Name: a generalized method for determining free soluble phenolic acid composition and antioxidant capacity of cereals and legumes
Uploaded: 2022-06-10T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Generalized Method for Determining Free Soluble Phenolic Acid Composition and Antioxidant Capacity of Cereals and Legumes at JoVE.com

Yazarlar, Bayan Alison Ser ve Bayan Hannah Oduro-Obeng'in teknik desteğinin yanı sıra Bayan Janice Fajardo ve Bay Miguel del Rosario'nun video düzenleme desteğini minnetle kabul etmektedir.

1. Numune türü
<ol><li>Bu çalışma için iki tahıl (örneğin, durum buğdayı ve sarı mısır) ve üç baklagilden (örneğin, Blackeye börülce fasulyesi, soya fasulyesi ve kırmızı barbunya fasulyesi) oluşan beş tam tahıl örneği kullanın.</li>
	<li>Her bir tahılın 50 gramını bir kahve değirmeni kullanarak üç kat un haline getirin ve 500 μm'lik bir elek ile geçirin.</li>
	<li>Bunları -20 °C'de saklayın.</li>
</ol>2. Numune hazırlama</...

<ol>
	<li>Huitu, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicon,+endophytes+and+secondary+metabolites+as+grass+defenses+against+mammalian+herbivores.">Silicon, endophytes and secondary metabolites as grass defenses against mammalian herbivores.</a> Frontiers in Plant Science. 5, 478 (2014).</li><li>Joshi, J. R., Burdman, S., Lipsky, A., Yariv, S., Yedidia, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plant+phenolic+acids+affect+the+virulence+of+Pectobacterium+aroidearum+and+P.+carotovorum+ssp.+brasiliense+via+quorum+sensing+regulation.">Plant phenolic acids affect the virulence of Pectobacterium aroidearum and P. carotovorum ssp. brasiliense via quorum sensing regulation.</a> Molecular Plant Pathology. 17 (4), 487-500 (2016).</li><li>Dykes, L., Rooney, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenolic+compounds+in+cereal+grains+and+their+health+benefits.">Phenolic compounds in cereal grains and their health benefits.</a> Cereal Foods World. 52 (3), 105-111 (2007).</li><li>Xiang, J., Apea-Bah, F. B., Ndolo, V. U., Katundu, M. C., Beta, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profile+of+phenolic+compounds+and+antioxidant+activity+of+finger+millet+varieties.">Profile of phenolic compounds and antioxidant activity of finger millet varieties.</a> Food Chemistry. 275, 361-368 (2019).</li><li>Qiu, Y., Liu, Q., Beta, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antioxidant+properties+of+commercial+wild+rice+and+analysis+of+soluble+and+insoluble+phenolic+acids.">Antioxidant properties of commercial wild rice and analysis of soluble and insoluble phenolic acids.</a> Food Chemistry. 121 (1), 140-147 (2010).</li><li>Beverly, R. L., Motarjemi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Encyclopedia of Food Safety. 3, 309-314 (2014).</li><li>FAO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Food+Outlook+-+Biannual+report+on+global+food+markets.">Food Outlook - Biannual report on global food markets.</a> Food and Agriculture Organization. , (2020).</li><li>Erbersdobler, H. F., Barth, C. A., Jahreis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Legumes+in+human+nutrition.+Nutrient+content+and+protein+quality+of+pulses.">Legumes in human nutrition. Nutrient content and protein quality of pulses.</a> Ernahrungs Umschau. 64 (9), 134-139 (2017).</li><li>Due&#241;as, M., Hern&#225;ndez, T., Estrella, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+in+vitro+antioxidant+capacity+of+the+seed+coat+and+the+cotyledon+of+legumes+in+relation+to+their+phenolic+contents.">Assessment of in vitro antioxidant capacity of the seed coat and the cotyledon of legumes in relation to their phenolic contents.</a> Food Chemistry. 98 (1), 95-103 (2006).</li><li>Khang, D. T., Dung, T. N., Elzaawely, A. A., Xuan, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenolic+profiles+and+antioxidant+activity+of+germinated+legumes.">Phenolic profiles and antioxidant activity of germinated legumes.</a> Foods. 5 (2), 27 (2016).</li><li>Hefni, M. E., Amann, L. S., Witth&#246;ft, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+HPLC-UV+method+for+the+quantification+of+phenolic+acids+in+cereals.">A HPLC-UV method for the quantification of phenolic acids in cereals.</a> Food Analytical Methods. 12 (12), 2802-2812 (2019).</li><li>AOAC. