Name: molecular spring constant analysis by biomembrane force probe spectroscopy
Uploaded: 2021-11-20T13:00:00
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Nous remercions Guillaume Troadec pour la discussion utile, Zihao Wang pour la consultation sur le matériel, et Sydney Manufacturing Hub, Gregg Suaning et Simon Ringer pour le soutien de notre démarrage de laboratoire. Ce travail a été soutenu par l’Australian Research Council Discovery Project (DP200101970 - L.A.J.), le NSW Cardiovascular Capacity Building Program (Early-Mid Career Researcher Grant - L.A.J.), le Sydney Research Accelerator prize (SOAR - L.A.J.), ramaciotti Foundations Health Investment Grant (2020HIG76 - L.A.J.), la National Health and Medical Research Council Ideas Grant (APP2003904 - L.A.J.) et le Fonds de démarrage et le programme d’équipement majeur de la Faculté d’ingénierie de l’Université de Sydney (L.A.J.). Lining Arnold Ju est un boursier DECRA de l’Australian Research Council (DE190100609).

1. Obtenir des événements DFS analysables
<ol><li>Démarrez l’expérience dans le logiciel (par exemple, LabVIEW VI) pour le contrôle BFP et le réglage des paramètres (Figure S1A).</li>
	<li>Observez les touches répétitives perles cibles de perles/cellules de la sonde dans le logiciel pour BFP Monitor (Figure S1B).</li>
	<li>Testez et atteignez la fréquence d’adhérence ≤ 20% dans les 50 premières touches en réglant la force d’impingement et le temps de contact, ce qu...

<ol>
	<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+Biomembrane+Force+Probe:+Concurrent+Quantitation+of+Receptor-ligand+Kinetics+and+Binding-induced+Intracellular+Signaling+on+a+Single+Cell.">Fluorescence Biomembrane Force Probe: Concurrent Quantitation of Receptor-ligand Kinetics and Binding-induced Intracellular Signaling on a Single Cell.</a> The Journal of Visualized Experiments. (102), e52975 (2015).</li><li>Su, Q. P., Ju, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+nanotools+for+single-molecule+dynamics.">Biophysical nanotools for single-molecule dynamics.</a> Biophysics Reviews. 10 (5), 1349-1357 (2018).</li><li>Ju, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Force+Spectroscopy+Analysis+on+the+Redox+States+of+Protein+Disulphide+Bonds.">Dynamic Force Spectroscopy Analysis on the Redox States of Protein Disulphide Bonds.</a> Methods in Molecular Biology. 1967, 115-131 (2019).</li><li>An, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-stable+Biomembrane+Force+Probe+for+Accurately+Determining+Slow+Dissociation+Kinetics+of+PD-1+Blockade+Antibodies+on+Single+Living+Cells.">Ultra-stable Biomembrane Force Probe for Accurately Determining Slow Dissociation Kinetics of PD-1 Blockade Antibodies on Single Living Cells.</a> Nano Letters. 20 (7), 5133-5140 (2020).</li><li>Chen, Y., Ju, L., Rushdi, M., Ge, C., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor-mediated+cell+mechanosensing.">Receptor-mediated cell mechanosensing.</a> Molecular Biology of the Cell. 28 (23), 3134-3155 (2017).</li><li>Ju, L., Chen, Y., Rushdi, M. N., Chen, W., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-Dimensional+Analysis+of+Cross-Junctional+Molecular+Interaction+by+Force+Probes.">Two-Dimensional Analysis of Cross-Junctional Molecular Interaction by Force Probes.