Name: monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model
Uploaded: 2021-04-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model at JoVE.com

Vi tackar alla medlemmar från vårt laboratorium och oftalmiska djurlaboratorium i Zhongshan Ophthalmic Center för deras tekniska hjälp. Vi tackar också prof. Chunqiao Liu för experimentellt stöd. Detta arbete stöddes av bidrag från National Natural Science Foundation of China (NSFC: 81670872; Peking, Kina), Natural Science Foundation i Guangdong-provinsen, Kina (bidrag nr 2019A1515011347) och sjukhusbyggnadsprojekt på hög nivå från State Key Laboratory of Ophthalmology vid Zhongshan Ophthalmic Center (Grant No. 303020103; Guangzhou, Guangdong-provinsen, Kina).

Alla förfaranden som involverar användning av möss godkändes av djurförsökets etiska kommitté vid Zhongshan Ophthalmic Center, Sun Yat-sen University, Kina (auktoriserat nummer: 2020-082), och i enlighet med de godkända riktlinjerna för djurvård och användningskommitté för Zhongshan Ophthalmic Center och Association Research in Vision and Ophthalmology (ARVO) Uttalande för användning av djur i oftalmisk och synforskning.
1. Induktion av musens OIR-modell
<ol><li>Använd möss ...

Mössens mottaglighet för OIR påverkas av många faktorer. Valparna med olika genetisk bakgrund och stammar kan inte jämföras. Hos BALB/c albinomöss växer kärlen snabbt in i VO-området med signifikant reducerade neovaskulära tufts38, vilket medför vissa svårigheter för forskningen. Hos C57BL/6-möss finns det ökad fotoreceptorskada jämfört med BALB/cJ-musstam39,40. Detsamma gäller för olika typer av transgena möss<sup cla...

