Name: monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model
Uploaded: 2021-04-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model at JoVE.com

Vi takker alle medlemmene fra vårt laboratorium og oftalmiske dyrelaboratorium i Zhongshan Ophthalmic Center for deres tekniske assistanse. Vi takker også professor Chunqiao Liu for eksperimentell støtte. Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra National Natural Science Foundation of China (NSFC: 81670872; Beijing, Kina), Natural Science Foundation of Guangdong-provinsen, Kina (Grant No.2019A1515011347), og høyt nivå sykehusbyggingsprosjekt fra State Key Laboratory of Ophthalmology ved Zhongshan Ophthalmic Center (Grant No. 303020103; Guangzhou, Guangdong-provinsen, Kina).

Alle prosedyrer som involverer bruk av mus ble godkjent av dyreforsøkets etiske komité ved Zhongshan Ophthalmic Center, Sun Yat-sen University, Kina (autorisert nummer: 2020-082), og i samsvar med de godkjente retningslinjene for dyrepleie og brukskomité for Zhongshan Ophthalmic Center og Association Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Erklæring for bruk av dyr i oftalmisk og visjonsforskning.
1. Induksjon av mus OIR-modell
<ol><li>Bruk mus med lavere frekvens av medfødt misdann...

Musens følsomhet for OIR påvirkes av mange faktorer. Valpene med ulik genetisk bakgrunn og stammer kan ikke sammenlignes. I BALB / c albino mus, fartøy regrow inn i VO området raskt med betydelig redusert neovaskulær tufts38, noe som bringer noen vanskeligheter for forskningen. I C57BL/6 mus er det økt fotoreseptorskade sammenlignet med BALB/cJ musestamme39,40. Det samme gjelder for forskjellige typer transgene mus4...

