Name: zebrafish model of neuroblastoma metastasis
Uploaded: 2021-03-14T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Model of Neuroblastoma Metastasis at JoVE.com

이 작품은 국립 암 연구소에서 보조금 R01 CA240323 (S.Z.)에 의해 지원되었다; 미국 국방부(DoD)의 보조금 W81XWH-17-1-0498(S.Z.) V학자상은 V암연구재단(S.Z.)과 마요 생물의학 발견 센터(S.Z.)의 플랫폼 보조금으로 수여됩니다. 메이요 클리닉 암 센터 및 개별 의학 센터 (S.Z.)의 지원을 받고 있습니다.

제브라피시와 동물 관리/유지관리를 이용한 모든 연구 방법은 메이요 클리닉의 제도적 가이드라인에 따라 수행되었습니다.
1. PSNS에서 과발현을 가진 LMO1 형질전환 제브라피시 라인의 개발을 위한 트랜스진 구조의 제조 및 미세 주입
<ol><li>LMO1-pDONR221 항목 클론을 개발하기 위해, PCR을 사용하여 인간 세포주로부터 얻은 cDNA로부터 인간 LMO1의 코딩 영역을 ?...

<ol>
	<li>Veldman, M., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+developmental+model+organism+for+pediatric+research.">Zebrafish as a developmental model organism for pediatric research.</a> Pediatric Research. 64, 470-476 (2008).</li><li>Feitsma, H., Cuppen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+cancer+model.">Zebrafish as a cancer model.</a> Molecular Cancer Research. 6 (5), 694 (2008).</li><li>Ethcin, J., Kanki, J. P., Look, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+for+the+study+of+human+cancer.">Zebrafish as a model for the study of human cancer.</a> Methods in Cell Biology. 105, 309-337 (2010).</li><li>Benjamin, D. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Children's+oncology+group's+2013+blueprint+for+research:+neuroblastoma.">Children's oncology group's 2013 blueprint for research: neuroblastoma.</a> Pediatric Blood and Cancer. 60 (6), 985-993 (2013).</li><li>Hoehner, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+developmental+model+of+neuroblastoma:+differentiating+stroma-poor+tumors'+progress+along+an+extra-adrenal+chromaffin+lineage.">A developmental model of neuroblastoma: differentiating stroma-poor tumors' progress along an extra-adrenal chromaffin lineage.</a> Laboratory Investigation: A Journal of Technical Methods and Pathology. 75 (5), 659-675 (1996).</li><li>Tsubota, S., Kadomatsu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+initiation+mechanisms+of+neuroblastoma.">Origin and initiation mechanisms of neuroblastoma.</a> Cell and Tissue Research. 372 (2), 211-221 (2018).</li><li>Tolbert, V. P., Matthay, K. 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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+tumor-propagating+cells,+regional+tumor+heterogeneity,+and+dynamic+cell+movements+in+embryonal+rhabdomyosarcoma.">In vivo imaging of tumor-propagating cells, regional tumor heterogeneity, and dynamic cell movements in embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Cancer Cell. 21 (5), 680-693 (2012).</li><li>Stoletov, K., Montel, V., Lester, R. D., Gonias, S. 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H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertebrate+genome+evolution+and+the+zebrafish+gene+map.">Vertebrate genome evolution and the zebrafish gene map.</a> Nature Genetics. 18 (4), 345-349 (1998).</li><li>Opazo, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-genome+duplication+and+the+functional+diversification+of+teleost+fish+hemoglobins.">Whole-genome duplication and the functional diversification of teleost fish hemoglobins.</a> Molecular Biology and Evolution. 30 (1), 140-153 (2013).</li></ol>

Zebrafish는 지난 수십 년 동안 연구에서 일반적으로 사용되어 왔으며, 특히 암 연구에서는 유지 보수의 용이성, 견고한 재생산 및 생체 내 이미징1,28에 대한 명확한 이점과 같은 명백한 이유로 사용되었습니다. 제브라피시 모델은 대규모 유전 연구를 위해 쥐와 마우스와 같은 포유류 모형 유기체에 잘 보완하는 그들의 외부 풍부하게 함 및 발달 때?...

