Name: detection of sars-cov-2 neutralizing antibodies using high-throughput fluorescent imaging of pseudovirus infection
Uploaded: 2021-06-05T14:00:00
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Wir möchten dem Whelan-Labor für die großzügige Bereitstellung des in diesem Protokoll verwendeten VSV-S-eGFP-Virus danken (beschrieben in Case et al. 2020). Wir danken auch Dr. Bill Cameron und Dr. Juthaporn Cowan (und seinem Team) für die Sammlung der Blutproben des Patienten (REB-Protokoll-ID 20200371-01H). Die Autoren geben bekannt, dass sie die folgende finanzielle Unterstützung für die Forschung, Autorschaft und/oder Veröffentlichung dieses Artikels erhalten haben: Diese Arbeit wurde durch die großzügige Unterstützung der Ottawa Hospital Foundation und ein Stipendium der Canadian Institutes of Health Research (#448323) und einen Fast Grant der Thistledown Foundation for COVID-19 Science für C.S.I. T.R.J. finanziert wird durch ein Ontario Graduate Scholarship und cluster Mitacs Fellowship. JP wird durch ein Cluster-Mitacs-Stipendium finanziert. T.A. wird durch ein CIHR Banting Fellowship finanziert. Wir möchten uns auch bei allen Personen bedanken, die teilgenommen und ihre Blutproben für diese Studie gespendet haben.

1. Plattierung von Zellen (Tag 1) zur Herstellung und Quantifizierung des SARS-CoV-2-Pseudovirus
<ol><li>Vorbereitung für die Gewebekultur<ol>
<li>Warme 1x Dulbecco's phosphatgepufferte Kochsalzlösung (DPBS); Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) mit 10% fetalem Rinderserum (FBS) und 1% Penicillin/Streptomycin (optional); und 0,25% Trypsin-Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) bis 37 °C in einem Wasserbad für ca. 15 min.</li>
		<li>Desinfizieren Sie eine Gewebekulturhaube mit 70% Ethanol und legen Sie bei Bedarf G...

<ol>
	<li>Hu, B., Guo, H., Zhou, P., Shi, Z. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+SARS-CoV-2+and+COVID-19.">Characteristics of SARS-CoV-2 and COVID-19.</a> Nature Reviews Microbiology. 19 (3), 141-154 (2021).</li><li>Burrell, C. J., Howard, C. R., Murphy, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronaviruses.">Coronaviruses.</a> Fenner and White's Medical Virlogy. , 437-446 (2017).</li><li>COVID-19 Map. Johns Hopkins Coronavirus Resource Center Available from: <a target="_blank" href="https://coronavirus.jhu.edu/map.html">https://coronavirus.jhu.edu/map.html</a> (2021)</li><li>Covid-19 vaccine tracker. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+SARS-CoV-2+serology+assays+reveals+a+range+of+test+performance.">Evaluation of SARS-CoV-2 serology assays reveals a range of test performance.</a> Nature Biotechnology. 38 (10), 1174-1183 (2020).</li><li>Ainsworth, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+characteristics+of+five+immunoassays+for+SARS-CoV-2:+a+head-to-head+benchmark+comparison.">Performance characteristics of five immunoassays for SARS-CoV-2: a head-to-head benchmark comparison.</a> The Lancet Infectious Diseases. 20 (12), 1390-1400 (2020).</li><li>Sharifkashani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin-converting+enzyme+2+(ACE2)+receptor+and+SARS-CoV-2:+Potential+therapeutic+targeting.">Angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) receptor and SARS-CoV-2: Potential therapeutic targeting.</a> European Journal of Pharmacology. 884, 173455 (2020).</li><li>Burki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+variants+of+SARS-CoV-2.">Understanding variants of SARS-CoV-2.</a> The Lancet. 397 (10273), 462 (2021).</li><li>Jayamohan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SARS-CoV-2+pandemic:+a+review+of+molecular+diagnostic+tools+including+sample+collection+and+commercial+response+with+associated+advantages+and+limitations.">SARS-CoV-2 pandemic: a review of molecular diagnostic tools including sample collection and commercial response with associated advantages and limitations.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 413 (1), 49-71 (2020).</li><li>Nie, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+SARS-CoV-2+neutralizing+antibody+by+a+pseudotyped+virus-based+assay.">Quantification of SARS-CoV-2 neutralizing antibody by a pseudotyped virus-based assay.</a> Nature Protocols. 15 (11), 3699-3715 (2020).</li><li>Crawford, K. H. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+and+reagents+for+pseudotyping+lentiviral+particles+with+SARS-CoV-2+spike+protein+for+neutralization+assays.">Protocol and reagents for pseudotyping lentiviral particles with SARS-CoV-2 spike protein for neutralization assays.</a> Viruses. 12 (5), 513 (2020).</li></ol>