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Official Methods of Analysis. 17th edn. , (2000).</li><li>Apea-Bah, F. B., Head, D., Scales, R., Bazylo, R., Beta, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrothermal+extraction,+a+promising+method+for+concentrating+phenolic+antioxidants+from+red+osier+dogwood+(Cornus+stolonifer)+leaves+and+stems.">Hydrothermal extraction, a promising method for concentrating phenolic antioxidants from red osier dogwood (Cornus stolonifer) leaves and stems.</a> Heliyon. 6 (10), 05158 (2020).</li><li>Apea-Bah, F. B., Minnaar, A., Bester, M. J., Duodu, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sorghum-cowpea+composite+porridge+as+a+functional+food,+Part+II:+Antioxidant+properties+as+affected+by+simulated+in+vitro+gastrointestinal+digestion.">Sorghum-cowpea composite porridge as a functional food, Part II: Antioxidant properties as affected by simulated in vitro gastrointestinal digestion.</a> Food Chemistry. 197, 307-315 (2016).</li><li>Robbins, R. J., Bean, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+quantitative+high-performance+liquid+chromatography-photodiode+array+detection+measurement+system+for+phenolic+acids.">Development of a quantitative high-performance liquid chromatography-photodiode array detection measurement system for phenolic acids.</a> Journal of Chromatography A. 1038 (1-2), 97-105 (2004).</li><li>Singleton, V. L., Rossi, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colorimetry+of+total+phenolics+with+phosphomolybdic-phosphotungstic+acid+reagents.">Colorimetry of total phenolics with phosphomolybdic-phosphotungstic acid reagents.</a> American Journal of Enology and Viticulture. 16, 144-158 (1965).</li><li>Prior, R. L., Wu, X., Schaich, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+methods+for+the+determination+of+antioxidant+capacity+and+phenolics+in+foods+and+dietary+supplements.">Standardized methods for the determination of antioxidant capacity and phenolics in foods and dietary supplements.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53 (10), 4290-4302 (2005).</li><li>Ainsworth, E. A., Gillespie, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+total+phenolic+content+and+other+oxidation+substrates+in+plant+tissues+using+Folin-Ciocalteu+reagent.">Estimation of total phenolic content and other oxidation substrates in plant tissues using Folin-Ciocalteu reagent.</a> Nature Protocols. 2 (4), 875-877 (2007).</li><li>Waterhouse, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+total+phenolics.">Determination of total phenolics.</a> Current Protocols in Food Analytical Chemistry. 1, 1-8 (2002).</li><li>Huang, D., Ou, B., Prior, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemistry+behind+antioxidant+capacity+assays.">The chemistry behind antioxidant capacity assays.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53 (6), 1841-1856 (2005).</li><li>Esterbauer, H., W&#228;g, G., Puhl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+peroxidation+and+its+role+in+atherosclerosis.">Lipid peroxidation and its role in atherosclerosis.</a> British Medical Bulletin. 49 (3), 566-576 (1993).</li><li>Esterbauer, H., Gebicki, J., Puhl, H., J&#252;rgens, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+lipid+peroxidation+and+antioxidants+in+oxidative+modification+of+LDL.">The role of lipid peroxidation and antioxidants in oxidative modification of LDL.</a> Free Radical Biology and Medicine. 13 (4), 341-390 (1992).</li><li>Apea-Bah, F. B., Serem, J. C., Bester, M. J., Duodu, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenolic+composition+and+antioxidant+properties+of+Koose,+a+deep-fat+fried+cowpea+cake.">Phenolic composition and antioxidant properties of Koose, a deep-fat fried cowpea cake.</a> Food Chemistry. 237, 247-256 (2017).</li></ol>

Kepekli tahıllar, dünya çapında geniş gıda uygulamaları bulan temsili tahıl taneleri ve baklagiller olarak seçildi. Her tahılın çeşitleri arasında farklılıklar olsa da, bu çalışmanın odak noktası, tam tahıllar için serbest fenolik asit ekstraksiyonu ve analizi için genelleştirilmiş bir yöntem göstermekti. Ekstraksiyon yöntemi, bu tür deneyler yapıldığında çevreye salınacak kimyasalların miktarını azaltmak için numune ve çözücü miktarlarını önemli ölçüde azaltarak değişt...

