Name: monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model
Uploaded: 2021-04-02T14:00:00
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기술 지원에 대해 우리 실험실과 중산 안과 센터의 안과 동물 실험실의 모든 구성원에게 감사드립니다. 또한 실험적 지원에 대해 Chunqiao Liu 교수에게 감사드립니다. 이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (NSFC : 81670872; 중국 베이징), 중국 광둥성 자연과학재단(보조금 No.2019A1515011347), 중산 안과 센터 국가 안과학연구소의 고위급 병원 건설 프로젝트(보조금 No. 303020103; 광저우, 광동성, 중국).

마우스 사용과 관련된 모든 절차는 중국 쑨원대학교 중산 안과 센터의 동물 실험 윤리 위원회(승인 번호: 2020-082)와 중산 안과 센터의 동물 관리 및 사용 위원회의 승인된 지침과 안과 및 시력 연구에서 동물 사용에 대한 시력 및 안과 협회(ARVO) 성명서의 승인에 따라 승인되었습니다.
1. 마우스 OIR 모델의 유도
<ol><li>눈의 선천성 기형 비율이 낮은 마우스(예: C57BL/6J 마우스)를 ?...

OIR에 대한 마우스의 감수성은 많은 요인에 의해 영향을받습니다. 다른 유전 적 배경과 균주의 새끼는 비교할 수 없습니다. BALB/c 알비노 마우스에서 혈관은 VO 영역으로 빠르게 재성장하여 신생 혈관 술38이 크게 감소하여 연구에 약간의 어려움을 가져옵니다. C57BL/6 마우스에서, BALB/cJ 마우스 균주39,40과 비교할 때 광수용체 손상이 증가?...

