Name: rapid freezing using sandwich freezing device for good ultrastructural preservation of biological specimens in electron microscopy
Uploaded: 2021-07-19T14:00:00
Duration: 9 min 3 s
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कोई नहीं

लेखकों ने हितों के टकराव की घोषणा नहीं की है।

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी सेल अल्ट्रास्ट्रक्चर का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है। पारंपरिक निर्जलीकरण प्रक्रियाओं के साथ रासायनिक निर्धारण का उपयोग कोशिकाओं और ऊतकों की अल्ट्रास्ट्रक्चर को देखने के लिए किया गया है। हालांकि, यह विधि कोशिकाओं की अल्ट्रास्ट्रक्चर को पर्याप्त रूप से संरक्षित नहीं करती है, और कलाकृतियों और सेल सामग्री का निष्कर्षण आमतौर पर मनाया जाता है। कोशिकाओं और ऊतकों की तेजी से ठंड और फ्रीज-प्रतिस्थापन सेल संरचना के संरक्षण के लिए बेहतर विकल्प हैं।
कोशिकाओं को तेजी से ठंडा करने के लिए तीन मुख्य तरीकों का उपयोग किया गया है1:1) डुबकी-ठंड एक ठंडे क्रायोजेन में नमूनों को डुबोकर किया जाता है, जैसे कि प्रोपेन, और 1950 के दशक की शुरुआत से इसका उपयोग किया गया था2; 2) ठंडे धातु ब्लॉक ठंड तेजी से तरल नाइट्रोजन या तरल हीलियम3,4 के साथ ठंडा एक धातु ब्लॉक पर कोशिकाओं और ऊतकों को बंद करके किया जाताहै; और 3) उच्च दबाव ठंड उच्च दबाव5,6,7 के तहत तरल नाइट्रोजन के साथ कोशिकाओं और ऊतकों को ठंडा करके किया जाताहै।
सैंडविच फ्रीजिंग एक प्रकार का डुबकी-फ्रीजिंग है जो दो तांबे की डिस्क के बीच पतली जैविक सामग्रियों को सैंडविच करके औरतरल प्रोपेन8,9,10में डुबोकर उन्हें तेजी से ठंडा करके किया जाता है। इस विधि में, बहुत पतले नमूनों (कुछ माइक्रोमीटर मोटी) को क्रायोजेन के साथ तेजी से ठंडा किया जाता है, जिसमें एक धातु का उपयोग किया जाता है जिसमें दोनों तरफ से अच्छी थर्मल चालकता होती है। इस प्रकार, यह विधि प्रभावी रूप से नमूनों से गर्मी को हटा देती है, जिससे बर्फ-क्रिस्टल क्षति के बिना कोशिकाओं को स्थिर रूप से फ्रीज करना संभव हो जाता है। सैंडविच फ्रीजिंग, जीवित खमीर और जीवाणु कोशिकाओं के फ्रीज-प्रतिस्थापन के बाद, कोशिकाओं की प्राकृतिक अल्ट्रास्ट्रक्चर को प्रकट करता है10,11,12,13,14, 15,16।
हाल ही में, इस विधि को ग्लूटाराल्डिहाइड-फिक्स्ड सूक्ष्मजीवों17, 18, 19,20, 21, 22,23,24,सुसंस्कृत कोशिकाओं25,26,27,और मानव कोशिकाओं और ऊतकों1, 28की स्पष्ट कोशिका छवियों को संरक्षित करने के लिए उपयोगी पाया गयाहै . यद्यपि इन अध्ययनों को एक हस्तनिर्मित सैंडविच फ्रीजिंग डिवाइस29का उपयोग करके किया गया है, और अन्य प्रयोगशालाओं में अन्य अध्ययनों के लिए अनुप्रयोगों को सीमित कर दिया गया है, एक नया सैंडविच फ्रीजिंग डिवाइस(एसएफडी) 28 बनाया गया है और अब व्यावसायिक रूप से उपलब्ध है।
वर्तमान पेपर से पता चलता है कि बैक्टीरिया, खमीर, सुसंस्कृत कोशिकाओं, अलग-अलग कोशिकाओं, जानवरों और मानव ऊतकों और वायरस सहित जैविक नमूनों की तेजी से ठंड के लिए एसएफडी का उपयोग कैसे किया जाए। इसके अलावा तेजी से ठंड के बाद अल्ट्राथिन सेक्शनिंग के लिए नमूनों की तैयारी, साथ ही फ्रीज-प्रतिस्थापन, राल एम्बेडिंग, ब्लॉकों की ट्रिमिंग, अल्ट्राथिन वर्गों की कटाई, वर्गों की वसूली, धुंधला, और समर्थन फिल्मों के साथ ग्रिड को कवर करने के लिए प्रक्रियाओं को भी दिखाया गया है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sandwich Freezing Device</td>
			<td>Marine works Japan, Ltd, Yokosuka, Japan</td>
			<td>MW-SFD-01</td>
			<td>with metal bar, thin metal bar, tweezers, and working bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL glass vials</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>Scintillation counter vials for fixative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>3004</td>
			<td>0.1 g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deep freezer</td>
			<td>Sanyo Co. Ltd., Osaka</td>
			<td>MDF-C8V1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper disk</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>-</td>
			<td>Refer to this paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide glass</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double-sided adhesive tape</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-edged razor blade</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>-</td>
			<td>Feather, FAS-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double-edged razor blade</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>-</td>
