Name: screening peptides that activate mrgprx2 using engineered hek cells
Uploaded: 2021-11-06T13:00:00
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SR 和 LDU 希望感谢艾伯塔省创新战略研究项目、NRC 和 NSERC-发现项目赠款。

1. 肽库的设计与开发
<ol><li>要根据已知的配体即 PAMP-1213来识别桅杆细胞 MRGPRX2 受体的配体，请按照以下步骤操作。<ol>
<li>通过连续通过固相肽合成（SPPS）截断配体的N端氨基酸残留物，生成N截断肽库。</li>
		<li>通过截断已知配体的 C 端氨基酸残留物，由 SPPS 连续截断 C 截断肽库。"</li>
		<li>根据 1.1.1 和 1.1.2 的结果，分别通过截断 N 和 C 端所需的残留物，使用 SPPS ?...

<ol>
	<li>McNeil, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mast-cell-specific+receptor+crucial+for+pseudo-allergic+drug+reactions.">Identification of a mast-cell-specific receptor crucial for pseudo-allergic drug reactions.</a> Nature. 519 (7542), 237-241 (2015).</li><li>Subramanian, H., Gupta, K., Ali, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+Mas-related+G+protein-coupled+receptor+X2+on+mast+cell-mediated+host+defense,+pseudoallergic+drug+reactions,+and+chronic+inflammatory+diseases.">Roles of Mas-related G protein-coupled receptor X2 on mast cell-mediated host defense, pseudoallergic drug reactions, and chronic inflammatory diseases.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 138 (3), 700-710 (2016).</li><li>R&#229;dinger, M., Jensen, B. M., Kuehn, H. S., Kirshenbaum, A., Gilfillan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation,+isolation,+and+maintenance+of+human+mast+cells+and+mast+cell+lines+derived+from+peripheral+blood+or+cord+blood.">Generation, isolation, and maintenance of human mast cells and mast cell lines derived from peripheral blood or cord blood.</a> Current protocols in immunology. , (2010).</li><li>Thomas, P., Smart, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HEK293+cell+line:+A+vehicle+for+the+expression+of+recombinant+proteins.">HEK293 cell line: A vehicle for the expression of recombinant proteins.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 51 (3), 187-200 (2005).</li><li>Subedi, G. P., Johnson, R. W., Moniz, H. A., Moremen, K. W., Barb, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+yield+expression+of+recombinant+human+proteins+with+the+transient+transfection+of+HEK293+cells+in+suspension.">High yield expression of recombinant human proteins with the transient transfection of HEK293 cells in suspension.</a> Journal of Visualized Experiments. (106), e53568 (2015).</li><li>Occhiuto, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Store-operated+calcium+entry+via+STIM1+contributes+to+MRGPRX2+induced+mast+cell+functions.">Store-operated calcium entry via STIM1 contributes to MRGPRX2 induced mast cell functions.</a> Frontiers in Immunology. 10, 3143 (2020).</li><li>Baba, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+function+for+the+calcium+sensor+STIM1+in+mast+cell+activation+and+anaphylactic+responses.">Essential function for the calcium sensor STIM1 in mast cell activation and anaphylactic responses.</a> Nature Immunology. 9 (1), 81-88 (2008).</li><li>Hoth, M., Penner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+intracellular+calcium+stores+activates+a+calcium+current+in+mast+cells.">Depletion of intracellular calcium stores activates a calcium current in mast cells.