Name: a generalized method for determining free soluble phenolic acid composition and antioxidant capacity of cereals and legumes
Uploaded: 2022-06-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Generalized Method for Determining Free Soluble Phenolic Acid Composition and Antioxidant Capacity of Cereals and Legumes at JoVE.com

著者らは、アリソン・セル氏とハンナ・オドゥロ・オーベン氏の技術支援、ジャニス・ファハルド氏とミゲル・デル・ロザリオ氏によるビデオ編集のサポートに感謝しています。

1. サンプルの種類
<ol><li>この研究には、2つの穀物(例えば、デュラム小麦およびイエローコーン)および3つの豆類(例えば、ブラックアイサゲ豆、大豆、および赤インゲン豆)を含む5つの全粒穀物サンプルを使用する。</li>
	<li>各穀物の50gを3連で粉砕し、コーヒーグラインダーを使用して小麦粉にし、それらを500μmのふるいに通す。</li>
	<li>-20°Cで保管してください。</li>
</ol><p clas...

<ol>
	<li>Huitu, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicon,+endophytes+and+secondary+metabolites+as+grass+defenses+against+mammalian+herbivores.">Silicon, endophytes and secondary metabolites as grass defenses against mammalian herbivores.</a> Frontiers in Plant Science. 5, 478 (2014).</li><li>Joshi, J. R., Burdman, S., Lipsky, A., Yariv, S., Yedidia, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+phenolic+acids+affect+the+virulence+of+Pectobacterium+aroidearum+and+P.+carotovorum+ssp.+brasiliense+via+quorum+sensing+regulation.">Plant phenolic acids affect the virulence of Pectobacterium aroidearum and P. carotovorum ssp. brasiliense via quorum sensing regulation.</a> Molecular Plant Pathology. 17 (4), 487-500 (2016).</li><li>Dykes, L., Rooney, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenolic+compounds+in+cereal+grains+and+their+health+benefits.">Phenolic compounds in cereal grains and their health benefits.</a> Cereal Foods World. 52 (3), 105-111 (2007).</li><li>Xiang, J., Apea-Bah, F. B., Ndolo, V. U., Katundu, M. C., Beta, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profile+of+phenolic+compounds+and+antioxidant+activity+of+finger+millet+varieties.">Profile of phenolic compounds and antioxidant activity of finger millet varieties.</a> Food Chemistry. 275, 361-368 (2019).</li><li>Qiu, Y., Liu, Q., Beta, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antioxidant+properties+of+commercial+wild+rice+and+analysis+of+soluble+and+insoluble+phenolic+acids.">Antioxidant properties of commercial wild rice and analysis of soluble and insoluble phenolic acids.</a> Food Chemistry. 121 (1), 140-147 (2010).</li><li>Beverly, R. L., Motarjemi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Encyclopedia of Food Safety. 3, 309-314 (2014).</li><li>FAO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Food+Outlook+-+Biannual+report+on+global+food+markets.">Food Outlook - Biannual report on global food markets.</a> Food and Agriculture Organization. , (2020).</li><li>Erbersdobler, H. F., Barth, C. A., Jahreis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Legumes+in+human+nutrition.+Nutrient+content+and+protein+quality+of+pulses.">Legumes in human nutrition. Nutrient content and protein quality of pulses.</a> Ernahrungs Umschau. 64 (9), 134-139 (2017).</li><li>Due&#241;as, M., Hern&#225;ndez, T., Estrella, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+in+vitro+antioxidant+capacity+of+the+seed+coat+and+the+cotyledon+of+legumes+in+relation+to+their+phenolic+contents.">Assessment of in vitro antioxidant capacity of the seed coat and the cotyledon of legumes in relation to their phenolic contents.</a> Food Chemistry. 98 (1), 95-103 (2006).</li><li>Khang, D. T., Dung, T. N., Elzaawely, A. A., Xuan, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenolic+profiles+and+antioxidant+activity+of+germinated+legumes.">Phenolic profiles and antioxidant activity of germinated legumes.</a> Foods. 5 (2), 27 (2016).</li><li>Hefni, M. E., Amann, L. S., Witth&#246;ft, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+HPLC-UV+method+for+the+quantification+of+phenolic+acids+in+cereals.">A HPLC-UV method for the quantification of phenolic acids in cereals.</a> Food Analytical Methods. 12 (12), 2802-2812 (2019).