</a> Methods in Molecular Biology. 1584, 231-258 (2017).</li><li>Evans, E., Ritchie, K., Merkel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+force+technique+to+probe+molecular+adhesion+and+structural+linkages+at+biological+interfaces.">Sensitive force technique to probe molecular adhesion and structural linkages at biological interfaces.</a> Biophysical Journal. 68 (6), 2580-2587 (1995).</li><li>Ju, L., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benchmarks+of+Biomembrane+Force+Probe+Spring+Constant+Models.">Benchmarks of Biomembrane Force Probe Spring Constant Models.</a> Biophysical Journal. 113 (12), 2842-2845 (2017).</li><li>Evans, E., Ritchie, K., Merkel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+Force+Technique+to+Probe+Molecular+Adhesion+and+Structural+Linkages+at+Biological+Interfaces.">Sensitive Force Technique to Probe Molecular Adhesion and Structural Linkages at Biological Interfaces.</a> Biophysical Journal. 68, 2580 (1995).</li><li>Fiore, V. F., Ju, L., Chen, Y., Zhu, C., Barker, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+catch+of+a+Thy-1-alpha5beta1+syndecan-4+trimolecular+complex.">Dynamic catch of a Thy-1-alpha5beta1+syndecan-4 trimolecular complex.</a> Nature Communications. 5, 4886 (2014).</li><li>Passam, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechano-redox+control+of+integrin+de-adhesion.">Mechano-redox control of integrin de-adhesion.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrin+alphaIIbbeta3+intermediate+affinity+state+mediates+biomechanical+platelet+aggregation.">An integrin alphaIIbbeta3 intermediate affinity state mediates biomechanical platelet aggregation.</a> Nature Materials. 18 (7), 760-769 (2019).</li><li>Chen, Y., Lee, H., Tong, H., Schwartz, M., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+regulated+conformational+change+of+integrin+&#945;V&#946;3.">Force regulated conformational change of integrin &#945;V&#946;3.</a> Matrix Biology. 60, 70-85 (2017).</li><li>Liu, B., Chen, W., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+force+spectroscopy+on+cells.">Molecular force spectroscopy on cells.</a> Annual Review of Physical Chemistry. 66, 427-451 (2015).</li><li>Piper, J. W., Swerlick, R. A., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+force+dependence+of+two-dimensional+receptor-ligand+binding+affinity+by+centrifugation.">Determining force dependence of two-dimensional receptor-ligand binding affinity by centrifugation.</a> Biophysical Journal. 74 (1), 492-513 (1998).</li><li>Ju, L., Dong, J. -. f., Cruz, M. A., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+N-terminal+flanking+region+of+the+A1+domain+regulates+the+force-dependent+binding+of+von+Willebrand+factor+to+platelet+glycoprotein+Ib&#945;.">The N-terminal flanking region of the A1 domain regulates the force-dependent binding of von Willebrand factor to platelet glycoprotein Ib&#945;.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (45), 32289-32301 (2013).</li><li>Ju, L., Chen, Y., Xue, L., Du, X., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperative+unfolding+of+distinctive+mechanoreceptor+domains+transduces+force+into+signals.">Cooperative unfolding of distinctive mechanoreceptor domains transduces force into signals.</a> Elife. 5, 15447 (2016).</li></ol>