Die hier beschriebene Methode kann je nach Bedarf an unterschiedliche Laborumgebungen und Ressourcen angepasst werden. Wichtig ist, dass die Haupteinschränkung dieses Protokolls die Notwendigkeit eines Containment-Level-2-Raums und einer Gewebekulturhaube ist. Die Anwendung eines replizierenden RNA-Virus, das mit dem SARS-CoV-2-Spike pseudotypisiert ist, wie VSV-S-eGFP, ist eine beeindruckende Alternative zum SARS-CoV-2-Virus, das einen Arbeitsbereich der Eindämmungsstufe 3 erfordert, aber für einige Gruppen eine Eins...

Im Dezember 2019 wurde ein neuartiges Coronavirus identifiziert, das wir jetzt als SARS-CoV-2, den Erreger der Coronavirus-Krankheit 2019 (COVID-19)1,kennen. SARS-CoV-2 ist ein Betacoronavirus aus der Familie der Coronaviridae. Diese umhüllten Viren bestehen aus einem großen RNA-Genom mit positivem Sinn und sind für Atemwegs- und Darminfektionen bei Mensch und Tier verantwortlich2. Bis Mai 2021 gab es weltweit mehr als 157 Millionen gemeldete Fälle von COVID-19 und mehr als 3,2 Millionen Todesfälle3. Die Entwicklung eines wirksamen Impfstoffs ist zum Hauptziel von Forschern auf der ganzen Welt geworden, wobei mindestens 77 präklinische Impfstoffe untersucht werden und 90 sich derzeit in klinischen Studien befinden4.
Coronaviren kodieren vier Strukturproteine, darunter das Spike-Protein (S), das Nukleokapsid (N), das Hüllprotein (E) und das Membranprotein (M). Der Eintritt von SARS-CoV-2 erfordert die Interaktion der Rezeptorbindungsdomäne (RBD) von S mit dem Wirtsrezeptor, dem humanen Angiotensin-Converting-Enzym 2 (hACE2) und der anschließenden Membranfusion nach proteolytischer Spaltung durch die zelluläre Serinprotease des Wirts, Transmembranprotease Serin 2 (TMPRSS2)5,6,7,8,9,10 . Humorale Immundominanz des S-Proteins von SARS-CoV wurde bereits berichtet und nun auch für SARS-CoV-2 gezeigt11,12,13. Tatsächlich wurden neutralisierende Antikörperreaktionen gegen S in Rekonvaleszenzserum von SARS-CoV-Patienten 24 Monate nach der Infektionnachgewiesen 14,was ihre entscheidende Rolle bei der langfristigen Immunantwort unterstreicht. Das S-Protein wurde als vielversprechendes Impfstoffziel identifiziert und ist damit zu einem Schlüsselbestandteil der meisten Impfstoffe in der Entwicklung15,16geworden.
Während der schnelle Nachweis neutralisierender Antikörper ein kritischer Aspekt der Impfstoffentwicklung ist, kann er auch Aufschluss über die Infektionsrate und die seroepidemiologische Überwachung in betroffenen Gebieten geben17. Ein replikationskompetentes VSV, das mit dem SARS-CoV-2 S-Glykoprotein anstelle des Wildtyp-VSV-Glykoproteins pseudotypisiert wurde, um die SARS-CoV-2-Infektion in Biosicherheitsstufe 2-Einstellungen zu untersuchen, wurde freundlicherweise von Whelan und Mitarbeitern18gespendet. VSV-exprimierender Spike (VSV-S) wird verwendet, um die neutralisierende Antikörperantwort gegen das SARS-CoV-2-Spike-Protein zu bestimmen. Da das hier verwendete VSV-S auch ein verbessertes grün fluoreszierendes Protein (eGFP) exprimiert, können eGFP-Herde innerhalb von 24 h nachgewiesen werden, um die Infektion zu quantifizieren, während die Plaquebildung 48 bis 72 h dauern kann. Hier ist ein einfaches und effektives Protokoll zusammengefasst, um die Fähigkeit von rekonvaleszentem Patientenserum zur Neutralisierung der VSV-S-eGFP-Infektion zu bestimmen. Diese Methode kann auch leicht angepasst werden, um andere potenzielle Therapeutika zu untersuchen, die darauf abzielen, die Wirt-Virus-Interaktion des SARS-CoV-2-S-Proteins zu stören.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.25% trypsin-EDTA (Gibco)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>LS25200114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ArrayScan VTI HCS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Automated fluorescent imager</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>carboxymethyl cellulose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5678</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium (Gibco)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium (Powder) (Gibco)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-800-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Phosphate-Buffered Saline (DPBS)</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>BP-310-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG Isotype Control (mouse)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>31903</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SARS-CoV-2 (2019-nCoV) Spike Neutralizing Antibody, Mouse Mab</td>
			<td>SinoBiological</td>
			<td>40592-MM57</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vero E6 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>&#160;CRL-1586</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of sars-cov-2 neutralizing antibodies using high-throughput fluorescent imaging of pseudovirus infection