</li><li>AOAC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Official Methods of Analysis. 17th edn. , (2000).</li><li>Apea-Bah, F. B., Head, D., Scales, R., Bazylo, R., Beta, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrothermal+extraction,+a+promising+method+for+concentrating+phenolic+antioxidants+from+red+osier+dogwood+(Cornus+stolonifer)+leaves+and+stems.">Hydrothermal extraction, a promising method for concentrating phenolic antioxidants from red osier dogwood (Cornus stolonifer) leaves and stems.</a> Heliyon. 6 (10), 05158 (2020).</li><li>Apea-Bah, F. B., Minnaar, A., Bester, M. J., Duodu, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sorghum-cowpea+composite+porridge+as+a+functional+food,+Part+II:+Antioxidant+properties+as+affected+by+simulated+in+vitro+gastrointestinal+digestion.">Sorghum-cowpea composite porridge as a functional food, Part II: Antioxidant properties as affected by simulated in vitro gastrointestinal digestion.</a> Food Chemistry. 197, 307-315 (2016).</li><li>Robbins, R. J., Bean, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+quantitative+high-performance+liquid+chromatography-photodiode+array+detection+measurement+system+for+phenolic+acids.">Development of a quantitative high-performance liquid chromatography-photodiode array detection measurement system for phenolic acids.</a> Journal of Chromatography A. 1038 (1-2), 97-105 (2004).</li><li>Singleton, V. L., Rossi, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorimetry+of+total+phenolics+with+phosphomolybdic-phosphotungstic+acid+reagents.">Colorimetry of total phenolics with phosphomolybdic-phosphotungstic acid reagents.</a> American Journal of Enology and Viticulture. 16, 144-158 (1965).</li><li>Prior, R. L., Wu, X., Schaich, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+methods+for+the+determination+of+antioxidant+capacity+and+phenolics+in+foods+and+dietary+supplements.">Standardized methods for the determination of antioxidant capacity and phenolics in foods and dietary supplements.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53 (10), 4290-4302 (2005).</li><li>Ainsworth, E. A., Gillespie, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+total+phenolic+content+and+other+oxidation+substrates+in+plant+tissues+using+Folin-Ciocalteu+reagent.">Estimation of total phenolic content and other oxidation substrates in plant tissues using Folin-Ciocalteu reagent.</a> Nature Protocols. 2 (4), 875-877 (2007).</li><li>Waterhouse, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+total+phenolics.">Determination of total phenolics.</a> Current Protocols in Food Analytical Chemistry. 1, 1-8 (2002).</li><li>Huang, D., Ou, B., Prior, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemistry+behind+antioxidant+capacity+assays.">The chemistry behind antioxidant capacity assays.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53 (6), 1841-1856 (2005).</li><li>Esterbauer, H., W&#228;g, G., Puhl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+peroxidation+and+its+role+in+atherosclerosis.">Lipid peroxidation and its role in atherosclerosis.</a> British Medical Bulletin. 49 (3), 566-576 (1993).</li><li>Esterbauer, H., Gebicki, J., Puhl, H., J&#252;rgens, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+lipid+peroxidation+and+antioxidants+in+oxidative+modification+of+LDL.">The role of lipid peroxidation and antioxidants in oxidative modification of LDL.</a> Free Radical Biology and Medicine. 13 (4), 341-390 (1992).</li><li>Apea-Bah, F. B., Serem, J. C., Bester, M. J., Duodu, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenolic+composition+and+antioxidant+properties+of+Koose,+a+deep-fat+fried+cowpea+cake.">Phenolic composition and antioxidant properties of Koose, a deep-fat fried cowpea cake.</a> Food Chemistry. 237, 247-256 (2017).</li></ol>

全粒穀物は、世界中で幅広い食品用途を見つける代表的な穀物および豆類として選択されました。各穀物の品種間にはばらつきが存在するかもしれないが、この研究の焦点は、全粒穀物の遊離フェノール酸抽出および分析のための一般化された方法を実証することであった。抽出方法は、そのような実験が行われたときに環境に放出される化学物質の量を減らすために、サンプルおよび溶媒?...

