Name: use of trowell-type organ culture to study regulation of dental stem cells
Uploaded: 2021-07-08T13:30:00
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この研究は、Jane and Aatos Erkko Foundationの支援を受けた。

この議定書には動物の使用が含まれ、すべての手順は、動物の使用と世話に関する倫理委員会とヘルシンキ大学の動物施設によって承認されました。
1. 臓器培養皿の調製
<ol><li>すべての手順は層流フードで実行します。作業面を70%エタノールで洗浄し、オートクレーブ滅菌したガラス器具と溶液を使用します。はさみやその他の金属機器をガラスビーズ滅菌器で滅菌し...

<ol>
	<li>Balic, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+explaining+tooth+repair+and+regeneration:+A+mini-review.">Biology explaining tooth repair and regeneration: A mini-review.</a> Gerontology. 64 (4), 382-388 (2018).</li><li>Harada, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+putative+stem+cells+in+dental+epithelium+and+their+association+with+Notch+and+FGF+signaling.">Localization of putative stem cells in dental epithelium and their association with Notch and FGF signaling.</a> The Journal of Cell Biology. 147 (1), 105-120 (1999).</li><li>Smith, C. E., Warshawsky, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+renewal+in+the+enamel+organ+and+the+odontoblast+layer+of+the+rat+incisor+as+followed+by+radioautography+using+3H-thymidine.">Cellular renewal in the enamel organ and the odontoblast layer of the rat incisor as followed by radioautography using 3H-thymidine.</a> The Anatomical Record. 183 (4), 523-561 (1975).</li><li>Balic, A., Thesleff, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+interactions+regulating+tooth+development+and+renewal.">Tissue interactions regulating tooth development and renewal.</a> Current Topics in Developmental Biology. 115, 157-186 (2015).</li><li>Scadden, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stem-cell+niche+as+an+entity+of+action.">The stem-cell niche as an entity of action.</a> Nature. 441 (7097), 1075-1079 (2006).</li><li>Juuri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox2+marks+epithelial+competence+to+generate+teeth+in+mammals+and+reptiles.">Sox2 marks epithelial competence to generate teeth in mammals and reptiles.</a> Development. 140 (7), 1424-1432 (2013).</li><li>Juuri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sox2++stem+cells+contribute+to+all+epithelial+lineages+of+the+tooth+via+Sfrp5++progenitors.">Sox2+ stem cells contribute to all epithelial lineages of the tooth via Sfrp5+ progenitors.</a> Developmental Cell. 23 (2), 317-328 (2012).</li><li>Feng, J., Mantesso, A., De Bari, C., Nishiyama, A., Sharpe, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual+origin+of+mesenchymal+stem+cells+contributing+to+organ+growth+and+repair.">Dual origin of mesenchymal stem cells contributing to organ growth and repair.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (16), 6503-6508 (2011).</li><li>Kaukua, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+origin+of+mesenchymal+stem+cells+in+a+tooth+model+system.">Glial origin of mesenchymal stem cells in a tooth model system.</a> Nature. 513 (7519), 551-554 (2014).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretion+of+shh+by+a+neurovascular+bundle+niche+supports+mesenchymal+stem+cell+homeostasis+in+the+adult+mouse+incisor.">Secretion of shh by a neurovascular bundle niche supports mesenchymal stem cell homeostasis in the adult mouse incisor.</a> Cell Stem Cell. 14 (2), 160-173 (2014).</li><li>Vidovic, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=alphaSMA-expressing+perivascular+cells+represent+dental+pulp+progenitors+in+vivo.">alphaSMA-expressing perivascular cells represent dental pulp progenitors in vivo.</a> Journal of Dental Research. 96 (3), 323-330 (2017).</li><li>Trowell, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modified+technique+for+organ+culture+in+vitro.">A modified technique for organ culture in vitro.</a> Experimental Cell Research. 6 (1), 246-248 (1954).</li><li>Saxen, L., Vainio, T., Toivonen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+polyoma+virus+on+mouse+kidney+rudiment+in+vitro.">Effect of polyoma virus on mouse kidney rudiment in vitro.</a> Journal of the National Cancer Institute. 29, 597-631 (1962).</li><li>Thesleff, I., Sahlberg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+culture+in+the+analysis+of+tissue+interactions.">Organ culture in the analysis of tissue interactions.