Da sich die COVID-19-Pandemie, die durch das schwere akute respiratorische Syndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) verursacht wird, weiter entwickelt, ist es offensichtlich geworden, dass das Vorhandensein neutralisierender Antikörper gegen das Virus Schutz vor einer zukünftigen Infektion bieten kann. Da die Entwicklung und Translation wirksamer COVID-19-Impfstoffe mit beispielloser Geschwindigkeit voranschreitet, wird die Entwicklung schneller und wirksamer Methoden zur Messung neutralisierender Antikörper gegen SARS-CoV-2 immer wichtiger, um den langfristigen Schutz vor Infektionen sowohl für zuvor infizierte als auch für immunisierte Personen zu bestimmen. Dieser Artikel beschreibt ein Hochdurchsatzprotokoll unter Verwendung des vesikulären Stomatitisvirus (VSV), das mit dem SARS-CoV-2-Spike-Protein pseudotypisiert ist, um das Vorhandensein neutralisierender Antikörper im Rekonvaleszentenserum von Patienten zu messen, die sich kürzlich von COVID-19 erholt haben. Die Verwendung eines replizierenden pseudotypisierten Virus eliminiert die Notwendigkeit einer Containment-Level-3-Einrichtung, die für die SARS-CoV-2-Handhabung erforderlich ist, wodurch dieses Protokoll für praktisch jedes Containment-Level-2-Labor zugänglich ist. Durch die Verwendung eines 96-Well-Formats können viele Proben gleichzeitig mit einer kurzen Durchlaufzeit von 24 h ausgeführt werden.

Dieses Protokoll beschreibt eine schnelle und effektive Methode zum Nachweis neutralisierender Antikörper gegen das SARS-CoV-2 S-Protein durch Hemmung der VSV-S-eGFP-Pseudovirusinfektion (quantifizierbar durch Verlust von eGFP-Herden nachgewiesen). Eine schematische Darstellung des Protokolls ist in Abbildung 1 dargestellt. Es wird empfohlen, bei jeder Durchführung des Assays einen kommerziell erhältlichen Antikörper als Positivkontrolle zu verwenden, um die Konsistenz des Assays sicherz...

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Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection

Das hier beschriebene Protokoll skizziert eine schnelle und effektive Methode zur Messung neutralisierender Antikörper gegen das SARS-CoV-2-Spike-Protein, indem die Fähigkeit rekonvaleszenter Serumproben bewertet wird, die Infektion durch ein verbessertes grün fluoreszierendes proteinmarkiertes vesikuläres Stomatitisvirus zu hemmen, das mit Spike-Glykoprotein pseudotypisiert ist.