</a> Nature. 355 (6358), 353-356 (1992).</li><li>Assinger, A., Volf, I., Schmid, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel,+rapid+method+to+quantify+intraplatelet+calcium+dynamics+by+ratiometric+flow+cytometry.">A novel, rapid method to quantify intraplatelet calcium dynamics by ratiometric flow cytometry.</a> PLoS One. 10 (4), 0122527 (2015).</li><li>Roe, M. W., Lemasters, J. J., Herman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+Fura-2+for+measurements+of+cytosolic+free+calcium.">Assessment of Fura-2 for measurements of cytosolic free calcium.</a> Cell Calcium. 11 (2-3), 63-73 (1990).</li><li>Malgaroli, A., Milani, D., Meldolesi, J., Pozzan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fura-2+measurement+of+cytosolic+free+Ca2++in+monolayers+and+suspensions+of+various+types+of+animal+cells.">Fura-2 measurement of cytosolic free Ca2+ in monolayers and suspensions of various types of animal cells.</a> The Journal of Cell Biology. 105 (5), 2145-2155 (1987).</li><li>Grynkiewicz, G., Poenie, M., Tsienb, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Generation+of+Ca2+++Indicators+with+Greatly+Improved+Fluorescence+Properties.">A New Generation of Ca2 + Indicators with Greatly Improved Fluorescence Properties.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (6), 3440-3450 (1985).</li><li>Lu, L., Parmar, M. B., Kulka, M., Kwan, P., Unsworth, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-assembling+peptide+nanoscaffold+that+activates+human+mast+cells.">Self-assembling peptide nanoscaffold that activates human mast cells.</a> ACS Applied Materials and Interfaces. 10 (7), 6107-6117 (2018).</li><li>Lansu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+silico+design+of+novel+probes+for+the+atypical+opioid+receptor+MRGPRX2.">In silico design of novel probes for the atypical opioid receptor MRGPRX2.</a> Nature Chemical Biology. 13 (5), 529-536 (2017).</li><li>Navin&#233;s-Ferrer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MRGPRX2-mediated+mast+cell+response+to+drugs+used+in+perioperative+procedures+and+anaesthesia.">MRGPRX2-mediated mast cell response to drugs used in perioperative procedures and anaesthesia.</a> Scientific Reports. 8 (1), 11628 (2018).</li><li>Johnson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+imaging+of+store-operated+calcium+(Ca+2+)+entry+(SOCE)+in+HEK293+cells+using+Fura-2.">Calcium imaging of store-operated calcium (Ca 2+) entry (SOCE) in HEK293 cells using Fura-2.</a> Calcium Signalling. , 163-172 (2019).</li><li>Tinning, P. W., Franssen, A. J. P. M., Hridi, S. U., Bushell, T. J., McConnell, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+340/380+nm+light-emitting+diode+illuminator+for+Fura-2+AM+ratiometric+Ca2++imaging+of+live+cells+with+better+than+5+nM+precision.">A 340/380 nm light-emitting diode illuminator for Fura-2 AM ratiometric Ca2+ imaging of live cells with better than 5 nM precision.</a> Journal of Microscopy. 269 (3), 212-220 (2018).</li></ol>