Retinal neovaskularisering (RNV), som definieras som ett tillstånd där nya patologiska kärl härstammar från befintliga retinala vener, sträcker sig vanligtvis längs näthinnans inre yta och växer in i glaskroppen (eller subretinalt utrymme under vissa förhållanden)1. Det är ett kännetecken och vanligt inslag i många ischemiska retinopatier, inklusive retinopati av prematuritet (ROP), retinal venocklusion (RVO) och proliferativ diabetisk retinopati (PDR)2.
Många kliniska och experimentella observationer har visat att ischemi är den främsta orsaken till retinal neovaskularisering 3,4. I ROP utsätts nyfödda för syre på hög nivå i slutna inkubatorer för att öka överlevnadsgraden, vilket också är en viktig drivkraft för att stoppa vaskulär tillväxt. Efter att behandlingen är klar upplever näthinnorna hos nyfödda en relativt hypoxisk period5. Andra situationer ses vid ocklusion av centrala eller grena retinala vener i RVO och skador på retinala kapillärer observeras också vilket orsakas av mikroangiopati i PDR2. Hypoxi ökar ytterligare uttrycket av angiogena faktorer såsom vaskulär endoteltillväxtfaktor (VEGF) genom den hypoxiinducerade faktor-1α (HIF-1α) signalvägen som i sin tur leder vaskulära endotelceller att växa in i det hypoxiska området och bilda nya kärl 6,7.
ROP är en slags vaskulär proliferativ retinopati hos för tidigt födda barn och en ledande orsak till barnblindhet8,9, som kännetecknas av retinal hypoxi, retinal neovaskularisering och fibrös hyperplasi10,11,12. På 1950-talet fann forskare att hög koncentration av syre kan förbättra andningssymtomen hos för tidigt födda barn13,14 avsevärt. Som ett resultat användes syrebehandling alltmer hos för tidigt födda barn vid den tiden15. Men samtidigt med den utbredda användningen av syrebehandling hos för tidigt födda barn ökade förekomsten av ROP år för år. Sedan dess har forskare kopplat syre till ROP och utforskat olika djurmodeller för att förstå patogenesen av ROP och RNV16.
Hos människor är de flesta retinala vaskulaturutvecklingen avslutad före födseln medan retinal vaskulatur hos gnagare utvecklas efter födseln, vilket ger ett tillgängligt modellsystem för att studera angiogenes i retinal vaskulatur2. Med den kontinuerliga utvecklingen av forskningen har syreinducerad retinopati (OIR) -modeller blivit viktiga modeller för att efterlikna patologisk angiogenes till följd av ischemi. Det finns inga specifika djurarter i studien av OIR-modellen och modellen har utvecklats i olika djurarter, inklusive kattunge 17, råtta18, mus19, beaglevalp 20 och zebrafisk 21. Alla modeller delar samma mekanism genom vilken de utsätts för hyperoxi under tidig retinal utveckling och sedan återgår till den normoxiska miljön. observerade att exponering av musungar för hyperoxi från P7 i 5 dagar inducerade en extrem form av kärlregression i den centrala näthinnan och förde dem tillbaka till rumsluften vid P12 utlöste gradvis neovaskulära tufts, som växte mot glaskroppen19. Detta var en standardiserad OIR-musmodell som också heter Smith-modellen. optimerade ytterligare protokollet och tillhandahöll en universellt tillämplig metod för att kvantifiera området VO (vaso-utplåning) och NV (neovaskularisering) 2009, vilket ökade acceptansen och användningen av modellen22. OIR-musmodellen är fortfarande den mest använda modellen nu på grund av dess lilla storlek, snabba reproduktion, tydliga genetiska bakgrund, goda repeterbarhet och höga framgångsgrad.
Hos möss börjar retinal vaskularisering efter födseln med inväxt av kärl från synnervhuvudet till den inre näthinnan mot ora serrata. Under normal retinal utveckling spirar de första retinala kärlen från synnervhuvudet runt födseln och bildar ett expanderande nätverk (den primära plexusen) som når periferin runt postnatal dag 7 (P7) 23. Sedan börjar kärlen växa in i näthinnan för att bilda ett djupt lager, tränga in i näthinnan och etablera ett laminärt nätverk runt det inre kärnskiktet (INL) som i människa24. I slutet av den tredje postnatala veckan (P21) är djupare plexusutveckling nästan klar. För OIR-musmodellen uppträder vaskulär ocklusion alltid i den centrala näthinnan på grund av den snabba degenerationen av ett stort antal omogna vaskulära nätverk i den centrala regionen under hyperoxiexponering. Så tillväxten av patologisk neovaskularisering sker också i mitten av perifer näthinna, vilket är gränsen för icke-perfusionsområdet och kärlområdet. Emellertid har mänskliga retinala kärl nästan bildats före födseln. När det gäller för tidigt födda barn är den perifera näthinnan inte helt vaskulariserad när den utsätts för hyperoxi25,26. Så vaskulär ocklusion och neovaskularisering förekommer huvudsakligen i den perifera näthinnan27,28. Trots dessa skillnader rekapitulerar musens OIR-modell noggrant de patologiska händelserna som inträffar under ischemiinducerad neovaskularisering.
Induktionen av OIR-modellen kan delas in i två faser29: i fas 1 (hyperoxifas) arresteras eller fördröjs retinal vaskulär utveckling med ocklusion och regression av blodkärl som ett resultat av nedgången i VEGF och apoptosen av endotelceller 24,30; I fas 2 (hypoxifas) kommer retinal syretillförsel att bli otillräcklig under rumsluftförhållanden29, vilket är viktigt för neural utveckling och homeostas 19,31. Denna ischemiska situation resulterar vanligtvis i oreglerad, onormal neovaskularisering.