Retinal neovaskularisering (RNV), som er definert som en tilstand der nye patologiske kar stammer fra eksisterende retinale vener, strekker seg vanligvis langs den indre overflaten av netthinnen og vokser inn i glasslegemet (eller subretinalt rom under noen forhold)1. Det er et kjennetegn og vanlig trekk ved mange iskemiske retinopatier, inkludert retinopati av prematuritet (ROP), retinal vene okklusjon (RVO) og proliferativ diabetisk retinopati (PDR)2.
Tallrike kliniske og eksperimentelle observasjoner har indikert at iskemi er hovedårsaken til retinal neovaskularisering 3,4. I ROP blir nyfødte utsatt for oksygen på høyt nivå i lukkede inkubatorer for å øke overlevelsesraten, noe som også er en viktig driver for arrestasjon av vaskulær vekst. Etter at behandlingen er ferdig, opplever netthinnen til nyfødte en relativt hypoksisk periode5. Andre situasjoner ses ved okklusjon av sentrale eller grenede retinale vener i RVO, og skade på retinale kapillærer observeres også som skyldes mikroangiopati i PDR2. Hypoksi øker ytterligere uttrykket av angiogene faktorer som vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) gjennom den hypoksi-induserte faktor-1α (HIF-1α) signalveien som igjen styrer vaskulære endotelceller til å vokse inn i det hypoksiske området og danne nye kar 6,7.
ROP er en slags vaskulær proliferativ retinopati hos premature spedbarn og en ledende årsak til barndomsblindhet 8,9, som er preget av retinal hypoksi, retinal neovaskularisering og fibrøs hyperplasi10,11,12. På 1950-tallet fant forskerne at høy konsentrasjon av oksygen kan forbedre respiratoriske symptomer hos premature spedbarnbetydelig 13,14. Som et resultat ble oksygenbehandling i økende grad brukt hos premature spedbarn på den tiden15. Samtidig med den utbredte bruken av oksygenbehandling hos premature barn, økte imidlertid forekomsten av ROP år for år. Siden da har forskere koblet oksygen til ROP, og utforsket ulike dyremodeller for å forstå patogenesen til ROP og RNV16.
Hos mennesker er de fleste retinal vaskulaturutvikling fullført før fødselen, mens hos gnagere utvikler retinal vaskulatur etter fødselen, og gir et tilgjengelig modellsystem for å studere angiogenese i retinal vaskulatur2. Med den kontinuerlige utviklingen av forskningen har oksygenindusert retinopati (OIR) -modeller blitt viktige modeller for å etterligne patologisk angiogenese som følge av iskemi. Det er ingen spesifikke dyrearter i studien av OIR-modellen, og modellen er utviklet i ulike dyrearter, inkludert kattunge 17, rotte18, mus19, beagle valp 20 og sebrafisk21. Alle modellene deler den samme mekanismen som de blir utsatt for hyperoksi under tidlig retinal utvikling og deretter returnert til det normoksiske miljøet. Smith og medarbeidere observerte at eksponering av musevalper for hyperoksi fra P7 i 5 dager induserte en ekstrem form for karregresjon i den sentrale netthinnen og bringe dem tilbake til romluften ved P12 gradvis utløste neovaskulære tufter, som vokste mot glasslegemet19. Dette var en standardisert OIR-musemodell også kalt Smith-modell. Connor og medarbeidere optimaliserte protokollen ytterligere og ga en universelt anvendelig metode for å kvantifisere området VO (vaso-utslettelse) og NV (neovaskularisering) i 2009, noe som økte aksepten og utnyttelsen av modellen22. OIR-musemodellen er fortsatt den mest brukte modellen nå på grunn av sin lille størrelse, raske reproduksjon, klare genetiske bakgrunn, god repeterbarhet og høy suksessrate.
Hos mus starter retinal vaskularisering etter fødselen med innvekst av kar fra optisk nervehode inn i den indre netthinnen mot ora serrata. Under normal retinal utvikling spirer de første retinale karene fra optisk nervehode rundt fødselen, og danner et ekspanderende nettverk (den primære plexus) som når periferien rundt postnatal dag 7 (P7) 23. Deretter begynner karene å vokse inn i netthinnen for å danne et dypt lag, trenge inn i netthinnen og etablere et laminært nettverk rundt det indre kjernefysiske laget (INL) som i menneske24. Ved slutten av den tredje barseluken (P21) er dypere plexusutvikling nesten fullført. For OIR-musemodellen vises vaskulær okklusjon alltid i den sentrale netthinnen på grunn av den raske degenerasjonen av et stort antall umodne vaskulære nettverk i det sentrale området under hyperoxia-eksponering. Så forekommer veksten av patologisk neovaskularisering også i den midterste perifere netthinnen, som er grensen til ikke-perfusjonsområdet og det vaskulære området. Imidlertid har menneskelige retinale kar nesten dannet seg før fødselen. Når det gjelder premature spedbarn, blir den perifere netthinnen ikke fullstendig vaskularisert når den blir utsatt for hyperoksi25,26. Så vaskulær okklusjon og neovaskularisering forekommer hovedsakelig i perifer retina27,28. Til tross for disse forskjellene rekapitulerer muse-OIR-modellen nøye de patologiske hendelsene som oppstår under iskemi-indusert neovaskularisering.