フェノール酸は、草食動物や真菌の感染に対する植物の防御に重要な役割を果たし、植物組織における構造的支持と完全性の維持に重要な役割を果たしているため、植物で研究されている最も重要な植物化学物質の1つです1,2。彼らは穀物のふすまと豆類の種皮に豊富にあります3.構造的には、それらは2つのグループに分けられる:ヒドロキシ安息香酸(図1)およびヒドロキシ桂皮酸(図2)。穀物および豆類における一般的なヒドロキシ安息香酸には、没食子酸、p-ヒドロキシ安息香酸、2,4-ジヒドロキシ安息香酸、プロトカテクイ酸、バニリック酸、およびシリンギン酸が含まれ、一般的なヒドロキシ桂皮酸にはカフェ酸、p-クマル酸、鉄原酸、シナピン酸3が含まれる。フェノール酸はまた、脂肪中の酸化的酸敗を引き起こすフリーラジカルを捕捉し、生理学的系においてラジカル誘発酸化ストレスを開始および伝播することができるので、抗酸化特性を有する4,5。抗酸化物質としてのこの重要な生理学的役割のために、それらは最近の研究の対象である。これは、植物性食品の成分として消費されると、抗酸化保護を発揮することができるからです。
穀物とシリアル製品は、世界中の人間と動物にとって主要な炭水化物食料源です6。穀物には、小麦、米、トウモロコシ(トウモロコシ)、大麦、トリチケール、キビ、ソルガムなどがあります。その中で、トウモロコシが最も利用されており、2019/2020年の推定世界利用量は11億3,570万トンで、続いて同じ期間に小麦が7億5,750万トンと推定されています7。シリアル食品は炭水化物の豊富な供給源であるため、消費者にとって大きなエネルギー源です。彼らはまた、いくつかのタンパク質、脂肪、繊維、ビタミンやミネラルを提供します6.それらの栄養価に加えて、穀物は植物化学的抗酸化物質、特にフェノール酸の良い供給源であり、ラジカル誘発酸化損傷から生理学的系を保護する可能性を秘めている3。マメ科植物はまた、栄養素の良い供給源であり、一般的に穀物よりもタンパク質が高いです。それらはまたビタミンとミネラルを含み、そして様々な食物の調製に使われます8。さらに、豆類は、フェノール酸、フラボノイド、アントシアニン、およびプロアントシアニジンを含む様々な植物化学的抗酸化物質の良好な供給源である9,10。穀物および豆類の異なる品種は、異なるフェノール酸組成を有し得る。したがって、フェノール系抗酸化物質に関してそれらの潜在的な健康上の利点を知るために、穀物および豆類およびそれらの品種のフェノール酸組成を研究する必要がある。
穀物およびマメ科植物の穀物中のフェノール酸の量を測定し、それらの抗酸化活性を決定するための多くのアッセイが報告されている。全粒フェノール酸の最も一般的な分析方法は、分光光度法および液体クロマトグラフィー11である。この研究の目的は、遊離可溶性フェノール酸組成を決定するための一般化された高圧液体クロマトグラフィー法、およびいくつかの全粒穀物および豆類の総フェノール含有量および抗酸化能を決定するための分光光度法を実証することであった。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Falcon conical centrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-527-90</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL Amber glass ID Surestop vial</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>C5000-2W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL Amber microcentrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20170-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,2&#8242;-Azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>440914-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,2&#39;-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) (C18H18N4O6S4) &#8805;98%,</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1888-2G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,2-Diphenyl-1pikrylhydrazyl (DPPH) (C18H12N5O6)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D913-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (Trolox) (C14H18O4), &#8805;98%</td>
			<td>Fluka Chemika</td>
			<td>56510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9 mm Autosampler Vial Screw Thread Caps</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>60180-670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well flat bottom plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12565501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent BioTek ELx800 microplate reader</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BT-ELX800NB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent BioTek Precision 2000 96/384 Automated Microplate Pipetting System</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent BioTek FLx800 Microplate Fluorescence Reader</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance SI-114</td>
			<td>Denver Instrument</td>
			<td>SI-114.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autosampler, Waters 717 Plus</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT078900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 3 mL syringe Luer-Lok Tip</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bransonic ultrasonic cleaner, Branson 5510</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z245143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning LSE Vortex Mixer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>6775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Durapore Filter (0.45 &#181;m PVDF Membrane)</td>
			<td>Merck Millipore Ltd</td>
			<td>HVLP04700&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Durapore Membrane Filters (0.45 &#181;m HV)</td>
			<td>Merck Millipore Ltd</td>
			<td>HVHP04700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Research&#160;plus, 0.5-10 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Research&#160;plus, 0.5-5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Research&#160;plus, 100-1000 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Research&#160;plus, 10-100 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate, HPLC grade</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>E195-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferulic acid standard</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>128708-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AC119245000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folin &#38; Ciocalteu phenol reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F9252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid, 99%</td>
			<td>Acros Organics, Janssen Pharmaceuticalaan 3a</td>
			<td>27048-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gallic acid standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7384</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatograph (HPLC), Waters 2695</td>
			<td>Waters</td>
			<td>960402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol, HPLC grade</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>A452-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro pipet tips, 0.5-10 &#181;L</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>21-197-2F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge Sorvall Legend Micro 21 centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75002435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel micropipette, Proline Plus, 30-300 &#181;L</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>728240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photodiode array detector, Waters 2996</td>
			<td>Waters</td>
			<td>720000350EN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips, 1000 &#181;L</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83007-382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips, 1-5 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82018-840</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium persulfate (K2S2O8), &#8805;99.0%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>216224-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate dibasic anhydrous (K2HPO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P288-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P285-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PYREX 250 mL Short Neck Boiling Flask, Round Bottom</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4321-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reversed phase C18 Analytical Column (100 x 3 mm) Accucore aQ</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>17326-103030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roto evaporator, IKA RV 10</td>
			<td>IKA</td>
			<td>&#160;0010005185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium carbonate (NaCO3) anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S263-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Mallinckrodt AR&#174;</td>
			<td>7581</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous (Na2HPO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP332-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic anhydrous (NaH2PO4)</td>
			<td>Fisher bioreagents</td>
			<td>BP329-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standardization pipet tips 0-200&#181;L</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>02-681-134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Driven Filter unit (0.22 &#181;m)</td>
			<td>&#160;Millex&#174;-GV</td>
			<td>SLGVR04NL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Target micro-serts vial insert (400 &#181;L)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>C4011-631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water (Direct Q-3 UV system with pump)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ZRQSVP030</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a generalized method for determining free soluble phenolic acid composition and antioxidant capacity of cereals and legumes

