Name: molecular spring constant analysis by biomembrane force probe spectroscopy
Uploaded: 2021-11-20T13:00:00
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Wir danken Guillaume Troadec für die hilfreiche Diskussion, Zihao Wang für die Hardware-Beratung und Sydney Manufacturing Hub, Gregg Suaning und Simon Ringer für die Unterstützung unseres Labor-Startups. Diese Arbeit wurde unterstützt durch das Australian Research Council Discovery Project (DP200101970 - L.A.J.), das NSW Cardiovascular Capacity Building Program (Early-Mid Career Researcher Grant - L.A.J.), den Sydney Research Accelerator Prize (SOAR - L.A.J.), den Ramaciotti Foundations Health Investment Grant (2020HIG76 - L.A.J.), den National Health and Medical Research Council Ideas Grant (APP2003904 - L.A.J.) und den University of Sydney Faculty of Engineering Startup Fund and Major Equipment Scheme (L.A.J.). Lining Arnold Ju ist deCRA-Fellow des Australian Research Council (DE190100609).

1. Abrufen analysierbarer DFS-Ereignisse
<ol><li>Starten Sie das Experiment in der Software (z. B. LabVIEW VI) für die BFP-Steuerung und Parametrierung (Abbildung S1A).</li>
	<li>Beobachten Sie die sich wiederholenden Berührungen der Sondenperlen-Zielperle/Zelle in der Software für BFP Monitor (Abbildung S1B).</li>
	<li>Testen und erreichen Sie die Adhäsionsfrequenz ≤ 20% innerhalb der ersten 50 Berührungen durch Abstimmung der Impingementkraft und der Kontaktzeit, wodurch siche...