</a> Methods in Molecular Biology. 461, 23-30 (2008).</li><li>Jarvinen, E., Shimomura-Kuroki, J., Balic, A., Jussila, M., Thesleff, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+Wnt/beta-catenin+signaling+limits+tooth+number.">Mesenchymal Wnt/beta-catenin signaling limits tooth number.</a> Development. 145 (4), (2018).</li><li>Ahtiainen, L., Uski, I., Thesleff, I., Mikkola, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+epithelial+signaling+center+governs+tooth+budding+morphogenesis.">Early epithelial signaling center governs tooth budding morphogenesis.</a> The Journal of Cell Biology. 214 (6), 753-767 (2016).</li><li>Narhi, K., Thesleff, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Explant+culture+of+embryonic+craniofacial+tissues:+analyzing+effects+of+signaling+molecules+on+gene+expression.">Explant culture of embryonic craniofacial tissues: analyzing effects of signaling molecules on gene expression.</a> Methods in Molecular Biology. 666, 253-267 (2010).</li><li>Yang, Z., Balic, A., Michon, F., Juuri, E., Thesleff, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+Wnt/beta-Catenin+signaling+controls+epithelial+stem+cell+homeostasis+in+teeth+by+inhibiting+the+antiapoptotic+effect+of+Fgf10.">Mesenchymal Wnt/beta-Catenin signaling controls epithelial stem cell homeostasis in teeth by inhibiting the antiapoptotic effect of Fgf10.</a> Stem Cells. 33 (5), 1670-1681 (2015).</li><li>Binder, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+distinctive+Ptch+receptors+establish+multimodal+hedgehog+signaling+in+the+tooth+epithelial+stem+cell+niche.">Functionally distinctive Ptch receptors establish multimodal hedgehog signaling in the tooth epithelial stem cell niche.</a> Stem Cells. 37 (9), 1238-1248 (2019).</li><li>Harada, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+putative+stem+cells+in+dental+epithelium+and+their+association+with+Notch+and+FGF+signaling.">Localization of putative stem cells in dental epithelium and their association with Notch and FGF signaling.</a> The Journal of Cell Biology. 147 (1), 105-120 (1999).</li><li>Seidel, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+signaling+regulates+the+generation+of+ameloblast+progenitors+in+the+continuously+growing+mouse+incisor.">Hedgehog signaling regulates the generation of ameloblast progenitors in the continuously growing mouse incisor.</a> Development. 137 (22), 3753-3761 (2010).</li><li>Hadjantonakis, A. K., Nagy, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FACS+for+the+isolation+of+individual+cells+from+transgenic+mice+harboring+a+fluorescent+protein+reporter.">FACS for the isolation of individual cells from transgenic mice harboring a fluorescent protein reporter.</a> Genesis. 27 (3), 95-98 (2000).</li><li>Yu, Y. A., Szalay, A. A., Wang, G., Oberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+molecular+and+cellular+events+with+green+fluorescent+proteins+in+developing+embryos:+a+review.">Visualization of molecular and cellular events with green fluorescent proteins in developing embryos: a review.</a> Luminescence. 18 (1), 1-18 (2003).</li><li>D'Amour, K. A., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+and+functional+differences+between+multipotent+neural+and+pluripotent+embryonic+stem+cells.">Genetic and functional differences between multipotent neural and pluripotent embryonic stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100, 11866-11872 (2003).</li><li>Chavez, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+dental+epithelial+stem+cells+from+the+adult+mouse+incisor.">Isolation and culture of dental epithelial stem cells from the adult mouse incisor.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (87), (2014).</li><li>Binder, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+strategies+for+expansion+of+tooth+epithelial+stem+cells+and+ameloblast+generation.">Novel strategies for expansion of tooth epithelial stem cells and ameloblast generation.</a> Science Reports. 10 (1), 4963 (2020).</li></ol>

in vitro 臓器培養は、臓器の成長と形態形成を支配する誘導電位と上皮間葉系相互作用を研究するために広く使用されています。Theslef研究室は、トロウェル型臓器培養のサクセン修飾を適応させ、それを使用して歯の発達を研究する方法を実証しました14。再現性のある条件と蛍光レポーターの進歩により、これは歯の形態形成とその中の明確な細胞集団をモニタリン?...