フェノール酸は、フェノール基とカルボキシル基の両方を持つ有機化合物の一種です。それらは穀物に見られ、穀物のふすままたは豆類の種皮に集中します。彼らは、近年、それらの潜在的な抗酸化保護健康機能について、多くの研究の関心を集めている抗酸化特性を持っています。この研究は、全粒穀物から遊離可溶性フェノール酸を抽出し、それらの抗酸化能力を分析するための一般化された方法を提示する。2つの穀物(小麦および黄色トウモロコシ)および3つの豆類(ササゲ豆、インゲン豆、および大豆)を含む5つの全粒穀物サンプルを使用した。穀物を小麦粉に粉砕し、それらの遊離可溶性フェノール酸をメタノール水溶液を用いて抽出した。次いで、化合物を高圧液体クロマトグラフ(HPLC)を用いて同定した。Folin-Ciocalteu法を使用してそれらの総フェノール含有量を決定し、それらの抗酸化能力はDPPHラジカル消去能、トロロックス等価抗酸化能(TEAC)および酸素ラジカル吸光能(ORAC)アッセイを使用して決定した。同定されたフェノール酸には、バニリック酸、カフェ酸、 p-クマル酸およびフェルラ酸が含まれていた。バニリン酸はササゲでのみ同定され、カフェ酸はインゲン豆でのみ同定された。 p-クマル酸はイエローコーン、ササゲ、大豆で同定され、フェルラ酸はすべてのサンプルで同定された。フェルラ酸は、同定された優勢なフェノール酸であった。サンプル中のフェノール酸の総濃度は、以下の順序で減少した:大豆>ササゲ豆>黄色トウモロコシ=インゲン豆>小麦。総抗酸化能力(DPPH、TEACおよびORACアッセイの値の合計)は、以下のように減少した:大豆>インゲン豆>黄色トウモロコシ=ササゲ豆>小麦。この研究は、HPLC分析ならびにDPPH、TEAC、およびORACアッセイが、全粒穀物のフェノール酸組成および抗酸化特性に関する有用な情報を提供すると結論付けた。

