Name: tumor transplantation for assessing the dynamics of tumor-infiltrating cd8+ t cells in mice
Uploaded: 2021-06-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tumor Transplantation for Assessing the Dynamics of Tumor-Infiltrating CD8+ T Cells in Mice at JoVE.com

تم دعم هذه الدراسة من خلال منح من الصندوق الوطني للعلوم الطبيعية للباحثين الشباب المتميزين (رقم 31825011 إلى LY) والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم 31900643 إلى QH ، رقم 31900656 إلى ZW).

تم إجراء جميع تجارب الفئران وفقا للمبادئ التوجيهية للجان رعاية واستخدام الحيوانات المؤسسية التابعة للجامعة الطبية العسكرية الثالثة. استخدم فئران C57BL/6 البالغة من العمر 6-8 أسابيع والفئران المعدلة وراثيا OT-I الساذجة التي تزن 18-22 جم. استخدم كلا من الذكور والإناث دون عشوائية أو "تعمية".
<p class="...

<ol>
	<li>Blank, C. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+'T+cell+exhaustion.">Defining 'T cell exhaustion.</a> Nature Reviews Immunology. 19 (11), 665-674 (2019).</li><li>Leko, V., Rosenberg, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+and+targeting+human+tumor+antigens+for+T+cell-based+immunotherapy+of+solid+tumors.">Identifying and targeting human tumor antigens for T cell-based immunotherapy of solid tumors.</a> Cancer Cell. 38 (4), 454-472 (2020).</li><li>McLane, L. M., Abdel-Hakeem, M. S., Wherry, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8+T+cell+exhaustion+during+chronic+viral+infection+and+cancer.">CD8 T cell exhaustion during chronic viral infection and cancer.</a> Annual Review of Immunology. 37, 457-495 (2019).</li><li>Davis, M. M., Brodin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rebooting+human+immunology.">Rebooting human immunology.</a> Annual Review of Immunology. 36, 843-864 (2018).</li><li>Sharma, P., Allison, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+future+of+immune+checkpoint+therapy.">The future of immune checkpoint therapy.</a> Science. 348 (6230), 56-61 (2015).</li><li>Littman, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Releasing+the+brakes+on+cancer+immunotherapy.">Releasing the brakes on cancer immunotherapy.</a> Cell. 373 (16), 1490-1492 (2015).</li><li>Verma, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+blockade+in+subprimed+CD8+cells+induces+dysfunctional+PD-1(+)CD38(hi)+cells+and+anti-PD-1+resistance.">PD-1 blockade in subprimed CD8 cells induces dysfunctional PD-1(+)CD38(hi) cells and anti-PD-1 resistance.</a> Nature Immunology. 20, 1231-1243 (2019).</li><li>Hashimoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8+T+cell+exhaustion+in+chronic+infection+and+cancer:+opportunities+for+interventions.">CD8 T cell exhaustion in chronic infection and cancer: opportunities for interventions.</a> Annual Review of Medicine. 69, 301-318 (2018).</li><li>Dammeijer, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+PD-1/PD-L1-checkpoint+restrains+T+cell+immunity+in+tumor-draining+lymph+nodes.">The PD-1/PD-L1-checkpoint restrains T cell immunity in tumor-draining lymph nodes.</a> Cancer Cell. 38 (5), 685-700 (2020).</li><li>Buchwald, Z. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-draining+lymph+node+is+important+for+a+robust+abscopal+effect+stimulated+by+radiotherapy.">Tumor-draining lymph node is important for a robust abscopal effect stimulated by radiotherapy.</a> Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 8 (2), 000867 (2020).</li><li>Philip, M., Schietinger, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+and+fate+choice:+T+cell+exhaustion+in+cancer+and+chronic+infections.">Heterogeneity and fate choice: T cell exhaustion in cancer and chronic infections.</a> Current Opinion in Immunology. 58, 98-103 (2019).</li><li>Miller, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subsets+of+exhausted+CD8(+)+T+cells+differentially+mediate+tumor+control+and+respond+to+checkpoint+blockade.">Subsets of exhausted CD8(+) T cells differentially mediate tumor control and respond to checkpoint blockade.</a> Nature Immunology. 20, 326-336 (2019).</li><li>Wu, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+T+cell+expansion+predicts+tumour+infiltration+and+clinical+response.">Peripheral T cell expansion predicts tumour infiltration and clinical response.</a> Nature. 579, 274-278 (2020).</li><li>Im, S. J., Konieczny, B. T., Hudson, W. H., Masopust, D., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1++stemlike+CD8+T+cells+are+resident+in+lymphoid+tissues+during+persistent+LCMV+infection.">PD-1+ stemlike CD8 T cells are resident in lymphoid tissues during persistent LCMV infection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United State of America. 117 (8), 4292-4299 (2020).</li><li>Beltra, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+relationships+of+four+exhausted+CD8(+)+T+cell+subsets+reveals+underlying+transcriptional+and+epigenetic+landscape+control+mechanisms.">Developmental relationships of four exhausted CD8(+) T cell subsets reveals underlying transcriptional and epigenetic landscape control mechanisms.</a> Immunity. 52 (5), 825-841 (2020).</li><li>Myers, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+functional+subset+of+CD8(+)+T+cells+during+chronic+exhaustion+is+defined+by+SIRPalpha+expression.">A functional subset of CD8(+) T cells during chronic exhaustion is defined by SIRPalpha expression.</a> Nature Communications. 10 (1), 794 (2019).