Name: monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model
Uploaded: 2021-04-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model at JoVE.com

Agradecemos a todos os membros do nosso laboratório e laboratório de animais oftalmológicos do Centro Oftalmológico Zhongshan por sua assistência técnica. Agradecemos também ao Prof. Chunqiao Liu pelo apoio experimental. Este trabalho foi apoiado por subsídios da Fundação Nacional de Ciência Natural da China (NSFC: 81670872; Pequim, China), a Fundação de Ciência Natural da Província de Guangdong, China (Grant No.2019A1515011347), e projeto de construção hospitalar de alto nível do Laboratório Estadual de Oftalmologia do Centro Oftalmológico Zhongshan (Grant No. 303020103; Guangzhou, Província de Guangdong, China).

Todos os procedimentos envolvendo o uso de camundongos foram aprovados pelo comitê de ética experimental animal do Centro Oftalmológico de Zhongshan, Sun Yat-sen University, China (número autorizado: 2020-082), e de acordo com as diretrizes aprovadas do Comitê de Cuidados e Uso de Animais do Centro Oftalmológico de Zhongshan e da Declaração da Associação de Pesquisa em Visão e Oftalmologia (ARVO) para o Uso de Animais em Pesquisa Oftalmológica e Visão.
1. Indução do modelo OIR do ...

A suscetibilidade dos camundongos ao OIR é afetada por muitos fatores. Os filhotes de diferentes origens genéticas e cepas não podem ser comparados. Em camundongos albinos BALB/c, os vasos recrescem rapidamente na área de VO com tufos neovasculares reduzidos significativos38, que trazem algumas dificuldades para a pesquisa. Em camundongos C57BL/6, há aumento do dano do fotoreceptor quando comparado com a cepa de rato BALB/cJ39,40. O m...