Fenolik asitler, otçul ve mantar enfeksiyonuna karşı bitki savunmasında oynadıkları hayati rol ve bitki dokularında yapısal destek ve bütünlüğün korunmasından dolayı bitkilerde incelenen en önemli fitokimyasallar arasındadır 1,2. Tahılların kepeğinde ve baklagillerin tohum kabuğunda bol miktarda bulunurlar3. Yapısal olarak, iki gruba ayrılırlar: hidroksibenzoik asitler (Şekil 1) ve hidroksisinnamik asitler (Şekil 2). Tahıllarda ve baklagillerde yaygın hidroksibenzoik asitler gallik, p-hidroksibenzoik, 2,4-dihidroksibenzoik, protokateşik, vanillik ve şırıngalik asitleri içerirken, yaygın hidroksisinnamik asitler kafeik, p-kumarik, ferulik ve sinapik asitleri içerir3. Fenolik asitler ayrıca yağlarda oksidatif kokululuğa neden olan serbest radikalleri temizleyebildikleri ve fizyolojik sistemlerde radikal kaynaklı oksidatif stresi başlatıp çoğaltabildikleri için antioksidan özelliklere sahiptirler 4,5. Antioksidanlar olarak bu hayati fizyolojik rol nedeniyle, son araştırmaların konusudur. Bunun nedeni, bitkisel gıdaların bileşenleri olarak tüketildiğinde, antioksidan koruma uygulayabilmeleridir.
Tahıllar ve tahıl ürünleri, dünya çapında insanlar ve hayvanlar için başlıca karbonhidrat besin kaynaklarıdır6. Tahıllar arasında buğday, pirinç, mısır (mısır), arpa, tritikale, darı ve sorgum bulunur. Bunlar arasında, 2019/2020 yıllarında tahmini 1.135,7 milyon ton küresel kullanım ile mısır en çok kullanılanıdır, bunu aynı dönemde tahmini 757,5 milyon ton küresel kullanım ile buğday izlemektedir7. Tahıl gıdaları, zengin karbonhidrat kaynakları oldukları için tüketiciler için harika enerji kaynaklarıdır. Ayrıca bazı protein, yağ, lif, vitamin ve mineraller sağlarlar6. Besin değerlerine ek olarak, tahıllar, fizyolojik sistemi radikal kaynaklı oksidatif hasardan koruma potansiyeline sahip fitokimyasal antioksidanların, özellikle fenolik asitlerin iyi kaynaklarıdır3. Baklagiller de iyi besin kaynaklarıdır ve genellikle protein bakımından tahıllardan daha yüksektir. Ayrıca vitamin ve mineral içerirler ve çeşitli yiyeceklerin hazırlanmasında kullanılırlar8. Ek olarak, baklagiller fenolik asitler, flavonoidler, antosiyaninler ve proantosiyanidinler 9,10 dahil olmak üzere çeşitli fitokimyasal antioksidanların iyi kaynaklarıdır. Farklı tahıl ve baklagil çeşitleri farklı bir fenolik asit bileşimine sahip olabilir. Bu nedenle, fenolik antioksidanlarla ilgili potansiyel sağlık yararlarını bilmek için tahılların ve baklagillerin fenolik asit bileşimini ve çeşitlerini incelemeye ihtiyaç vardır.
Tahıl ve baklagil tanelerindeki fenolik asitlerin miktarını ölçmek ve antioksidan aktivitelerini belirlemek için bir dizi tahlil bildirilmiştir. Tam tahıllı fenolik asitler için en yaygın analiz yöntemleri spektrofotometri ve sıvı kromatografisi11'dir. Bu çalışmanın amacı, serbest çözünür fenolik asit bileşimini belirlemek için genelleştirilmiş yüksek basınçlı sıvı kromatografik bir yöntem ve bazı tam tahıllı tahılların ve baklagillerin toplam fenolik içeriğini ve antioksidan kapasitesini belirlemek için spektrofotometrik yöntemleri göstermektir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Falcon conical centrifuge tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-527-90</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL Amber glass ID Surestop vial</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>C5000-2W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL Amber microcentrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20170-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,2&#8242;-Azobis(2-amidinopropane) dihydrochloride (AAPH)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>440914-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,2&#39;-Azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) (C18H18N4O6S4) &#8805;98%,</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A1888-2G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,2-Diphenyl-1pikrylhydrazyl (DPPH) (C18H12N5O6)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D913-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-Hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid (Trolox) (C14H18O4), &#8805;98%</td>
			<td>Fluka Chemika</td>
			<td>56510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>9 mm Autosampler Vial Screw Thread Caps</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>60180-670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well flat bottom plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12565501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent BioTek ELx800 microplate reader</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BT-ELX800NB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent BioTek Precision 2000 96/384 Automated Microplate Pipetting System</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent BioTek FLx800 Microplate Fluorescence Reader</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance SI-114</td>
			<td>Denver Instrument</td>
			<td>SI-114.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autosampler, Waters 717 Plus</td>
			<td>Waters</td>
			<td>WAT078900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 3 mL syringe Luer-Lok Tip</td>
			<td>BD</td>
			<td>309657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bransonic ultrasonic cleaner, Branson 5510</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>Z245143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning LSE Vortex Mixer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>6775</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Durapore Filter (0.45 &#181;m PVDF Membrane)</td>
			<td>Merck Millipore Ltd</td>
			<td>HVLP04700&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Durapore Membrane Filters (0.45 &#181;m HV)</td>
			<td>Merck Millipore Ltd</td>
			<td>HVHP04700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Research&#160;plus, 0.5-10 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Research&#160;plus, 0.5-5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Research&#160;plus, 100-1000 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Research&#160;plus, 10-100 &#181;L</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>3123000047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl acetate, HPLC grade</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>E195-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ferulic acid standard</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>128708-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AC119245000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Folin &#38; Ciocalteu phenol reagent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F9252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid, 99%</td>
			<td>Acros Organics, Janssen Pharmaceuticalaan 3a</td>
			<td>27048-0010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gallic acid standard</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7384</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High performance liquid chromatograph (HPLC), Waters 2695</td>
			<td>Waters</td>
			<td>960402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol, HPLC grade</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>A452-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro pipet tips, 0.5-10 &#181;L</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>21-197-2F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge Sorvall Legend Micro 21 centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75002435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multichannel micropipette, Proline Plus, 30-300 &#181;L</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>728240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photodiode array detector, Waters 2996</td>
			<td>Waters</td>
			<td>720000350EN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips, 1000 &#181;L</td>
			<td>VWR</td>
			<td>83007-382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet tips, 1-5 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82018-840</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium persulfate (K2S2O8), &#8805;99.0%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>216224-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate dibasic anhydrous (K2HPO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P288-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium phosphate monobasic (KH2PO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P285-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PYREX 250 mL Short Neck Boiling Flask, Round Bottom</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4321-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reversed phase C18 Analytical Column (100 x 3 mm) Accucore aQ</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>17326-103030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roto evaporator, IKA RV 10</td>
			<td>IKA</td>
			<td>&#160;0010005185</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium carbonate (NaCO3) anhydrous</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S263-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Mallinckrodt AR&#174;</td>
			<td>7581</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate dibasic anhydrous (Na2HPO4)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP332-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic anhydrous (NaH2PO4)</td>
			<td>Fisher bioreagents</td>
			<td>BP329-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standardization pipet tips 0-200&#181;L</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>02-681-134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Driven Filter unit (0.22 &#181;m)</td>
			<td>&#160;Millex&#174;-GV</td>
			<td>SLGVR04NL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Target micro-serts vial insert (400 &#181;L)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>C4011-631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water (Direct Q-3 UV system with pump)</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ZRQSVP030</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a generalized method for determining free soluble phenolic acid composition and antioxidant capacity of cereals and legumes