Nachweis von SARS-CoV-2 neutralisierenden Antikörpern mittels Hochdurchsatz-Fluoreszenzbildgebung von Pseudovirus-Infektionen

As the COVID-19 pandemic caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) continues to evolve, it has become evident that the ...

Diese Methode bietet eine Möglichkeit, eine der wichtigeren Fragen zu den in der Entwicklung befindlichen SARS-Coronavirus-2-Impfstoffen zu beantworten. Ist der Impfstoff in der Lage, eine neutralisierende Antikörperreaktion auszulösen? Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie in einer Einrichtung der zweiten Sicherheitsstufe durchgeführt werden kann.Es ist auch relativ schnell und kostengünstig, so dass es gut geeignet ist, viele Proben gleichzeitig zu analysieren. Wir haben Ricardo Marius, einen leitenden Techniker im Labor, und Taylor Jamieson, einen MD-Doktoranden, demonstriert das Neutralisierungssäureverfahren. Beginnen Sie mit der Kultivierung von Vero E6-Zellen in DMEM, ergänzt mit 10% FBS bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid.Um die Zellen zu passieren, waschen Sie sie zuerst, indem Sie 10 Milliliter PBS hinzufügen und die Schüssel vier- bis fünfmal vorsichtig schaukeln. Nachdem Sie das PBS angesaugt haben, fügen Sie drei Milliliter Trypsin EDTA hinzu und rocken Sie die Schüssel, um sicherzustellen, dass die gesamte Oberfläche bedeckt ist, bevor Sie sie bei 37 Grad Celsius inkubieren. Sobald sich die Zellen gelöst haben, deaktivieren Sie das Trypsin, indem Sie sieben Milliliter DMEM hinzufügen, ergänzt mit 10% FBS, und resuspendieren Sie die Zellen dann, indem Sie mehrmals auf und ab pipettieren.Entfernen Sie das Trypsin durch Zentrifugation und aspirieren Sie den Überstand, ohne das Zellpellet zu stören, bevor Sie die Zellen in 10 Milliliter frischem DMEM wiederverwenden. Nach dem Zählen etwa einmalig 10 zu den siebten Zellen zu jeder 15 Zentimeter großen Platte geben und die Kultur für ein bis zwei Tage inkubieren, bis die Zellen zu 100% konfluent sind. Um das VSV-Spike-EGFP-Pseudovirus für die Titerierung vorzubereiten, infizieren Sie die Zellen bei 0,01 Vielfachkeit der Infektion mit dem Inmaterialvirus, das in 12 Milliliter serumfreiem DMEM verdünnt ist.Nach Zugabe des Virus die Zellen für eine Stunde bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid mit gelegentlichem Schaukeln inkubieren. Ersetzen Sie am Ende der Inkubation das Inokulum durch frisches DMEM, das mit 2% FBS und 20 Millimolhaufen ergänzt wird, und inkubieren Sie die Zellen dann 24 Stunden lang bei 34 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid. Verwenden Sie am nächsten Tag ein Fluoreszenzmikroskop, um die EGFP-Expression der infizierten Zellen sichtbar zu machen.Sobald ein ausgedehnter zytopathischer Effekt und eine Zellablösung beobachtet wurden, sammeln Sie den Kulturüberstand und entfernen Sie die Trümmer durch Zentrifugation. Um mehrere Gefrier-Tau-Zyklen zu vermeiden, aliquotieren Sie den Überstand vor der Lagerung bei minus 80 Grad Celsius. Um den Virustiter zu bestimmen, platten Sie Vero E6-Zellen in sechs Vertiefungsplatten mit einer Aussaatdichte von sechs mal 10 bis zur fünften Zelle pro Vertiefung und inkubieren über Nacht.Am nächsten Tag richten Sie eine zehnfache serielle Verdünnungsserie des Virusbestands ein, indem Sie 900 Mikroliter Medium zu sieben Mikrozentrifugenröhrchen hinzufügen und 100 Mikroliter Virusmaterial in das erste Röhrchen geben. Nach kurzem Wirbeln 100 Mikroliter verdünntes Virus in jedes nachfolgende Röhrchen übertragen und zwischen jedem Röhrchen wirbeln. Ersetzen Sie dann den Überstand in jeder Vertiefung der Vero E6-Kulturplatte durch 500 Mikroliter der 10 bis minus Sekunde bis 10 bis minus siebten Virusverdünnungen.Nach einer 45-minütigen Inkubation im Zellkultur-Inkubator mit sanftem Schaukeln alle 15 Minuten ersetzen Sie das Inokulum durch eine Overlay-Lösung und