Induksjonen av OIR-modellen kan deles inn i to faser29: i fase 1 (hyperoxia-fase) blir retinal vaskulær utvikling arrestert eller forsinket med okklusjon og regresjon av blodkar som følge av nedgangen i VEGF og apoptose av endotelceller 24,30; I fase 2 (hypoksifase) vil oksygentilførselen i netthinnen bli utilstrekkelig under romluftforhold29, noe som er avgjørende for nevral utvikling og homeostase 19,31. Denne iskemiske situasjonen resulterer vanligvis i uregulert, unormal neovaskularisering.
For tiden er den ofte brukte modelleringsmetoden vekslende høy / lav oksygeneksponering: Mødre og deres valper blir utsatt for 75% oksygen i 5 dager ved P7 etterfulgt av 5 dager i romluft til P17 viste sammenlignbare resultater22, som er endepunktet for OIR-musemodellinduksjon. (Figur 1). I tillegg til å simulere ROP, kan denne iskemimedierte patologiske neovaskulariseringen også brukes til å studere andre iskemiske retinale sykdommer. Hovedmålingene av denne modellen inkluderer kvantifisering av området VO og NV, som analyseres fra retinale flate fester ved immunfluorescensfarging eller FITC-dekstran perfusjon. Hver mus kan bare studeres en gang på grunn av den dødelige operasjonen. For tiden er det få metoder for å observere dynamiske endringer av retinal vaskulatur kontinuerlig under prosessen med vaskulær regresjon og patologisk angiogenese32. I dette papiret gir vi en detaljert protokoll for OIR-modellinduksjon, analyse av retinale flatfester, samt en arbeidsflyt av fluorescein fundus angiografi (FFA) på mus som vil være nyttig for å få en mer omfattende forståelse av vaskulære dynamiske endringer i to faser av OIR-musemodellen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL sterile syringe</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>YA0550</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts and intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215; Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Transgen Biotech</td>
			<td>&#160;FG701-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml Microcentrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MCT-200-C</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48 Well Clear TC-Treated Multiple Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive microscope slides</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop CC 2019</td>
			<td>Adobe Inc.</td>
			<td></td>
			<td>For image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide gas</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For sacrifice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14127</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI staining solution</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab228549</td>
			<td>For labeling nucleus on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olmpus</td>
			<td>SZ61</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6377</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Microscope</td>
			<td>&#160;Zeiss</td>
			<td>AxioImager.Z2</td>
			<td>For acquisition of fluorescence images of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G Mounting media</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>&#160;0100-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxypropyl Methylcellulose</td>
			<td>Maya</td>
			<td>89161</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolectin B4 594 antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I21413</td>
			<td>For labeling retinal vasculature on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice C57/BL6J</td>
			<td>GemPharmatech of Jiangsu Province</td>
			<td></td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro dissecting scissors-straight blade</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503242</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No.4 straight forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>&#160;501978-6</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7475</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2 sensor</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For monitoring the level of O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OxyCycler</td>
			<td>Biospherix</td>
			<td>A84XOV</td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148-1KG</td>
			<td>For tissue fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soda lime</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For absorbing excess CO2 in the oxygen chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPECTRALIS HRA+OCT</td>
			<td>Heidelberg</td>
			<td>HC00500002</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPSS Statistics 22.0</td>
			<td>IBM</td>
			<td></td>
			<td>For statistical analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tansference decloring shaker</td>
			<td>Kylin-Bell</td>
			<td>ZD-2008</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish (Low attachment)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3261-20EA</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;SLBW6818</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Imaging Software</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td>For image acquisition and export</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model