			<td>Feather, FA-10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shredded board</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>428</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>-</td>
			<td>Several pairs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers with polystyrene foam</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>One pair</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>3052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propane gas</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>Cryogen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ion sputter apparatus</td>
			<td>Hitachi high technologies, Tokyo</td>
			<td>Hitachi E102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>For 1 mL, 200 &#956;L, and 2 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>Tomy digital biology Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>Capsulefuge, PMC-060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Co. Ltd., Tokyo et al.</td>
			<td>-</td>
			<td>SMZ 645</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED illumination for stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Co. Ltd., Tokyo et al.</td>
			<td>SM-LW 61 Ji</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable plastic container</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>50 mL and 200 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethane gas</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>Cryogen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL Eppendorf tubes</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>For embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable plastic syringes</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>1 mL, 5 mL, 10 mL, and 20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic stirrer</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epoxy resin</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>340</td>
			<td>Quetol 812 set</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon embedding mold</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>4217</td>
			<td>7 mm in diameter, 13 mm deep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubater</td>
			<td></td>
			<td>-</td>
			<td>For 37 &#176;C and 60 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimming stage</td>
			<td>Sunmag Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>-</td>
			<td>Tilting mechanism equipped, Refer to this paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED illumination for trimming stage</td>
			<td>Sunmag Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>-</td>
			<td>Refer to this paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic Trimming Blade</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>5240</td>
			<td>EM-240, Refer to this paper</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica Microsystems, Vienna</td>
			<td>Ultracut S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grids</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>2633, 2634</td>
			<td>300 mesh, 400 mesh</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5% Neoprene W solution</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfect Loop</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>2351</td>
			<td>Fot retrieving sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Half Tube for section staining</td>
			<td>Nisshin EM Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>463</td>
			<td>Refer to this pape</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Toyo Roshi Kaisha, Ltd., Tokyo</td>
			<td>DISMIC-03CP</td>
			<td>Cellulose acetate, 0.45 &#956;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transmission electron microscope</td>
			<td>JEOL Co. Ltd., Tokyo</td>
			<td>JEM-1400</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rapid freezing using sandwich freezing device for good ultrastructural preservation of biological specimens in electron microscopy