表2 に、穀物及びマメ科植物粒において同定されたフェノール酸類を示す。入手可能な本物の標準に基づいて、サンプル中に4つのフェノール酸が同定され、それらはバニリック酸、カフェ酸、 p-クマル酸、およびフェルラ酸である。バニリン酸はヒドロキシ安息香酸であり、他の3つはヒドロキシ桂皮酸である。バニリン酸はブラックアイササゲ豆でのみ同定され、カフェ?...

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A Generalized Method for Determining Free Soluble Phenolic Acid Composition and Antioxidant Capacity of Cereals and Legumes

フェノール酸は、全粒穀物に存在する重要な植物化学物質です。それらは抗酸化保護機能のような生理活性特性を有する。この研究は、HPLC同定、総フェノール含有量推定、および穀物および豆類中のフェノール酸の抗酸化能の測定のための一般化された方法に関する報告を目的としていた。

穀物およびマメ科植物の遊離可溶性フェノール酸組成および抗酸化能を決定するための一般化された方法

Phenolic acids are a class of organic compounds that bear both a phenolic group, and a carboxylic group. They are found in grains and concentrate in the ...

穀物および豆類の遊離可溶性フェノール酸組成および抗酸化能を決定するための一般化された方法。穀物や豆類を含む全粒穀物は、人間の食事のかなりの部分を占めています。人間に対するそれらの栄養学的関連性は長い間認識されてきました。しかし、より最近では、それらの抗酸化保護健康上の利点が報告されている。穀物の外粒層および豆類の種皮に見られるフェノール酸は、全粒穀物の抗酸化特性に寄与する。彼らは生体分子に酸化的損傷を引き起こすフリーラジカルを捕捉する。全粒穀物に含まれるフェノール酸の2つのクラスは、ヒドロキシ安息香酸およびヒドロキシ桂皮酸である。この研究は、全粒穀物フェノール酸を抽出し、それらのin vitro抗酸化能力を決定するための簡単な方法を提供する。この研究には、デュラム小麦、イエローコーン、黒目ササゲ豆、大豆、赤インゲン豆の5つの全粒穀物サンプルを使用します。全粒粉サンプル100ミリグラムを、琥珀色の2ミリリットル容量のマイクロ遠心管に直接正確に計量します。チューブの暗い色は、混合物が光にさらされるのを防ぐのに役立ちます。実施例を含む各チューブに1ミリリットルの80%メタノール水溶液を加える。ボルテックスはメタノール溶液と試料とを短時間混合する。サンプルを60分間超音波処理して、遊離の可溶性フェノール化合物を抽出します。光からの追加の保護のための超音波処理の期間中、サンプルの上にカバーを置きます。超音波処理後、混合物を20、000倍Gで5分間遠心分離し、固体残渣を沈降させ、上清を上に残します。遊離フェノール化合物は、遠心分離後の上清中に存在するであろう。上清は、HPLC装置に注入する前に濾過する必要があります。上清をろ過するには、3mLシリンジのプランジャーを取り外し、シリンジフィルターを取り付けます。フィルターの孔径は 0.22 マイクロメートル以下でなければなりません。約0.4ミリリットルの上清をシリンジの上部にピペットする。プランジャーを再挿入し、フィルターを通して液体をバイアルインサートを含むHPLCバイアルに押し込みます。HPLC分析用の原稿に概説されている方法を実行するように機器がセットアップされたら、サンプルリストに対応するようにバイアルをカルーセルにロードします。320ナノメートルおよび280ナノメートルでHPLCクロマトグラムを取得し、異なるフェノール化合物を表す別個のピークを示す。適切な標準曲線を使用して、ヒドロキシ桂皮酸は、この波長で最大の吸光度を有するので、320ナノメートルで定量する。同じ原理により、ヒドロキシ安息香酸類を280ナノメートルで定量する。ビタミンEの水溶性類似体であるトロロックスを標準として使用して、全粒穀物抽出物のインビトロ抗酸化能を推定する。正確にファルコンチューブにトロロックスの1ミリグラムを計量します。4ミリリットルの50%メタノール水溶液で溶解し、1リットルあたり1ミリモルの原液を調製し、これは1リットルあたり1000マイクロモルと同じである。