För närvarande är den vanliga modelleringsmetoden alternerande hög / låg syreexponering: Mödrar och deras valpar utsätts för 75% syre i 5 dagar vid P7 följt av 5 dagar i rumsluft tills P17 visade jämförbara resultat22, vilket är slutpunkten för OIR-musmodellinduktion. (Figur 1). Förutom att simulera ROP kan denna ischemimedierade patologiska neovaskularisering också användas för att studera andra ischemiska retinala sjukdomar. Huvudmätningarna av denna modell inkluderar kvantifiering av området för VO och NV, som analyseras från retinala platta fästen genom immunofluorescensfärgning eller FITC-dextranperfusion. Varje mus kan studeras endast en gång på grund av den dödliga operationen. För närvarande finns det få metoder för att observera dynamiska förändringar av retinal vaskulatur kontinuerligt under processen med vaskulär regression och patologisk angiogenes32. I detta dokument tillhandahåller vi ett detaljerat protokoll för OIR-modellinduktion, analys av retinala platta fästen samt ett arbetsflöde för fluorescein fundus angiografi (FFA) på möss som skulle vara till hjälp för att få en mer omfattande förståelse för vaskulära dynamiska förändringar under två faser av OIR-musmodellen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 mL sterile syringe</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>YA0550</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts and intraperitoneal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215; Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Transgen Biotech</td>
			<td>&#160;FG701-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 ml Microcentrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MCT-200-C</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>48 Well Clear TC-Treated Multiple Well Plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3548</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive microscope slides</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adobe Photoshop CC 2019</td>
			<td>Adobe Inc.</td>
			<td></td>
			<td>For image analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide gas</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For sacrifice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14127</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI staining solution</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab228549</td>
			<td>For labeling nucleus on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope</td>
			<td>Olmpus</td>
			<td>SZ61</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein sodium</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F6377</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent Microscope</td>
			<td>&#160;Zeiss</td>
			<td>AxioImager.Z2</td>
			<td>For acquisition of fluorescence images of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount-G Mounting media</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>&#160;0100-01</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydroxypropyl Methylcellulose</td>
			<td>Maya</td>
			<td>89161</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isolectin B4 594 antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>I21413</td>
			<td>For labeling retinal vasculature on retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice C57/BL6J</td>
			<td>GemPharmatech of Jiangsu Province</td>
			<td></td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro dissecting scissors-straight blade</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>503242</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No.4 straight forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>&#160;501978-6</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab7475</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O2 sensor</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For monitoring the level of O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OxyCycler</td>
			<td>Biospherix</td>
			<td>A84XOV</td>
			<td>For OIR model induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148-1KG</td>
			<td>For tissue fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pentobarbital sodium</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soda lime</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For absorbing excess CO2 in the oxygen chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPECTRALIS HRA+OCT</td>
			<td>Heidelberg</td>
			<td>HC00500002</td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPSS Statistics 22.0</td>
			<td>IBM</td>
			<td></td>
			<td>For statistical analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tansference decloring shaker</td>
			<td>Kylin-Bell</td>
			<td>ZD-2008</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dish (Low attachment)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3261-20EA</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipettes</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>&#160;SLBW6818</td>
			<td>For preparation of retinal flat mounts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide</td>
			<td>Various</td>
			<td></td>
			<td>For in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZEN Imaging Software</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td></td>
			<td>For image acquisition and export</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