रासायनिक निर्धारण का उपयोग कोशिकाओं और ऊतकों की अल्ट्रास्ट्रक्चर को देखने के लिए किया गया है। हालांकि, यह विधि कोशिकाओं की अल्ट्रास्ट्रक्चर को पर्याप्त रूप से संरक्षित नहीं करती है; कलाकृतियों और सेल सामग्री के निष्कर्षण आमतौर पर मनाया जाता है। तेजी से ठंड सेल संरचना के संरक्षण के लिए एक बेहतर विकल्प है। कोशिकाओं के अति सुंदर प्राकृतिक अल्ट्रास्ट्रक्चर को देखने के लिए फ्रीज-प्रतिस्थापन के बाद जीवित खमीर या बैक्टीरिया की सैंडविच फ्रीजिंग का उपयोग किया गया है। हाल ही में, ग्लूटाराल्डिहाइड-फिक्स्ड सुसंस्कृत कोशिकाओं या मानव ऊतकों के सैंडविच फ्रीजिंग का उपयोग कोशिकाओं और ऊतकों की अल्ट्रास्ट्रक्चर को प्रकट करने के लिए भी किया गया है। 
इन अध्ययनों को अब तक एक हस्तनिर्मित सैंडविच फ्रीजिंग डिवाइस के साथ किया गया है, और अन्य प्रयोगशालाओं में अध्ययन के लिए अनुप्रयोगों को सीमित किया गया है। एक नया सैंडविच फ्रीजिंग डिवाइस हाल ही में गढ़ा गया है और अब व्यावसायिक रूप से उपलब्ध है। वर्तमान पेपर से पता चलता है कि बैक्टीरिया, खमीर, सुसंस्कृत कोशिकाओं, अलग-अलग कोशिकाओं, पशु और मानव ऊतकों और वायरस सहित जैविक नमूनों की तेजी से ठंड के लिए सैंडविच फ्रीजिंग डिवाइस का उपयोग कैसे किया जाए। इसके अलावा तेजी से ठंड और फ्रीज प्रतिस्थापन, राल एम्बेडिंग, ब्लॉकों की trimming, ultrathin वर्गों के काटने, वर्गों की वसूली, धुंधला, और समर्थन फिल्मों के साथ ग्रिड के कवर के लिए प्रक्रियाओं के बाद ultrathin sectioning के लिए नमूनों की तैयारी दिखाया गया है।

