Name: monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model
Uploaded: 2021-04-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model at JoVE.com

Agradecemos a todos los miembros de nuestro laboratorio y del Laboratorio de Animales Oftálmicos del Centro Oftalmológico Zhongshan por su asistencia técnica. También agradecemos al Prof. Chunqiao Liu por su apoyo experimental. Este trabajo fue apoyado por subvenciones de la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (NSFC: 81670872; Beijing, China), la Fundación de Ciencias Naturales de la provincia de Guangdong, China (Subvención No.2019A1515011347), y el proyecto de construcción de hospitales de alto nivel del Laboratorio Estatal Clave de Oftalmología en el Centro Oftalmológico Zhongshan (Subvención No. 303020103; Guangzhou, provincia de Guangdong, China).

Todos los procedimientos que involucran el uso de ratones fueron aprobados por el comité de ética experimental animal del Centro Oftalmológico Zhongshan, Universidad Sun Yat-sen, China (número autorizado: 2020-082), y de acuerdo con las pautas aprobadas del Comité de Cuidado y Uso de Animales del Centro Oftalmológico Zhongshan y la Declaración de la Asociación de Investigación en Visión y Oftalmología (ARVO) para el Uso de Animales en Investigación Oftálmica y de la Visión.
1. Indu...

La susceptibilidad de los ratones a OIR se ve afectada por muchos factores. Los cachorros de diferentes antecedentes genéticos y cepas no se pueden comparar. En ratones albinos BALB/c, los vasos vuelven a crecer rápidamente en el área de VO con mechones neovasculares significativamente reducidos38, lo que trae algunas dificultades a la investigación. En ratones C57BL/6, hay un aumento del daño a los fotorreceptores en comparación con la cepa de ratón BALB/cJ39,40<sup...