Fenolik asitler, hem fenolik bir grubu hem de bir karboksilik grubu taşıyan bir organik bileşik sınıfıdır. Tahıllarda bulunurlar ve tahılların kepeğinde veya baklagillerin tohum kabuğunda yoğunlaşırlar. Son yıllarda potansiyel antioksidan koruyucu sağlık işlevleri hakkında çok fazla araştırma ilgisi yaratan antioksidan özelliklere sahiptirler. Bu çalışma, serbest çözünür fenolik asitlerin kepekli tahıllardan ekstraksiyonu ve antioksidan kapasitelerinin analizi için genelleştirilmiş bir yöntem sunmaktadır. İki tahıl (buğday ve sarı mısır) ve üç baklagilden (börülce fasulyesi, barbunya fasulyesi ve soya fasulyesi) oluşan beş tam tahıl örneği kullanılmıştır. Taneler un haline getirildi ve serbest çözünür fenolik asitleri sulu metanol kullanılarak ekstrakte edildi. Bileşikler daha sonra yüksek basınçlı sıvı kromatografı (HPLC) kullanılarak tanımlandı. Toplam fenolik içeriklerini belirlemek için Folin-Ciocalteu yöntemi kullanılırken, antioksidan kapasiteleri DPPH radikal süpürme kapasitesi, Trolox eşdeğer antioksidan kapasitesi (TEAC) ve oksijen radikal absorbans kapasitesi (ORAC) testleri kullanılarak belirlendi. Tanımlanan fenolik asitler vanillik, kafeik, p-kumarik ve ferulik asitleri içeriyordu. Vanillik asit sadece börülcede tanımlanırken, kafeik asit sadece böbrek fasulyesinde tanımlanmıştır. p-Kumarik asit sarı mısır, börülce ve soya fasulyesinde tanımlanırken, tüm örneklerde ferulik asit tanımlanmıştır. Ferulik asit, tanımlanan baskın fenolik asitti. Numunelerdeki fenolik asitlerin toplam konsantrasyonu aşağıdaki sırayla azalmıştır: soya fasulyesi > börülce fasulyesi > sarı mısır = buğday > barbunya fasulyesi. Toplam antioksidan kapasitesi (DPPH, TEAC ve ORAC tahlillerinin değerlerinin toplamı) aşağıdaki gibi azalmıştır: soya fasulyesi > böbrek fasulyesi > sarı mısır = börülce fasulyesi > buğday. Bu çalışma, HPLC analizinin yanı sıra DPPH, TEAC ve ORAC tahlillerinin kepekli tahılların fenolik asit bileşimi ve antioksidan özellikleri hakkında yararlı bilgiler sağladığı sonucuna varmıştır.