1リットルあたり50、100、200、400、600、および800マイクロモルの6つの濃度のトロロックスを準備して、DPPHラジカル消去能力およびトロロックスと同等の抗酸化能(TEACの推定のための標準曲線をプロットする。同様に、酸素ラジカル吸光度容量(ORAC)を推定するために、1リットルあたり6.25、12.5、25、および50マイクロモルのトロロックス濃度を準備する。表1に示すように、各濃度の総容量を500マイクロリットルに構成する。分析前にサンプル抽出物をメタノールで希釈する。ここで、イエローコーン及びササゲ抽出物を2倍に希釈した。小麦およびインゲン豆抽出物を5倍に希釈し、一方、大豆抽出物をメタノールで10倍希釈した。8.23ミリグラムのABTSを清潔で2ミリリットルの容量の琥珀色のマイクロ遠心管に入れます。次に、1.62ミリグラムの過硫酸カリウムを清潔で2ミリリットルの容量の琥珀色のマイクロ遠心管に入れます。秤量した薬品のそれぞれをボルテックスにより1ミリリットルの蒸留水に溶解する。これは、16ミリモルのABTS溶液および6ミリモルの過硫酸カリウム溶液をもたらす。ABTSと過硫酸カリウム溶液とを等量混合してABTS原液を調製する。解決策はすぐに暗い色に変わります。この混合物を暗闇の中で12〜16時間インキュベートさせる。ABTSストック溶液を200ミリモルのリン酸緩衝生理食塩水で30倍に希釈し、ABTS作業溶液を形成した。これを行うには、2ミリリットルのABTS作業溶液に58ミリリットルの200ミリモルPBSを加える。作業溶液は、0.27ミリモルABTSおよび0.1ミリモル過硫酸カリウムを含有する。分析のために、各希釈抽出物の10マイクロリットルを96ウェルマイクロプレートに入れる。190マイクロリットルのABTS作業溶液を各ウェルに加え、60分間インキュベートする。マイクロプレートリーダーで750ナノメートルでの反応混合物の吸光度を測定する。1リットルあたり100~800マイクロモルの範囲の濃度のTrolox標準を使用して、検量線をプロットします。DPPH抗酸化アッセイには、ラジカル生成化合物DPPHが必要です。空の15ミリリットル容量の遠沈管に1.2ミリグラムのDPPHを計量します。DPPHをメタノールに溶解し、60マイクロモルの溶液を調製した。DPPHアッセイは、DPPHによって生成されたフリーラジカルを捕捉するサンプル抽出物の能力を試験する。5マイクロリットルのサンプル抽出物をマイクロプレートウェルに加える。次に、195マイクロリットルの60マイクロモルDPPHメタノール溶液を添加し、60分間インキュベートする。515ナノメートルでの吸光度を測定する。Trolox標準を使用して検量線をプロットします。図1は、全粒穀物に見られるヒドロキシ安息香酸類の構造を示す。この現在の研究では、バニリン酸が同定された唯一のヒドロキシ安息香酸であった。図2は、全粒穀物に見られるヒドロキシ桂皮酸の構造を示す。現在の研究では、p-クマル酸、カフェ酸、およびフェルラ酸がサンプル中に同定された。表2は、試料中で同定されたフェノール酸を示す。前述のように、バニリン酸はサンプルで同定された唯一のヒドロキシ安息香酸でした。ササゲ抽出物のみで同定した。ヒドロキシケイ皮酸カフェ酸はインゲン豆でのみ同定されたが、p-クメリン酸はイエローコーン、ササゲ、および大豆において同定された。フェルラ酸はすべてのサンプルで同定され、サンプル中の優勢なフェノール酸でした。フェノール酸類の総濃度は、最大から最小の順に、大豆、ササゲ、イエローコーン、およびインゲン豆または同等物の順に、次いで小麦であった。表3は、試料の総フェノール含有量および抗酸化能を示した。抗酸化能は、DPPHラジカル消去能、TEAC、ORAC、および試料の総抗酸化能から構成されていた。総抗酸化能は、DPPH、TEAC、およびORAC値の合計です。表2と同様に、大豆は総抗酸化能が最も高かった。しかし、ササゲの代わりに、ササゲの総フェノール酸含有量が2番目に高いにもかかわらず、総抗酸化能力が2番目に高いのはむしろインゲン豆でした。この異常は、個々のフェノール酸の構造およびササゲのヒドロキシ桂皮酸の抗酸化効果に対するヒドロキシ安息香酸バニリン酸の可能な拮抗効果に関連している。この研究は、全粒穀物がフェノール酸組成において異なると結論付けた。研究された全粒穀物の中で、大豆はフェノール酸の総量が最も多く、それに対応して抗酸化能が最も高い。