La neovascularización retiniana (RNV), que se define como un estado en el que nuevos vasos patológicos se originan en las venas retinianas existentes, generalmente se extiende a lo largo de la superficie interna de la retina y crece en el espacio vítreo (o subretiniano en algunas condiciones)1. Es un sello distintivo y una característica común de muchas retinopatías isquémicas, incluyendo la retinopatía del prematuro (ROP), la oclusión de la vena retiniana (RVO) y la retinopatía diabética proliferativa (RDP)2.
Numerosas observaciones clínicas y experimentales han indicado que la isquemia es la principal causa de neovascularización retiniana 3,4. En la ROP, los neonatos están expuestos a oxígeno de alto nivel en incubadoras cerradas para aumentar las tasas de supervivencia, lo que también es un factor importante para la detención del crecimiento vascular. Después del tratamiento, las retinas de los recién nacidos experimentan un período relativamente hipóxico5. Otras situaciones se observan en la oclusión de las venas retinianas centrales o ramificadas en la OVR y también se observa daño de los capilares retinianos causado por microangiopatía en la PDR2. La hipoxia aumenta aún más la expresión de factores angiogénicos como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) a través de la vía de señalización del factor 1α inducido por hipoxia (HIF-1α) que a su vez guía a las células endoteliales vasculares para crecer en el área hipóxica y formar nuevos vasos 6,7.
La RP es un tipo de retinopatía proliferativa vascular en lactantes prematuros y una de las principales causas de ceguera infantil 8,9, que se caracteriza por hipoxia retiniana, neovascularización retiniana e hiperplasia fibrosa10,11,12. En la década de 1950, los investigadores encontraron que la alta concentración de oxígeno puede mejorar significativamente los síntomas respiratorios de los bebés prematuros13,14. Como resultado, la oxigenoterapia se usaba cada vez más en bebés prematuros en ese momento15. Sin embargo, simultáneamente con el uso generalizado de oxigenoterapia en lactantes prematuros, la incidencia de RP aumentó año tras año. Desde entonces, los investigadores han relacionado el oxígeno con la ROP, explorando varios modelos animales para comprender la patogénesis de la ROP y la RNV16.
En humanos, la mayor parte del desarrollo de la vasculatura retiniana se completa antes del nacimiento, mientras que en roedores la vasculatura retiniana se desarrolla después del nacimiento, proporcionando un sistema modelo accesible para estudiar la angiogénesis en la vasculatura retiniana2. Con el progreso continuo de la investigación, los modelos de retinopatía inducida por oxígeno (OIR) se han convertido en modelos importantes para imitar la angiogénesis patológica resultante de la isquemia. No hay especies animales específicas en el estudio del modelo OIR y el modelo se ha desarrollado en varias especies animales, incluyendo gatito 17, rata18, ratón19, cachorro beagle 20 y pez cebra21. Todos los modelos comparten el mismo mecanismo por el cual están expuestos a la hiperoxia durante el desarrollo temprano de la retina y luego regresan al ambiente normóxico. Smith et al. observaron que la exposición de crías de ratón a la hiperoxia de P7 durante 5 días indujo una forma extrema de regresión de los vasos en la retina central y traerlas de vuelta al aire ambiente en P12 desencadenó gradualmente mechones neovasculares, que crecieron hacia el cuerpo vítreo19. Este fue un modelo de ratón OIR estandarizado también llamado modelo Smith. Connor et al. optimizaron aún más el protocolo y proporcionaron un método universalmente aplicable para cuantificar el área de VO (vaso-obliteración) y NV (neovascularización) en 2009, lo que aumentó la aceptación y utilización del modelo22. El modelo de ratón OIR sigue siendo el modelo más utilizado ahora debido a su pequeño tamaño, reproducción rápida, antecedentes genéticos claros, buena repetibilidad y alta tasa de éxito.
En ratones, la vascularización retiniana comienza después del nacimiento con el crecimiento interno de vasos desde la cabeza del nervio óptico hacia la retina interna hacia la ora serrata. Durante el desarrollo normal de la retina, los primeros vasos retinianos brotan de la cabeza del nervio óptico alrededor del nacimiento, formando una red en expansión (el plexo primario) que llega a la periferia alrededor del día postnatal 7 (P7) 23. Luego, los vasos comienzan a crecer en la retina para formar una capa profunda, penetrar en la retina y establecer una red laminar alrededor de la capa nuclear interna (INL) como en el humano24. Al final de la tercera semana postnatal (P21), el desarrollo más profundo del plexo está casi completo. Para el modelo de ratón OIR, la oclusión vascular siempre aparece en la retina central debido a la rápida degeneración de un gran número de redes vasculares inmaduras en la región central durante la exposición a la hiperoxia. Por lo tanto, el crecimiento de la neovascularización patológica también ocurre en la retina periférica media, que es el límite del área de no perfusión y el área vascular. Sin embargo, los vasos retinianos humanos casi se han formado antes del nacimiento. En cuanto a los bebés prematuros, la retina periférica no está completamente vascularizada cuando se expone a la hiperoxia25,26. Así, la oclusión vascular y la neovascularización aparecen principalmente en la retina periférica27,28. A pesar de estas diferencias, el modelo OIR de ratón recapitula de cerca los eventos patológicos que ocurren durante la neovascularización inducida por isquemia.
La inducción del modelo OIR se puede dividir en dos fases29: en la fase 1 (fase de hiperoxia), el desarrollo vascular retiniano se detiene o retrasa con oclusión y regresión de los vasos sanguíneos como resultado de la disminución del VEGF y la apoptosis de las células endoteliales 24,30; En la fase 2 (fase de hipoxia), el suministro de oxígeno retiniano será insuficiente en condiciones de aire ambiente29, lo cual es esencial para el desarrollo neural y la homeostasis 19,31. Esta situación isquémica generalmente resulta en una neovascularización anormal no regulada.
Actualmente, el método de modelado comúnmente utilizado es alternar la exposición alta / baja al oxígeno: las madres y sus cachorros están expuestos al 75% de oxígeno durante 5 días en P7 seguido de 5 días en el aire ambiente hasta que P17 demostró resultados comparables22, que es el punto final de la inducción del modelo de ratón OIR. (Figura 1). Además de simular la ROP, esta neovascularización patológica mediada por isquemia también se puede utilizar para estudiar otras enfermedades isquémicas de la retina. Las principales mediciones de este modelo incluyen la cuantificación del área de VO y NV, que se analizan a partir de montajes planos retinianos mediante tinción de inmunofluorescencia o perfusión FITC-dextrano. Cada ratón puede ser estudiado sólo una vez debido a la operación letal. En la actualidad, existen pocos métodos para observar continuamente cambios dinámicos de la vasculatura retiniana durante el proceso de regresión vascular y angiogénesis patológica32. En este documento, proporcionamos un protocolo detallado de inducción del modelo OIR, análisis de montajes planos retinianos, así como un flujo de trabajo de angiografía de fondo de ojo fluoresceína (FFA) en ratones que sería útil para obtener una comprensión más completa de los cambios dinámicos vasculares durante dos fases del modelo de ratón OIR.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL sterile syringe</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>YA0550</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts and intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215; Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Transgen Biotech</td>
			<td>&#160;FG701-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml Microcentrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MCT-200-C</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48 Well Clear TC-Treated Multiple Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive microscope slides</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop CC 2019</td>
			<td>Adobe Inc.</td>
			<td></td>
			<td>For image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide gas</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For sacrifice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14127</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI staining solution</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab228549</td>
			<td>For labeling nucleus on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olmpus</td>
			<td>SZ61</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6377</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Microscope</td>
			<td>&#160;Zeiss</td>
			<td>AxioImager.Z2</td>
			<td>For acquisition of fluorescence images of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G Mounting media</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>&#160;0100-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxypropyl Methylcellulose</td>
			<td>Maya</td>
			<td>89161</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolectin B4 594 antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I21413</td>
			<td>For labeling retinal vasculature on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice C57/BL6J</td>
			<td>GemPharmatech of Jiangsu Province</td>
			<td></td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro dissecting scissors-straight blade</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503242</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No.4 straight forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>&#160;501978-6</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7475</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2 sensor</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For monitoring the level of O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OxyCycler</td>
			<td>Biospherix</td>
			<td>A84XOV</td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148-1KG</td>
			<td>For tissue fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soda lime</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For absorbing excess CO2 in the oxygen chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPECTRALIS HRA+OCT</td>
			<td>Heidelberg</td>
			<td>HC00500002</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPSS Statistics 22.0</td>
			<td>IBM</td>
			<td></td>
			<td>For statistical analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tansference decloring shaker</td>
			<td>Kylin-Bell</td>
			<td>ZD-2008</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish (Low attachment)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3261-20EA</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;SLBW6818</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Imaging Software</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td>For image acquisition and export</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model

