overføres nethindekoppen til et rent dias med åbningen opad, og brug mikroskopet til at skære nethinden radialt ved tre, seks, ni og 12 positioner fra periferien mod midten, op til en til 1,5 millimeter fra synsnervehovedet.Skyl nethinden tre gange med et par dråber PBS pr. vask, før du bruger luftlagt papir til at tørre og flade nethinden. Tilsæt en dråbe monteringsmedium til midten af dækslippen, indtil dråbens diameter dækker halvdelen af dækslippen. Placer derefter hurtigt dækslipmonteringsmediet nedad på den udstrakte nethinde.Når alle nethindens flade beslag er blevet forberedt, kan prøverne afbildes ved konfokal fluorescensmikroskopi. Til in vivo-billeddannelse tilsættes 20 mikroliter mydriatiske øjendråber for at opnå langvarig pupiludvidelse. Efter fem minutter skal du placere hvalpene i en stabil position på en lille varmepude foran billeddannelsesenheden.For at opretholde fugt i hornhinderne skal du regelmæssigt tilføje kunstige tårer under hele billeddannelsesproceduren. Klik derefter på Infrarød Fundus Imaging på enheden for at justere synsnervehovedet til midten af skærmen. Intraperitonealt injicere 150 mikroliter 0,5% fluoresceinnatriumsaltopløsning, og klik straks på FA- og injektionsknapperne på berøringspanelet på billeddannelsesenheden for at starte timeren.Efter tre minutter, når blodcirkulationen i nethinden er kommet ind i den venøse fase, erhverver det første billede af den centrale nethinden. Flyt linsen på billeddannelsesenheden vandret til næsesiden af øjet, indtil synsnervehovedet er placeret midt på den ene side af billedoptagelsesområdet, og tag det andet billede. Fortsæt med at bevæge linsen og erhverve billeder af den tidsmæssige, overlegne og ringere nethinde på samme måde.Hvis du vil behandle nethindebillederne i et passende billedbehandlingsprogram, skal du åbne menuen Filer og klikke på Ny for at oprette et nyt lærred med sort baggrund. Åbn billedet af den centrale nethinde. Klik derefter på Filer for at tilføje et andet billede.Juster opaciteten af det andet billede til 60%, og flyt og tilpas størrelsen på billedet, indtil de to billeder overlapper hinanden. Klik på Skift mellem tilstandene Free Transform og Warp, og foretag om nødvendigt subtile justeringer af fartøjerne. Indstil derefter opaciteten af det andet billede tilbage til 100 % Vælg begge billeder, og klik på Automatisk blanding af lag.Marker Panorama som blandingsmetode, og marker også afkrydsningsfelterne for sømløse toner og farver og indholdsbevidste udfyld gennemsigtige områder. Klik på OK for at fuldføre syningen af de to første billeder. Tilføj derefter det tredje billede, og sy dette billede til de to første billeder som vist, indtil alle fem billeder fra en enkelt nethinde er blevet syet.Når alle billederne fra analysen er blevet behandlet, skal du bruge beskæringsværktøjet til at beskære FFA-billederne til en ensartet størrelse for at lette observationen af ændringerne i retinal vaskulaturdynamikken på forskellige udviklingstidspunkter. Efter fem dages eksponering for hyperoxi viser de centrale nethinder hos postnatal dag 12 hvalpe et stort ikke-perfusionsområde. Ved overførsel til fem dage med hypoxiske tilstande neovaskulariserer nethinderne gradvist og udviser en stigning i fluorescenssignal stærkere end det, der observeres i de omgivende normale kar.Efter postnatal dag 17 regresserer den patologiske neovaskularisering hurtigt, og nethinden viser et helt normalt udseende ved postnatal dag 25. En god repeterbarhed og stabilitet af iltinduceret retinopatimodel kan opnås ved at kontrollere kuldstørrelsen og postnatal vægtforøgelse af hvalpene. Som observeret topper vaso-udslettelsen typisk ved postnatal dag 12 og forsvinder ved postnatal dag 25, mens neovaskulariseringen topper ved postnatal dag 17 og regresserer ved postnatal dag 25.I postnatal dag 15 til 25 iltinducerede retinopatimus øges retinal blodkardiameteren og bliver meget torturøs sammenlignet med den, der observeres for nethinden hos normale mus. Tangen i venstre hånd spiller hovedsageligt i en birolle. Pas på ikke at klemme øjet, som kan deformere eller sprænge det.

Research

JoVE Journal

Biology

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these ...

Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice

We use the whole-cell patch clamp technique to study the synaptic circuitry that underlies visual information processing in the retina. In this video, we ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Langsigtet dødelige toksicitet Test med krebsdyr Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Validering af en musemodel at afbryde LINC komplekser i en celle-specifik måde

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En ansigtsbehandling af museblodfartøjer

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Et grafisk brugergrænseflade til softwareassisteret sporing af proteinkoncentration i dynamiske cellulære protrusioner

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-indre celle masse injektion af stamceller fra embryoner fører til højere kimærisme

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...