Tablo 2, tahıl ve baklagil tanelerinde tanımlanan fenolik asitleri göstermektedir. Mevcut otantik standartlara dayanarak, örneklerde dört fenolik asit tanımlanmıştır ve bunlar: vanillik, kafeik, p-kumarik ve ferulik asitler. Vanillik asit bir hidroksibenzoik asittir, diğer üçü ise hidroksisinnamik asitlerdir. Vanillik asit sadece Blackeye börülce fasulyesinde tanımlanırken, kafeik asit sadece böbrek fasulyesinde tanımlanmıştır. p-Kumarik asit sarı mısır, börül...

Watch this Scientific Journal Video about A Generalized Method for Determining Free Soluble Phenolic Acid Composition and Antioxidant Capacity of Cereals and Legumes at JoVE.com

A Generalized Method for Determining Free Soluble Phenolic Acid Composition and Antioxidant Capacity of Cereals and Legumes

Fenolik asitler, kepekli tahıllarda bulunan önemli fitokimyasallardır. Antioksidan koruyucu fonksiyonlar gibi biyoaktif özelliklere sahiptirler. Bu çalışma, HPLC tanımlaması, toplam fenolik içerik tahmini ve tahıl ve baklagillerde fenolik asitlerin antioksidan kapasitesinin belirlenmesi için genelleştirilmiş bir yöntemin raporlanmasını amaçlamıştır.

Tahılların ve baklagillerin serbest çözünür fenolik asit bileşimini ve antioksidan kapasitesini belirlemek için genelleştirilmiş bir yöntem

Phenolic acids are a class of organic compounds that bear both a phenolic group, and a carboxylic group. They are found in grains and concentrate in the ...