<ol>
	<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+Biomembrane+Force+Probe:+Concurrent+Quantitation+of+Receptor-ligand+Kinetics+and+Binding-induced+Intracellular+Signaling+on+a+Single+Cell.">Fluorescence Biomembrane Force Probe: Concurrent Quantitation of Receptor-ligand Kinetics and Binding-induced Intracellular Signaling on a Single Cell.</a> The Journal of Visualized Experiments. (102), e52975 (2015).</li><li>Su, Q. P., Ju, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+nanotools+for+single-molecule+dynamics.">Biophysical nanotools for single-molecule dynamics.</a> Biophysics Reviews. 10 (5), 1349-1357 (2018).</li><li>Ju, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Force+Spectroscopy+Analysis+on+the+Redox+States+of+Protein+Disulphide+Bonds.">Dynamic Force Spectroscopy Analysis on the Redox States of Protein Disulphide Bonds.</a> Methods in Molecular Biology. 1967, 115-131 (2019).</li><li>An, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-stable+Biomembrane+Force+Probe+for+Accurately+Determining+Slow+Dissociation+Kinetics+of+PD-1+Blockade+Antibodies+on+Single+Living+Cells.">Ultra-stable Biomembrane Force Probe for Accurately Determining Slow Dissociation Kinetics of PD-1 Blockade Antibodies on Single Living Cells.</a> Nano Letters. 20 (7), 5133-5140 (2020).</li><li>Chen, Y., Ju, L., Rushdi, M., Ge, C., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor-mediated+cell+mechanosensing.">Receptor-mediated cell mechanosensing.</a> Molecular Biology of the Cell. 28 (23), 3134-3155 (2017).</li><li>Ju, L., Chen, Y., Rushdi, M. N., Chen, W., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-Dimensional+Analysis+of+Cross-Junctional+Molecular+Interaction+by+Force+Probes.">Two-Dimensional Analysis of Cross-Junctional Molecular Interaction by Force Probes.</a> Methods in Molecular Biology. 1584, 231-258 (2017).</li><li>Evans, E., Ritchie, K., Merkel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+force+technique+to+probe+molecular+adhesion+and+structural+linkages+at+biological+interfaces.">Sensitive force technique to probe molecular adhesion and structural linkages at biological interfaces.</a> Biophysical Journal. 68 (6), 2580-2587 (1995).</li><li>Ju, L., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benchmarks+of+Biomembrane+Force+Probe+Spring+Constant+Models.">Benchmarks of Biomembrane Force Probe Spring Constant Models.</a> Biophysical Journal. 113 (12), 2842-2845 (2017).</li><li>Evans, E., Ritchie, K., Merkel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+Force+Technique+to+Probe+Molecular+Adhesion+and+Structural+Linkages+at+Biological+Interfaces.">Sensitive Force Technique to Probe Molecular Adhesion and Structural Linkages at Biological Interfaces.</a> Biophysical Journal. 68, 2580 (1995).</li><li>Fiore, V. F., Ju, L., Chen, Y., Zhu, C., Barker, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+catch+of+a+Thy-1-alpha5beta1+syndecan-4+trimolecular+complex.">Dynamic catch of a Thy-1-alpha5beta1+syndecan-4 trimolecular complex.</a> Nature Communications. 5, 4886 (2014).</li><li>Passam, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechano-redox+control+of+integrin+de-adhesion.">Mechano-redox control of integrin de-adhesion.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrin+alphaIIbbeta3+intermediate+affinity+state+mediates+biomechanical+platelet+aggregation.">An integrin alphaIIbbeta3 intermediate affinity state mediates biomechanical platelet aggregation.</a> Nature Materials. 18 (7), 760-769 (2019).</li><li>Chen, Y., Lee, H., Tong, H., Schwartz, M., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+regulated+conformational+change+of+integrin+&#945;V&#946;3.">Force regulated conformational change of integrin &#945;V&#946;3.</a> Matrix Biology. 60, 70-85 (2017).</li><li>Liu, B., Chen, W., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+force+spectroscopy+on+cells.">Molecular force spectroscopy on cells.</a> Annual Review of Physical Chemistry. 66, 427-451 (2015).</li><li>Piper, J. W., Swerlick, R. A., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+force+dependence+of+two-dimensional+receptor-ligand+binding+affinity+by+centrifugation.">Determining force dependence of two-dimensional receptor-ligand binding affinity by centrifugation.</a> Biophysical Journal. 74 (1), 492-513 (1998).</li><li>Ju, L., Dong, J. -. f., Cruz, M. A., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+N-terminal+flanking+region+of+the+A1+domain+regulates+the+force-dependent+binding+of+von+Willebrand+factor+to+platelet+glycoprotein+Ib&#945;.">The N-terminal flanking region of the A1 domain regulates the force-dependent binding of von Willebrand factor to platelet glycoprotein Ib&#945;.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (45), 32289-32301 (2013).</li><li>Ju, L., Chen, Y., Xue, L., Du, X., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperative+unfolding+of+distinctive+mechanoreceptor+domains+transduces+force+into+signals.">Cooperative unfolding of distinctive mechanoreceptor domains transduces force into signals.</a> Elife. 5, 15447 (2016).</li></ol>

Zusammenfassend haben wir ein detailliertes Datenanalyseprotokoll zur Vorverarbeitung der DFS-Rohdaten und zur Ableitung molekularer Federkonstanten in den BFP-Analysemodi Bead-Bead und Bead-Cell bereitgestellt. Biomechanische Modelle und Gleichungen, die zur Bestimmung molekularer und zellulärer Federkonstanten erforderlich sind, werden vorgestellt. Obwohl verschiedene Integrine untersucht werden, besitzt das kmol, gemessen durch den Bead-Bead-Modus und den Bead-Cell-Modus signifikante Reichweitenun...