Zebrafish는 널리 사용되고 연구의 여러 영역에 적용되었습니다, 특히 암에서. 이 모델은 강력한 생식, 비용 효율적인 유지 보수 및 종양 성장 및 전이의 다목적 시각화와 같은 많은 이점을 제공하며, 이 중 제브라피쉬는 종양 발생 및 전이의 세포 및 분자 기지를 연구하고 조사할 수 있는 강력한 도구로 만듭니다. 대규모 게놈 매핑, 전염, 유전자 과발성 또는 녹아웃, 세포 이식 및 화학 스크린을 위한 새로운 기술은 제브라피시 모델1의 힘을 대단히 증강시켰습니다. 지난 몇 년 동안, 많은 얼룩말 물고기 라인은 백혈병, 흑색종, rhabdomyosarcoma, 및 간세포 암에 국한되지 않는 다양한 인간 암의 종양 발생 및 전이를 연구하기 위하여 개발되었습니다2,3,4,5. 또한, 신경모세포종(NB)의 제1 제1 제1 제보브라시모델은 도파민-베타-하이드록실라제(dβh) 프로모터를 통제하에 있는 말초 교감 신경계(PSNS)에서 종양유전자인 MYCN을 과발현함으로써 생성되었다. 이 모델로, 활성화된 ALK가 MYCN과 시너지 효과를 발휘하여 종양 발병을 가속화하고 생체내에서 종양 침투를 증가시킬 수 있음을 더욱 입증되었다.
NB는 신경 문장 세포의 동감 계보에서 파생되고, 어린이의 고이성암이다7. 그것은 소아암 관련 죽음의 10%를 책임집니다8. 진단에서 널리 전이되는, NB는 PSNS9,10의 교감 심정 및 부신 수질의 사슬을 따라 주로 유래하는 종양으로 임상적으로 제시될 수 있습니다. MYCN 증폭은 일반적으로 NB 환자에서 가난한 결과와 연관11,12. 더욱이, LMO1은 고위험 케이스13,14에서 중요한 NB 감수성 유전자로 확인되었습니다. 연구 결과는 제브라피시 모형의 PSNS에 있는 MYCN및 LMO1의 형질전환이 NB의 초기 개시를 승진시킬 뿐 아니라, 또한 고위험 NB13를 가진 환자에서 일반적으로 보인 사이트에 유사한 조직 및 기관에 광범위하게 전이를 유도한다는 것을 것을을 발견했습니다. 아주 최근에, NB의 또 다른 전이성 표현형은 또한 NB의 새로운 제브라피시 모형에서 관찰되고, MYCN과 Lin28B, RNA 결합 단백질을 인코딩하는, dβh promoter16의 통제하에 과발현되는.
제브라피시에 있는 안정한 형질 전환 접근법은 관심있는 유전자의 과발현이 일반적인 발달 및 질병 병인에 기여할 수 있었다는 것을 연구하기 위하여 수시로 이용됩니다14,15. 이 기술은 성공적으로 NB 종양 발생에 여러 유전자와 경로의 중요성을 입증하기 위해 사용되었습니다6,16,17,18,19,20. 이 논문에서는 PSNS에서 MYCN과 LMO1을 과도하게 표현하는 형질전환선이 어떻게 만들어졌는지, 그리고 이 두 종양발생의 협력이 NB 종양발생과 전이의 발병을 가속화한다는 것이 어떻게 입증되었는지소개합니다. 첫째, dβh 프로모터(지정된 MYCN 라인)의 제어하에 EGFP-MYCN을 과발현하는 형질전환선은 dβh-EGFP-MYCN 구조를 야생형(WT) AB 배아의 1세포 단계로 주입하여 개발하였으며, 이는 이전에 설명된 바와 같이 6,17이다. PSNS(지정된 LMO1 라인)에서 LMO1을 과발현하는 별도의 형질전환선은 1세포 13단계에서 WT 배아에 2개의 DNA 구조, dβh-LMO1 및 dβh-mCherry를 주입하여 개발되었다. 이전에는 이중 DNA 구조를 생성하여 물고기 게놈으로 통합될 수 있음을 입증했습니다. 따라서, LMO1 및 mCherry는 형질전환 동물의 PSNS 세포에서 공동 발현된다. 주입 된 F0 배아가 성숙에 도달하면, 그들은 트랜스 진 (들) 통합을 가진 긍정적인 물고기의 식별을 위해 WT 물고기와 교차했습니다. 간단히, F1 자손은 PSNS 세포에서 mCherry 발현에 대한 형광 현미경 검사법에 의해 처음으로 검열되었다. mCherry 양성 물고기에서 LMO1의 세균성 통합은 게놈 PCR 및 시퀀싱에 의해 더 확인되었다. 각 형질전환선의 성공적인 식별 후, 이종구스 MYCN 및 LMO1 형질형 물고기의 자손은 MYCN과 LMO1을 모두 표현하는 복합 어류 라인을 생성하기 위해 교배되었다 (지정된 MYCN; LMO1 라인). 종양 베어링 MYCN; LMO1 물고기는 1 차 부위, 인터신장 영역 (IRG, 인간 부신의 얼룩말 물고기 에 상응하는)에 먼 지역에서 전이성 종양의 증거를 위해 주중 형광 현미경 검사법에 의해 모니터링되었다. MYCN에서 종양의 전이를 확인하려면; LMO1 물고기, 조직학적 및 면역 조직화학 적 분석이 적용되었다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3,3&#8217;-Diaminobenzidine (DAB) Vector Kit</td>
			<td>Vector</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Fisher Scientific / Acros Organic</td>
			<td>64-19-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose GP2</td>
			<td>Midwest Scientific</td>
			<td>009012-36-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Tyrosine Hydroxylase (TH) Antibody</td>
			<td>Pel-Freez</td>
			<td>P40101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avidin/Biotin Blocking Kit</td>
			<td>Vector</td>
			<td>SP-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BOND Intense R Detection</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>DS9263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BOND primary antibody diluent</td>
			<td>Leica Biosystems Newcastle, Ltd.</td>
			<td>AR9352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BOND-MAX IHC instrument</td>
			<td>Leica Biosystems Newcastle, Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>fully automated IHC staining system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CH211-270H11 BAC clone</td>
			<td>BACPAC resources center (BRFC)</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compound microscope equipped with DP71 camera</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>AX70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal XYL (xylene based mounting medium)</td>
			<td>Richard-Allan Scientific</td>
			<td>8312-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3801601</td>
			<td>ready-to-use (no preparation needed)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Carolina</td>
			<td>86-1263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Expand Long Template PCR System</td>
			<td>Roche Applied Science, IN</td>
			<td>11681834001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gateway BP Clonase II enzyme mix</td>
			<td>Invitrogen, CA</td>
			<td>11789-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gateway LR Clonase II enzyme mix</td>
			<td>Invitrogen, CA</td>