钙信号是乳腺细胞脱粒的核心，已广泛应用于受体-配体相互作用、配体鉴定和药物发现等研究。MRGPRX2是最近发现的乳腺细胞受体，被发现在许多炎症性疾病，如痒，哮喘，和特异性皮炎，除其他2。此外，一些经批准的药物已被证明通过MRGPRX2受体15引起炎症反应。因此，研究配体-受体相互作用、识别新的配体并了解激活机制势在必行。这项研...

乳腺细胞是免疫系统不可分割的一部分，在先天和自适应免疫反应中起着至关重要的作用。乳腺细胞主要通过抗原与免疫球蛋白E（IgE）-FcéRI受体复合物结合，或者通过最近发现的与男性相关的G-蛋白受体X2（MRGPRX2）1激活。MRGPRX2激活与多种免疫和炎症性疾病有关，因此，了解受体与其配体2的结合机制非常重要。为此，开发并筛选了一个小型肽分子库，对在 HEK 细胞中过度表达的 MRGPRX2 受体进行筛选。在这项研究中，肽库是使用简单多才多艺的阿兰宁扫描和氨基酸截断技术构建的。阿兰宁扫描涉及用阿兰宁残留物取代特定的氨基酸。Alanine 是小而中性的，剥离了被替换残留物赋予的特定特性的肽，并连续突出了氨基酸在受体相互作用中各自的物理化学特性的重要性。相反，在氨基酸截断中，肽序列的设计使其缺少来自N终端、C终端或两者兼有的一个或多个氨基酸残留物。这组肽用于识别对 MRGPRX2 结合至关重要的氨基酸序列。
人类桅杆细胞系（LAD-2）的经验表明，这些细胞很难 在体外培养和维持：两周的加倍时间，昂贵的中等补充剂，以及通过3期间需要的直接注意。这些属性使细胞不适合大规模筛选潜在的配体。在这里，稳定地转染的 HEK 细胞表示 MRGPRX2 受体 （HEK-X2） 用于筛选肽库1。HEK-293细胞由于其高转化效率、较快的翻倍率以及需要在实验室4中培养非昂贵的中等补充剂，被广泛用于表面受体的异质表达。转染 HEK-293 细胞线的方案已经得到证明，并且已经建立了5。HEK-293细胞稳定地表达MRGPRX2受体（通道13-19）被激活与肽通过N截断，C-截断，N+C截断，和丙氨酸扫描1产生。野生型 HEK 细胞 （HEK-WT） （通道 16-21） 用作控制。激活后监测细胞内钙释放，以研究基于MGPRX2的活化。
MRGPRX2 的细胞激活后，细胞溶胶钙动员。乳腺细胞中这种受调节的细胞内钙释放由存储操作的钙进入 （SOCE） 调节，由频闪相互作用分子 1 （STIM1） 协调：并且是免疫反应级联6，7的核心。各种方法已用于检测细胞内钙浓度，包括贴片夹和荧光染料8。在现有的所有技术中，氟钙染料与各种检测技术结合，正在被广泛使用。获得兴趣的两种氟染料是：单波长染料（如 Fluo-4）和双波长比例染料（如印度 -1 和 Fura-2）。双波长比度染料带来单波长染料的优势在于，双波长比度染料纠正了染料加载、照片漂白和聚焦10、11等实验错误。
Fura-2 乙酰酯（Fura-2 AM）是一种细胞渗透的绿色荧光染料，其激发在钙结合后会转移到较低的波长。实验中，Fura-2 的兴奋度为 340 和 380 nm，而排放记录为 510 nm。钙结合后，340纳米的荧光强度增加，而380纳米的荧光强度降低，如图 1所示。数据表示为 340 nm （F340） 激发后的荧光强度与 380 nm （F380） 即 F340/F380 激发后的荧光强度比率。F340/F380的比例是成正比的细胞内钙，其价值可以通过格林凯维奇方程12计算。由于荧光信号来自两波长（340 nm 和 380 nm）的染料激发，荧光信号的比例对染料加载、染料泄漏、光出血和细胞密度等实验因素进行了修正。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>5470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>793939</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 96 Well</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS3603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black Polystyrene Microplate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>CLS3603</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>11995065</td>
			<td>High Glucose</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>D12345</td>
			<td>Sterile, biological grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>12483-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexstation 3</td>
			<td>Molecular devices</td>
			<td>FV06060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fura-2 AM</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>F1221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D8270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>15630-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I9657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L Glutamine</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>25030-081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep</td>
			<td>Thermo Fischer</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptides</td>
			<td>RS Syntehsis</td>
			<td>Custom</td>
			<td>&#8805;95% pure; 
			N terminal - acetyl group 
			C terminal - amide group</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>12636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TritonX-100</td>
			<td>DOW Chemical</td>
			<td>166704</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

screening peptides that activate mrgprx2 using engineered hek cells

识别特定于具有治疗意义的细胞受体的配体对于许多应用至关重要，包括设计和开发新的治疗方法。与Mas相关的G蛋白受体-X2（MRGPRX2）是调节乳腺细胞活化的重要受体，因此指导一般免疫反应。已确定MGPRX2的众多配体，包括PAMP、防御素、LL-37和其他蛋白质片段（即降解白蛋白）等内源性肽。进一步鉴定MGPRX2特定配体需要筛选大量的肽（即肽库）;然而，桅杆细胞很难和昂贵的体 外 维持，因此，不经济地用于筛选大量的分子。本文演示了使用 MRGPRX2 表达 HEK 细胞设计、开发和筛选小肽分子库的方法。这种细胞系相对容易和便宜的维护，可用于 体外 高通量分析。一种对钙敏感的Fura-2荧光染料，用于监测活化后细胞内钙通量。Fura-2 的荧光强度在 510 nm 时与激发波长 340 和 380 nm 的比例用于计算钙浓度。用于验证该系统的肽库基于内源性前列腺素 N-终端 12 （PAMP-12） 秘密，已知该秘密库将 MRGPRX2 与高特异性和亲和力结合。随后的肽通过氨基酸截断和应用于PAMP-12的阿兰宁扫描技术产生。此处描述的方法简单且价格低廉，但坚固耐用，用于筛选大量化合物库，以识别在受体激活中发挥重要作用的结合域和其他重要参数。