Tahılların ve baklagillerin serbest çözünür fenolik asit bileşimini ve antioksidan kapasitesini belirlemek için genelleştirilmiş bir yöntem. Tahıllar ve baklagiller de dahil olmak üzere kepekli tahıllar, insan diyetlerinin önemli bir bölümünü oluşturur. İnsanlarla besinsel ilgileri uzun zamandır bilinmektedir.Bununla birlikte, daha yakın zamanlarda, antioksidan koruyucu sağlık yararları bildirilmiştir. Tahılların dış tahıl katmanlarında ve baklagillerin tohum kabuğunda bulunan fenolik asitler, kepekli tahılların antioksidan özelliklerine katkıda bulunur. Biyomoleküllere oksidatif hasara neden olan serbest radikalleri temizlerler.Tam tahıllarda bulunan iki fenolik asit sınıfı, hidroksibenzoik asitler ve hidroksisinnamik asitlerdir. Bu çalışma, tam tahıllı fenolik asitlerin ekstraksiyonu ve in vitro antioksidan kapasitelerinin belirlenmesi için basit bir yöntem sunmaktadır. Bu çalışma için beş tam tahıl örneği kullanın, durum buğdayı, sarı mısır, siyah gözlü börülce fasulyesi, soya fasulyesi ve kırmızı barbunya fasulyesi.Tam tahıllı un numunesinin 100 miligramını doğrudan amber renkli, iki mililitre kapasiteli bir mikro santrifüj tüpüne doğru bir şekilde tartın. Tüpün koyu rengi, karışımın ışığa maruz kalmasını önlemeye yardımcı olur. Örnek içeren tüplerin her birine bir mililitre% 80 sulu metanol ekleyin.Metanol çözeltisini ve numuneyi karıştırmak için kısaca vorteks. Serbest çözünür fenolik bileşikleri çıkarmak için örnekleri 60 dakika boyunca sonikleştirin. Işıktan ek koruma için sonikasyon süresi boyunca örneklerin üzerine bir kapak koyun.Sonikasyondan sonra, katı kalıntıları tortulamak için karışımları beş dakika boyunca 20.000 kez G'de santrifüj edin ve süpernatantı üstte bırakın. Santrifüjlemeden sonra süpernatantta serbest fenolik bileşikler bulunacaktır. Süpernatantın HPLC cihazına enjekte edilmeden önce filtrelenmesi gerekir.Süpernatanı filtrelemek için, 3 mL'lik bir şırınganın pistonunu çıkarın ve bir şırınga filtresi takın. Filtre, 0,22 mikrometreden büyük olmayan bir gözenek boyutuna sahip olmalıdır. Pipet, şırınganın üst kısmına yaklaşık 0.4 mililitre süpernatant girer.Pistonu tekrar takın ve sıvıyı filtreden bir şişe eki içeren bir HPLC şişesine itin. Cihaz, HPLC analizi için makalede özetlenen yöntemi çalıştıracak şekilde ayarlandıktan sonra, numune listesine karşılık gelmesi için şişeleri atlıkarıncaya yükleyin. Farklı fenolik bileşikleri temsil eden farklı zirveleri gösteren 320 nanometre ve 280 nanometrede HPLC kromatogramları elde edin.Uygun standart eğrileri kullanarak, hidroksisinnamik asitleri 320 nanometrede sayısallaştırın, çünkü bu dalga boyunda maksimum emilime sahiptirler. Aynı prensibe göre, hidroksibenzoik asitleri 280 nanometrede sayısallaştırın. Tam tahıl ekstraktlarının in vitro antioksidan kapasitesini tahmin etmek için standart olarak E vitamininin suda çözünür bir analoğu olan Trolox'u kullanın.Bir miligram Trolox'u bir Falcon tüpüne doğru bir şekilde tartın. Litre başına 1000 mikromol ile aynı olan litre başına bir milimol stok çözeltisi hazırlamak için dört mililitre% 50 sulu metanol ile çözün. DPPH radikal süpürme kapasitesi ve Trolox'a eşdeğer antioksidan kapasitesi TEAC'ın tahmini için standart eğrileri çizmek üzere litre başına 50, 100, 200, 400, 600 ve 800 mikromol olan altı Trolox konsantrasyonu hazırlayın.Benzer şekilde, oksijen radikal absorbans kapasitesini tahmin etmek için litre başına 6.25, 12.5, 25 ve 50 mikromol Trolox konsantrasyonları hazırlayın, ORAC. Her konsantrasyonun toplam hacmini, tablo birde gösterildiği gibi 500 mikrolitreye kadar yapın. Analizden önce numune ekstraktlarını metanol ile seyreltin.Burada, sarı mısır ve börülce özleri iki kez seyreltildi. Buğday ve barbunya fasulyesi ekstraktları beş kez, soya fasulyesi ekstresi ise metanol ile 10 kez seyreltildi. 