En résumé, nous avons fourni un protocole d’analyse de données détaillé pour le prétraitement des données brutes DFS et la dérivation des constantes de ressort moléculaire dans les modes d’analyse BFP Bead-Bead et Bead-Cell. Des modèles biomécaniques et des équations nécessaires à la détermination des constantes de ressort moléculaires et cellulaires sont présentés. Bien que différentes intégrines soient étudiées, le kmol mesuré par le mode Perle-Perle et le mode Perle-Cellu...

En tant que technique DFS à cellules vivantes, BFP conçoit un globule rouge humain (RBC; Figure 1) dans un transducteur de force ultrasensible et accordable avec une plage constante de ressort compatible à 0,1-3 pN/nm1,2,3. Pour sonder l’interaction ligand-récepteur, BFP permet des mesures DFS à ~1 pN(10 -12 N), ~3 nm(10 -9 m) et ~0,5 ms (10-3 s) en force, résolution spatiale et temporelle4,5. Sa configuration expérimentale se compose de deux micropipettes opposées, à savoir la sonde et la cible. La micropipette Probe aspire un globules biologiques et une perle est collée à son sommet via une interaction biotine-streptavidine. La perle est recouverte du ligand d’intérêt (Figure 1A). La micropipette cible aspire soit une cellule, soit une perle portant le récepteur d’intérêt, correspondant aux modes Bead-Cell(Figure 1B)et Bead-Bead(Figure 1C),respectivement5.
La construction BFP, l’assemblage et les protocoles expérimentaux DFS ont été décrits en détail précédemment1,6. En bref, un cycle tactile BFP se compose de 5 étapes : Approcher, Impinge, Contact, Retract et Dissocier(Figure 1D). La position horizontale de l’apex RBC est notée ΔxRBC. Au début, la déformation RBC non étayée (force nulle) ΔxRBC est 0(tableau 1). La cible est ensuite entraînée par un piézotranslateur pour empiéter et se rétracter sur le cordon de la sonde(Figure 1D). La sonde RBC est d’abord comprimée par la cible avec une déformation RBC négative ΔxRBC < 0. Dans un cas de liaison, l’étage de rétraction passe d’une phase de compression à une phase de traction avec une déformation RBC positive ΔxRBC > 0(Figure 2C et D). Selon la loi de Hooke, la force de roulement BFP peut être mesurée comme F = kRBC × ΔxRBC, où kRBC ( Tableau1) est la constante de ressort RBC du BFP. À la rupture de la liaison et à la fin d’un cycle tactile, le bille de sonde revient à la position de force nulle avec ΔxRBC = 0(Figure 1D).
Pour déterminer le kRBC,nous mesurons et enregistrons les rayons de l’orifice interne de la micropipette de sonde (Rp), du RBC (R0) et de la zone de contact circulaire (Rc) entre le RBC et le bille de sonde ( Figure1A). Ensuite, kRBC est calculé selon le modèle d’Evan (Eq. 1)7,8 à l’aide d’un programme LabVIEW qui agit comme un instrument virtuel (VI) pour faire fonctionner le BFP(Figure S1A)8,9.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/62490/62490eq01.jpg"> (Eq. 1)
Avec un BFP établi et des données brutes DFS obtenues, nous présentons ici comment analyser la constante de ressort de la paire ligand-récepteur ou des cellules. Les données brutes DFS sur l’interaction de la protéine glycosylée Thy-1 et de la cellule K562 portant l’intégrine α5β1 (Thy-1-α5β1; Figures 3A et 3B)10 et celle de l’intégrine enduite de fibrinogène et de billes αIIbβ3 (FGN-αIIbβ3; Figure 3C) 11,12 ont été utilisés pour démontrer les modes d’analyse Bead-Cell et Bead-Bead, respectivement.
Préparation expérimentale BFP Pour plus de détails sur la préparation expérimentale et l’instrumentation du BFP, veuillez vous référer aux protocoles précédemment publiés3. En bref, les globules biologiques humains ont été biotinylés à l’aide du Biotin-PEG3500-NHS dans le tampon carbone/bicarbonate. Les protéines d’intérêt ont été couplées de manière covalente aux billes de verre borosilicate en utilisant MAL-PEG3500-NHS dans le tampon de phosphate. Pour se fixer au globule rouge biotinylé, la bille de sonde est également recouverte de streptavidine (SA) à l’aide du MAL-SA. Veuillez consulter le tableau des matériaux et le tableau 2.
Pour assembler le BFP(Figure 1, à gauche),la troisième micropipette appelée « Helper » sera utilisée pour délivrer la bille de sonde et la coller à l’apex du RBC1,3. L’interaction covalente entre la bille de sonde revêtue de SA et les globules rouges biotinylés est beaucoup plus forte que la liaison ligand-récepteur d’intérêt. Ainsi, l’étape dissociée peut être interprétée comme la rupture de la liaison ligand-récepteur plutôt que le détachement de la perle de sonde du globule rouge.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-Mercaptopropyltrimethoxysilane (MPTMS)</td>
			<td>Uct, Specialties, llc</td>
			<td>4420-74-0</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anhy. Sodium Phosphate Dibasic (Na2HPO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7907</td>
			<td>Phosphate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BFP data acquisition VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP control and parameter setting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BFP data analysis VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP raw data analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-PEG3500-NHS</td>
			<td>JenKem</td>
			<td>A5026-1</td>
			<td>RBC biotinylation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate Glass beads</td>
			<td>Distrilab Particle Technology, Netherlands</td>
			<td>9002</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A0336</td>
			<td>Ligand functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP monitoring</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAL-PEG3500-NHS</td>
			<td>JenKem</td>
			<td>A5002-1</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>Carbonate/bicarbonate buffer preparation; Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Carbonate (Na2CO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2127</td>
			<td>Carbonate/bicarbonate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic Monohydrate (NaH2PO4&#8226;H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td>Phosphate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin-Maleimide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9415</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