La retinopatía inducida por oxígeno (OIR) se usa ampliamente para estudiar el crecimiento anormal de vasos en enfermedades isquémicas de la retina, incluida la retinopatía del prematuro (ROP), la retinopatía diabética proliferativa (PDR) y la oclusión de la vena retiniana (RVO). La mayoría de los estudios OIR observan neovascularización retiniana en puntos de tiempo específicos; sin embargo, el crecimiento dinámico de vasos en ratones vivos a lo largo de un curso de tiempo, que es esencial para comprender las enfermedades vasculares relacionadas con OIR, ha sido poco estudiado. Aquí, describimos un protocolo paso a paso para la inducción del modelo de ratón OIR, destacando las posibles dificultades y proporcionando un método mejorado para cuantificar rápidamente las áreas de vaso-obliteración (VO) y neovascularización (NV) utilizando tinción de inmunofluorescencia. Más importante aún, monitoreamos el recrecimiento de los vasos en ratones vivos de P15 a P25 mediante la realización de angiografía de fondo de ojo fluoresceína (FFA) en el modelo de ratón OIR. La aplicación de FFA al modelo de ratón OIR nos permite observar el proceso de remodelación durante el recrecimiento del vaso.

En el modelo de ratón OIR, el resultado más importante y básico es la cuantificación del área VO y NV. Después de vivir en el ambiente de hiperoxia durante 5 días desde P7, la retina central de las crías mostró el área de no perfusión más grande. Bajo la estimulación de la hipoxia en otros 5 días, se produjo gradualmente una neovascularización retiniana que fluoresceba más intensamente que los vasos normales circundantes. Después de P17, la señal de fluorescencia de neovascularización patológica retro...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model at JoVE.com

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Este protocolo describe un método detallado para la preparación y tinción de inmunofluorescencia de ratones montados planos de retina y análisis. El uso de la angiografía con fondo de ojo de fluoresceína (FFA) para crías de ratones y el procesamiento de imágenes también se describen en detalle.

Monitoreo del crecimiento dinámico de los vasos retinianos en un modelo de ratón con retinopatía inducida por oxígeno

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...