Als Lebendzell-DFS-Technik entwickelt BFP ein menschliches rotes Blutkörperchen (RBC; Abbildung 1) in einen ultraempfindlichen und abstimmbaren Kraftaufnehmer mit einem kompatiblen Federkonstantenbereich bei 0,1-3 pN/nm1,2,3. Um die Liganden-Rezeptor-Interaktion zu untersuchen, ermöglicht BFP DFS-Messungen bei ~1 pN (10-12 N), ~3 nm (10-9 m) und ~0,5 ms (10-3 s) in Kraft, räumlicher und zeitlicher Auflösung4,5. Seine experimentelle Konfiguration besteht aus zwei gegenüberliegenden Mikropipetten, nämlich der Sonde und dem Ziel. Die Sonden-Mikropipette saugt ein RBC an und eine Perle wird an ihrer Spitze über eine Biotin-Streptavidin-Wechselwirkung geklebt. Die Perle ist mit dem interessierenden Liganden beschichtet (Abbildung 1A). Die Target-Mikropipette aspirat entweder eine Zelle oder eine Perle mit dem interessierenden Rezeptor, entsprechend den Modi Bead-Cell (Abbildung 1B) und Bead-Bead (Abbildung 1C) bzw.5.
BFP-Aufbau, Montage und die DFS-Versuchsprotokolle wurden zuvor ausführlich beschrieben1,6. Kurz gesagt, ein BFP-Touch-Zyklus besteht aus 5 Stufen: Annäherung, Impinge, Kontakt, Rückzug und Dissoziieren (Abbildung 1D). Die horizontale RBC-Spitzenposition wird als ΔxRBC bezeichnet. Zu Beginn ist die unbelastete (kraftfreie) RBC-Verformung ΔxRBC 0 (Tabelle 1). Das Ziel wird dann von einem Piezotranslator angetrieben, um auf die Sondenperle einzufallen und sich von ihr zurückzuziehen (Abbildung 1D). Die RBC-Sonde wird zunächst vom Target mit negativer RBC-Verformung ΔxRBC-< 0 komprimiert. In einem Bond-Ereignis geht die Retract-Stufe von einer Druck- in eine Zugphase mit positiver RBC-Verformung ΔxRBC > 0 über(Abbildung 2C und D). Nach dem Hookeschen Gesetz kann die BFP-Lagerkraft als F = kRBC × ΔxRBCgemessenwerden, wobei kRBC ( Tabelle1) die RBC-Federkonstante des BFP ist. Nach Abschluss eines Berührungszyklus kehrt die Sondenperle mit Δ xRBC = 0 in die Nullkraftposition zurück (Abbildung 1D).
Zur Bestimmung des kRBCmessen und erfassen wir die Radien der Sondenmikropipetten-Innenöffnung (Rp), der RBC (R0) und der kreisförmigen Kontaktfläche (Rc) zwischen dem RBC und der Sondenperle ( Abbildung1A). Dann wird kRBC nach dem Evan's Modell (Eq. 1)7,8 unter Verwendung eines LabVIEW-Programms berechnet, das als virtuelles Instrument (VI) zum Betrieb des BFP fungiert (Abbildung S1A)8,9.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/62490/62490eq01.jpg"> (Gleichung 1)
Mit einem BFP etabliert und DFS Rohdaten erhalten, präsentieren wir hiermit, wie die Federkonstante von Liganden-Rezeptor-Paaren oder Zellen analysiert werden kann. Die DFS-Rohdaten zur Wechselwirkung des glykosylierten Proteins Thy-1 und K562 zelltragendes Integrin α5β1 (Thy-1-α5β1; Abbildungen 3A und 3B)10 und die des fibrinogen- und perlenbeschichteten Integrins αIIbβ3 (FGN-αIIbβ3; Abbildung 3C) 11,12 wurden verwendet, um die Analysemodi Bead-Cell bzw. Bead-Bead zu demonstrieren.
BFP Versuchsvorbereitung Einzelheiten zur experimentellen Vorbereitung und Instrumentierung von BFP finden Sie in den zuvor veröffentlichten Protokollen3. Kurz gesagt, humanes RBC wurde mit dem Biotin-PEG3500-NHS im Kohlenstoff-/Bicarbonatpuffer biotinyliert. Interessante Proteine wurden kovalent mit den Borosilikatglasperlen unter Verwendung von MAL-PEG3500-NHS im Phosphatpuffer gekoppelt. Zur Bindung an das biotinylierte RBC wird die Sondenperle auch mit Streptavidin (SA) unter Verwendung des MAL-SA beschichtet. Bitte beachten Sie die Materialtabelle und Tabelle 2.
Um den BFP (Abbildung 1, links) zusammenzubauen, wird die dritte Mikropipette, die als "Helper" bezeichnet wird, verwendet, um die Sondenperle zu liefern und sie an die Spitze1,3des RBC zu kleben. Die kovalente Wechselwirkung zwischen der SA-beschichteten Sondenperle und dem biotinylierten RBC ist viel stärker als die interessierende Ligandenrezeptorbindung. Daher kann das Dissoziierungsstadium als Liganden-Rezeptor-Bindungsbruch und nicht als Ablösung der Sondenperle vom RBC interpretiert werden.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-Mercaptopropyltrimethoxysilane (MPTMS)</td>
			<td>Uct, Specialties, llc</td>
			<td>4420-74-0</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anhy. Sodium Phosphate Dibasic (Na2HPO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7907</td>
			<td>Phosphate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BFP data acquisition VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP control and parameter setting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BFP data analysis VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP raw data analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-PEG3500-NHS</td>
			<td>JenKem</td>
			<td>A5026-1</td>
			<td>RBC biotinylation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate Glass beads</td>
			<td>Distrilab Particle Technology, Netherlands</td>
			<td>9002</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A0336</td>
			<td>Ligand functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP monitoring</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAL-PEG3500-NHS</td>
			<td>JenKem</td>
			<td>A5002-1</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>Carbonate/bicarbonate buffer preparation; Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Carbonate (Na2CO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2127</td>
			<td>Carbonate/bicarbonate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic Monohydrate (NaH2PO4&#8226;H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td>Phosphate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin-Maleimide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9415</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