monitoring dynamic growth of retinal vessels in oxygen-induced retinopathy mouse model

Syreinducerad retinopati (OIR) används ofta för att studera onormal kärltillväxt vid ischemiska retinala sjukdomar, inklusive retinopati av prematuritet (ROP), proliferativ diabetisk retinopati (PDR) och retinal venocklusion (RVO). De flesta OIR-studier observerar retinal neovaskularisering vid specifika tidpunkter; den dynamiska kärltillväxten hos levande möss längs en tidskurs, som är avgörande för att förstå de OIR-relaterade kärlsjukdomarna, har dock understuderats. Här beskriver vi ett steg-för-steg-protokoll för induktion av OIR-musmodellen, belyser de potentiella fallgroparna och tillhandahåller en förbättrad metod för att snabbt kvantifiera områden med vaso-utplåning (VO) och neovaskularisering (NV) med hjälp av immunofluorescensfärgning. Ännu viktigare var att vi övervakade kärlåterväxten hos levande möss från P15 till P25 genom att utföra fluorescein fundus angiografi (FFA) i OIR-musmodellen. Tillämpningen av FFA på OIR-musmodellen gör att vi kan observera ombyggnadsprocessen under fartygsåterväxt.

I OIR-musmodellen är det viktigaste och grundläggande resultatet kvantifieringen av VO- och NV-området. Efter att ha levt i hyperoximiljön i 5 dagar från P7 visade valparnas centrala näthinna det största icke-perfusionsområdet. Under stimulering av hypoxi i ytterligare 5 dagar producerades retinal neovaskularisering gradvis som fluorescerade mer intensivt än omgivande normala kärl. Efter P17 gick fluorescenssignalen för patologisk neovaskularisering snabbt tillbaka som ombyggnaden av näthinnan (<strong class=...

Watch this Scientific Journal Video about Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model at JoVE.com

Monitoring Dynamic Growth of Retinal Vessels in Oxygen-Induced Retinopathy Mouse Model

Detta protokoll beskriver en detaljerad metod för beredning och immunofluorescensfärgning av möss retinala platta fästen och analys. Användningen av fluorescein fundus angiografi (FFA) för mössungar och bildbehandling beskrivs också i detalj.

Övervakning av dynamisk tillväxt av retinala kärl i syreinducerad retinopati musmodell

Oxygen-induced retinopathy (OIR) is widely used to study abnormal vessel growth in ischemic retinal diseases, including retinopathy of prematurity (ROP), ...