새로운 병리학 혈관이 기존 망막 정맥에서 시작되는 상태로 정의되는 망막 신생 혈관 형성 (RNV)은 일반적으로 망막의 내부 표면을 따라 확장되어 유리체 (또는 일부 조건에서는 망막 하 공간)로 성장합니다 1. 이는 미숙아 망막병증(ROP), 망막 정맥 폐색(RVO) 및 증식성 당뇨병성 망막병증(PDR)을 포함한 많은 허혈성 망막병증의 특징이자 공통적인 특징입니다2.
수많은 임상 및 실험 관찰에 따르면 허혈이 망막 신생 혈관의 주요 원인입니다 3,4. ROP에서 신생아는 생존율을 높이기 위해 밀폐 된 인큐베이터에서 높은 수준의 산소에 노출되며, 이는 혈관 성장을 막는 중요한 동인이기도합니다. 치료가 끝나면 신생아의 망막은 상대적으로 저산소 기간을 경험합니다5. RVO에서 중앙 또는 가지 망막 정맥의 폐색에서 다른 상황이 나타나고 PDR2에서 미세 혈관 병증으로 인한 망막 모세 혈관의 손상도 관찰됩니다. 저산소증은 저산소증 유도 인자 -1α (HIF-1α) 신호 전달 경로를 통해 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)와 같은 혈관 형성 인자의 발현을 더욱 증가시켜 혈관 내피 세포가 저산소 영역으로 성장하고 새로운 혈관을 형성하도록 유도합니다 6,7.
ROP는 미숙아의 혈관 증식성 망막병증의 일종이며 망막 저산소증, 망막 신생혈관 및 섬유성 증식증10,11,12를 특징으로 하는 소아 실 명 8,9의 주요 원인입니다. 1950년대에 연구자들은 고농도의 산소가 미숙아의 호흡기 증상을 크게 개선할 수 있음을 발견했습니다13,14. 그 결과, 산소 요법은 그 당시 미숙아에서 점점 더 많이 사용되었습니다15. 그러나 미숙아에서 산소 요법이 널리 사용됨에 따라 ROP의 발병률은 해마다 증가했습니다. 그 이후로 연구자들은 산소를 ROP에 연결하여 ROP와 RNV16의 발병 기전을 이해하기 위해 다양한 동물 모델을 탐색했습니다.
인간의 경우 대부분의 망막 혈관 발달은 출생 전에 완료되는 반면 설치류에서는 망막 혈관 구조가 출생 후에 발달하여 망막 혈관 구조2에서 혈관 신생을 연구하기위한 접근 가능한 모델 시스템을 제공합니다. 연구의 지속적인 진행과 함께, 산소 유도 망막병증 (OIR) 모델은 허혈로 인한 병리학적 혈관신생을 모방하기 위한 주요 모델이 되었다. OIR 모델의 연구에는 특정 동물 종이 없으며 모델은 새끼 고양이 17, 쥐18, 마우스19, 비글 강아지 20 및 제브라 피쉬21을 포함한 다양한 동물 종에서 개발되었습니다. 모든 모델은 초기 망막 발달 동안 과산소증에 노출된 다음 정상 환경으로 되돌아가는 동일한 메커니즘을 공유합니다. Smith et al. 마우스 새끼를 P7의 과산소증에 5일 동안 노출시키면 중앙 망막에서 극단적인 형태의 혈관 퇴행이 유발되고 P12에서 실내 공기로 다시 가져오면 유리체(19)쪽으로 자라는 신생 혈관 술이 점차적으로 유발된다는 것을 관찰했습니다. 이것은 스미스 모델로도 명명 된 표준화 된 OIR 마우스 모델이었습니다. Connor et al.은 프로토콜을 더욱 최적화하고 2009 년에 VO (혈관 소멸) 및 NV (신생 혈관)의 면적을 정량화하기 위해 보편적으로 적용 가능한 방법을 제공하여 모델22의 수용과 활용도를 높였습니다. OIR 마우스 모델은 작은 크기, 빠른 번식, 명확한 유전적 배경, 우수한 반복성 및 높은 성공률로 인해 현재 가장 널리 사용되는 모델입니다.
생쥐에서 망막 혈관 형성은 출생 후 시신경 머리에서 혈관이 오라 세라 타쪽으로 망막 내부로 내 성장하면서 시작됩니다. 정상적인 망막 발달 동안 첫 번째 망막 혈관은 출생 전후 시신경 머리에서 돋아나 출생 후 7일(P7)23 주변의 주변에 도달하는 확장 네트워크(일차 신경총)를 형성합니다. 그런 다음 혈관은 망막으로 성장하기 시작하여 깊은 층을 형성하고 망막을 관통하며 인간24에서와 같이 내부 핵층 (INL) 주위에 층류 네트워크를 구축합니다. 출생 후 3 주 (P21)가 끝날 무렵, 더 깊은 신경총 발달이 거의 완료됩니다. OIR 마우스 모델의 경우, 혈관 폐색은 고 산소 노출 동안 중앙 영역에서 많은 수의 미성숙 혈관 네트워크의 급속한 퇴행으로 인해 항상 중심 망막에 나타납니다. 따라서 병리학 적 신생 혈관의 성장은 비 관류 영역과 혈관 영역의 경계 인 중간 말초 망막에서도 발생합니다. 그러나 인간의 망막 혈관은 출생 전에 거의 형성되었습니다. 미숙아의 경우, 말초 망막은 고 산소 증25,26에 노출되었을 때 완전히 혈관 화되지 않습니다. 따라서 혈관 폐색과 신생 혈관은 주로 말초 망막27,28에서 나타납니다. 이러한 차이에도 불구하고, 마우스 OIR 모델은 허혈-유도된 신생혈관형성 동안 발생하는 병리학적 사건을 면밀히 요약한다.
OIR 모델의 유도는 2 단계로 나눌 수 있습니다 (29) : 제 1 상 (고 옥시아 단계)에서, 망막 혈관 발달은 VEGF의 감소 및 내피 세포의 세포 사멸의 결과로 혈관의 폐색 및 퇴행으로 정지되거나 지연된다24,30; 2 단계 (저산소증 단계)에서는 망막 산소 공급이 실내 공기 조건 29 하에서 불충분 해지게되며, 이는 신경 발달 및 항상성19,31에 필수적입니다. 이 허혈성 상황은 일반적으로 조절되지 않은 비정상적인 신생 혈관을 초래합니다.
현재, 일반적으로 사용되는 모델링 방법은 고산소 / 저 산소 노출을 번갈아 가며 사용하는 것입니다 : 어미와 새끼는 P7에서 5 일 동안 75 % 산소에 노출 된 다음 P17이 OIR 마우스 모델 유도의 종점 인 비교 가능한 결과22를 입증 할 때까지 실내 공기에서 5 일 동안 노출됩니다. (그림 1). ROP를 시뮬레이션하는 것 외에도 이 허혈 매개 병리학적 신생혈관은 다른 허혈성 망막 질환을 연구하는 데에도 사용할 수 있습니다. 이 모델의 주요 측정에는 면역 형광 염색 또는 FITC- 덱스 트란 관류에 의해 망막 플랫 마운트에서 분석 된 VO 및 NV의 면적을 정량화하는 것이 포함됩니다. 각 마우스는 치명적인 수술 때문에 한 번만 연구 할 수 있습니다. 현재, 혈관 퇴행 및 병리학 적 혈관 신생 과정 동안 망막 혈관계의 동적 변화를 지속적으로 관찰하는 방법은 거의 없다32. 이 백서에서는 OIR 마우스 모델의 두 단계에서 혈관 동적 변화에 대한 보다 포괄적인 이해를 얻는 데 도움이 될 마우스에 대한 플루오레세인 안저 혈관 조영술(FFA)의 워크플로뿐만 아니라 OIR 모델 유도, 망막 플랫 마운트 분석에 대한 자세한 프로토콜을 제공합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL sterile syringe</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>YA0550</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts and intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215; Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Transgen Biotech</td>