</li><li>Jansen, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intra-tumoral+niche+maintains+and+differentiates+stem-like+CD8+T+cells.">An intra-tumoral niche maintains and differentiates stem-like CD8 T cells.</a> Nature. 576, 465-470 (2019).</li><li>Jadhav, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+signature+of+PD-1++TCF1++CD8+T+cells+that+act+as+resource+cells+during+chronic+viral+infection+and+respond+to+PD-1+blockade.">Epigenetic signature of PD-1+ TCF1+ CD8 T cells that act as resource cells during chronic viral infection and respond to PD-1 blockade.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United State of America. 116 (28), 14113-14118 (2019).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfunctional+CD8+T+cells+form+a+proliferative,+dynamically+regulated+compartment+within+human+melanoma.">Dysfunctional CD8 T cells form a proliferative, dynamically regulated compartment within human melanoma.</a> Cell. 176 (4), 775-789 (2018).</li><li>Kurtulus, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Checkpoint+blockade+immunotherapy+induces+dynamic+changes+in+PD-1(-)CD8(+)+tumor-infiltrating+T+cells.">Checkpoint blockade immunotherapy induces dynamic changes in PD-1(-)CD8(+) tumor-infiltrating T cells.</a> Immunity. 50 (1), 181-194 (2019).</li><li>Fransen, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-draining+lymph+nodes+are+pivotal+in+PD-1/PD-L1+checkpoint+therapy.">Tumor-draining lymph nodes are pivotal in PD-1/PD-L1 checkpoint therapy.</a> JCI Insight. 3 (23), 124507 (2018).</li><li>E, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8(+)CXCR5(+)+T+cells+in+tumor-draining+lymph+nodes+are+highly+activated+and+predict+better+prognosis+in+colorectal+cancer.">CD8(+)CXCR5(+) T cells in tumor-draining lymph nodes are highly activated and predict better prognosis in colorectal cancer.</a> Human Immunology. 79 (6), 446-452 (2018).</li><li>Snell, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD8(+)+T+cell+priming+in+established+chronic+viral+infection+preferentially+directs+differentiation+of+memory-like+cells+for+sustained+immunity.">CD8(+) T cell priming in established chronic viral infection preferentially directs differentiation of memory-like cells for sustained immunity.</a> Immunity. 49 (4), 678-694 (2018).</li><li>Siddiqui, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratumoral+Tcf1(+)PD-1(+)CD8(+)+T+cells+with+stem-like+properties+promote+tumor+control+in+response+to+vaccination+and+checkpoint+blockade+immunotherapy.">Intratumoral Tcf1(+)PD-1(+)CD8(+) T cells with stem-like properties promote tumor control in response to vaccination and checkpoint blockade immunotherapy.</a> Immunity. 50 (1), 195-211 (2019).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+TCF1+preserves+the+effector+function+of+exhausted+CD8+T+cells+during+chronic+viral+infection.">The transcription factor TCF1 preserves the effector function of exhausted CD8 T cells during chronic viral infection.</a> Frontiers in Immunology. 10, 169 (2019).</li><li>Krishna, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-like+CD8+T+cells+mediate+response+of+adoptive+cell+immunotherapy+against+human+cancer.">Stem-like CD8 T cells mediate response of adoptive cell immunotherapy against human cancer.</a> Science. 370 (6522), 1328-1334 (2020).</li><li>Yost, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+replacement+of+tumor-specific+T+cells+following+PD-1+blockade.">Clonal replacement of tumor-specific T cells following PD-1 blockade.</a> Nature Medicine. 25, 1251-1259 (2019).</li><li>Zitvogel, L., Pitt, J. M., Daillere, R., Smyth, M. J., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+in+oncoimmunology.">Mouse models in oncoimmunology.</a> Nature Reviews Cancer. 16 (12), 759-773 (2016).</li><li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bcl6+preserves+the+suppressive+function+of+regulatory+T+cells+during+tumorigenesis.">Bcl6 preserves the suppressive function of regulatory T cells during tumorigenesis.</a> Frontiers in Immunology. 11, 806 (2020).</li><li>Yu, D., Ye, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+portrait+of+CXCR5(+)+follicular+cytotoxic+CD8(+)+T+cells.">A portrait of CXCR5(+) follicular cytotoxic CD8(+) T cells.</a> Trends in Immunology. 39 (12), 965-979 (2018).</li><li>Bracci, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide+enhances+the+antitumor+efficacy+of+adoptively+transferred+immune+cells+through+the+induction+of+cytokine+expression,+B-cell+and+T-cell+homeostatic+proliferation,+and+specific+tumor+infiltration.">Cyclophosphamide enhances the antitumor efficacy of adoptively transferred immune cells through the induction of cytokine expression, B-cell and T-cell homeostatic proliferation, and specific tumor infiltration.</a> Clinical Cancer Research. 13 (2), 644-653 (2007).</li><li>Salem, M. L., El-Naggar, S. A., Mahmoud, H. A., Elgharabawy, R. M., Bader, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclophosphamide+eradicates+murine+immunogenic+tumor+coding+for+a+non-self-antigen+and+induces+antitumor+immunity.">Cyclophosphamide eradicates murine immunogenic tumor coding for a non-self-antigen and induces antitumor immunity.</a> International Journal of Immunopathology and Pharmacology. 32, 1-5 (2018).</li><li>Thorsson, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Immune+landscape+of+cancer.">The Immune landscape of cancer.</a> Immunity. 48 (4), 812-830 (2018).</li></ol>