Detta protokoll kan hjälpa forskare att enkelt separera näthinnorna hos möss och observera de dynamiska förändringarna i retinal vaskulatur i OIR-musmodellen. De främsta fördelarna med denna metod är bevarande av integriteten hos de separerade näthinnorna och låter varje mus fungera som sin egen kontroll, vilket gör resultaten mer jämförbara. Forskare som provar den här metoden för första gången kan kämpa när de tar de fem orienteringsbilderna eftersom det är lite svårt att placera valpar i rätt position.För att samla vävnaden för retinal helmontering, använd böjd sax för att koppla bort ögonbollarna från orbitalvävnaden hos en avlivad C57-Svart / 6 valp. Sätt sedan in böjda pincett i den bakre delen av ögongloben, kläm fast synnerven och lyft snabbt ögat ut från banan. Placera ögonbollarna i förkyld PBS för att ta bort hår och blod från ytan.När alla ögonbollar har samlats in, överför de rengjorda ögonbollarna till ett två-milliliter mikrocentrifugrör innehållande 4% paraformaldehyd och inkubera i 15 minuter vid rumstemperatur och 12 till 15 varv per minut. I slutet av inkubationen, tillsätt en droppe PBS i mitten av en odlingsskål under ett dissekerande mikroskop och placera en ögonglob i droppen. Håll ögongloben med ett par pincett, använd en sprutnål på en milliliter för att försiktigt punktera hornhinnan vid hornhinnans limbus.Sätt in spetsen på en sax i punkteringen och skär hornhinnan längs hornhinnans limbus, var försiktig så att du inte skär näthinnan. Använd pincett för att ta bort iris och lins och placera den återstående ögonmusslan i 4% paraformaldehyd för en 45-minuters inkubation vid rumstemperatur på skakaren. I slutet av inkubationen placerar du den fasta ögonmusslan i en ny droppe PBS i mitten av en ny kulturrätt.Håll ögonmusslan med ett par pincett, använd ett andra par pincett för att försiktigt separera näthinnan och sclera-skikten. Placera saxens spets mellan näthinnan och sclera-skikten och skär sclera mot synnerven. Skala bort sclera från näthinnan för att få näthinnekoppen.Använd pincett och släpp anslutningen mellan de radiella hyaloidkärlen och perifer näthinna. Använd en två-milliliter pipett med spetsen avskuren för att överföra retinalkoppen till en brunn på en 48-brunnsplatta för tre fem minuters tvättar i rumstemperatur PBS på skakaren. Efter den sista tvätten, inkubera koppen i 1% Triton X-100 och 5% normalt åsneserum i PBS över natten vid fyra grader Celsius.För att märka retinal vaskulatur med isolektin B4, inkubera näthinnan i en brunn på en 48-brunnsplatta i 400 mikroliter 0,1% normalt åsneserum kompletterat med isolektin B4-594 över natten vid 4 grader Celsius på en shaker. Vid behov kan en annan primär antikropp tillsättas samtidigt. Följande dag, tvätta näthinnan med tre 20-minuters tvättar i 0,1% PBST på skakaren.Efter den sista tvätten, inkubera näthinnan med en lämplig sekundär antikropp med hög affinitet i en timme vid rumstemperatur innan provet märks med DAPI i 20 till 25 minuter. Vid slutet av inkubationen, tvätta näthinnan med tre 30-minuters tvättar i 0,1% PBST vid rumstemperatur med skakning. Efter den sista tvätten, överför näthinnekoppen till en ren bild med öppningen uppåt och använd mikroskopet för att skära näthinnan radiellt vid tre, sex, nio och 12 timmar från periferin mot mitten, upp till en till 1,5 millimeter från synnervhuvudet.Skölj näthinnan tre gånger med några droppar PBS per tvätt innan du använder luftlagt papper för att torka och platta ut näthinnan. Tillsätt en droppe monteringsmedium i mitten av täckglaset tills droppens diameter täcker hälften av täckglaset. Placera sedan snabbt täckglasets monteringsmediumsida nedåt på den utspridda näthinnan.När alla retinala platta fästen har förberetts kan proverna avbildas med konfokal fluorescensmikroskopi. För in vivo-avbildning, tillsätt 20 mikroliter mydriatiska ögondroppar för att uppnå långvarig pupillutvidgning. Efter fem minuter placerar du valparna i ett stabilt läge på en liten värmedyna framför bildbehandlingsenheten.För att bibehålla fukt i hornhinnorna, lägg regelbundet till konstgjorda tårar under hela bildproceduren. Klicka sedan på Infraröd Fundus Imaging på enheten för att justera synnervhuvudet till mitten av skärmen. Injicera intraperitonealt 150 mikroliter 0,5% fluoresceinnatriumsaltlösning och klicka omedelbart på FA- och injektionsknapparna på bildapparatens pekskärm för att starta timern.Efter tre minuter, när blodcirkulationen i näthinnan har gått in i venös fas, förvärva den första bilden av den centrala näthinnan. Flytta bildapparatens lins horisontellt till nässidan av ögat tills synnervhuvudet är beläget vid mittpunkten på ena sidan av bildförvärvsområdet och ta den andra bilden. Fortsätt att flytta linsen och få bilder av den tidsmässiga, överlägsna och underlägsna näthinnan på samma sätt.Om du vill bearbeta näthinnebilderna i ett lämpligt bildbehandlingsprogram öppnar du Arkiv-menyn och klickar på Ny för att skapa en ny arbetsyta med svart bakgrund. Öppna bilden av den centrala näthinnan. Klicka sedan Fil för att lägga till en andra bild.Justera opaciteten för den andra bilden till 60 % och flytta och ändra storlek på bilden tills de två bilderna överlappar varandra. Klicka på Växla mellan lägena Free Transform och Warp och gör subtila justeringar av fartygen om det behövs. Ställ sedan tillbaka opaciteten för den andra bilden till 100 % Markera båda bilderna och klicka på Blanda lager automatiskt.Markera Panorama som blandningsmetod och markera även rutorna för Sömlösa toner och färger och Innehållsmedvetna fyllningsgenomskinliga områden. Klicka på OK för att slutföra sömnaden av de två första bilderna. Lägg sedan till den tredje bilden och sy den här bilden till de två första bilderna som visas tills alla fem bilderna från en enda näthinna har sydts.När alla bilder från analysen har bearbetats, använd beskärningsverktyget för att beskära FFA-bilderna till en enhetlig storlek för att underlätta observation av förändringarna i retinal vaskulaturdynamik vid olika utvecklingstidpunkter. Efter fem dagars exponering för hyperoxi visar de centrala näthinnorna hos postnatal dag 12 valpar ett stort icke-perfusionsområde. Vid överföring till fem dagar av hypoxiska tillstånd neovaskulariseras näthinnorna gradvis och uppvisar en ökning av fluorescenssignalen starkare än den som observerats i de omgivande normala kärlen.Efter postnatal dag 17 går den patologiska neovaskulariseringen snabbt tillbaka och näthinnan visar ett helt normalt utseende efter förlossningsdag 25. En god repeterbarhet och stabilitet hos syreinducerad retinopatimodell kan uppnås genom att kontrollera valparnas kullstorlek och postnatala viktökning. Som observerats toppar vaso-utplånandet vanligtvis vid postnatal dag 12 och försvinner vid postnatal dag 25 medan neovaskulariseringen toppar vid postnatal dag 17 och regresserar vid postnatal dag 25.I postnatal dag 15 till 25 syreinducerad retinopati möss, retinal blodkärl diameter ökar och blir mycket plågsam jämfört med den som observerats för näthinnorna hos normala möss. Tången i vänster hand spelar huvudsakligen i en stödjande roll. Var försiktig så att du inte klämmer på ögongloben, som kan deformera eller brista den.