			<td>&#160;FG701-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml Microcentrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MCT-200-C</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48 Well Clear TC-Treated Multiple Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive microscope slides</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop CC 2019</td>
			<td>Adobe Inc.</td>
			<td></td>
			<td>For image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide gas</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For sacrifice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14127</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI staining solution</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab228549</td>
			<td>For labeling nucleus on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olmpus</td>
			<td>SZ61</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6377</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Microscope</td>
			<td>&#160;Zeiss</td>
			<td>AxioImager.Z2</td>
			<td>For acquisition of fluorescence images of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G Mounting media</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>&#160;0100-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxypropyl Methylcellulose</td>
			<td>Maya</td>
			<td>89161</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolectin B4 594 antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I21413</td>
			<td>For labeling retinal vasculature on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice C57/BL6J</td>
			<td>GemPharmatech of Jiangsu Province</td>
			<td></td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro dissecting scissors-straight blade</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503242</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No.4 straight forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>&#160;501978-6</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7475</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2 sensor</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For monitoring the level of O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OxyCycler</td>
			<td>Biospherix</td>
			<td>A84XOV</td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148-1KG</td>
			<td>For tissue fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soda lime</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For absorbing excess CO2 in the oxygen chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPECTRALIS HRA+OCT</td>
			<td>Heidelberg</td>
			<td>HC00500002</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPSS Statistics 22.0</td>
			<td>IBM</td>
			<td></td>
			<td>For statistical analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tansference decloring shaker</td>
			<td>Kylin-Bell</td>
			<td>ZD-2008</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish (Low attachment)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3261-20EA</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;SLBW6818</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Imaging Software</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td>For image acquisition and export</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model