表1包含通过末期氨基酸截断和丙氨酸扫描产生的肽序列。如表1所示，肽序列RKKWNKWALSR缺乏N终端苯丙氨酸（F）的母体PAMP-12，因此是N截断库中具有代表性的肽。同样，在FRKKWNKWALS中，PAMP-12 C终端血清已被移除，代表从PAMP-12衍生的C-截断肽库。在N+C截断肽库中，从N和C终端中去除氨基酸。从N终端截断4个氨基酸，从PAMP-12的C终端截断1个残留物，在WNKWALS中产生。从丙氨酸扫描中...

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Screening Peptides that Activate MRGPRX2 using Engineered HEK Cells

介绍了通过 MRGPRX2 受体生成短肽库以激活桅杆细胞的技术。相关技术简单、便宜，可扩展到其他细胞受体。

使用工程 HEK 细胞筛选激活 MRGPRX2 的肽

Identifying ligands specific to therapeutically significant cell receptors is crucial for many applications, including the design and development of new ...

今天，我们将演示一种筛选肽库的方法，与最近发现的主受体（即与Mas相关的G蛋白受体X2）（也称为MRGPRX2受体）相对。乳腺细胞是免疫系统不可分割的一部分，在先天和自适应免疫反应中起着至关重要的作用。桅杆细胞由抗原结合的Fc epsilon R1受体或最近发现的X2受体激活。表面约束X2受体的激活，与多种免疫和发炎疾病有关，因此，了解该受体与其配体的结合机制非常重要。为此，我们开发了一个小型肽分子库，并筛选出它们对X2受体过度表达的异性氧化物。在这项研究中，使用简单多才多艺的阿兰宁扫描和氨基酸截断技术构建了肽库。Heck293说，当用多肽激活时表达X2受体，而宽型六氧化硫则用作对照。在激活后的截断释放被监测，以研究基于X2的激活。实验中，Fura-2 AM 钙敏感染料的兴奋度为 340 和 380 纳米，而排放记录为 510 纳米。钙结合后，荧光强度在340增加，而380纳米的荧光强度降低。然后，染料以340纳米的荧光强度与380纳米的荧光强度之比沉积。380比例的340，与细胞内钙的含量成正比，其价值，可以用格林凯维奇方程来计算。检测到两种荧光强度的表率、稀释、光出血、染料泄漏和气味密度等实验因素的影响。因此，让我们毫不拖延地开始实验。通过截断 pam-12 误区中的 N 端、C 端和 N+C 端氨基酸，确定乳腺细胞 MRGPR X2 受体、发生器 N-截断、C-截断和 N+C-特伦特肽库的配体。使用固体相肽合成合成肽。将端端端修改为设置潮汐组，将 C 端端修改为中间组。生成和丙氨酸可以肽库，通过取代各自的氨基酸的pam-12由阿兰宁，一次一个。将端端终端修改为设置组，将 C 端端修改为中间组。通过补充高葡萄糖DMEM，用10%胎儿牛血清，2毫摩尔L-麸质胺，每毫升青霉素100单位，每毫升链霉素100微克，准备培养介质。除了发球的细胞起诉培养特征，375培养瓶在37摄氏度，5%CO2，直到他们是75至80%的汇合。一旦75%的汇流，洗细胞，并添加两到三毫升的证明-C，以分离细胞。一旦细胞分离，收集在证明C细胞。加入六至九毫升新鲜介质。在1620克下离心细胞三到五分钟。离心后，丢弃超高纳特收集颗粒。在新鲜培养中重新使用细胞。根据所需的浓度稀释细胞。在200微升的细胞悬浮器中，浓度为20万个细胞，将安邦倒入每口井中，以寻求每口井4万个细胞。在37摄氏度、5%CO2的孵化器中24小时保护细胞。使用 Fura-2 AM 染料进行实验。在 50 微克 Fura-2 AM 中加入 50 微升 DMSO，以准备富拉-2 AM 染料的一毫摩尔赤裸裸溶液。每毫升新鲜介质添加一毫摩尔Fula-2 AM染料的微升，以准备一种微摩尔染料浓度的稀释介质。从孵化器中取出 96 井板并丢弃介质。用新鲜稀释介质替换介质。在每口井中加入200微升稀释介质。