			<td>11791-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rb secondary antibody (Biotinylated)</td>
			<td>Dako</td>
			<td>E0432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Solution, Harris Modified</td>
			<td>Sigma Aldrich Chemical Company Inc. / SAFC</td>
			<td>HHS-32-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP Avidin D</td>
			<td>Vector</td>
			<td>A-2004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid</td>
			<td>Aqua Solutions</td>
			<td>4360-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen Peroxide, 3%</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>H324-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I-SceI enzyme</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>R0694L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin sulfate</td>
			<td>Teknova, Inc.</td>
			<td>K2150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>34133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium Carbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich Chemical Company Inc. / SAFC</td>
			<td>554-13-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome for sectioning</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>RM2255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Shot TOP10 Chemically Competent&#160;E. coli</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C404006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p3E-polyA</td>
			<td>&#160;Dr. Chi-Bin Chien, Univ. of Utah</td>
			<td>N/A</td>
			<td>a generous gift 
			(Please refer to webpage http://tol2kit.genetics.utah.edu/index.php/Main_Page to obtain material, which is freely distrubted as described.)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafin wax</td>
			<td>Surgipath Paraplast</td>
			<td>39603002</td>
			<td>Parrafin to parafin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A11313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pDEST vector (modified destination vector containing I-SceI recognition sites)</td>
			<td>Dr. C. Grabher, Karlsruhe Institute of Technology, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>N/A</td>
			<td>a generous gift</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pDONR 221 gateway donor vector</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12536-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pDONRP4-P1R donor vector</td>
			<td>&#160;Dr. Chi-Bin Chien, Univ. of Utah</td>
			<td>N/A</td>
			<td>a generous gift</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red, 0.5%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>&#160;P0290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS), 10X</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrosirrius red stain kit</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>24901-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pME-mCherry</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>26028</td>
			<td>(DBH construct)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K, recombinant, PCR Grade</td>
			<td>Roche</td>
			<td>21712520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAprep Spin MiniPrep Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>27104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RDO Rapid Decalcifier</td>
			<td>Apex Enginerring</td>
			<td>RDO04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide (NaN3)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>26628-22-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo fluorescence microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ10F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscopic fluorescence microscope equipped with a digital sight DS-U1 camera for imaging</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ-1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq DNA Polymerase</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>M0273L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek VIP&#174;&#160;6 AI Vacuum Infiltration Processor</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model #: VIP-6-A1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine-S</td>
			<td>Western Chemical Incorporated</td>
			<td>20513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>X3P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