Oksygenindusert retinopati (OIR) er mye brukt til å studere unormal karvekst i iskemiske retinale sykdommer, inkludert retinopati av prematuritet (ROP), proliferativ diabetisk retinopati (PDR) og retinal vene okklusjon (RVO). De fleste OIR-studier observerer retinal neovaskularisering på bestemte tidspunkter; Imidlertid har den dynamiske fartøyveksten i levende mus langs et tidskurs, som er avgjørende for å forstå OIR-relaterte fartøyssykdommer, blitt understudert. Her beskriver vi en trinnvis protokoll for induksjon av OIR-musemodellen, fremhever potensielle fallgruver og gir en forbedret metode for raskt å kvantifisere områder med vaso-utslettelse (VO) og neovaskularisering (NV) ved hjelp av immunfluorescensfarging. Enda viktigere, vi overvåket gjenvekst av fartøy i levende mus fra P15 til P25 ved å utføre fluorescein fundus angiografi (FFA) i OIR-musemodellen. Anvendelsen av FFA til OIR-musemodellen lar oss observere ombyggingsprosessen under gjenvekst av fartøy.

I OIR-musemodellen er det viktigste og grunnleggende resultatet kvantifiseringen av VO- og NV-området. Etter å ha levd i hyperoksimiljøet i 5 dager fra P7, viste den sentrale netthinnen til valpene det største ikke-perfusjonsområdet. Under stimulering av hypoksi i ytterligere 5 dager ble retinal neovaskularisering gradvis produsert som fluorescerte mer intenst enn omkringliggende normale kar. Etter P17 gikk fluorescenssignalet til patologisk neovaskularisering raskt tilbake som ombygging av netthinnen (<strong class...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model at JoVE.com

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Denne protokollen beskriver en detaljert metode for fremstilling og immunfluorescensfarging av mus retinal flat mounts og analyse. Bruk av fluorescein fundus angiografi (FFA) for musunger og bildebehandling er også beskrevet i detalj.