在37摄氏度、5%CO2的孵化器中孵育细胞30-40分钟。当细胞被孵育时，设置板读取器。将温度设置为 37 摄氏度。在设置中，选择 Flex。将阅读模式设置为荧光和底部读取。在波长中，将波长设置为 2。将兴奋度设置为 340 纳米和 380 纳米。将排放设置为 510 纳米。将敏感性保留为默认值。在计时中，将间隔设置为 3.9 秒。将运行时间设置为 94 秒，以获得 25 个读取数。接下来，选择检测板类型。接下来，选择要阅读的井。在复合传输中，将传输到一个，初始卷到一百微升。将派佩特高度设置为百微升，体积设置为 50 微升，时间点设置为 36 秒以添加化合物，并倾向于读数。接下来，选择复合源板类型。离开三叶草不使用。选择提示和派佩特提示布局。对于复合柱和尖端柱，复合物将在复合板的第一列中转移。将提示列设置为一，将复合列设置为一。离开自动校准打开. 点击确定。孵化40分钟后，取出介质。使用 XDB 缓冲器清洗细胞。添加一百微升 XDB 缓冲器，用于荧光读取。拿盘子读荧光。当摄氏37度时，按阅读室，将检测板放入荧光板读卡器中。按源放置复合板。添加 200 微升受人尊敬的多肽离子体和 EGTA 来制备复合板，以转动 X 溶液。按下小费，将提示框放入。使用黑色尖端以避免尖端自动荧光。一旦板被保留，如果你使用软件的设置和按阅读。通过格林凯维奇方程从荧光比中确定钙浓度。显示的是pam好肽的荧光数据。可见，在36秒添加肽后，340纳米的荧光量会随着380纳米记录的减少而增加。数据表示为 340 与 380 信号的比例。它们显示添加肽后信号增加。此图是激活肽的代表性数据。图A显示激活肽的荧光信号。代表数据对应于补习板12肽是在创建投标周期基线后添加的，如 ado 所示。图B显示激励后荧光排放比为340纳米，激发后荧光发射比为380纳米。此数字是空白代表数据。图 A 显示空白的荧光信号。HTB 是在稀释了 10 个喂食周期的基线后添加的，如 ado 所示。图B显示了340纳米激发后荧光排放与380纳米激发后荧光发射的配给。此数字是染料校准标准的代表数据。图A显示，离子霉素被添加在第10读数，如ado显示，以获得最大的荧光在现金绑定状态。EGPA 特里顿 X 百是在获得最小信号的 ado 显示的 20 读数后添加的。图B显示340纳米激发后的荧光排放与380纳米激发后的荧光排放比。这些值被进一步放在格林凯维奇方程中，以获得细胞内浓度缓存。此图显示了代表肽的特征，以确认序列和纯度。图A显示具有代表性的肽序列WNK WAL的垂直质量为857.90染料稀释。这在质谱学中由 N 超过 Zed 比率显示。图B显示，HPLC确认的肽纯度为99%。这种肽属于N+C截断肽库。最后，这里描述的方法是一种简单多才多艺的方法，可以高效和明亮地进行最后一次钙基筛查。但是，有几个因素决定了数据的质量，因此，需要优化给定单元格仪器系统的构成。谢谢。

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Antibiotic Efficacy Testing in an Ex vivo Model of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Biofilms in the Cystic Fibrosis Lung

Antibiotic Efficacy Testing in an Ex vivo Model of Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus Biofilms in the Cystic Fibrosis Lung

在囊性纤维化肺中的伪肌瘤和金黄色葡萄球菌生物膜的前体内模型中进行抗生素疗效测试

The effective prescription of antibiotics for the bacterial biofilms present within the lungs of individuals with cystic fibrosis (CF) is limited by a ...