Este protocolo puede ayudar a los investigadores a separar fácilmente las retinas de los ratones y observar los cambios dinámicos en la vasculatura retiniana del modelo de ratón OIR. Las principales ventajas de este método son la preservación de la integridad de las retinas separadas y permitir que cada ratón sirva como su propio control, lo que hace que los resultados sean más comparables. Los investigadores que prueban este método por primera vez pueden tener dificultades al tomar las cinco imágenes de orientación porque es un poco difícil colocar a los cachorros en la posición correcta.Para recolectar el tejido para el montaje completo de la retina, use tijeras curvas para desconectar los globos oculares del tejido orbital de un cachorro C57-Black / 6 sacrificado. Luego, inserte pinzas curvas en la parte posterior del globo ocular, sujetando el nervio óptico y levantando rápidamente el ojo de la órbita. Coloque los globos oculares en PBS preenfriado para eliminar el vello y la sangre de la superficie.Cuando se hayan recogido todos los globos oculares, transfiera los globos oculares limpios a un tubo de microcentrífuga de dos mililitros que contenga 4% de paraformaldehído e incube durante 15 minutos a temperatura ambiente y de 12 a 15 revoluciones por minuto. Al final de la incubación, agregue una gota de PBS al centro de una placa de cultivo bajo un microscopio de disección y coloque un globo ocular en la gota. Sosteniendo el globo ocular con un par de fórceps, use una aguja de jeringa de un mililitro para perforar cuidadosamente la córnea en el limbo corneal.Inserte la punta de un par de tijeras en la punción y corte la córnea a lo largo del limbo corneal, teniendo cuidado de no cortar la retina. Use fórceps para extraer el iris y el cristalino, y coloque el ocular restante en paraformaldehído al 4% para una incubación de 45 minutos a temperatura ambiente en el agitador. Al final de la incubación, coloque el ocular fijo en una gota fresca de PBS en el centro de un nuevo plato de cultivo.Sosteniendo el ocular con un par de fórceps, use un segundo par de fórceps para separar suavemente las capas de retina y esclerótica. Coloque la punta de las tijeras entre las capas de retina y esclerótica, y corte la esclerótica hacia el nervio óptico. Despegue la esclerótica de la retina para obtener la copa retiniana.Usando fórceps, libere la conexión entre los vasos hialoides radiales y la retina periférica. Use una pipeta de dos mililitros con la punta cortada para transferir la copa retiniana a un pocillo de una placa de 48 pocillos durante tres lavados de cinco minutos en PBS a temperatura ambiente en el agitador. Después del último lavado, incube la taza en 1% Triton X-100 y 5% de suero de burro normal en PBS durante la noche a cuatro grados centígrados.Para marcar la vasculatura retiniana con isolectina B4, incubar la retina en un pocillo de una placa de 48 pocillos en 400 microlitros 0,1% suero de burro normal suplementado con isolectina B4-594 durante la noche a 4 grados centígrados en una coctelera. Si es necesario, se puede agregar otro anticuerpo primario al mismo tiempo. Al día siguiente, lave la retina con tres lavados de 20 minutos en PBST al 0,1% en el agitador.Después del último lavado, incubar la retina con un anticuerpo secundario apropiado de alta afinidad durante una hora a temperatura ambiente antes de etiquetar la muestra con DAPI durante 20 a 25 minutos. Al final de la incubación, lavar la retina con tres lavados de 30 minutos en PBST al 0,1% a temperatura ambiente con agitación. Después del último lavado, transfiera la copa retiniana a un portaobjetos limpio con la abertura hacia arriba, y use el microscopio para cortar la retina radialmente en las posiciones de las tres, seis, nueve y 12 en punto desde la periferia hacia el centro, hasta uno a 1,5 milímetros de la cabeza del nervio óptico.Enjuague la retina tres veces con unas gotas de PBS por lavado antes de usar papel colocado al aire para secar y aplanar la retina. Agregue una gota de medio de montaje al centro del cubreobjetos hasta que el diámetro de la gota cubra la mitad del cubreobjetos. Luego, coloque rápidamente el cubreobjetos con el lado medio de montaje hacia abajo sobre la retina extendida.Una vez que se han preparado todos los soportes planos de retina, las muestras se pueden obtener imágenes mediante microscopía de fluorescencia confocal. Para obtener imágenes in vivo, agregue 20 microlitros de gotas oftálmicas midriáticas para lograr una dilatación de la pupila duradera. Después de cinco minutos, coloque a los cachorros en una posición estable en una pequeña almohadilla térmica frente al dispositivo de imágenes.Para mantener la humedad en las córneas, agregue regularmente lágrimas artificiales durante todo el procedimiento de imágenes. A continuación, haga clic en Imágenes de fondo de ojo infrarrojo en el dispositivo para ajustar la cabeza del nervio óptico al centro de la pantalla. Inyecte por vía intraperitoneal 150 microlitros de solución salina de sodio con fluoresceína al 0,5% e inmediatamente haga clic en los botones FA e Inyección en el panel táctil del dispositivo de