تلعب المناعة بوساطة الخلايا التائية دورا حاسما في الاستجابات المناعية ضد الأورام ، حيث تلعب CTLs الدور الرائد في القضاء على الخلايا السرطانية. ومع ذلك ، لم يتم توضيح أصول CTLs الخاصة بمستضدات الورم داخل TME30. قدم استخدام بروتوكول زرع الورم هذا دليلا مهما على أن خلايا CD8 + T الخ?...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62442">Tumor Transplantation for Assessing the Dynamics of Tumor-Infiltrating CD8+&#160;T Cells in Mice</a>. The Protocol&#160;was&#160;updated.
Step 6.10 of the Protocol was updated from:
Administer penicillin every 8-12 h after the surgery for 3 days. Monitor the mouse&#39;s eating, drinking, moving, and the area operated on. Return the transplant recipient to the company of other animals only after it has fully recovered. 
NOTE: The administration of buprenorphine is suggested to prevent post-surgical pain [delete sentence]. The mouse typically recovers from the trauma of the surgery within 3 days. If the mouse is not back to normal feeding and mobility and shows any manifestations of infection, consult a veterinarian for interventions or euthanize it.
to:
Administer buprenorphine subcutaneously at a dose of 0.1 mg/kg body weight every 8 h three times after surgery to alleviate the pain. Monitor the mouse&#39;s eating, drinking, moving, and the area operated on. Return the transplant recipient to the company of other animals only after it has fully recovered. 
NOTE: The mouse typically recovers from the trauma of the surgery within 3 days. If the mouse is not back to normal feeding and mobility and shows any manifestations of infection, consult a veterinarian for interventions or euthanize it.

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/62442">Tumor Transplantation for Assessing the Dynamics of Tumor-Infiltrating CD8+&#160;T Cells in Mice</a>. The Protocol&#160;was&#160;updated.

Erratum: Tumor Transplantation for Assessing the Dynamics of Tumor-Infiltrating CD8+ T Cells in Mice