inkubieren die Zellen bei 34 Grad Celsius mit 5% Kohlendioxid für 48 Stunden. Um die Plaques am Ende der Inkubation durch Kristallviolettfärbung sichtbar zu machen, waschen Sie die Zellen einmal mit PBS, bevor Sie zwei Milliliter mit 0,1% Kristallviolett in jede Vertiefung geben. Legen Sie die Platte für ca. 20 Minuten bei Raumtemperatur auf eine Wippe, bevor Sie jede Vertiefung zweimal vorsichtig mit PBS waschen.Lassen Sie die Platten nach der letzten Wäsche mindestens eine Stunde an der Luft trocknen, bevor Sie die Formel wie angegeben verwenden, um den Titer des Virus in jeder Vertiefung in plaquebildenden Einheiten pro Milliliter zu berechnen. Um Zellen für einen Neutralisationsassay zu platten, verwenden Sie eine Mehrkanalpipette, um 100 Mikroliter Vero E6-Zellen zu jeder Vertiefung einer 96-Well-Platte mit einer Dichte von zweimal 10 bis zur fünften Zelle pro Milliliter hinzuzufügen und die Platte für 24 Stunden bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid zu inkubieren. Am nächsten Tag inaktivieren Sie die Serumproben des Patienten, die in einem 56 Grad Celsius warmen Wasserbad für 30 Minuten getestet werden sollen, mit Hitze.Stellen Sie dann eine zehnfache Verdünnungsreihe der Serumproben des Patienten in einer leeren 96-Well-Gewebekulturplatte auf, indem Sie acht Mikroliter des Serums zu 72 Mikrolitern serumfreiem DMEM mit Antibiotika in jeder Vertiefung der Reihe A hinzufügen.Dann fügen Sie 40 Mikroliter serumfreies DMEM zu jeder Vertiefung der Reihen B bis G und 80 Mikroliter zu jeder Vertiefung der Reihe H hinzu. Mischen Sie die Proben in Reihe A und übertragen Sie dann 40 Mikroliter der Probe von jedem Bohrloch der Reihe A in jedes Bohrloch der Reihe B.Wiederholen Sie nach dem Mischen die Verdünnung für jede nachfolgende Reihe von Vertiefungen bis zur Zeile F.Als nächstes fügen Sie 40 Mikroliter VSV-Spike EGFP bei 0,05 Infektionsmultiplikation zu jeder Vertiefung in den Reihen A bis G hinzu. und vier- bis fünfmal pipettieren, bevor sie die Platte eine Stunde lang bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid inkubieren. Am Ende der Inkubation wird der Überstand vorsichtig aus jeder Vertiefung der Vero E6-Kulturplatte abgesaugt und 60 Mikroliter Antikörpervirusmischung aus jeder Vertiefung der Probenverdünnungsplatte in die entsprechende Vertiefung der Zellkulturplatte übertragen. Wenn alle Proben übertragen wurden, platzieren Sie die Zellkulturplatte bei 37 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid für eine Stunde mit Schaukeln alle 20 Minuten.Nach Abschluss der Inkubation werden 140 Mikroliter Carboxymethylcellulose-Overlay-Lösung in jede Vertiefung der Zellkulturplatte gegeben und die Platte in einen 34 Grad Celsius und 5% Kohlendioxid-Inkubator überführt. Nach 24 Stunden können Sie die Platten auf einem automatisierten Fluoreszenzbildner mit einer Wellenlänge von 488 Nanometern abbilden und die automatisierte Zählfunktion des Imagers verwenden, um die einzelnen EGFP-Brennpunkte zu quantifizieren. In diesem repräsentativen Beispiel wurde ein kommerziell erhältlicher neutralisierender Antikörper gegen die SARS-Coronavirus-2-Spikerezeptor-Bindungsdomäne als Positivkontrolle neben IgG als Negativkontrolle verwendet.Die prozentuale Hemmung wurde basierend auf der Anzahl der EGFP-Herde berechnet, die über Fluoreszenzbildgebung nachgewiesen wurden. Pseudovirus-Neutralisation durch rekonvaleszente Patientenproben, die etwa drei Monate nach der SARS-Coronavirus-2-Infektion gesammelt wurden, zeigten, dass hospitalisierte Patienten eine erhöhte Neutralisierungsfähigkeit im Vergleich zu denen zeigten, die keinen Krankenhausaufenthalt benötigten. Dieses Verfahren kann auch verwendet werden, um andere COVID-19-Präventions- und Therapeutika zu bewerten, die darauf abzielen, eine Virusinfektion zu blockieren.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