Research

JoVE Journal

Biology

Application of Light-cured Dental Adhesive Resin for Mounting Electrodes or Microdialysis Probes in Chronic Experiments

Tillämpning av Ljus cured Dental Lim Resin för montering Elektroder eller sonder Mikrodialys vid kronisk Experiment

In chronic recording experiments, self-curing dental acrylic resins have been used as a mounting base of electrodes or microdialysis-probes. Since these ...

Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice

Helcells-Inspelningar av Ljus Evoked excitatoriska Synaptic strömmar i näthinnan Slice

We use the whole-cell patch clamp technique to study the synaptic circuitry that underlies visual information processing in the retina. In this video, we ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging och terapeutiska behandlingar i en Orthotopic musmodell av äggstockscancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolering av näthinnan stamceller från mus Eye

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...

Monitoring Dynamic Changes In Mitochondrial Calcium Levels During Apoptosis Using A Genetically Encoded Calcium Sensor

Övervakning dynamiska förändringar i mitokondriernas kalciumnivåer under apoptos Använda en genetiskt kodade Kalcium Sensor

Dynamic changes in intracellular calcium concentration in response to various stimuli regulates many cellular processes such as proliferation, ...

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Long-term Lethal Toxicity Test with the Crustacean Artemia franciscana

Långsiktig Dödligt toxicitetstest med Crustacean Artemia franciscana</em

Our research activities target the use of biological methods for the evaluation of environmental quality, with particular reference to saltwater/brackish ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

Validering av en musmodell för att Disrupt LINC Anläggningar i en cell-specifik Manner

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En Face Preparation of Mouse Blood Vessels

En ansiktsberedning av musblodfartyg

Sections of paraffin embedded tissues are routinely used for studying tissue histology and histopathology. However, it is difficult to determine what the ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

En grafisk användargränssnitt för programvaruassisterad spårning av proteinkoncentration i dynamiska cellulära protrusioner

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

Trans-inner Cell Mass injektion av embryonala stamceller leder till högre chimärism

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...