8,23 miligram ABTS'yi temiz, iki mililitre kapasiteli, amber mikro santrifüj tüpüne tartın.Daha sonra, 1.62 miligram potasyum persülfatı temiz, iki mililitre kapasiteli, amber mikro santrifüj tüpüne tartın. Tartılan kimyasalların her birini vorteks yaparak bir mililitre damıtılmış suda çözün. Bu, 16 milimolar ABTS çözeltisi ve altı milimolar potasyum persülfat çözeltisi ile sonuçlanır.ABTS ve potasyum persülfat çözeltilerini eşit hacimlerde karıştırarak ABTS stok çözeltisini hazırlayın. Çözelti hemen koyu bir renge dönüşecektir. Bu karışımın karanlıkta 12 ila 16 saat kuluçkaya yatmasına izin verin.ABTS çalışma çözeltisini oluşturmak için ABTS stok çözeltisini 200 milimolar fosfat tamponlu salin ile 30 kez seyreltin. Bunu yapmak için, ABTS çalışma çözeltisinin iki mililitresine 58 mililitre 200 milimolar PBS ekleyin. Çalışma çözeltisi 0.27 milimolar ABTS ve 0.1 milimolar potasyum persülfat içerecektir.Analiz için, her seyreltilmiş ekstraktın 10 mikrolitresini 96 kuyucuklu bir mikroplakaya yerleştirin. Her bir kuyucuğa 190 mikrolitre ABTS çalışma çözeltisi ekleyin ve 60 dakika boyunca inkübe edin. Bir mikroplaka okuyucuda 750 nanometrede reaksiyon karışımlarının emiciliğini ölçün.Bir kalibrasyon eğrisi çizmek için Trolox standartlarını litre başına 100 ila 800 mikromol arasında değişen konsantrasyonlarda kullanın. DPPH antioksidan testi, radikal üreten bir bileşik olan DPPH'yi gerektirir. 1,2 miligram DPPH'yi 15 mililitre kapasiteli boş bir santrifüj tüpüne tartın.60 mikromolar çözelti hazırlamak için DPPH'yi metanol içinde çözün. DPPH testi, numune ekstraktlarının DPPH tarafından üretilen serbest radikalleri temizleme yeteneğini test eder. Mikroplaka kuyucuklarına beş mikrolitre numune ekstresi ekleyin.Daha sonra, 195 mikrolitre 60 mikromolar DPPH metanolik çözelti ekleyin ve 60 dakika boyunca inkübe edin. Absorbansı 515 nanometrede ölçün. Bir kalibrasyon eğrisi çizmek için Trolox standartlarını kullanın.Birinci şekil, kepekli tahıllarda bulunan hidroksibenzoik asitlerin yapısını göstermektedir. Bu güncel çalışmada, vanillik asit tanımlanan tek hidroksibenzoik asitti. Şekil iki, kepekli tahıllarda bulunan hidroksisinnamik asitlerin yapısını göstermektedir.Bu çalışmada, örneklerde p-kumarik, kafeik ve ferulik asitler tanımlanmıştır. Tablo iki, numunelerde tanımlanan fenolik asitleri göstermektedir. Daha önce de belirtildiği gibi, vanillik asit, numunelerde tanımlanan tek hidroksibenzoik asitti.Sadece börülce ekstraktında tanımlanmıştır. Hidroksisinnamik asit kafeik asit sadece böbrek fasulyesinde tanımlanırken, p-koumerik asit sarı mısır, börülce ve soya fasulyesinde tanımlanmıştır. Ferulik asit tüm örneklerde tanımlandı ve örneklerde baskın fenolik asitti.Fenolik asitlerin en büyükten en küçüğe doğru toplam konsantrasyonu, soya fasulyesi, börülce, sarı mısır ve böbrek fasulyesi veya eşdeğeri sırasına göre, ardından buğday geldi. Tablo üç, örneklerin toplam fenolik içeriğini ve antioksidan kapasitesini göstermiştir. Antioksidan kapasite, numunelerin DPPH radikal süpürme kapasitesi, TEAC, ORAC ve toplam antioksidan kapasitesini içermektedir.Toplam antioksidan kapasitesi DPPH, TEAC ve ORAC değerlerinin toplamıdır. Tablo iki'ye benzer şekilde, soya fasulyesi en yüksek toplam antioksidan kapasitesine sahipti. Bununla birlikte, börülce yerine, ikinci en yüksek toplam antioksidan kapasiteye sahip olan böbrek fasulyesiydi, ancak börülce ikinci en yüksek toplam fenolik asit içeriğine sahipti.Bu anomali, bireysel fenolik asitlerin yapıları ve hidroksibenzoik asit vanililik asidin börülcedeki hidroksisinnamik asitlerin antioksidan etkileri üzerindeki olası antagonistik etkisi ile ilgilidir. Bu çalışma, kepekli tahılların fenolik asit bileşimlerinde farklılık gösterdiği sonucuna varmıştır. İncelenen kepekli tahıllar arasında, soya fasulyesi en yüksek toplam fenolik asit miktarına ve buna bağlı olarak en yüksek antioksidan kapasiteye sahiptir.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Free Radicals in Chemical Biology: from Chemical Behavior to Biomarker Development