تلعب الاستجابة المناعية بوساطة الخلايا التائية CD8+ دورا محوريا في التحكم في نمو الورم. أثناء تكوين الورم ، يتم تنشيط خلايا CD8 + T الساذجة عند التعرف على المستضدات بطريقة مقيدة من الفئة I من MHC ومن ثم تتمايز إلى خلايا مستجيبة وتتسلل إلى كتلة الورم 1,2. ومع ذلك ، داخل البيئة الدقيقة للورم (TME) ، فإن التعرض للمستضدات لفترة طويلة ، وكذلك العوامل المثبطة للمناعة ، تدفع الخلايا التائية CD8 + الخاصة بالورم إلى حالة نقص الاستجابة المعروفة باسم "الإرهاق"3. تختلف الخلايا التائية المستنفدة (Tex) عن الخلايا التائية المستجيبة أو الذاكرة المتولدة في العدوى الفيروسية الحادة ، سواء من الناحية النسخية أو اللاجينية. تتميز خلايا تكس هذه بشكل رئيسي بالتعبير المستمر والمرتفع لسلسلة من المستقبلات المثبطة بالإضافة إلى الفقدان الهرمي لوظائف المستجيب. علاوة على ذلك ، فإن ضعف القدرة التكاثرية للخلايا التائية CD8 + المنهكة يؤدي إلى انخفاض أعداد الخلايا التائية الخاصة بالورم ، بحيث لا يمكن للخلايا التائية CD8 + المتبقية داخل TME بالكاد توفير مناعة وقائية كافية ضد تطور الورم3. وبالتالي ، فإن الحفاظ على أو تعزيز خلايا CD8 + T الخاصة بالمستضد داخل الفخذ أمر لا غنى عنه لقمع الورم.
علاوة على ذلك ، يعتقد أن علاج حصار نقاط التفتيش المناعية (ICB) يعيد تنشيط Tex في الأورام عن طريق زيادة تسلل الخلايا التائية وبالتالي ، أعداد الخلايا التائية وتجديد وظائف الخلايا التائية لتعزيز قمع الورم. أدى التطبيق الواسع النطاق لعلاج ICB إلى تغيير مشهد علاج السرطان ، مع وجود مجموعة فرعية كبيرة من المرضى الذين يعانون من استجابات دائمة4،5،6. ومع ذلك ، فإن غالبية المرضى وأنواع السرطان لا يستجيبون أو يستجيبون مؤقتا فقط ل ICB. تم افتراض عدم كفاية تسلل الخلايا التائية في TME لتكون واحدة من الآليات الأساسية التي تمثل مقاومة ICB 7,8.
أظهرت العديد من الدراسات عدم تجانس الخلايا التائية CD8+ المتسللة للورم (TILs) في كل من المرضى ونماذج الفئران9،10،11،12. وقد تم التأكيد على أن مجموعة فرعية من الخلايا التائية CD8 + التي تعبر عن عامل الخلايا التائية -1 (TCF1) في كتلة الورم تظهر خصائص تشبه الخلايا الجذعية ، والتي يمكن أن تؤدي إلى مزيد من الخلايا التائية المنهكة نهائيا وهي مسؤولة عن انفجار الانتشار بعد علاج ICB 12,13,14,15,16,17,18,19,20 ، 21,22. ومع ذلك ، فقد ثبت أن نسبة صغيرة فقط من الخلايا التائية TCF1 + CD8 + الخاصة بالمستضد موجودة في TME وتولد مجموعة موسعة من النسل المتمايز استجابة ل ICB 23,24,25,26. ما إذا كان الحجم المحدود لهذه المجموعة كافيا لضمان استمرار الخلايا الليمفاوية التائية السامة للخلايا (CTLs) للسيطرة على تطور الورم لا يزال غير معروف ، وما إذا كان هناك تجديد من الأنسجة الطرفية يتطلب المزيد من التحقيق. علاوة على ذلك ، تشير الأبحاث الحديثة إلى عدم كفاية قدرة التنشيط للخلايا التائية الخاصة بالورم الموجودة مسبقا وظهور أنماط استنساخ جديدة لم تكن موجودة من قبل بعد علاج بروتين موت الخلايا 1 المضاد للبرمجة. وهذا يشير إلى أن استجابة الخلايا التائية لحصار نقاط التفتيش قد تكون بسبب التدفق الجديد لذخيرة متميزة من استنساخ الخلايا التائية27. جنبا إلى جنب مع وجود جزء الخلايا التائية غير التفاعلية للخلايا غير التفاعلية في TME ، دفعت هذه النتائج إلى إنشاء نموذج allograft الورم لدراسة دور الخلايا التائية CD8 + Tالمشتقة من المحيط 11.
حتى الآن ، تم استخدام عدة أنواع من زرع الورم ، وكذلك نقل الخلايا المناعية بالتبني ، على نطاق واسع في مجال علم المناعة للورم28. يمكن وصف TILs ، وخلايا الدم الطرفية أحادية النواة ، والخلايا المناعية التفاعلية للورم التي نشأت من أنسجة أخرى بشكل جيد باستخدام هذه الطرق. ومع ذلك ، عند دراسة التفاعلات بين المناعة المضادة للورم الجهازية والمحلية ، تبدو هذه النماذج غير كافية لفحص التفاعلات بين الخلايا المناعية المشتقة من المحيط و TME. هنا ، تم زرع أنسجة الورم من المتبرعين في الفئران المتلقية المطابقة للورم لتتبع تدفق الخلايا المناعية المشتقة من المتلقي بدقة ومراقبة الخلايا المشتقة من المتبرع في TME بشكل متزامن.
في هذه الدراسة ، تم إنشاء نموذج سينجيني للفئران من سرطان الجلد مع خط خلايا الورم الميلانيني B16F10-OVA ، والذي يعبر بثبات عن البويضات المستضدية الجديدة البديلة. الفئران OT-I المعدلة وراثيا TCR ، حيث تتعرف أكثر من 90٪ من خلايا CD8 + T على وجه التحديد على الببتيد OVA المشتق من OVA OVA257-264 (SIINFEKL) المرتبط بجزيء MHC من الفئة I H2-K b ، تمكن من دراسة استجابات الخلايا التائية الخاصة بالمستضدات التي تم تطويرها في نموذج الورم B16F10-OVA. ومن خلال الجمع بين هذا النموذج وزرع الورم، تمت مقارنة الاستجابات المناعية للخلايا التائية CD8+ الخاصة بالمستضدات المتأصلة في الورم والخلايا الطرفية للكشف عن انتقال ديناميكي بين هاتين المجموعتين. بشكل جماعي ، قدم هذا التصميم التجريبي نهجا آخر للتحقيق بدقة في الاستجابات المناعية للخلايا التائية CD8 + في TME ، مما يلقي ضوءا جديدا على ديناميكيات الاستجابات المناعية للخلايا التائية الخاصة بالورم في TME.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#956;m filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGPR33RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL tuberculin syringe</td>
			<td>KDL</td>
			<td>BB000925</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL centrifuge tube</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG2211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 U insulin syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>320310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tube</td>
			<td>BEAVER</td>
			<td>43008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,2,2-Tribromoethanol (Avertin)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T48402-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-Methyl-2-butanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>240486-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70 &#956;m nylon cell strainer</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-mouse CD45.1</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>110714</td>
			<td>Clone:A20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B16F10-OVA cell line</td>
			<td>bluefbio</td>
			<td>BFN607200447</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA-V (bovine serum albumin)</td>
			<td>Bioss</td>
			<td>bs-0292P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV421 Mouse Anti-Mouse CD45.2</td>
			<td>BD Horizon</td>
			<td>562895</td>
			<td>Clone:104</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cell culture dish</td>
			<td>BEAVER</td>
			<td>43701/43702/43703</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5810R-A462/5424R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cyclophosphamide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0768-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11995500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EasySep Mouse CD8+ T Cell Isolation Kit</td>
			<td>Stemcell Technologies</td>
			<td>19853</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>EDS-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS tubes</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10270-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>FACSCanto II</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemocytometer</td>
			<td>PorLab Scientific</td>
			<td>HM330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>isoflurane</td>
			<td>RWD life science</td>
			<td>R510-22-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KHCO3</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501195-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Fixable Near-IR Dead Cell Stain Kit, for 633 or 635 nm excitation</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>L10199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle carrier</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>F31034-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NH4Cl</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A501569-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>P0099-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-mouse TCR V&#945;2</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>127808</td>
			<td>Clone:B20.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep Glutamine (100x)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10378-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP/Cy5.5 anti-mouse CD8a</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>100734</td>
			<td>Clone:53-6.7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R8758-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical forceps</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>F12005-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>surgical scissors</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>S12003-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>suture thread</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>F34004-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trypsin-EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T4049-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tumor transplantation for assessing the dynamics of tumor-infiltrating cd8+ t cells in mice