molecular spring constant analysis by biomembrane force probe spectroscopy

Une sonde de force biomébrarane (BFP) a récemment émergé en tant que nanooutil de spectroscopie de force dynamique (DFS) à surface cellulaire native ou in situ qui peut mesurer la cinétique de liaison moléculaire unique, évaluer les propriétés mécaniques des interactions ligand-récepteur, visualiser les changements conformationnels dynamiques des protéines et élucider de manière plus excitante les mécanismes de mécanosension cellulaire médiés par les récepteurs. Plus récemment, le BFP a été utilisé pour mesurer la constante de ressort des liaisons moléculaires. Ce protocole décrit la procédure étape par étape pour effectuer une analyse DFS de la constante de ressort moléculaire. Plus précisément, deux modes de fonctionnement BFP sont discutés, à savoir les modes Bead-Cell et Bead-Bead. Ce protocole se concentre sur la dérivation des constantes de ressort de la liaison moléculaire et de la cellule à partir de données brutes DFS.

Dans ce travail, nous avons démontré le protocole de l’analyse constante du ressort BFP. Pour le mode d’analyse Bead-Cell, nous avons analysé le kmol de la liaison moléculaire entre la protéine glycosylé Thy-1 enrobée sur la perle de la sonde et l’intégrine α5β1 exprimée sur la cellule Cible K562 (Thy-1-intégrine α5β1; Figure 3A) 10. Lacellule kest également déri...

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Molecular Spring Constant Analysis by Biomembrane Force Probe Spectroscopy

Une sonde de force biombrane (BFP) est une technique de spectroscopie de force dynamique (DFS) in situ. BFP peut être utilisé pour mesurer la constante de ressort des interactions moléculaires sur les cellules vivantes. Ce protocole présente une analyse de la constante de ressort pour les liaisons moléculaires détectées par BFP.

Analyse de la constante de ressort moléculaire par spectroscopie de sonde de force de biomembrane

A biomembrane force probe (BFP) has recently emerged as a native-cell-surface or in situ dynamic force spectroscopy (DFS) nanotool that can measure ...