A neovascularização da retina (RNV), que é definida como um estado onde novos vasos patológicos se originam das veias retinárias existentes, geralmente se estende ao longo da superfície interna da retina e cresce no espaço vítreo (ou subretral sob algumas condições)1. É uma característica marcante e comum de muitas retinopatias isquêmicas, incluindo retinopatia da prematuridade (ROP), oclusão da veia da retina (RVO) e retinopatia diabética proliferativa (PDR)2.
Inúmeras observações clínicas e experimentais indicaram que a isquemia é a principal causa da neovascularizaçãoda retina 3,4. No ROP, os recém-nascidos são expostos ao oxigênio de alto nível em incubadoras fechadas para aumentar as taxas de sobrevivência, o que também é um importante motor para a prisão do crescimento vascular. Após o tratamento, as retinas dos recém-nascidos experimentam um período relativamente hipóxico5. Outras situações são observadas na oclusão das veias de retina central ou ramificada no RVO e também é observado dano de capilares de retina que é causado por microangiopatia na PDR2. A hipóxia aumenta ainda mais a expressão de fatores angiogênicos, como o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) através do fator induzido por hipóxia-1α (HIF-1α) caminho de sinalização que, por sua vez, guia as células endoteliais vasculares para crescer na área hipóxica e formar novos vasos 6,7.
O ROP é uma espécie de retinopatia proliferativa vascular em bebês prematuros e uma das principais causas de cegueira infantil 8,9, caracterizada por hipóxia retiniana, neovascularização da retina e hiperplasia fibrosa 10,11,12. Na década de 1950, pesquisadores descobriram que a alta concentração de oxigênio pode melhorar significativamente os sintomas respiratórios de bebês prematuros13,14. Como resultado, a oxigenoterapia foi cada vez mais utilizada em bebês prematuros na época15. No entanto, concomitantemente com o uso generalizado de oxigenoterapia em bebês prematuros, a incidência de ROP aumentou ano a ano. Desde então, pesquisadores associaram oxigênio ao ROP, explorando vários modelos animais para entender a patogênese do ROP e RNV16.
No ser humano, a maioria do desenvolvimento da vasculatura da retina é concluída antes do nascimento, enquanto nos roedores a vasculatura da retina se desenvolve após o nascimento, fornecendo um sistema modelo acessível para estudar angiogênese na vasculatura da retina2. Com o progresso contínuo da pesquisa, os modelos de retinopatia induzida por oxigênio (OIR) tornaram-se grandes modelos para imitar a angiogênese patológica resultante da isquemia. Não há espécies animais específicas no estudo do modelo OIR e o modelo foi desenvolvido em várias espécies animais, incluindo gatinho17, rato18, rato19, filhote de beagle20 e zebrafish21. Todos os modelos compartilham o mesmo mecanismo pelo qual são expostos à hiperoxia durante o desenvolvimento precoce da retina e depois retornados ao ambiente normóxico. Smith et al. observaram que expor filhotes de camundongos à hiperoxia de P7 por 5 dias induziu uma forma extrema de regressão do vaso na retina central e trazê-los de volta ao ar da sala em P12 gradualmente desencadeou tufos neovasculares, que cresceram em direção ao corpo vítreo19. Este foi um modelo de mouse OIR padronizado também chamado de modelo Smith. Connor et al. otimizaram ainda mais o protocolo e forneceram um método universalmente aplicável para quantificar a área de VO (vaso-obliteração) e NV (neovascularização) em 2009, o que aumentou a aceitação e utilização do modelo22. O modelo de mouse OIR ainda é o modelo mais utilizado agora por causa de seu pequeno tamanho, reprodução rápida, fundo genético claro, boa repetibilidade e alta taxa de sucesso.
Em camundongos, a vascularização da retina começa após o nascimento com o crescimento dos vasos da cabeça do nervo óptico para a retina interna em direção à ora serrata. Durante o desenvolvimento normal da retina, os primeiros vasos da retina brotam da cabeça do nervo óptico ao redor do nascimento, formando uma rede em expansão (o plexo primário) que atinge a periferia em torno do dia pós-natal 7(P7)23. Em seguida, os vasos começam a crescer na retina para formar uma camada profunda, penetrar na retina, e estabelecer uma rede laminar em torno da camada nuclear interna (INL) como no humano24. Ao final da terceira semana pós-natal (P21), o desenvolvimento mais profundo do plexo está quase concluído. Para o modelo de camundongo OIR, a oclusão vascular sempre aparece na retina central devido à rápida degeneração de um grande número de redes vasculares imaturas na região central durante a exposição à hiperoxia. Assim, o crescimento da neovascularização patológica também ocorre na retina periférica média, que é o limite da área de não perfusão e da área vascular. No entanto, os vasos de retina humana quase se formaram antes do nascimento. Quanto aos prematuros, a retina periférica não é completamente vascularizada quando exposta à hiperoxia 25,26. Assim, a oclusão vascular e a neovascularização aparecem principalmente na retina periférica27,28. Apesar dessas diferenças, o modelo OIR do camundongo recapitula de perto os eventos patológicos que ocorrem durante a neovascularização induzida pela isquemia.
A indução do modelo OIR pode ser dividida em duas fases29: na fase 1 (fase da hiperoxia), o desenvolvimento vascular da retina é preso ou retardado com oclusão e regressão dos vasos sanguíneos como resultado do declínio do VEGF e da apoptose das células endoteliais 24,30; na fase 2 (fase da hipóxia), o suprimento de oxigênio da retina se tornará insuficiente sob as condições de ar29, essencial para o desenvolvimento neural e homeostase19,31. Esta situação isquêmica geralmente resulta em neovascularização anormal não regulamentada.
Atualmente, o método de modelagem comumente utilizado é alternar alta/baixa exposição ao oxigênio: Mães e seus filhotes são expostos a 75% de oxigênio por 5 dias em P7 seguido por 5 dias no ar do quarto até p17 demonstrar resultadoscomparáveis 22, que é o ponto final da indução do modelo de camundongo OIR. (Figura 1). Além de simular ROP, essa neovascularização patológica mediada por isquemia também pode ser usada para estudar outras doenças isquêmicas da retina. As principais medidas deste modelo incluem quantificar a área de VO e NV, que são analisadas a partir de montagens planas de retina por coloração de imunofluorescência ou perfusão FITC-dextran. Cada rato só pode ser estudado uma vez por causa da operação letal. Atualmente, existem poucos métodos para observar mudanças dinâmicas da vasculatura da retina continuamente durante o processo de regressão vascular e angiogênese patológica32. Neste artigo, fornecemos um protocolo detalhado da indução do modelo OIR, análise de montagens planas de retina, bem como um fluxo de trabalho de angiografia de fluoresceína fundus (FFA) em camundongos que seria útil para obter uma compreensão mais abrangente das mudanças dinâmicas vasculares durante duas fases do modelo de mouse OIR.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL sterile syringe</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>YA0550</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts and intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215; Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Transgen Biotech</td>
			<td>&#160;FG701-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml Microcentrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MCT-200-C</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48 Well Clear TC-Treated Multiple Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive microscope slides</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop CC 2019</td>
			<td>Adobe Inc.</td>
			<td></td>
			<td>For image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide gas</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For sacrifice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14127</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI staining solution</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab228549</td>
			<td>For labeling nucleus on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olmpus</td>
			<td>SZ61</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6377</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Microscope</td>
			<td>&#160;Zeiss</td>
			<td>AxioImager.Z2</td>
			<td>For acquisition of fluorescence images of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G Mounting media</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>&#160;0100-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxypropyl Methylcellulose</td>
			<td>Maya</td>
			<td>89161</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolectin B4 594 antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I21413</td>
			<td>For labeling retinal vasculature on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice C57/BL6J</td>
			<td>GemPharmatech of Jiangsu Province</td>
			<td></td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro dissecting scissors-straight blade</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503242</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No.4 straight forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>&#160;501978-6</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7475</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2 sensor</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For monitoring the level of O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OxyCycler</td>
			<td>Biospherix</td>
			<td>A84XOV</td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148-1KG</td>
			<td>For tissue fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soda lime</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For absorbing excess CO2 in the oxygen chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPECTRALIS HRA+OCT</td>
			<td>Heidelberg</td>
			<td>HC00500002</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPSS Statistics 22.0</td>
			<td>IBM</td>
			<td></td>
			<td>For statistical analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tansference decloring shaker</td>
			<td>Kylin-Bell</td>
			<td>ZD-2008</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish (Low attachment)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3261-20EA</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;SLBW6818</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Imaging Software</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td>For image acquisition and export</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model