imágenes para iniciar el temporizador.Después de tres minutos, cuando la circulación sanguínea de la retina haya entrado en la fase venosa, adquiera la primera imagen de la retina central. Mueva la lente del dispositivo de diagnóstico por imágenes horizontalmente hacia el lado nasal del ojo hasta que la cabeza del nervio óptico esté ubicada en el punto medio de un lado del área de adquisición de imágenes y tome la segunda imagen. Continúe moviendo el cristalino y adquiera imágenes de la retina temporal, superior e inferior de la misma manera.Para procesar las imágenes de la retina en un programa de procesamiento de imágenes adecuado, abra el menú Archivo y haga clic en Nuevo para crear un nuevo lienzo con un fondo negro. Abra la imagen de la retina central. A continuación, haga clic en Archivo para agregar una segunda imagen.Ajuste la opacidad de la segunda imagen al 60% y mueva y cambie el tamaño de la imagen hasta que las dos imágenes se superpongan. Haga clic en Cambiar entre los modos de transformación libre y deformación, y realice ajustes sutiles en los recipientes si es necesario. A continuación, vuelva a establecer la opacidad de la segunda imagen en 100%Seleccione ambas imágenes y haga clic en Capas de fusión automática.Marque Panorama como método de fusión y también marque las casillas Tonos y colores sin fisuras y Áreas transparentes de relleno conscientes del contenido. Haga clic en Aceptar para completar la unión de las dos primeras imágenes. A continuación, agregue la tercera imagen y cose esta imagen a las dos primeras imágenes como se demostró hasta que se hayan cosido las cinco imágenes de una sola retina.Cuando se hayan procesado todas las imágenes del análisis, utilice la herramienta Recortar para recortar las imágenes FFA a un tamaño uniforme para facilitar la observación de los cambios en la dinámica de la vasculatura retiniana en diferentes puntos de tiempo de desarrollo. Después de cinco días de exposición a la hiperoxia, las retinas centrales de las crías postnatales del día 12 demuestran una gran área de no perfusión. Tras la transferencia a cinco días de condiciones hipóxicas, las retinas se neovascularizan gradualmente, exhibiendo un aumento en la señal de fluorescencia más fuerte que la observada en los vasos normales circundantes.Después del día postnatal 17, la neovascularización patológica retrocede rápidamente y la retina muestra una apariencia completamente normal para el día postnatal 25. Se puede lograr una buena repetibilidad y estabilidad del modelo de retinopatía inducida por oxígeno controlando el tamaño de la camada y el aumento de peso postnatal de los cachorros. Como se observa, la vaso-obliteración típicamente alcanza su punto máximo en el día postnatal 12 y desaparece en el día postnatal 25, mientras que la neovascularización alcanza su punto máximo en el día postnatal 17 y retrocede en el día postnatal 25.En el día postnatal 15 a 25 ratones con retinopatía inducida por oxígeno, el diámetro de los vasos sanguíneos retinianos aumenta y se vuelve altamente tortuoso en comparación con el observado para las retinas de ratones normales. Los fórceps en la mano izquierda juegan principalmente un papel de apoyo. Tenga cuidado de no apretar el globo ocular, que puede deformarlo o romperlo.

Research

JoVE Journal

Biology

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

Aplicación de curado con luz Resina Adhesivo Dental para los electrodos de montaje o sondas de microdiálisis en experimentos crónica

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these ...

Investigación

Biología

Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice

De células enteras grabaciones de la Luz evocados excitatorios de las corrientes sinápticas en la porción de retina

We use the whole-cell patch clamp technique to study the synaptic circuitry that underlies visual information processing in the retina. In this video, we ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

En vivo de imágenes y tratamientos terapéuticos en un modelo de ratón ortotópico de cáncer de ovario

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Aislamiento de células madre de la retina del ojo del ratón

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Seguimiento de los cambios dinámicos en niveles de calcio mitocondrial de la apoptosis mediante un sensor de calcio genéticamente codificados

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

A largo plazo Prueba de toxicidad letal con el Crustáceo Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Validación de un modelo de ratón para interrumpir LINC Complejos en una celda de manera específica

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparación de los vasos sanguíneos del ratón

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

Una interfaz gráfica de usuario para el seguimiento asistido por software de la concentración de proteínas en protones dinámicos celulares

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-interno celular masiva inyección de células madre embrionarias conduce a mayores tasas de quimerismo

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...