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Rapid Freezing using Sandwich Freezing Device for Good Ultrastructural Preservation of Biological Specimens in Electron Microscopy

यहां हम दिखाते हैं कि बैक्टीरिया, खमीर, सुसंस्कृत कोशिकाओं, अलग-अलग कोशिकाओं, पशु और मानव ऊतकों और वायरस सहित जैविक नमूनों की तेजी से ठंड के लिए सैंडविच फ्रीजिंग डिवाइस का उपयोग कैसे किया जाए। हम यह भी दिखाते हैं कि तेजी से ठंड के बाद अल्ट्राथिन सेक्शनिंग के लिए नमूने कैसे तैयार किए जाएं।

इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी में जैविक नमूनों के अच्छे अल्ट्रास्ट्रक्चरल संरक्षण के लिए सैंडविच फ्रीजिंग डिवाइस का उपयोग करके तेजी से ठंड

Chemical fixation has been used for observing the ultrastructure of cells and tissues. However, this method does not adequately preserve the ...

कोशिकाओं की उत्कृष्ट प्राकृतिक अल्ट्रा संरचना का निरीक्षण करने के लिए, तेजी से ठंड से कोशिकाओं को ठीक करना आवश्यक है। सैंडविच फ्रीजिंग बर्फ क्रिस्टल बनाने के बिना कोशिकाओं को ठंडा करने के लिए सबसे अच्छे तरीकों में से एक है। यह प्रोटोकॉल सैंडविच फ्रीजिंग डिवाइस के उपयोग को दर्शाता है, और सैंडविच फ्रीजिंग के बाद फ्रीज-प्रतिस्थापित नमूनों के अल्ट्रा पतले वर्गों को बनाने की प्रक्रिया का भी वर्णन करता है।सैंडविच फ्रीजिंग डिवाइस या एसएफडी के तरल नाइट्रोजन कंटेनर को तरल नाइट्रोजन के साथ भरकर तरल प्रोपेन तैयार करना शुरू करें। एक ठीक नोजल का उपयोग करके प्रोपेन गैस पेश करके तरल प्रोपेन के साथ तरल प्रोपेन कंटेनर भरें। एक ठंडा धातु पट्टी का उपयोग करके प्रोपेन के ठोसीकरण में तेजी लाने.फ्लैट प्रकार और टोकरी प्रकार तांबे की डिस्क तैयार करने के लिए, उन्हें बिना किसी अक्षर के पक्ष के साथ एक ग्लास स्लाइड पर रखें और 10 पास्कल, 400 वोल्ट, 30 सेकंड के लिए एक मिलीम्पियर पर चमक निर्वहन के साथ इलाज करें ताकि एक आयन स्पॉटर उपकरण का उपयोग करके डिस्क सतह हाइड्रोफिलिक बनाया जा सके। कमरे के तापमान पर 10 सेकंड के लिए 2, 900 बार जी पर दो मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज ट्यूब और सेंट्रीफ्यूज पर सेल निलंबन को स्थानांतरित करें। supernatant निकालें और एक मोटी निलंबन प्राप्त करने के लिए गोली निलंबित.कॉपर डिस्क पर सेल सस्पेंशन की एक छोटी राशि या लगभग 0.02 माइक्रोलीटर रखें। इसे एक और तांबे की डिस्क के साथ कवर करें और चिमटी के साथ डिस्क उठाएं। पतली धातु पट्टी के साथ ठोस प्रोपेन के केंद्र में एक अच्छी तरह से बनाओ।एक SFD में चिमटी सेट करें और तेजी से उपकरण के इंजेक्शन बटन धक्का द्वारा उन्हें फ्रीज. निम्नलिखित नमूनों को फ्रीज करने के लिए उन्हें गर्म करने के लिए कमरे के तापमान के पानी में इस्तेमाल किए गए चिमटी को भिगोएं। 2.5% ग्लूटाराल्डिहाइड, पीएच 7.4 के 0.1 दाढ़ फॉस्फेट बफर में तय किए गए पशु और मानव ऊतकों का उपयोग करें।उन्हें एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत एक रेजर ब्लेड के साथ 0.1 से 0.2 मिलीमीटर मोटी वर्गों में स्लाइस करें। टोकरी प्रकार तांबे की डिस्क पर ग्लूटाराल्डिहाइड समाधान की एक छोटी सी बूंद रखें, फिर तांबे की डिस्क पर ग्लूटाराल्डिहाइड में ऊतक का एक टुकड़ा रखने के लिए चिमटी का उपयोग करें और इसे फ्लैट कॉपर डिस्क के साथ कवर करें। SFD के पिघलने प्रोपेन में ऊतकों के साथ डिस्क को तेजी से फ्रीज करें जैसा कि पहले दिखाया गया था।एक काम स्नान में तरल नाइट्रोजन में डिस्क हस्तांतरण. तरल नाइट्रोजन में ठंडा चिमटी की एक जोड़ी का उपयोग करते हुए, नमूने को उजागर करने के लिए डिस्क को एक दूसरे से अलग करें। कोशिकाओं के साथ डिस्क को एक कांच की शीशी में रखें जो एसीटोन के एक मिलीलीटर से भरा होता है जिसमें 2% ऑस्मियम टेट्रोक्साइड होता है जिसे तरल नाइट्रोजन में रखा गया है और ठोस किया गया है।