A retinopatia induzida por oxigênio (OIR) é amplamente utilizada para estudar o crescimento anormal de vasos em doenças isquêmicas da retina, incluindo retinopatia da prematuridade (ROP), retinopatia diabética proliferativa (RDR) e oclusão da veia retinista (RVO). A maioria dos estudos de OIR observa a neovascularização da retina em pontos de tempo específicos; no entanto, o crescimento dinâmico de embarcações em camundongos vivos ao longo de um curso de tempo, essencial para a compreensão das doenças de vasos relacionadas ao OIR, tem sido subestudado. Aqui, descrevemos um protocolo passo-a-passo para a indução do modelo de mouse OIR, destacando as potenciais armadilhas, e fornecendo um método aprimorado para quantificar rapidamente áreas de vaso-obliteração (VO) e neovascularização (NV) usando coloração de imunofluorescência. Mais importante, monitoramos o recrescimento de embarcações em camundongos vivos de P15 a P25 realizando angiografia de fundus fluoresceína (FFA) no modelo de mouse OIR. A aplicação da FFA ao modelo de mouse OIR nos permite observar o processo de remodelação durante o recrescimento da embarcação.

No modelo de mouse OIR, o resultado mais importante e básico é a quantificação da área de VO e NV. Depois de viver no ambiente de hiperoxia por 5 dias a partir de P7, a retina central dos filhotes apresentou a maior área de não perfusão. Sob a estimulação da hipóxia em mais 5 dias, a neovascularização da retina foi gradualmente produzida, que fluoresced mais intensamente do que vasos normais circundantes. Após P17, o sinal de fluorescência da neovascularização patológica regrediu rapidamente como a remo...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model at JoVE.com

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Este protocolo descreve um método detalhado para a preparação e a coloração da imunofluorescência de montagem e análise plana de retina de camundongos. O uso de fluoresceína fundus angiography (FFA) para filhotes de camundongos e processamento de imagem também são descritos em detalhes.

Monitoramento do crescimento dinâmico dos vasos retinais no modelo de rato de retinopatia induzido pelo oxigênio

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...