Kimyasal Biyoloji Serbest Radikaller: Kimyasal Davranış den Biyomarker Kalkınma

The involvement of free radicals in life sciences has constantly increased with time and has been connected to several physiological and pathological ...

Preparation of Silica Nanoparticles Through Microwave-assisted Acid-catalysis

Microwave-assisted synthetic techniques were used to quickly and reproducibly produce silica nanoparticle sols using an acid catalyst with nanoparticle ...

Towards Biomimicking Wood: Fabricated Free-standing Films of Nanocellulose, Lignin, and a Synthetic Polycation

Nanocellulose, Lignin Fabrikasyon Serbest duran Filmler ve Sentetik polikatiyon: Biomimicking Wood Doğru

Woody materials are comprised of plant cell walls that contain a layered secondary cell wall composed of structural polymers of polysaccharides and ...

Synthesis of Cd-free InP/ZnS Quantum Dots Suitable for Biomedical Applications

Biyomedikal Uygulamalar için uygundur InP / ZnS Kuantum Noktaları Cd-serbest sentezi

Fluorescent nanocrystals, specifically quantum dots, have been a useful tool for many biomedical applications. For successful use in biological systems, ...

Synthesis of a Water-soluble Metal&#8211;Organic Complex Array

Synthesis of a Water-soluble MetalÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã…â€œOrganic Complex Array

suda çözünür bir metal-organik kompleks dizi sentezi

We demonstrate a method for the synthesis of a water-soluble multimetallic peptidic array containing a predetermined sequence of metal centers such as ...

Determining the Chemical Composition of Corrosion Inhibitor/Metal Interfaces with XPS: Minimizing Post Immersion Oxidation

XPS ile Korozyon Önleyici / Metal Arayüz Kimyasal Bileşimi Belirlenmesi: En Aza İndirme Mesaj Daldırma oksidasyonu

An approach for acquiring more reliable X-ray photoelectron spectroscopy data from corrosion inhibitor/metal interfaces is described. More specifically, ...

Escherichia coli-Based Cell-Free Protein Synthesis: Protocols for a robust, flexible, and accessible platform technology

Escherichia coli-Based Cell-Free Protein Synthesis: Protocols for a robust, flexible, and accessible platform technology

Escherichia coli-boş hücre Protein sentezi dayalı: sağlam, esnek ve erişilebilir platform teknolojisi için iletişim kuralları

Over the last 50 years, Cell-Free Protein Synthesis (CFPS) has emerged as a powerful technology to harness the transcriptional and translational capacity ...

Synthesis Method for Cellulose Nanofiber Biotemplated Palladium Composite Aerogels

Selüloz nanofiber Biotemkaplama Palladium kompozit Aerogels için sentez yöntemi

Here, a method to synthesize cellulose nanofiber biotemplated palladium composite aerogels is presented. Noble metal aerogel synthesis methods often ...

NMR-Based Activity Assays for Determining Compound Inhibition, IC50 Values, Artifactual Activity, and Whole-Cell Activity of Nucleoside Ribohydrolases

NMR-Based Activity Assays for Determining Compound Inhibition, IC50 Values, Artifactual Activity, and Whole-Cell Activity of Nucleoside Ribohydrolases

NMR tabanlı aktivite bileşik Inhibisyonu belirlenmesi için Assays, ıC50 değerleri, Artifactual aktivite, ve Nükrenoside Ribohidolases tüm hücre aktivitesi

NMR spectroscopy is often used for the identification and characterization of enzyme inhibitors in drug discovery, particularly in the context of fragment ...

Ion Mobility-Mass Spectrometry Techniques for Determining the Structure and Mechanisms of Metal Ion Recognition and Redox Activity of Metal Binding Oligopeptides

Metal Bağlama Oligopeptidlerinin Yapısı ve Mekanizmalarının Belirlenmesinde Iyon Hareketliliği-Kütle Spektrometresi Teknikleri ve Metal Bağlayıcı Oligopeptidlerin Redoks Aktivitesi