zebrafish model of neuroblastoma metastasis

Zebrafish는 인간 질병, 특히 암을 연구하는 중요한 동물 모델로 부상했습니다. Zebrafish 모델링에 적용된 강력한 형질 전환 및 게놈 편집 기술과 함께 유지 보수의 용이성, 고수량 생산성 및 강력한 라이브 이미징은 모두 제브라피쉬를 생체 내에서 이 공정의 기초에 기초한 전이 및 세포 및 분자 기지를 연구하는 귀중한 모델 시스템으로 만듭니다. 전이의 첫번째 제1 제브라피시 신경모세포종 (NB) 모형은 도파민 베타-하이드록실라제 (dβh) 프로모터의 통제하에, 2개의 종양유전자, MYCN 및 LMO1를 과보로 해서 개발되었습니다. CO-표현 된 MYCN 및 LMO1 신경 모세포종 발생의 감소 된 대기 시간 및 증가 침투뿐만 아니라 종양 세포의 가속 먼 전이로 이어졌다. 이 새로운 모델은 임상적으로 관련되고 전이 연관된 유전 적 변경의 참여를 포함하여 인간 전이성 NB의 많은 주요 특징을 안정적으로 반복합니다. 생체 내에서 전이의 자연적이고 자발적인 발달; 전이의 보존 사이트. 따라서, 제브라피쉬 모델은 생체내에서 종양 전이의 복잡한 과정을 해부하는 독특한 장점을 갖는다.

LMO1이 MYCN과 시너지 효과를 발휘하여 NB 병원체에 영향을 미치는지 여부를 결정하기 위해, dβh 프로모터의 통제하에 있는 PSNS 세포에서 LMO1(dβh:LMO1 및 dβh:mCherry) 또는 MYCN(dβh:EGFP-MYCN)의 발현을 구동하는 형질형성생성이 얼룩말피 배아배아로 주입되었다. 도 1A에 도시된 바와 같이, 안정된 형질전환선의 발...

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Zebrafish Model of Neuroblastoma Metastasis

본 논문은 신경모세포종의 제브라피시 모델에서 종양 전이를 실시간으로 개발, 특성화 및 추적하는 방법을 소개하며, 특히 MYCN 및 LMO1의 과발현을 가진 형질형 제브라피시 라인에서 자발적으로 전이를 발생시합니다.

신경 모세포종 전이의 제브라피시 모델

Zebrafish has emerged as an important animal model to study human diseases, especially cancer. Along with the robust transgenic and genome editing ...