산소 유발 망막병증(OIR)은 미숙아 망막병증(ROP), 증식성 당뇨병성 망막병증(PDR) 및 망막 정맥 폐색(RVO)을 포함한 허혈성 망막 질환에서 비정상적인 혈관 성장을 연구하는 데 널리 사용됩니다. 대부분의 OIR 연구는 특정 시점에서 망막 신생 혈관을 관찰합니다. 그러나 OIR 관련 혈관 질환을 이해하는 데 필수적인 시간 경과에 따른 살아있는 마우스의 동적 혈관 성장은 연구되지 않았습니다. 여기에서는 OIR 마우스 모델의 유도를 위한 단계별 프로토콜을 설명하고, 잠재적인 위험을 강조하며, 면역형광 염색을 사용하여 혈관 소색(VO) 및 신생혈관(NV) 영역을 신속하게 정량화하는 개선된 방법을 제공합니다. 더 중요한 것은 OIR 마우스 모델에서 플루오레세인 안저 혈관조영술(FFA)을 수행하여 P15에서 P25까지의 살아있는 마우스에서 혈관 재성장을 모니터링했다는 것입니다. OIR 마우스 모델에 FFA를 적용하면 혈관 재성장 중 리모델링 과정을 관찰 할 수 있습니다.

OIR 마우스 모델에서 가장 중요하고 기본적인 결과는 VO 및 NV 영역의 정량화입니다. P7로부터 5일 동안 과산소 환경에서 생활한 후, 새끼의 중심 망막은 가장 큰 비관류 면적을 보였다. 또 다른 5 일 동안 저산소증의 자극 하에, 망막 신생 혈관이 점차적으로 생성되어 주변의 정상 혈관보다 더 강하게 형광을 발했습니다. P17 이후, 병리학적 신생혈관의 형광 신호는 망막의 리모델링으로서 빠르게 퇴행...

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Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

이 프로토콜은 망막 플랫 마운트 마우스의 제조 및 면역형광 염색 및 분석을 위한 상세한 방법을 기술한다. 마우스 새끼를위한 fluorescein 안저 혈관 조영술 (FFA)의 사용 및 이미지 처리도 자세히 설명되어 있습니다.

산소 유발 망막병증 마우스 모델에서 망막 혈관의 동적 성장 모니터링

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...