Overvåking av dynamisk vekst av retinale kar i oksygenindusert retinopati musemodell

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...

Denne protokollen kan hjelpe forskere enkelt å skille netthinnen til mus og observere de dynamiske endringene i retinal vaskulaturen til OIR-musemodellen. De viktigste fordelene ved denne metoden er bevaring av integriteten til de separerte netthinnene og lar hver mus tjene som sin egen kontroll, noe som gjør resultatene mer sammenlignbare. Forskere som prøver denne metoden for første gang, kan slite mens de tar de fem orienteringsbildene fordi det er litt vanskelig å plassere valper i riktig posisjon.For å samle vevet for retinal hel montering, bruk buet saks for å koble øyebollene fra orbitalvevet til en avlivet C57-Black / 6 valp. Sett deretter buede tang inn i den bakre delen av øyebollet, klemmer optisk nerve og løfter øyet raskt ut fra bane. Plasser øyebollene i forkjølt PBS for å fjerne hår og blod fra overflaten.Når alle øyebollene er samlet, overfør de rensede øyebollene til et to milliliter mikrosentrifugerør som inneholder 4% paraformaldehyd, og inkuberer i 15 minutter ved romtemperatur og 12 til 15 omdreininger per minutt. På slutten av inkubasjonen, legg til en dråpe PBS i midten av en kulturskål under et dissekeringsmikroskop, og legg ett øyeboll i dråpen. Hold øyebollet med et par tang, bruk en milliliter sprøytenål for å punktere hornhinnen forsiktig på hornhinnen.Sett spissen av en saks inn i punkteringen, og klipp hornhinnen langs hornhinnen, vær forsiktig så du ikke kutter netthinnen. Bruk tang for å fjerne iris og linse, og plasser den gjenværende øyekoppen i 4% paraformaldehyd for en 45-minutters inkubasjon ved romtemperatur på shakeren. På slutten av inkubasjonen, plasser den faste øyekoppen i en ny dråpe PBS i midten av en ny kulturrett.Hold øyeklokken med ett par tang, bruk et andre par tang for å forsiktig skille retina og sclera lagene. Plasser saksens spiss mellom netthinnen og sclera-lagene, og skjær scleraen mot synsnerven. Skrell sclera av netthinnen for å få retinalkoppen.Ved hjelp av tang, frigjør forbindelsen mellom de radiale hyaloidkarene og perifer retina. Bruk en to milliliter pipette med spissen avskåret for å overføre retinalkoppen til en brønn på en 48-brønnplate i tre fem minutters vasker i romtemperatur PBS på shakeren. Etter siste vask, inkuber koppen i 1% Triton X-100 og 5% normalt eselserum i PBS over natten ved fire grader Celsius.For å merke retinal vaskulaturen med isolectin B4, inkuber netthinnen i en brønn av en 48-brønnplate i 400 mikroliter 0,1% normalt eselserum supplert med isolektin B4-594 over natten ved 4 grader Celsius på en shaker. Om nødvendig kan et annet primært antistoff tilsettes samtidig. Neste dag vasker du netthinnen med tre 20-minutters vasker i 0,1% PBST på shakeren.Etter siste vask, inkuber netthinnen med et passende sekundært antistoff med høy affinitet i en time ved romtemperatur før du merker prøven med DAPI i 20 til 25 minutter. På slutten av inkubasjonen, vask netthinnen med tre 30-minutters vasker i 0,1% PBST ved romtemperatur med risting. Etter den siste vasken, overfør retinalkoppen til et rent lysbilde med åpningen vendt opp, og bruk mikroskopet til å kutte netthinnen radialt ved tre, seks, ni og 12 timer fra periferien mot midten, opp til en til 1,5 millimeter fra optisk nervehode.Skyll netthinnen tre ganger med noen dråper PBS per vask før du bruker luftlagt papir for å tørke og flate netthinnen. Legg til en dråpe monteringsmedium i midten av dekselet til diameteren på dråpen dekker halvparten av dekselet. Plasser deretter raskt dekselet med middels side ned på den utspredte netthinnen.Når alle retinale flate fester er forberedt, kan prøvene avbildes ved konfokal fluorescensmikroskopi. For in vivo-avbildning, tilsett 20 mikroliter mydriatiske øyedråper for å oppnå langvarig pupillutvidelse. Etter fem minutter plasserer du valpene i stabil stilling på en liten varmepute foran bildebehandlingsenheten.For å opprettholde fuktighet i hornhinnen, tilsett regelmessig kunstige tårer gjennom bildebehandlingsprosedyren. Deretter klikker du Infrarød Fundus Imaging på enheten for å justere optisk nervehode til midten av skjermen. Injiser 150 mikroliter 0,5% fluoresceinnatriumsaltoppløsning intraperitonealt, og klikk umiddelbart på FA- og injeksjonsknappene på berøringspanelet på bildebehandlingsenheten for å starte timeren.Etter tre minutter, når blodsirkulasjonen av netthinnen har gått inn i venøs fase, skaff deg det første bildet av den sentrale netthinnen. Flytt linsen til bildebehandlingsenheten horisontalt til nesesiden av øyet til synsnervehodet er plassert midt på den ene siden av bildeopptaksområdet, og ta det andre bildet. Fortsett å flytte linsen og få bilder av den tidsmessige, overlegne og dårligere netthinnen på samme måte.For å behandle retinalbildene i et passende bildebehandlingsprogram, åpne Fil-menyen og klikk Ny for å opprette et nytt lerret med svart bakgrunn. Åpne bildet av den sentrale netthinnen. Klikk deretter filet for å legge til et nytt bilde.Juster tettheten til det andre bildet til 60 %, og flytt og endre størrelsen på bildet til de to bildene overlapper hverandre. Klikk på Bytt mellom fri transformerings- og fordreiningsmodus, og gjør om nødvendig subtile justeringer av fartøyene. Sett deretter tettheten til det andre bildet tilbake til 100 %Merk begge bildene, og klikk Bland lag automatisk.Merk av for Panorama som blandingsmetode, og merk også av i boksene for Sømløse toner og farger og innholdsbevisst fyll gjennomsiktige områder. Klikk OK for å fullføre sømmen av de to første bildene. Deretter legger du til det tredje bildet, og syr dette bildet til de to første bildene som demonstrert til alle fem bildene fra en enkelt netthinne er sydd.Når alle bildene fra analysen er behandlet, bruk beskjæringsverktøyet til å beskjære FFA-bildene til en jevn størrelse for å lette observasjonen av endringene i retinal vaskulaturdynamikk ved forskjellige utviklingstidspunkter. Etter fem dagers eksponering for hyperoksi viser de sentrale netthinnene i postnatal dag 12 avkom et stort ikke-perfusjonsområde. Ved overføring til fem dager med hypoksiske forhold, neovaskulariserer netthinnen gradvis, og utviser en økning i fluorescenssignal sterkere enn det som observeres i de omkringliggende normale karene.Etter postnatal dag 17 går den patologiske neovaskulariseringen raskt tilbake, og netthinnen viser et helt normalt utseende ved postnatal dag 25. En god repeterbarhet og stabilitet av oksygenindusert retinopati modell kan oppnås ved å kontrollere kullstørrelsen og postnatal vektøkning av valpene. Som observert topper vaso-oblitterasjonen vanligvis ved postnatal dag 12 og forsvinner ved postnatal dag 25, mens neovaskulariseringen topper seg ved postnatal dag 17 og regresser ved postnatal dag 25.I postnatal dag 15 til 25 oksygeninduserte retinopatimus øker retinal blodkardiameteren og blir svært torturøs sammenlignet med det som observeres for netthinnen til normale mus. Tangen i venstre hånd spiller hovedsakelig i en birolle. Pass på at du ikke klemmer øyebollet, noe som kan deformere eller briste det.

Research

JoVE Journal

Biology

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these ...

Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice

We use the whole-cell patch clamp technique to study the synaptic circuitry that underlies visual information processing in the retina. In this video, we ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Langsiktig Dødelig toksisitet Test med krepsdyret Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Validering av en musemodell for å forstyrre LINC Komplekser i en celle-spesifikk Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En ansiktsbehandling av museblodfartøy

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Et grafisk brukergrensesnitt for programvareassistert sporing av proteinkonsentrasjon i dynamiske cellulære protrusjoner

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-indre cellen masse injeksjon av embryonale stamceller fører til høyere Chimerism priser

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...