डिस्क को एक गहरे फ्रीजर में स्थानांतरित करें और कोशिकाओं के फ्रीज प्रतिस्थापन के लिए उन्हें दो से चार दिनों के लिए माइनस 80 डिग्री सेल्सियस पर रखें। धीरे-धीरे नमूनों को दो घंटे के लिए माइनस 20 डिग्री सेल्सियस पर, दो घंटे चार डिग्री सेल्सियस पर और 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करके कमरे के तापमान पर लाएं। डिस्क को दो मिलीलीटर प्लास्टिक ट्यूबों में स्थानांतरित करें जो एसीटोन के एक मिलीलीटर से भरे होते हैं।एक हलचल का उपयोग कर एक डिस्पोजेबल प्लास्टिक कंटेनर में अभिकर्मकों को मिलाकर एपॉक्सी राल तैयार करें। एसीटोन में 30% राल, 60% राल और 90% राल के साथ क्रमिक रूप से एसीटोन का आदान-प्रदान करें, प्रत्येक एक घंटे के लिए कमरे के तापमान पर, फिर रात भर 37 डिग्री सेल्सियस पर 100% राल के साथ 90% राल का आदान-प्रदान करें। अंत में, सिलिकॉन एम्बेडिंग मोल्ड में 100% राल में नमूनों को एम्बेड करें और उन्हें 24 घंटे के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पर पॉलिमराइज़ करें।सिलिकॉन एम्बेडिंग मोल्ड्स से पॉलिमराइज्ड ब्लॉकों को बाहर निकालें और ब्लॉक पर नमूना संख्या लिखें। एक रेजर ब्लेड के साथ ब्लॉक से तांबे की डिस्क निकालें और एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत एक अल्ट्रासोनिक ट्रिमिंग ब्लेड और रेजर ब्लेड का उपयोग करके ब्लॉक सतह पर एम्बेडेड नमूनों को ट्रिम करें। अगला, नमूना ब्लॉक चक और माइक्रोटोम के नमूना धारक पर टेप लागू करें और सीमा पर टेप काटें।अल्ट्रा माइक्रोटोम से ब्लॉक को हटा दें, इसे स्टीरियो माइक्रोस्कोप में सेट करें, और रेजर ब्लेड का उपयोग करके इसे 0.3 मिलीमीटर से 0.2 मिलीमीटर तक ट्रिम करें। उन्हें चिपकने वाला बनाने के लिए ग्रिड पर neoprene लागू होते हैं। टेप किए गए भागों को संरेखित करके अल्ट्रा माइक्रोटोम पर ब्लॉक को वापस सेट करें।अल्ट्रा माइक्रोटोम को प्लास्टिक कवर के साथ कवर करें और 50 से 70 नैनोमीटर मोटे वर्गों को काटें। किसी लूप का उपयोग करके अनुभागों को पुनर्प्राप्त करें. Neoprene के साथ इलाज किया 300 या 400 जाल तांबा ग्रिड पर उन्हें माउंट और उन्हें सूखी.आधा सिलिकॉन ट्यूब के नाली में वर्गों के साथ ग्रिड सेट करें। तीन मिनट के लिए uranyl एसीटेट समाधान में नमूनों भिगोना. इस्तेमाल किया uranyl समाधान ले लीजिए और यह एक सिरिंज में स्टोर.एक पानी जेट के साथ एक आधा ट्यूब में नमूनों को धोलें, फिर नमूनों को तीन मिनट के लिए सीसा साइट्रेट में भिगोएं। खमीर और कवक नमूनों के लिए, ग्रिड को एक फिल्टर पेपर पर रखें, उन्हें चिमटी के साथ उठाएं, और उन्हें पानी की सतह पर प्लाज्मा पॉलिमराइज्ड नेप्थलीन फिल्म के साथ कवर करें। एक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के नमूना धारक में ग्रिड डालें, फिर नमूना धारक को इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप में डालें और 100 किलोवोल्ट पर निरीक्षण करें।इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के तहत देखे जाने पर ई.कोलाई और एस.सेरेविसिया दोनों के अल्ट्रा पतले वर्गों ने प्राकृतिक आकृति विज्ञान और स्पष्ट छवियों को दिखाया। एसएफडी का उपयोग करके तेजी से जमे हुए सुसंस्कृत कोशिकाओं के अल्ट्रा पतले वर्गों को इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के तहत देखा गया था। मानव त्वचा के अल्ट्रा पतले वर्गों की छवियां बहुत स्पष्ट थीं और प्राकृतिक आकृति विज्ञान दिखाती थीं।हेपेटाइटिस बी वायरस कोर कणों को एसएफडी के साथ तेजी से जमे हुए थे और क्रायो इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा मनाया गया था। याद रखने वाली सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि आपको तांबे की डिस्क पर बहुत कम मात्रा में कोशिकाओं को लागू करना चाहिए ताकि बर्फ क्रिस्टल गठन को ठंड पर रोका जा सके। पहले से ग्लूटाराल्डिहाइड के साथ जानवरों के ऊतकों को ठीक करके, लगभग 200 माइक्रोमीटर की गहराई पर अच्छी ठंड उच्च दबाव ठंड द्वारा प्राप्त गहराई के समान प्राप्त की जाती है।यह तकनीक एक शोधकर्ता के लिए कम लागत पर आसानी से कोशिकाओं की उत्कृष्ट प्राकृतिक अल्ट्रा संरचना का निरीक्षण करने का मार्ग प्रशस्त करती है।

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