Research

JoVE Journal

Chemistry

Free Radicals in Chemical Biology: from Chemical Behavior to Biomarker Development

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Preparation of Silica Nanoparticles Through Microwave-assisted Acid-catalysis

マイクロ波支援酸 - 触媒反応によりシリカナノ粒子の調製

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Towards Biomimicking Wood: Fabricated Free-standing Films of Nanocellulose, Lignin, and a Synthetic Polycation

Nanocellulose、リグニンから製造自立フィルム、合成ポリカチオン：Biomimickingウッドに向けて

Woody materials are comprised of plant cell walls that contain a layered secondary cell wall composed of structural polymers of polysaccharides and ...

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Synthesis of a Water-soluble Metal&#8211;Organic Complex Array

Synthesis of a Water-soluble MetalÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã…â€œOrganic Complex Array

水溶性有機金属錯体アレイの合成

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XPSで腐食防止剤/金属界面の化学組成を決定する：最小化後のイマージョン酸化

An approach for acquiring more reliable X-ray photoelectron spectroscopy data from corrosion inhibitor/metal interfaces is described. More specifically, ...

Escherichia coli-Based Cell-Free Protein Synthesis: Protocols for a robust, flexible, and accessible platform technology

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大腸菌の無細胞タンパク質合成のベース: 堅牢な柔軟性とアクセス可能なプラットフォーム技術のためのプロトコル

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Synthesis Method for Cellulose Nanofiber Biotemplated Palladium Composite Aerogels

セルロースナノファイバーバイオテンプレートパラジウム複合エアロゲルの合成法

Here, a method to synthesize cellulose nanofiber biotemplated palladium composite aerogels is presented. Noble metal aerogel synthesis methods often ...

NMR-Based Activity Assays for Determining Compound Inhibition, IC50 Values, Artifactual Activity, and Whole-Cell Activity of Nucleoside Ribohydrolases

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化合物阻害、IC50値、アーティフィファクト活性、ヌクレオシドリボヒドロラーゼの全細胞活性を決定するためのNMRベース活性アッセイ

NMR spectroscopy is often used for the identification and characterization of enzyme inhibitors in drug discovery, particularly in the context of fragment ...

Ion Mobility-Mass Spectrometry Techniques for Determining the Structure and Mechanisms of Metal Ion Recognition and Redox Activity of Metal Binding Oligopeptides