تلعب المناعة بوساطة الخلايا التائية دورا حاسما في الاستجابات المناعية ضد الأورام، حيث تلعب الخلايا الليمفاوية التائية السامة للخلايا (CTLs) الدور الرائد في القضاء على الخلايا السرطانية. ومع ذلك ، فإن أصول وتجديد خلايا CD8 + T الخاصة بمستضد الورم داخل البيئة الدقيقة للورم (TME) لا تزال غامضة. يستخدم هذا البروتوكول خط خلايا الورم الميلانيني B16F10-OVA ، الذي يعبر بثبات عن المستضد الجديد البديل ، ovalbumin (OVA) ، وفئران OT-I المعدلة وراثيا TCR ، حيث يتعرف أكثر من 90٪ من خلايا CD8 + T على وجه التحديد على الببتيد OVA المشتق من OVAOVA 257-264 (SIINFEKL) المرتبط بجزيء مركب التوافق النسيجي الرئيسي (MHC) من الفئة الأولى H2-K b. تمكن هذه الميزات من دراسة استجابات الخلايا التائية الخاصة بالمستضدات أثناء تكوين الأورام.
من خلال الجمع بين هذا النموذج وجراحة زرع الورم، تم زرع أنسجة الورم من المتبرعين في الفئران المتلقية المتجانسة المتطابقة مع الورم لتتبع تدفق الخلايا المناعية المشتقة من المتلقي بدقة إلى أنسجة المتبرعين المزروعة، مما يسمح بتحليل الاستجابات المناعية ل CD8+ الخاص بالمستضدات المتأصلة في الورم والمستضد المحيطي المنشأ. الخلايا التائية. ووجد أن هناك انتقالا ديناميكيا يحدث بين هاتين المجموعتين. بشكل جماعي ، قدم هذا التصميم التجريبي نهجا آخر للتحقيق بدقة في الاستجابات المناعية للخلايا التائية CD8 + في TME ، مما سيلقي ضوءا جديدا على مناعة الورم.