Este protocolo pode ajudar os pesquisadores a separar facilmente as retinas dos camundongos e observar as mudanças dinâmicas na vasculatura da retina do modelo de rato OIR. As principais vantagens deste método são a preservação da integridade das retinas separadas e permitir que cada rato sirva como seu próprio controle, o que torna os resultados mais comparáveis. Pesquisadores que tentam esse método pela primeira vez podem ter dificuldade ao tirar as cinco imagens de orientação porque é um pouco difícil colocar filhotes na posição correta.Para coletar o tecido para montagem inteira da retina, use uma tesoura curva para desconectar os globos oculares do tecido orbital de um filhote de C57-Black/6 eutanizado. Em seguida, insira fórceps curvos na parte posterior do globo ocular, apertando o nervo óptico e rapidamente levantando o olho para fora da órbita. Coloque os globos oculares em PBS pré-resfriado para remover qualquer cabelo e sangue da superfície.Quando todos os globos oculares tiverem sido coletados, transfira os globos oculares limpos para um tubo de microcentrífugo de dois mililitros contendo 4% de paraformaldeído, e incubar por 15 minutos à temperatura ambiente e 12 a 15 revoluções por minuto. No final da incubação, adicione uma gota de PBS ao centro de um prato de cultura sob um microscópio dissecando, e coloque um globo ocular na queda. Segurando o globo ocular com um par de fórceps, use uma agulha de seringa de um mililitro para perfurar cuidadosamente a córnea no limbus da córnea.Insira a ponta de uma tesoura na punção e corte a córnea ao longo do limbus da córnea, tomando cuidado para não cortar a retina. Use fórceps para remover a íris e a lente, e coloque a xícara ocular restante em 4% de paraformaldeído para uma incubação de 45 minutos à temperatura ambiente no agitador. No final da incubação, coloque a ocular fixa em uma nova gota de PBS no centro de um novo prato de cultura.Segurando a xícara ocular com um par de fórceps, use um segundo par de fórceps para separar suavemente as camadas de retina e esclera. Coloque a ponta da tesoura entre as camadas de retina e esclera e corte a esclera em direção ao nervo óptico. Retire a esclera da retina para obter o copo de retina.Usando fórceps, solte a conexão entre os vasos hialoides radiais e a retina periférica. Use uma pipeta de dois mililitros com a ponta cortada para transferir o copo de retina em um poço de uma placa de 48 poços para três lavagens de cinco minutos em temperatura ambiente PBS no shaker. Após a última lavagem, incubar o copo em 1%Triton X-100 e 5% soro de burro normal na PBS durante a noite a quatro graus Celsius.Para rotular a vasculatura de retina com isolectina B4, incubar a retina em um poço de uma placa de 48 poços em 400 microliters 0,1% soro de burro normal complementado com isolectina B4-594 durante a noite a 4 graus Celsius em um shaker. Se necessário, outro anticorpo primário pode ser adicionado ao mesmo tempo. No dia seguinte, lave a retina com três lavagens de 20 minutos em 0,1%PBST no shaker.Após a última lavagem, incubar a retina com um anticorpo secundário de alta afinidade apropriado por uma hora à temperatura ambiente antes de rotular a amostra com DAPI por 20 a 25 minutos. No final da incubação, lave a retina com três lavagens de 30 minutos em 0,1%PBST em temperatura ambiente com agitação. Após a última lavagem, transfira o copo de retina para um slide limpo com a abertura voltada para cima, e use o microscópio para cortar a retina radialmente nas posições de três, seis, nove e 12 horas da periferia em direção ao centro, até um a 1,5 milímetros da cabeça do nervo óptico.Enxágüe a retina três vezes com algumas gotas de PBS por lavagem antes de usar papel colocado a ar para secar e achatar a retina. Adicione uma gota de meio de montagem ao centro da mancha de cobertura até que o diâmetro da gota cubra metade do deslizamento de cobertura. Em seguida, coloque rapidamente o deslizamento de cobertura montando lado médio para baixo na retina outspread.Uma vez que todas as montagens planas da retina tenham sido preparadas, as amostras podem ser imagens por microscopia de fluorescência confocal. Para imagens in vivo, adicione 20 microliters de colírios micráticos para alcançar a dilatação da pupila de longa duração. Após cinco minutos, coloque os filhotes em posição estável em uma pequena almofada de aquecimento na frente do dispositivo de imagem.Para manter a umidade nas córneas, adicione regularmente lágrimas artificiais durante todo o procedimento de imagem. Em seguida, clique em Infrared Fundus Imaging no dispositivo para ajustar a cabeça do nervo óptico para o centro da tela. Injete intraperitoneally 150 microliters de solução de sal de sódio fluoresceína de 0,5%, e clique imediatamente nos botões FA e Injection no painel de toque do dispositivo de imagem