이러한 방법은 신경 모세포종 전이의 첫번째 제브라피시 모형을 개발하기 위하여 이용되었습니다. 그리고이 모델은 신경 모세포종의 고위험 환자에서 본 전이의 많은 특징을 충실하게 재구성 할 수 있음을 입증합니다. 이 전이성 얼룩말 피시 모델의 주요 장점은 종양 보급의 생체 내 이미징에서 언제, 그리고 아마도 전이가 발생하는지 더 잘 이해하는 것입니다.이 기술은 신경 모세포종에 만국되지 않습니다. 그것은 종양 세포가 가능성의 배열로 이끌어 내는 확인되고 추적될 수 있는 한 암의 다양한 모형의 제브라피시 모형에 적용될 수 있습니다. 시작하려면 MYCN과 LMO1 형질 대사를 교배하여 MYCN과 LMO1을 과도하게 표현하는 이종화구균 형질형 어류 라인을 개발하십시오.언젠가 포스트 수정에서, EGFP 양성 점으로 제시 EGFP 발현에 대한 아웃 크로스의 자성을 정렬하는 입체 형광 현미경을 사용합니다. 선별 후, 선별된 배아를 별도의 페트리 요리로 분리하고 MYCN 긍정 또는 MYCN 음성으로 라벨 접시를 표시합니다. LMO1 발현을 위한 두 그룹의 배아를 3~4일 후에 비옥하게 시각화하고 분류한다.특히 힌드뇌의 직사각형 에서 우수한 자궁 경부 신경절과 비 PSNS 도파민성 뉴런 세포 모두에서 적색 형광 반점을 찾습니다. 배아가 5일 후에 수정되기 전에 검열을 수행합니다. 그런 다음 선별된 물고기를 서로 다른 유전자형으로 분리하고 MYCN으로만 라벨을 부착하고, LMO1만, MYCN 및 LMO1은 야생 유형으로 분리합니다.표준 프로토콜에 따라 동일한 조건에서 올립니다. 종양을 보기 위해 양쪽에 금속 주걱으로 물고기를 부드럽게 뒤집어 입체 형광 현미경으로 종양을 시각화합니다. 가능한 종양 베어링 물고기를 식별 한 후, 생년월일, 종양이 검사 된 날짜 및 유전자형을 포함하는 적절한 라벨이있는 별도의 탱크로 분리하십시오.수정 후 6 주에서, 이전에 가려진 물고기에 대한 종양의 존재를 확인하거나 새로운 가능한 종양 베어링 물고기를 식별하기 위해 종양 베어링 물고기와 비 종양 베어링 물고기를 검사하기 위해 이전 단계를 반복합니다. 형광 양성 질량및 확인된 종양 베어링 물고기의 지속 또는 증가된 크기를 찾아보십시오. 종양 베어링 물고기를 확인한 후에, 종양 세포 이동의 증거를 위해 격주 감시, 작은 EGFP 또는 mCherry 양성 종양 질량으로 제출하는 종양 창종의 1 차적인 사이트에서 멀리.필요에 따라 이러한 물고기를 별도의 탱크로 분리하고 가능한 전이를 나타내기 위해 적절하게 라벨을 부착합니다. LMO1 물고기에서 이종고우스 MYCN을 해석한 후, 그들의 자손을 분류하는 동안, EGFP MYCN 발현은 1일 후에 비 PSNS 도파민성 신경세포에서 두드러졌습니다. 대조적으로, LMO1 발현은 PSNS 세포와 비 PSNS 도파민성 신경 세포 둘 다에서 두드러졌습니다.형광 양성 종양 질량은 MYCN과 LMO1 의 과발현을 가진 화합물 형질전환 물고기의 1 차 종양 부위에서 멀리 떨어진 장기의 조직에서 검출되었지만 MYCN의 발현을 혼자 가진 형질전환 물고기에서는 검출되지 않았다. 수술 섹션의 H&E 염색은 신경 모세포종 환자에서 1 차적인 질병의 일반적인 사이트인 인간 부신의 제브라피시 동등한 인터신장 부위에서 1 차적인 종양이 발생했다는 것을 보여줍니다. 신장의 탈경 부분, 궤도, 아가미, 비장 및 심심 의 심방 챔버의 내벽을 포함하여 여러 지역에서 종양 질량이 발견되었습니다.1차 종양 및 모든 전이성 부위에서 종양 세포의 PSNS 신경폭발 계보가 확인되었다. MYCN을 단독으로 발현하는 종양과 비교했을 때 MYCN LMO1 종양에서 PSR 염색 콜라겐 섬유의 현저히 증폭된 양과 두께증가가 발견되었다. 이 절차를 사용한 후, 신약 검진 및 새로운 암 치료법을 테스트하면 잠재적으로 전이성 암을 예방하고 치료할 대체 제제의 개발로 이어질 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

원래 종양 개발의 쥐 실험 모델 및 복막 전이<em&gt;를 통해</em난소 암 세포에&gt; 동소 이식 접종

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

연구

암 연구학

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

종양의 전이에 저산소증의 테스트 효과에 대한 생체 내 모델에서

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

고급 동물의 간에서 대장 전이의 모델 : 이미징 기술 및 전이성 클론의 특성

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

전임상 마우스 모델에 대한 수술 절차 및 방법론<em&gt; 드 노보</em&gt; 유방암 전이

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

포탈 정맥 주입 모델 간 전이 유방암의 공부를

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Acellular과 세포 폐 종양 전이 연구 모델

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

하류 분자 분석 및 전이성 전위 평가를 위한 순환 종양 세포의 미세 조작

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

4T1 유방암 모델에서 폐 전이의 정량화를 개선하기 위해 컴퓨터 기반 이미지 분석을 사용하여

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

전이율을 제어하는 절단을 가진 신제닉 직소 성 골육종 스프라그 Dawley 쥐 모델

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...