Cette vidéo décrit les procédures étape par étape sur l’utilisation de biomembrane Force Probe, ou BFP pour mesurer la constante de ressort moléculaire. En force, le BFP a récemment émergé dans la surface de la cellule native ou dans l’analyse de spectroscopie de force dynamique SITU. L’objectif principal de cette technique est de mesurer la génétique de liaison à une seule molécule.Cette procédure d’analyse de données est un message simple mais puissant et fournit des informations mécaniques, en particulier la force dynamique et l’inflammation de la membrane cellulaire exprimant les molécules. Au cours du cycle d’expérience BFP, le pari du microbiome de la sonde avec le globule rouge et l’homologation, la cellule cible et la liaison moléculaire du récepteur du ligand entre la sonde et la cible peut être considéré comme un système cérébral connecté en série. Selon la loi de Hooke, la réciproque de la constante de ressort totale d’un système de ressort connecté en série est égale à la somme de la constante de ressort inverse de chaque composant, comme le montre l’équation.La constante de ressort des globules rouges est calculée en fonction du mouvement des événements, qui dépend de la radiale de la micropipette de la sonde dans l’orifice. Les globules rouges, la zone de contact circulaire entre les globules rouges et l’homologation et la pression d’aspiration de la micro-pipette. Les données routières BFP sont obtenues par un instrument virtuel de vue à gauche fait maison, qui contrôle le mouvement de la micro-pipette cible par un traducteur DE SON.Un cycle tactile PFP complet se compose de cinq étapes. Approche.Impinge.Contact. Se rétracter et se dissocier. Au début, la position Robusto APICS est notée comme X est égal à 0 en noir deshine.La cible est ensuite entraînée par une pièce ou un traducteur pour empiéter et comprimer le robusto pour provoquer un mouvement d’homologation négatif. Vous le notez comme X plus petit que zéro dans la ligne de tiret rouge. Dans l’étage de rétraction, le busto rouge se déplace de la position X plus petite que zéro vers la position X égale à zéro appelée phase de compression.Si une liaison est formée entre le complexe de molécules du récepteur du ligand, le globule rouge serait encore plus différent d’une autre direction positive. Cette période X supérieure à zéro est appelée phase de traction de l’étape de rétraction. L’étape de rétraction est la partie la plus critique pour déterminer la constante de ressort de la molécule de liaison.Collectez des données routières force versus temps à l’aide de la plateforme d’acquisition de données BSP. Chaque expérience enregistre généralement 50 à 200 cycles tactiles, Ouvrez le logiciel d’analyse de données PFP. Cliquez sur l’icône du dossier jaune et sélectionnez le fichier de données de ligne correspondant en double-cliquant dessus.Nous sommes au programme. Cliquez ensuite sur les boutons fléchés haut et bas pour basculer entre les événements. Utilisation des critères d’exclusion des valeurs aberrantes pour filtrer les événements non valides.Sélectionnez le type de données d’exportation qui est forcé au format d’heure et choisissez la plage d’état appropriée. Cliquez sur le bouton Exporter les données du tracé. Les données exportées sont enregistrées sous forme de fichier texte par défaut.Ce fichier texte contient deux colonnes de données. C’est la première colonne représentant les papas de temps et la deuxième colonne représentant la force correspondante à chaque point temporel. Tracez la courbe force/temps à l’aide d’un tableur pour obtenir la courbe forcée versus déplacement.Multipliez la valeur temporelle de chaque point de données par le mouvement Willow Steel PSO. Élilinez le premier point de données à zéro en soustrayant la plus petite valeur de déplacement de chaque point de données. Cette transformation horizontale n’affecte pas le calcul ultérieur de la constante de ressort.Dans la courbe force/déplacement, deux groupes d’acteurs distincts étaient différents si la nouvelle pente de force peut être identifiée. Chacun représentant la phase de compression et la phase de style 10. Ajustez une ligne de régression à chaque groupe de données.La ligne avec une pente plus raide représente la constante totale du ressort à une phase de compresseur notée K1. Et la ligne qui était la plus petite en haut représente la ligne à cette phase de style 10 désignée comme K2.As que j’ai mentionnée, la constante totale du ressort est la réciproque du fils de la constante de ressort de série de chaque composant. Pendant la phase de compression du mode battement-cellule, la liaison moléculaire n’est pas étirée, de sorte que la constante du ressort de liaison moléculaire n’est pas prise en considération. La constante de ressort de la cellule cible est décrite comme l’équation affichée où K1 représente la constante totale du ressort pendant la phase du compresseur.Dans la phase de style 10 du mode beat to sell, la constante totale du printemps est la constante du soleil du printemps uverse de la liaison moléculaire des globules rouges. Et la cellule cible, utilisez l’équation affichée pour calculer la constante du ressort de liaison du moléculeur, qui K2 représente la constante totale du ressort. Vous lisez la phase des 10 arrêts.En mode beat to beat, puisque la déformation B est négligeable, le terme qui décrit l’inverse de la constante de ressort de la cellule cible se rapproche de zéro, donc la constante totale de ressort dans la phase de compresseur est équivalente à la constante de ressort de globule rouge montrant l’équation suivante. Dans la phase de traction, la constante de ressort de la liaison moléculaire peut être calculée en soustrayant l’effet du globule rouge montrant l’équation suivante. Collecter les constantes de ressort de l’attitude d’intégration du vent latéral B, du complexe Beta 3, de la cellule K562 et du complexe d’intégration d’attitude de Febrifugine B Beta, calculer la moyenne et l’écart-type des constantes de ressort dérivées à l’échelle de Newton ou de nanomètres.Maintenant, vous devriez avoir une meilleure compréhension des exigences pour mesurer et ressorter la constante à partir des données VFD. Les différences entre le mode beat to cell et le mode beat to beat doivent être remarquées. Différents services de présentation de molécules auront des défenses différentes à la mesure de la constante de ressort.En conclusion, cette procédure étape par étape décrit comment effectuer une analyse de la constante de ressort moléculaire à l’aide de BFP. Nous prévoyons que des efforts futurs seront déployés pour automatiser et intégrer l’acquisition de données BFP et l’analyse DFS dans un seul programme de repos informatique. Rendre l’ensemble de l’analyse des données d’exploitation BFP plus convivial et plus élevé tout au long.

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