molecular spring constant analysis by biomembrane force probe spectroscopy

Eine Biomembrankraftsonde (BFP) hat sich kürzlich als Nanowerkzeug für die native Zelloberfläche oder die dynamische Kraftspektroskopie (DFS) mit nativer Zelloberfläche oder in situ entwickelt, das die einzelmolekulare Bindungskinetik messen, mechanische Eigenschaften von Liganden-Rezeptor-Interaktionen bewerten, proteindynamische Konformationsänderungen visualisieren und rezeptorvermittelte Zellmechanosensormechanismen aufregender aufklären kann. In jüngerer Zeit wurde BFP verwendet, um die Federkonstante molekularer Bindungen zu messen. Dieses Protokoll beschreibt das schrittweise Verfahren zur Durchführung der molekularen Federkonstanten-DFS-Analyse. Konkret werden zwei BFP-Betriebsmodi diskutiert, nämlich die Bead-Cell- und Bead-Bead-Modi. Dieses Protokoll konzentriert sich auf die Ableitung von Federkonstanten der molekularen Bindung und Zelle aus DFS-Rohdaten.

In dieser Arbeit haben wir das Protokoll der BFP-Federkonstantenanalyse demonstriert. Für den Bead-Cell-Analysemodus analysierten wir das kmol der molekularen Bindung zwischen dem auf der Sondenperle beschichteten glykosylierten Protein Thy-1 und dem Integrin α5β1, exprimiert auf der Zielzelle K562 (Thy-1-integrin α5β1; Abbildung 3A) 10.Diek-Zelle ist ebenfalls aus dem Bead-Cell-Modus (K56...

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Molecular Spring Constant Analysis by Biomembrane Force Probe Spectroscopy

Eine Biomembrankraftsonde (BFP) ist eine In-situ-Technik der dynamischen Kraftspektroskopie (DFS). BFP kann verwendet werden, um die Federkonstante molekularer Wechselwirkungen auf lebenden Zellen zu messen. Dieses Protokoll präsentiert eine Federkonstantenanalyse für molekulare Bindungen, die von BFP nachgewiesen wurden.