マウスの切歯は、歯の成分の絶え間ない生産をサポートする幹細胞(SC)の生涯保存により、継続的に成長します。これらには、エナメル質産生アメロブラストを生成する上皮SCや、象牙質産生歯芽細胞を生成する間葉系幹細胞(MSC)などが含まれます1。継続的に成長する切歯の上皮SCは、最初はラベル保持細胞として同定され2,3、その後、Sox24を含む多くのよく知られたステムネス遺伝子を発現することが示されています。これらの細胞は他の臓器の上皮SCと共通の特徴を共有し、切歯の唇側に位置する頸部ループと呼ばれるSCニッチ内に存在する。ニッチは、SC活性5を制御する細胞と細胞外マトリックスで構成される動的実体です。系統追跡研究は、Sox2+上皮SCが歯の上皮コンパートメント全体を再生することができ、それらが連続した歯の形成に重要であることを示しています6,7。象牙質修復または再生の可能性を有するMSCは、主に血管および神経を介して臓器外から募集されるため8、9、10、11、したがって、MSC集団の募集、移動、および住居を研究するための適切なモデルを提供します。
遺伝的および/または薬理学的操作の多くは臓器の恒常性に影響を与えたり、致命的な結果をもたらす可能性があるため、in vivoでSCを研究することは常に実行可能であるとは限りません。したがって、臓器培養は、in vitroでSCとそのニッチの調節を研究するための優れたツールを提供します。金属グリッドを利用する臓器培養システムは、当初、臓器発達を研究するためにTrowell12によって開発され、腎臓発達における誘導シグナルを研究するためにSaxen13によってさらに変更されました。それ以来、臓器の全部または一部を培養するこのin vitro法は、さまざまな分野でうまく適用されてきました。歯の発達の分野では、この方法は、歯の発達14と連続的な歯の形成15を支配する上皮間葉系相互作用の研究に広く使用されています。Thesleff研究室の研究は、歯の成長と形態形成の時間的分析、歯の成長に対するさまざまな分子と成長因子の影響の分析、および歯の発達のタイムラプスライブイメージングのためのこのシステムの有用性を実証しました16,17。最近では、この方法は、切歯SCおよびそれらのニッチ18,19の調節を研究するために利用されており、これはここで詳細に説明されている。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1-mL plastic syringes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable 20/26 gauge hypodermic needles</td>
			<td>Terumo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>61965-026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Bonn Scissors</td>
			<td>F.S.T.</td>
			<td>14084-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>F-12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>31765-027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS South American (CE)</td>
			<td>LifeTechn.</td>
			<td>10270106</td>
			<td>divide in aliquotes, store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass bead sterilizer, Steri 250 Seconds-Sterilizer</td>
			<td>Simon Keller Ltd</td>
			<td>4AJ-6285884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX-1 (200 mM L-alanyl-L-glutamine dipeptide)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopore Polycarb.Filters, 0,1 um 25-mm diameter</td>
			<td>MerckMillipore</td>
			<td>VCTP02500</td>
			<td>Store in 70% ethanol at room temperature.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascobic Acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4544-25g</td>
			<td>diluted 100 mg/ml in MilliQ, filter strerilized and divided in 20&#956;l aliquotes, store at dark, -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low melting agarose</td>
			<td>TopVision</td>
			<td>R0801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metal grids</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Commercially available, or self-made from stainless-steel mesh (corrosion resistant, size of mesh 0.7 mm). Cut approximately 30 mm diameter disk and bend the edges to give 3 mm height. Use nails to make holes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro forceps</td>
			<td>Medicon</td>
			<td>07.60.03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000U/ml) sol.</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dishes, Soda-Lime glass</td>
			<td>DWK Life Sciences</td>
			<td>9170442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petridish 35 mm, with vent</td>
			<td>Duran</td>
			<td>237554008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petridish 90 mm, no vent classic</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>101RT/C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small scissors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of trowell-type organ culture to study regulation of dental stem cells