ويبين الشكل 1 مخطط هذا البروتوكول. بعد ثمانية أيام من تلقيح الورم، تم حقن خلايا CD45.1+ وCD45.1+CD45.2+ OT-I في الفئران C57BL/6 الحاملة للورم B16F10-OVA. تم تشريح الورم جراحيا من الفئران المزروعة بالخلايا CD45.1+ OT-I (المتبرع) في اليوم 8 بعد النقل وزرعها في الفئران المطابقة ل?...

Watch this Scientific Journal Video about Tumor Transplantation for Assessing the Dynamics of Tumor-Infiltrating CD8+ T Cells in Mice at JoVE.com

Tumor Transplantation for Assessing the Dynamics of Tumor-Infiltrating CD8+ T Cells in Mice

هنا ، نقدم بروتوكول زرع الورم لتوصيف الخلايا الليمفاوية المتأصلة في الورم والأطراف المشتقة من الورم في نموذج ورم الفئران. يكشف التتبع المحدد لتدفق الخلايا المناعية المشتقة من المتلقي باستخدام قياس التدفق الخلوي عن ديناميكيات النمط الظاهري والتغيرات الوظيفية لهذه الخلايا أثناء الاستجابات المناعية المضادة للورم.

زرع الورم لتقييم ديناميكيات الخلايا التائية CD8+ المتسللة للورم في الفئران

T cell-mediated immunity plays a crucial role in immune responses against tumors, with cytotoxic T lymphocytes (CTLs) playing the leading role in ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في علم مناعة الورم، بما في ذلك ما إذا كان هناك تجديد للخلايا المناعية الخاصة بالورم من الأنسجة الطرفية، والتحولات بين الخلايا المناعية المخترقة حديثا والموجودة بالفعل داخل البيئة الدقيقة للورم، واستجاباتها للعلاج المناعي. هذه تقنية مريحة وسهلة المتابعة لتمييز الخلايا المشتقة من المحيط عن الخلايا المناعية المخترقة للورم وتتبع التغيرات الديناميكية والظاهرية والوظيفية لهذه الخلايا في الفحوصات الطولية. ابدأ بسحب 100 ميكرولتر من تعليق الخلايا B16F10-OVA المحضر إلى حقنة درنية سعة 1 مل.اضغط على البرميل لنقل أي فقاعات إلى الأعلى وادفع المكبس برفق لإزالة فقاعات الهواء. كبح جماح الماوس لفضح بطنه. اضغط على الساق الخلفية اليسرى بالإصبع الصغير لشد جلد المنطقة الإربية اليسرى.قم بإزالة شعر الفأر من أسفل البطن الأيسر باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية. استخدم القطن المنقوع في 75٪ من الإيثانول لتنظيف الربع الخلفي من البطن الأيسر. أمسك المحقنة بزاوية ضحلة تتراوح بين 0 إلى 15 درجة ، ومع توجيه شطبة الإبرة لأعلى ، أدخلها على جانب الفخذ العلوي الأيسر.تقدم الإبرة 0.5 إلى 1 سم من خلال الأنسجة تحت الجلد إلى المنطقة الأربية. اسحب المكبس للخلف قبل الحقن. إذا كان هناك ضغط سلبي ، فقم بخفض المكبس تماما ولاحظ تكوين جيب سائل صغير ، أو بلعة ، في تحت الجلد.قم بإزالة الإبرة بعد إجراء الحقن. حرر الماوس وضعه مرة أخرى في القفص. في اليوم السادس إلى الثامن بعد زرع B16F10-OVA ، قم بقياس حجم الورم بمقياس أكثر دقة.اختر الفئران التي يبلغ قطرها حوالي ثلاثة ملليمترات أو ورم بحجم حبة المونغ ، وقسمها بالتساوي وبشكل عشوائي إلى مجموعتين. اسحب 200 ميكرولتر من تعليق الخلايا OT-1 إلى حقنة أنسولين 100 وحدة قياس 29 وإزالة الفقاعات. ضع الماوس بشكل منفصل في قفص ، مع مصباح الأشعة تحت الحمراء فوق القفص لمدة 5 إلى 10 دقائق لتوسيع الوريد الذيل.شل حركة الماوس باستخدام جهاز تقييد بحجم مناسب. امسك الذيل لتصويبه ورش 75٪ من الإيثانول لجعل الوريد مرئيا. امسك المحقنة موازية للوريد وأدخلها في الوريد بزاوية من 0 إلى 15 درجة.اسحب المكبس قليلا ، وإذا دخل الدم إلى البرميل ، فقم بحقن التعليق ببطء وثبات بمعدل لا يزيد عن ملليلتر واحد في الدقيقة. بعد اكتمال الحقن ، قم بإزالة المحقنة واضغط على منطقة الحقن بلطف لمدة ثلاث إلى خمس ثوان لوقف النزيف. أعد الماوس إلى القفص وراقبه عن كثب لبضع دقائق بحثا عن ردود الفعل السلبية.