Molekulare Federkonstantenanalyse mittels Biomembran-Kraftsondenspektroskopie

A biomembrane force probe (BFP) has recently emerged as a native-cell-surface or in situ dynamic force spectroscopy (DFS) nanotool that can measure ...

Dieses Video beschreibt Schritt-für-Schritt-Verfahren zur Verwendung von Biomembrane Force Probe oder BFP zur Messung der molekularen Federkonstante. In der Kraftsonde ist BFP kürzlich in der nativen Zelloberfläche oder in der SITU Dynamic Force Spectroscopy-Analyse aufgetaucht. Das Hauptziel dieser Technik ist es, die Genetik der Einzelmolekülbindung zu messen.Dieses Datenanalyseverfahren ist eine einfache, aber kraftvolle Botschaft und liefert mechanische Informationen, insbesondere die dynamische Kraft und Entzündung der Zellmembran, die Moleküle exprimiert. Während des BFP-Experimentzyklus kann das Sondenmikrobiom mit den roten Blutkörperchen und dem Nachlass, der Zielzelle und der molekularen Bindung des Ligandenrezeptors zwischen der Sonde und dem Ziel als ein reihengebundenes Gehirnsystem betrachtet werden. Basierend auf dem Hookeschen Gesetz ist der Kehrwert der Gesamtfederkonstante eines reihengebundenen Federsystems gleich der Summe der inversen Federkonstante jeder einzelnen Komponente, wie die Gleichung zeigt.Die Federkonstante der roten Blutkörperchen wird basierend auf der Ereignisbewegung berechnet, die von der radialen Mikropipette der Sonde in der Öffnung abhängt. Die roten Blutkörperchen, der kreisförmige Kontaktbereich zwischen den roten Blutkörperchen und dem Nachlass und der Mikropipetten-Aspirationspression. Die BFP-Straßendaten werden von einem selbstgebauten virtuellen Instrument mit linker Ansicht erhalten, das die Bewegung der Zielmikropipette durch einen PAs-Übersetzer steuert.Ein vollständiger PFP-Touch-Zyklus besteht aus fünf Stufen. Approach.Impinge.Contact. Zurückziehen und Dissoziieren. Am Anfang wird die Robusto APICS-Position als X gleich 0 in schwarzer Deshine bezeichnet.Das Ziel wird dann von einem Stück oder Übersetzer angetrieben, um das Robusto zu treffen und zu komprimieren, um eine negative Nachlassbewegung zu verursachen. Sie notieren es als X kleiner als Null in der roten Strichlinie. In der Rückzugsphase bewegen sich die roten Busto-Apex von der Position X kleiner als Null zurück in die Position X gleich Null, die als Druckphase bezeichnet wird.Wenn eine Bindung zwischen dem Ligandenrezeptormolekülkomplex gebildet wird, würden sich die roten Blutkörperchen weiter von anderen positiven Richtungen unterscheiden. Diese X-Periode größer als Null wird als Zugphase der Rückzugsstufe bezeichnet. Die Rückzugsstufe ist der kritischste Teil, um die Federkonstante des Bindungsmoleküls zu bestimmen.Sammeln Sie Kraft- und Zeitdaten auf der Straße mit der Datenerfassungsplattform BSP. Jedes Experiment zeichnet in der Regel 50 bis 200 Berührungszyklen auf, öffnen Sie die PFP-Datenanalysesoftware. Klicken Sie auf das gelbe Ordnersymbol und wählen Sie die entsprechende Zeilendatendatei aus, indem Sie darauf doppelklicken.Wir sind auf dem Programm. Klicken Sie dann auf die Pfeiltasten nach oben und unten, um zwischen den Ereignissen zu wechseln. Verwenden der Ausreißerausschlusskriterien, um ungültige Ereignisse herauszufiltern.Wählen Sie den exportierenden Datentyp aus, der zum Zeitformat gezwungen wird, und wählen Sie den entsprechenden Statuszeitbereich aus. Klicken Sie auf die Schaltfläche Plotdaten exportieren. Die exportierten Daten werden