臓器の発生、機能、および再生は、幹細胞ニッチと呼ばれる個別の解剖学的空間内に存在する幹細胞に依存しています。継続的に成長するマウス切歯は、組織特異的幹細胞を研究するための優れたモデルを提供します。切歯の上皮組織特異的幹細胞は、頸部ループと呼ばれるニッチの歯の近位端に位置しています。それらは、歯の自己研ぎ先端の絶え間ない摩耗を相殺するために細胞の連続的な流入を提供する。ここに提示されるのは、幹細胞とそのニッチを収容するマウス切歯の近位端の単離と培養のための詳細なプロトコルです。これは、組織片(外植片)の in vitro 培養を可能にする修正トロウェルタイプの臓器培養プロトコルであり、金属グリッドで支えられたフィルター上の液体/空気界面の厚い組織スライスを可能にします。ここで説明する臓器培養プロトコルは 、in vivoでは 不可能な組織操作を可能にし、蛍光レポーターの使用と組み合わせると、幹細胞を含む生きた組織中の離散的な細胞集団の経時的な識別と追跡のためのプラットフォームを提供します。このシステムでは、幹細胞とそのニッチに対する効果について、さまざまな調節分子や薬理学的化合物を試験することができます。これは最終的に幹細胞の調節と維持を研究するための貴重なツールを提供します。

上皮SCは、切歯の近位端に位置する頸部ループと呼ばれるニッチに存在します(図3A)。頸部ループは、緩く配置された上皮細胞のコアである星状網を包む内側と外側のエナメル質上皮で構成される形態学的に異なる構造です(図3B、C)。各切歯には2つの頸部ループがありますが(図3A)、唇頸部ループにのみSCが含まれ?...

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Use of Trowell-Type Organ Culture to Study Regulation of Dental Stem Cells

トロウェル型臓器培養法は、歯の発達を支配する複雑なシグナル伝達ネットワークを解明するために使用され、最近では、継続的に成長するマウス切歯の幹細胞に関与する調節を研究するために使用されています。蛍光レポーター動物モデルとライブイメージング法は、歯科幹細胞とその特定のニッチ微小環境の詳細な分析を容易にします。

歯科幹細胞の制御を研究するためのトロウェル型臓器培養の使用

Organ development, function, and regeneration depend on stem cells, which reside within discrete anatomical spaces called stem cell niches. The ...

トロウェル型臓器培養は、組織外植片の培養に使用されます。ここでは、この方法を使用して、継続的に成長する歯の幹細胞を研究する方法を示します。この技術により、幹細胞とそのニッチでの挙動を研究し、幹細胞の生存と維持に対するさまざまな分子の影響をスクリーニングすることができます。この方法は、皮膚や乳腺などの他の臓器の幹細胞の研究にも適用できます。まず、直径1〜2ミリメートルの穴のある30ミリメートルの金属グリッドを35ミリメートルのペトリ皿に配置します。メディアがグリッド表面に到達するまで、その場所をメディアで満たします。次に、組織が分離されて培養の準備が整うまで、プレートを摂氏37度でインキュベートします。マウスを斬首した後、皮膚を切除して下顎骨を露出させ、咬筋を切り裂いて下顎骨を上顎骨と頭の残りの部分から分離します。下顎骨が分離されたら、舌と最大の軟部組織を取り除きます。結合を切り裂いて正中線で下顎骨を分割します。氷の上にPBSを含むペトリ皿に下顎骨を置きます。使い捨ての20 x 26ゲージの皮下注射針を使用して、切歯を解剖します。次に、骨の表面から軟組織と筋肉組織をきれいにして、視覚化を改善します。10日未満の動物から得られた下顎骨の場合は、使い捨ての20 x 26ゲージの皮下注射針を使用して下顎骨の各半分を縦方向に開き、切歯を露出させます。切歯を周囲の骨からそっと外します。頸部ループを含む近位端を切り取り、石灰化したエナメル質と象牙質マトリックスを取り除きます。採取した近位端を、培養の準備ができるまで氷上でダルベッコのPBSに保管します。10日以上経過したマウスの場合は、下顎骨の各半分を縦方向に開いて切歯を露出させます。ピンセットを使用して下顎骨をつかみ、骨を折って歯を露出させます。頸部ループを含む近位端を切断します。採取した近位端を、培養の準備ができるまで氷上でダルベッコのPBSに保管します。長方形のフィルターを事前に温めた培養皿のグリッドの上に慎重に置き、組織片を適切に向けます。プレートを摂氏37度、二酸化炭素5%、湿度90〜95%でインキュベートします。気泡の形成を避けて、隔日に培地を慎重に交換してください。組織の成長を監視し、毎日画像をキャプチャします。皿から培地を取り出し、氷冷メタノールを組織に注意深く加えます。その後、5分間インキュベートします。組織外植片を運ぶフィルターを固定液で満たされたサンプリングチューブに移します。外植片をPBSで調製した4%パラホルムアルデヒドに固定し、摂氏4度で一晩最大にします。上皮幹細胞は、切歯の近位端に位置する頸部ループと呼ばれるニッチに存在する。頸部ループは、緩く配置された上皮細胞のコアである星状網を包む内側と外側のエナメル質上皮で構成されています。各切歯には1つの唇と1つの舌の頸部ループがありますが、唇頸部ループにのみ幹細胞が含まれています。生後2日目のSox2-GFPマウスから単離した切歯の近位端を捕捉し、Sox2発現切歯上皮幹細胞の同定と可視化を可能にしました。Sox2-GFPおよびFucci赤色トランスジェニックマウスから単離された子宮頸部ループにおいて、GFP陽性幹細胞およびフッチ赤色陽性非増殖細胞が同定された。Sox2-GFP発現は、Sox2発現幹細胞およびGFP発現に悪影響を与えるWnt/β-カテニンシグナル伝達活性化因子BIOの効果を分析するためのレポーターとして使用されました。この技術は、幹細胞の挙動のライブイメージングに最適化できます。プレスまたは培養された外植片は、さらなる分析のために単一細胞懸濁液に酵素的に処理することもできます。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Use of the TetON System to Study Molecular Mechanisms of Zebrafish Regeneration