High-Throughput Nachweisverfahren für Influenza-Virus

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Generation of Escape Variants of Neutralizing Influenza Virus Monoclonal Antibodies

Generation von Escape Varianten des Influenza-Virus Monoclonal Antikörper neutralisieren

Influenza viruses exhibit a remarkable ability to adapt and evade the host immune response. One way is through antigenic changes that occur on the surface ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Eine High-Throughput-Plattform für das Screening von Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

Visualisierung von SARS-CoV-2 mit Immuno-RNA-Fluoreszenz in situ Hybridisierung

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...

A Rapid, Multiplex Dual Reporter IgG and IgM SARS-CoV-2 Neutralization Assay for a Multiplexed Bead-Based Flow Analysis System

Ein schneller Multiplex-Dual-Reporter-IgG- und IgM-SARS-CoV-2-Neutralisationsassay für ein multiplexed Bead-basiertes Durchflussanalysesystem

The COVID-19 pandemic has underscored the need for rapid high-throughput methods for sensitive and specific serological detection of infection with novel ...

Detection of SARS-CoV-2 Receptor-Binding Domain Antibody using a HiBiT-Based Bioreporter

Nachweis eines SARS-CoV-2-Rezeptor-bindenden Domänenantikörpers mit einem HiBiT-basierten Bioreporter

The emergence of the COVID-19 pandemic has increased the need for better serological detection methods to determine the epidemiologic impact of severe ...

Live Imaging and Quantification of Viral Infection in K18 hACE2 Transgenic Mice Using Reporter-Expressing Recombinant SARS-CoV-2

Live-Bildgebung und Quantifizierung von Virusinfektionen in transgenen K18-hACE2-Mäusen mit Reporter-exprimierendem rekombinantem SARS-CoV-2

The coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic has been caused by severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2). To date, SARS-CoV-2 has ...

Efficient SARS-CoV-2 Quantitative Reverse Transcriptase PCR Saliva Diagnostic Strategy utilizing Open-Source Pipetting Robots

Effiziente SARS-CoV-2 quantitative Reverse Transkriptase PCR Speicheldiagnostikstrategie unter Verwendung von Open-Source-Pipettierrobotern

The emergence of the recent SARS-CoV-2 global health crisis introduced key challenges for epidemiological research and clinical testing. Characterized by ...

Quantifying Vaccine-Induced Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Variants

Application of Ha-CoV-2 Pseudovirus for Rapid Quantification of SARS-CoV-2 Variants and Neutralizing Antibodies

Author Spotlight: A Pseudotype Virus System for Assessing Omicron Subvariants and Neutralizing Antibodies in SARS-CoV-2 Research

The coronavirus disease 2019 pandemic (COVID-19) has highlighted the need for rapid assays to accurately measure the infectivity of emerging SARS-CoV-2 ...

Assessing Serum Neutralization Against SARS-CoV-2 with Pseudotyped Viruses

Pseudotyped Viruses As a Molecular Tool to Monitor Humoral Immune Responses Against SARS-CoV-2 Via Neutralization Assay

Studying Host-Virus Interactions with Pseudotyped Viruses (Video) | JoVE

Pseudotypisierte Viren als molekulares Werkzeug zur Überwachung humoraler Immunantworten gegen SARS-CoV-2 mittels Neutralisationsassay

Pseudotyped viruses (PVs) are molecular tools that can be used to study host-virus interactions and to test the neutralizing ability of serum samples, in ...