para iniciar o temporizador.Após três minutos, quando a circulação sanguínea da retina entrou na fase venosa, adquire a primeira imagem da retina central. Mova a lente do dispositivo de imagem horizontalmente para o lado nasal do olho até que a cabeça do nervo óptico esteja localizada no ponto médio de um lado da área de aquisição de imagens, e tire a segunda imagem. Continue movendo a lente e adquirindo imagens da retina temporal, superior e inferior da mesma forma.Para processar as imagens da retina em um programa de processamento de imagens apropriado, abra o menu Arquivo e clique em Novo para criar uma nova tela com fundo preto. Abra a imagem da retina central. Em seguida, clique em Arquivar para adicionar uma segunda imagem.Ajuste a opacidade da segunda imagem para 60% e mova-se e redimensione a imagem até que as duas imagens se sobreponham. Clique em Alternar entre modos de transformação livre e dobra e faça ajustes sutis nas embarcações, se necessário. Em seguida, defina a opacidade da segunda imagem de volta para 100% Selecione ambas as imagens e clique em Auto-Blend Layers.Verifique o Panorama como o método de mistura e também verifique as caixas para obter tons e cores e cores e áreas transparentes de preenchimento conscientes de conteúdo. Clique em OK para completar a costura das duas primeiras imagens. Em seguida, adicione a terceira imagem, e costure esta imagem para as duas primeiras imagens como demonstrado até que todas as cinco imagens de uma única retina tenham sido costuradas.Quando todas as imagens da análise tiverem sido processadas, use a Ferramenta crop para cortar as imagens ffa em um tamanho uniforme para facilitar a observação das mudanças na dinâmica da vasculatura da retina em diferentes pontos de tempo de desenvolvimento. Após cinco dias de exposição à hiperoxia, as retinas centrais do pós-natal 12 filhotes demonstram uma grande área de não perfusão. Ao transferir para cinco dias de condições hipóxiis, as retinas gradualmente se neovascularizam, apresentando um aumento no sinal de fluorescência mais forte do que o observado nos vasos normais circundantes.Após o pós-natal 17, a neovascularização patológica regrede rapidamente e a retina demonstra uma aparência completamente normal até o pós-natal 25. Uma boa repetibilidade e estabilidade do modelo de retinopatia induzido pelo oxigênio podem ser alcançados controlando o tamanho da ninhada e o ganho de peso pós-natal dos filhotes. Como observado, a vaso-obliteração normalmente atinge o pico no pós-natal 12 e desaparece no pós-natal dia 25, enquanto a neovascularização atinge o pico no pós-natal 17 e regrede até o pós-natal dia 25.No pós-natal de 15 a 25 camundongos de retinopatia induzidos pelo oxigênio, o diâmetro do vaso sanguíneo da retina aumenta e se torna altamente torturante em comparação com o observado para as retinas de camundongos normais. Os fórceps na mão esquerda desempenham principalmente um papel coadjuvante. Tome cuidado para não apertar o globo ocular, que pode deformá-lo ou rompê-lo.

Research

JoVE Journal

Biology

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

Aplicação de Light-resina adesivo dental para Eletrodos de montagem ou Sondas microdiálise em Experimentos crônica

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these ...

Biologia

Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice

De célula inteira Recordings of Light Evocados Excitatórios Correntes Synaptic na Slice Retinal

We use the whole-cell patch clamp technique to study the synaptic circuitry that underlies visual information processing in the retina. In this video, we ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo de imagens e tratamentos terapêuticos em um modelo de camundongo ortotópico de câncer de ovário

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolamento de Células-Tronco da retina do olho do rato

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Mudanças Dinâmicas de monitoramento dos níveis de cálcio mitocondrial durante a apoptose através de um sensor de cálcio geneticamente codificado

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

A longo prazo de Teste de toxicidade letal com o crustáceo Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

A validação de um modelo de camundongo para Disrupt Complexos LINC de um modo específico de célula

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparação de Vasos Sanguíneos de Rato

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Uma interface de usuário gráfica para rastreamento assistido por software da concentração de proteínas em protrusões celulares dinâmicas

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-interno pilha injeção maciça de células-tronco embrionárias leva a taxas mais elevadas de quimerismo

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...