ゼブラフィッシュ再生の分子機構を研究するためにテトンシステムの利用

The zebrafish has become a very important model organism for studying vertebrate development, physiology, disease, and tissue regeneration. A thorough ...

Method of Studying Palatal Fusion using Static Organ Culture

静的器官培養を使用して口蓋の融合を研究の方法

Cleft lip and palate are among the most common of all birth defects. The secondary palate forms from mesenchymal shelves covered with epithelium that ...

Epigenetic Regulation of Cardiac Differentiation of Embryonic Stem Cells and Tissues

胚性幹細胞や組織の心臓分化のエピジェネティック制御

Specific gene transcription is a key biological process that underlies cell fate decision during embryonic development. The biological process is mediated ...

Methods to Study Mrp4-containing Macromolecular Complexes in the Regulation of Fibroblast Migration

線維芽細胞移動の調節にMRP4含有高分子複合体を研究するための方法

Multidrug resistance protein 4 (MRP4) is a member of the ATP-binding cassette family of membrane transporters and is an endogenous efflux transporter of ...

Large-Scale Production of Cardiomyocytes from Human Pluripotent Stem Cells Using a Highly Reproducible Small Molecule-Based Differentiation Protocol

再現性の高い小分子ベースの分化プロトコルを使用したヒト多能性幹細胞から心筋細胞の大規模生産

Maximizing the benefit of human pluripotent stem cells (hPSCs) for research, disease modeling, pharmaceutical and clinical applications requires robust ...

Horizontal Whole Mount: A Novel Processing and Imaging Protocol for Thick, Three-dimensional Tissue Cross-sections of Skin

水平全マウント：皮膚の厚い3次元組織断面のための新規処理および画像化プロトコール

Processing a tissue of interest to generate a microscopic image that supports a scientific argument can be challenging. The acquisition of high-quality ...

Single-cell Photoconversion in Living Intact Zebrafish

生活そのままゼブラフィッシュの単一セルの光電

Animal and plant tissue is composed of distinct populations of cells. These cells interact over time to build and maintain the tissue and can cause ...

Identification of Skeletal Muscle Satellite Cells by Immunofluorescence with Pax7 and Laminin Antibodies

Pax7 とラミニン抗体抗体法による骨格筋衛星細胞の同定

Immunofluorescence is an effective method that helps to identify different cell types on tissue sections. In order to study the desired cell population, ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

核の分布、蛋白質および細胞骨格を研究する線虫生殖細胞の解析

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Isolation, Propagation, and Prion Protein Expression During Neuronal Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells

分離、伝達、およびプリオン蛋白質発現ひと歯髄幹細胞の神経分化

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