이 프로토콜은 연구자들이 마우스의 망막을 쉽게 분리하고 OIR 마우스 모델의 망막 혈관계의 동적 변화를 관찰하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 방법의 주요 장점은 분리 된 망막의 무결성을 보존하고 각 마우스가 자체 제어 역할을하도록하여 결과를보다 비교할 수 있다는 것입니다. 이 방법을 처음 시도하는 연구원은 새끼를 올바른 위치에 배치하기가 약간 어렵 기 때문에 5 가지 방향 이미징을 수행하는 동안 어려움을 겪을 수 있습니다.망막 전체 장착을 위해 조직을 수집하려면 구부러진 가위를 사용하여 안락사 된 C57-Black / 6 강아지의 안와 조직에서 안구를 분리하십시오. 그런 다음 구부러진 집게를 안구의 뒤쪽 부분에 삽입하여 시신경을 고정하고 눈을 궤도에서 빠르게 들어 올립니다. 미리 냉각된 PBS에 안구를 넣어 표면에서 머리카락과 혈액을 제거합니다.모든 안구가 수집되면 세척 된 안구를 4 % 파라 포름 알데히드가 포함 된 2 밀리리터 미세 원심 분리 튜브로 옮기고 실온에서 15 분 동안 배양하고 분당 12-15 회전합니다. 배양이 끝나면 해부 현미경으로 배양 접시의 중앙에 PBS 한 방울을 넣고 하나의 안구를 방울에 넣습니다. 한 쌍의 집게로 안구를 잡고 1 밀리리터 주사기 바늘을 사용하여 각막 윤부의 각막을 조심스럽게 뚫습니다.한 쌍의 가위 끝을 구멍에 넣고 망막을 자르지 않도록 조심하면서 각막 윤부를 따라 각막을 자릅니다. 집게를 사용하여 홍채와 렌즈를 제거하고 남은 아이컵을 4%파라포름알데히드에 넣어 셰이커의 실온에서 45분 동안 배양합니다. 배양이 끝나면 고정 된 아이 컵을 새로운 배양 접시의 중앙에있는 신선한 PBS 방울에 놓습니다.한 쌍의 집게로 아이 컵을 잡고 두 번째 집게를 사용하여 망막과 공막 층을 부드럽게 분리하십시오. 망막과 공막 층 사이에 가위 끝을 놓고 공막을 시신경쪽으로 자릅니다. 망막에서 공막을 벗겨 망막 컵을 얻습니다.집게를 사용하여 방사형 히알로이드 혈관과 말초 망막 사이의 연결을 해제하십시오. 팁이 잘린 2 밀리리터 피펫을 사용하여 망막 컵을 48 웰 플레이트의 한 웰로 옮기고 셰이커의 실온 PBS에서 5 분 동안 3 회 세척합니다. 마지막 세척 후 컵을 PBS의 1% 트리톤 X-100 및 5% 일반 당나귀 혈청에 섭씨 4도에서 밤새 배양합니다.망막 혈관 구조에 이소렉틴 B4를 라벨링하려면 셰이커에서 섭씨 4도에서 밤새 아이솔렉틴 B4-594가 보충 된 400 마이크로 리터 0.1 % 일반 당나귀 혈청의 48 웰 플레이트의 한 웰에서 망막을 배양합니다. 필요한 경우 다른 1 차 항체를 동시에 첨가 할 수 있습니다. 다음 날, 셰이커에서 0.1%PBST로 20분 세척 3회로 망막을 세척합니다.마지막 세척 후, 실온에서 1시간 동안 적절한 고친화성 2차 항체와 함께 망막을 인큐베이션한 후 샘플을 DAPI로 20 내지 25분 동안 라벨링한다. 배양이 끝나면 흔들면서 실온에서 0.1%PBST로 3회 30분 세척하여 망막을 세척합니다. 마지막 세척 후 망막 컵을 개구부가 위를 향하도록 깨끗한 슬라이드로 옮기고 현미경을 사용하여 주변에서 중심을 향해 시신경 머리에서 최대 1-1.5mm까지 3시, 6시, 9시 및 12시 위치에서 방사상으로 망막을 절단합니다.망막을 세 번 헹구기 전에 세척 당 PBS 몇 방울로 헹구고 공기 종이를 사용하여 망막을 말리고 평평하게합니다. 액적의 직경이 커버슬립의 절반을 덮을 때까지 커버슬립 중앙에 장착 매체를 한 방울 떨어뜨립니다. 그런 다음 커버슬립 장착 매체 면을 아래로 향하게 하여 펼쳐진 망막에 빠르게 놓습니다.모든 망막 플랫 마운트가 준비되면 컨포칼 형광 현미경으로 샘플을 이미지화할 수 있습니다. 생체 내 영상의 경우 20마이크로리터의 산동 점안액을 추가하여 오래 지속되는 동공 확장을 달성합니다. 5분 후, 이미징 장치 앞의 작은 가열 패드에 새끼를 안정적인 위치에 놓습니다.각막의 수분을 유지하려면 이미징 절차 전반에 걸쳐 정기적으로 인공 눈물을 추가하십시오. 그런 다음 장치에서 적외선 안저 이미징을 클릭하여 시신경 헤드를 화면 중앙으로 조정합니다. 150 마이크로 리터의 0.5 % 플루오레 세인 나트륨 염 용액을 복강 내 주사하고 즉시 이미징 장치의 터치 패널에있는 FA 및 주입 버튼을 클릭하여 타이머를 시작합니다.3 분 후, 망막의 혈액 순환이 정맥 단계에 들어가면 중앙 망막의 첫 번째 이미지를 얻습니다. 시신경 헤드가 이미지 획득 영역의 한쪽 중간 지점에 위치할 때까지 이미징 장치의 렌즈를 눈의 비강 쪽으로 수평으로 이동하고 두 번째 이미지를 촬영합니다. 렌즈를 계속 움직이고 같은 방식으로 측두엽, 상급 망막, 하부 망막의 이미지를 획득하십시오.적절한 이미징 처리 프로그램에서 망막 이미지를 처리하려면 파일 메뉴를 열고 새로 만들기를 클릭하여 검은색 배경의 새 캔버스를 만듭니다. 중앙 망막의 이미지를 엽니 다. 그런 다음 파일을 클릭하여 두 번째 이미지를 추가합니다.두 번째 이미지의 불투명도를 60%로 조정하고 두 이미지가 겹칠 때까지 이미지를 이동하고 크기를 조정합니다. 자유 변형 모드와 변형 모드 간 전환을 클릭하고 필요한 경우 선박을 미묘하게 조정합니다. 그런 다음 두 번째 이미지의 불투명도를 다시 100%두 이미지 모두 선택하고 [레이어 자동 혼합]을 클릭합니다.혼합 방법으로 파노라마를 선택하고 매끄러운 색조 및 색상 및 내용 인식 채우기 투명 영역 상자도 선택합니다. 확인을 클릭하여 처음 두 이미지의 스티칭을 완료합니다. 다음으로, 세 번째 이미지를 추가하고 단일 망막에서 5개의 이미지가 모두 스티칭될 때까지 이 이미지를 처음 두 이미지에 스티칭합니다.분석의 모든 이미지가 처리되면 자르기 도구를 사용하여 FFA 이미지를 균일한 크기로 자릅니다. 고 산소증에 노출 된 지 5 일 후, 출생 후 12 마리의 새끼의 중심 망막은 큰 비 관류 영역을 보여줍니다. 5 일간의 저산소 상태로 옮겨지면 망막은 점차적으로 신생 혈관을 형성하여 주변의 정상 혈관에서 관찰되는 것보다 더 강한 형광 신호의 증가를 나타냅니다.출생 후 17 일 후, 병리학 적 신생 혈관은 빠르게 퇴행하고 망막은 출생 후 25 일까지 완전히 정상적인 모습을 보입니다. 산소 유발 망막병증 모델의 우수한 반복성 및 안정성은 새끼의 깔짚 크기 및 출생 후 체중 증가를 제어함으로써 달성될 수 있다. 관찰된 바와 같이, 혈관 소멸은 일반적으로 출생 후 12일에 최고조에 달하고 출생 후 25일에 사라지는 반면, 신생혈관은 출생 후 17일에 최고조에 달하고 출생 후 25일까지 퇴행합니다.출생 후 15 내지 25일째 산소-유도성 망막병증 마우스에서, 망막 혈관 직경은 정상 마우스의 망막에 대해 관찰된 것에 비해 증가하고 매우 고문적이 된다. 왼손의 집게는 주로 지원 역할을합니다. 안구를 변형 시키거나 파열시킬 수있는 안구를 쥐어 짜지 않도록주의하십시오.

Research

JoVE Journal

Biology

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

만성 실험에 장착 전극 또는 Microdialysis 프로브를위한 라이트 - 치료 치과 접착제 수지의 응용

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these ...

연구

생물학

Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice

라이트의 전체 세포 레코딩은 망막 통에 흥분성의 시냅틱 전류를 Evoked

We use the whole-cell patch clamp technique to study the synaptic circuitry that underlies visual information processing in the retina. In this video, we ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

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