إذا كان لديه حركة طبيعية وإفرازات أنفية ، فضعه مرة أخرى بصحبة الفئران الأخرى. بعد 8 إلى 10 أيام من النقل بالتبني، اختر الفئران المانحة التي تحمل كتلة ورم مماثلة يبلغ قطرها حوالي خمسة ملليمترات لجراحة الزرع. ضع طبقا بحجم 100 ملم × 20 ملليلتر في خزانة السلامة البيولوجية وأضف 10 ملليلتر من PBS المعقم والبارد المثلج.بعد القتل الرحيم للماوس ، اغمره في 75٪ من الإيثانول لمدة ثلاث إلى خمس دقائق. ضع الماوس في وضع ضعيف على لوحة تشريح مغطاة بورق ماصة نظيف في خزانة السلامة الأحيائية. كبح جماح أطراف الماوس باستخدام إبر التشريح.قطع الجلد على طول خط الوسط من فوق فتحة مجرى البول إلى الخناق مع مقص. قم بتمديد الجلد نحو الجانب الأيسر من جسم الفأر باستخدام ملاقط وكبح جماح الجلد باستخدام إبر التشريح. استئصال الورم ، والحفاظ على كبسولة سليمة قدر الإمكان.قم بإزالة النسيج الضام بعناية ولطف بالقرب من الورم باستخدام مقص جراحي ، ثم ضع أنسجة الورم في الطبق الذي يحتوي على PBS معقم وبارد للزرع اللاحق. استخدم مرهم بيطري على العينين لمنعهما من التجفيف. احلق الجناح الأيسر للماوس باستخدام ماكينة حلاقة كهربائية ، ثم ضع كريم مزيل للشعر لإزالة الشعر المتبقي.ضع الماوس داخل خزانة السلامة الأحيائية في وضع عرضة على لوحة تشريح مغطاة بورق ماصة نظيف ، مع المحور الرأسي للماوس مواز ورأسه إلى الجانب الأيمن من المجرب. فرك جلد المنطقة المحلوقة بالقطن المنقوع في البوفيدون اليود. ارفع الجلد عند نقطة الوسط بين مفاصل ورك الفأر باستخدام ملاقط جراحية.استخدم المقص لإجراء استئصال رأسي بطول خمسة ملليمترات وتمديد القطع بشكل سطحي على طول خط الوسط الظهري إلى حوالي 10 إلى 15 ملم. قم بإجراء تشريح حاد عن طريق إدخال الأطراف المغلقة للمقص في الشق ثم فتحه لفصل الصفاق من الجناح الأيسر عن الجلد والأنسجة الرخوة. قم بإجراء تشريح حاد عدة مرات لإنشاء جيب جلدي على الجناح الأيسر.قم بإيداع كتلة الورم المغلفة والسليمة والمشتقة من المتبرع في الجيب. أغلق الشق عن طريق خياطة متقطعة ، باستخدام غرزتين أو ثلاث غرز لكل شق. تطهير الجلد حول القطع مع القطن المنقوع في البوفيدون اليود.ضع الماوس في الموضع الجانبي في قفص نظيف ودافئ. راقبه باستمرار حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء الصارم. إدارة البوبرينورفين تحت الجلد بجرعة 0.1 ملليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم كل ثماني ساعات ، ليصبح المجموع ثلاث جرعات.إعادة متلقي الزرع إلى شركة الحيوانات الأخرى فقط بعد أن يتعافى تماما. باستخدام قياس التدفق الخلوي ، تم تحديد مجموعتين من الخلايا التائية الخاصة بمستضدات الورم السلبية CD44 و CD8 الإيجابية بسهولة في البيئة الدقيقة للورم ، بما في ذلك CD45.1 إيجابي من المتبرع المشتق و CD45.1 سلبي و CD45.2 إيجابي المتلقي المشتق من الخلايا التائية CD8 الإيجابية. في اليوم الثاني بعد الزرع ، كان هناك ما يقرب من 83٪ من الخلايا التائية الإيجابية CD8 المشتقة من المستضدات الخاصة بالمتبرع داخل الورم المزروع ، وهي أكثر شيوعا من نظيراتها المشتقة من المتلقي.ارتفعت نسبة خلايا OT-1 المشتقة من المتلقي في المرحلة المتأخرة من تكوين الورم ، متجاوزة خلايا OT-1 المتأصلة في الورم المشتقة من المتبرع. أهم شيء يجب تذكره هو إجراء تشريح لطيف أثناء زرع الورم تحت الجلد لتجنب الإصابات على الأنسجة المحيطة ، وخاصة في العقدة الليمفاوية الحبيبية.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Tumor Transplantation for Assessing the Dynamics of Tumor-Infiltrating CD8+ T Cells in Mice