standardmäßig als Textdatei gespeichert.Diese Textdatei enthält zwei Datenspalten. Es ist die erste Spalte, die die Zeitväter darstellt, und die zweite Spalte, die die entsprechende Kraft zu jedem Zeitpunkt darstellt. Zeichnen Sie die Kraft-Zeit-Kurve mit Tabellenkalkulationssoftware auf, um die Erzwungen-Gegen-Verschiebungs-Kurve zu erhalten.Multiplizieren Sie den Zeitwert jedes Datenpunkts mit der Willow Steel PSO-Bewegung. Null den ersten Datenpunkt, indem der kleinste Verschiebungswert von jedem Datenpunkt subtrahiert wird. Diese horizontale Transformation hat keinen Einfluss auf die nachfolgende Federkonstantenberechnung.In der Kraft-Verschiebungs-Kurve unterschieden sich zwei verschiedene Akteursgruppen, wenn die neue Kraftsteigung identifiziert werden kann. Jede repräsentiert die Druckphase und die 10-Stilphase. Passen Sie jeder Datengruppe eine Regressionslinie an.Die Linie mit steilerer Steigung stellt die Gesamtfederkonstante an einer Kompressorphase dar, die als K1 bezeichnet wird. Und die Linie, die am kleinsten oben war, repräsentiert die Linie in dieser 10-Stilphase, die als K2.As bezeichnet wird, die Gesamtfederkonstante ist der Kehrwert des Sohnes der Serienfederkonstante jeder Komponente. Während der Druckphase des Beat-to-Cell-Modus wird die molekulare Bindung nicht gedehnt, daher wird die molekulare Bindungsfederkonstante nicht berücksichtigt. Die Federkonstante der Zielzelle wird als die angezeigte Gleichung beschrieben, wobei K1 die Gesamtfederkonstante während der Kompressorphase darstellt.In der 10-Stil-Phase des Beat-to-Sell-Modus ist die gesamtfederkonstante die Sonne der uversen Frühlingskonstante der molekularen Bindung der roten Blutkörperchen. Und die Zielzelle verwendet die angezeigte Gleichung, um die Molekularbindungsfederkonstante zu berechnen, die K2 die Gesamtfederkonstante darstellt. Sie lesen die 10-Stopp-Phase.Im Beat-to-Beat-Modus, da die B-Verformung vernachlässigbar ist, nähert sich der Begriff, der die Umkehrung der Zielzellfederkonstante beschreibt, Null, daher ist die Gesamtfederkonstante in der Kompressorphase äquivalent zur Federkonstante der roten Blutkörperchen, die als folgende Gleichung angezeigt wird. In der Zugphase kann die Federkonstante der molekularen Bindung berechnet werden, indem der Effekt der roten Blutkörperchen als folgende Gleichung subtrahiert wird. Sammeln Sie Federkonstanten der Seitenwind-Integrationslage B, des Beta-3-Komplexes, der K562-Zelle und der Febrifugine-Integrationseinstellung B Beta drei-Komplexe, berechnen Sie den Mittelwert und die Standardabweichung der abgeleiteten Federkonstanten auf einer Newton- oder Nanometer-Skala.Jetzt sollten Sie ein besseres Verständnis dafür haben, was die Anforderungen an die Messung und Federkonstante aus den VFD-Daten sind. Die Unterschiede zwischen dem Beat-to-Cell-Modus und dem Beat-to-Beat-Modus sollten beachtet werden. Verschiedene Molekül präsentierende Dienste haben unterschiedliche Abwehrkräfte für das Maß der Federkonstante.Zusammenfassend beschreibt dieses Schritt-für-Schritt-Verfahren, wie die molekulare Federkonstantenanalyse mit BFP durchgeführt wird. Wir gehen davon aus, dass in Zukunft Anstrengungen unternommen werden, um die BFP-Datenerfassung und DFS-Analyse in einem Computer-Rest-Programm zu automatisieren und zu integrieren. Machen Sie die gesamte BFP-Betriebsdatenanalyse benutzerfreundlicher und durchgehend hoch.

Research

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