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

ال<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; تخيلي ورم القرص نموذج: التصور والكمي للالتعبير الجيني وغزو الورم عن طريق الفسيفساء الوراثية

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

السابقين فيفو تصوير لمفاوية T CD8 المقيم في ورم الرئة البشرية شرائح باستخدام الفحص المجهري [كنفوكل]

CD8 T cell are key players in the fight against cancer. In order for CD8 T cells to kill tumor cells they need to enter into the tumor, migrate within the ...

Conditional Knockdown of Gene Expression in Cancer Cell Lines to Study the Recruitment of Monocytes/Macrophages to the Tumor Microenvironment

الشرطي ضربة قاضية للتعبير الجيني في خطوط خلايا السرطان لدراسة توظيف حيدات/الضامة إلى ورم المكروية

siRNA and shRNA-mediated knock down (KD) methods of regulating gene expression are invaluable tools for understanding gene and protein function. However, ...

Multiplexed Immunofluorescence Analysis and Quantification of Intratumoral PD-1+ Tim-3+ CD8+ T Cells

Multiplexed Immunofluorescence Analysis and Quantification of Intratumoral PD-1+ Tim-3+ CD8+ T Cells

متعدد الفلورة التحليل والقياس الكمي ل Intratumoral PD-1+ CD8 تيم-3+ + تي الخلايا

Immune cells are important components of the tumor microenvironment and influence tumor growth and evolution at all stages of carcinogenesis. Notably, it ...

Digital Polymerase Chain Reaction Assay for the Genetic Variation in a Sporadic Familial Adenomatous Polyposis Patient Using the Chip-in-a-tube Format

بوليميريز الرقمية سلسلة من ردود الفعل المقايسة للتنوع الوراثي في مريض متفرقة مرجلات غدومي استخدام تنسيق رقاقة في أنبوب

The quantitative analysis of human genetic variation is crucial for understanding the molecular characteristics of serious medical conditions, such as ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

الكشف عن الوقت الحقيقي في المختبر ورم الخلايا المبرمج الناجمة عن CD8+ تي الخلايا لدراسة وظائف المناعة القمعية من التسلل إلى ورم الخلايا النقوي

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

The Clinical Application of Tumor Treating Fields Therapy in Glioblastoma

التطبيق السريري للورم علاج العلاج بحقول في جليوبلاستوما

Glioblastoma is the most common and lethal form of brain cancer, with a median survival of 15 months after diagnosis and a 5 year survival rate of only 5% ...

In Vitro Tumor Cell Rechallenge For Predictive Evaluation of Chimeric Antigen Receptor T Cell Antitumor Function

في ريتشالينجي خلية الورم المختبر للتقييم التنبؤي من مستضد تشيميريك مستقبلات خلية تي انتيتومور الدالة

The field of chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy is rapidly advancing with improvements in CAR design, gene-engineering approaches and ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cells for the Generation of Tumor Antigen-specific T Cells

باستخدام الإنسان المستحثة الخلايا الجذعية مستحث لتوليد خلايا T الأورام مستضد محدده

The generation and expansion of functional T cells in vitro can lead to a broad range of clinical applications. One such use is for the treatment of ...

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

Generation of Orthotopic Pancreatic Tumors and Ex vivo Characterization of Tumor-Infiltrating T Cell Cytotoxicity

توليد أورام البنكرياس التقويمية وتوصيف الجسم السابق للخلايا التي تتسلل إلى الخلايا T

In vivo models of pancreatic cancer provide invaluable tools for studying disease dynamics, immune infiltration and new therapeutic strategies. The ...