Name: molecular spring constant analysis by biomembrane force probe spectroscopy
Uploaded: 2021-11-20T13:00:00
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हम सहायक चर्चा के लिए Guillaume Troadec, हार्डवेयर परामर्श के लिए Zihao वांग, और सिडनी विनिर्माण हब, ग्रेग Suaning और साइमन रिंगर हमारे प्रयोगशाला स्टार्टअप के समर्थन के लिए धन्यवाद । इस काम को ऑस्ट्रेलियाई अनुसंधान परिषद डिस्कवरी परियोजना (DP200101970-L.A.J.), एनएसडब्ल्यू हृदय क्षमता निर्माण कार्यक्रम (अर्ली-मिड करियर शोधकर्ता अनुदान-ला.जे.), सिडनी रिसर्च एक्सीलरेटर पुरस्कार (चढ़ता-ला जे), रामासिओटी फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था स्वास्थ्य निवेश अनुदान (2020HIG76-L.A.J.), राष्ट्रीय स्वास्थ्य और चिकित्सा अनुसंधान परिषद विचार अनुदान (APP2003904-L.J.), और इंजीनियरिंग स्टार्टअप फंड और प्रमुख उपकरण योजना (L.A.J.) के सिडनी संकाय विश्वविद्यालय । अस्तर अर्नोल्ड जू एक ऑस्ट्रेलियाई अनुसंधान परिषद DECRA फेलो (DE190100609) है ।

1. प्राल्य DFS घटनाओं प्राप्त
<ol><li>बीएफपी नियंत्रण और पैरामीटर सेटिंग(चित्रा S1A)के लिए सॉफ्टवेयर (जैसे, लैबव्यू VI) में प्रयोग शुरू करें।</li>
	<li>बीएफपी मॉनिटर(चित्रा S1B)के लिए सॉफ्टवेयर में दोहराव ज?...

<ol>
	<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+Biomembrane+Force+Probe:+Concurrent+Quantitation+of+Receptor-ligand+Kinetics+and+Binding-induced+Intracellular+Signaling+on+a+Single+Cell.">Fluorescence Biomembrane Force Probe: Concurrent Quantitation of Receptor-ligand Kinetics and Binding-induced Intracellular Signaling on a Single Cell.</a> The Journal of Visualized Experiments. (102), e52975 (2015).</li><li>Su, Q. P., Ju, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+nanotools+for+single-molecule+dynamics.">Biophysical nanotools for single-molecule dynamics.</a> Biophysics Reviews. 10 (5), 1349-1357 (2018).</li><li>Ju, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Force+Spectroscopy+Analysis+on+the+Redox+States+of+Protein+Disulphide+Bonds.">Dynamic Force Spectroscopy Analysis on the Redox States of Protein Disulphide Bonds.</a> Methods in Molecular Biology. 1967, 115-131 (2019).</li><li>An, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-stable+Biomembrane+Force+Probe+for+Accurately+Determining+Slow+Dissociation+Kinetics+of+PD-1+Blockade+Antibodies+on+Single+Living+Cells.">Ultra-stable Biomembrane Force Probe for Accurately Determining Slow Dissociation Kinetics of PD-1 Blockade Antibodies on Single Living Cells.</a> Nano Letters. 20 (7), 5133-5140 (2020).</li><li>Chen, Y., Ju, L., Rushdi, M., Ge, C., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor-mediated+cell+mechanosensing.">Receptor-mediated cell mechanosensing.</a> Molecular Biology of the Cell. 28 (23), 3134-3155 (2017).</li><li>Ju, L., Chen, Y., Rushdi, M. N., Chen, W., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-Dimensional+Analysis+of+Cross-Junctional+Molecular+Interaction+by+Force+Probes.">Two-Dimensional Analysis of Cross-Junctional Molecular Interaction by Force Probes.</a> Methods in Molecular Biology. 1584, 231-258 (2017).</li><li>Evans, E., Ritchie, K., Merkel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+force+technique+to+probe+molecular+adhesion+and+structural+linkages+at+biological+interfaces.">Sensitive force technique to probe molecular adhesion and structural linkages at biological interfaces.</a> Biophysical Journal. 68 (6), 2580-2587 (1995).</li><li>Ju, L., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benchmarks+of+Biomembrane+Force+Probe+Spring+Constant+Models.">Benchmarks of Biomembrane Force Probe Spring Constant Models.</a> Biophysical Journal. 113 (12), 2842-2845 (2017).</li><li>Evans, E., Ritchie, K., Merkel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+Force+Technique+to+Probe+Molecular+Adhesion+and+Structural+Linkages+at+Biological+Interfaces.">Sensitive Force Technique to Probe Molecular Adhesion and Structural Linkages at Biological Interfaces.</a> Biophysical Journal. 68, 2580 (1995).</li><li>Fiore, V. F., Ju, L., Chen, Y., Zhu, C., Barker, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+catch+of+a+Thy-1-alpha5beta1+syndecan-4+trimolecular+complex.">Dynamic catch of a Thy-1-alpha5beta1+syndecan-4 trimolecular complex.</a> Nature Communications. 5, 4886 (2014).</li><li>Passam, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechano-redox+control+of+integrin+de-adhesion.">Mechano-redox control of integrin de-adhesion.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrin+alphaIIbbeta3+intermediate+affinity+state+mediates+biomechanical+platelet+aggregation.">An integrin alphaIIbbeta3 intermediate affinity state mediates biomechanical platelet aggregation.</a> Nature Materials. 18 (7), 760-769 (2019).</li><li>Chen, Y., Lee, H., Tong, H., Schwartz, M., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+regulated+conformational+change+of+integrin+&#945;V&#946;3.">Force regulated conformational change of integrin &#945;V&#946;3.</a> Matrix Biology. 60, 70-85 (2017).</li><li>Liu, B., Chen, W., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+force+spectroscopy+on+cells.">Molecular force spectroscopy on cells.</a> Annual Review of Physical Chemistry. 66, 427-451 (2015).</li><li>Piper, J. W., Swerlick, R. A., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+force+dependence+of+two-dimensional+receptor-ligand+binding+affinity+by+centrifugation.">Determining force dependence of two-dimensional receptor-ligand binding affinity by centrifugation.</a> Biophysical Journal. 74 (1), 492-513 (1998).</li><li>Ju, L., Dong, J. -. f., Cruz, M. A., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+N-terminal+flanking+region+of+the+A1+domain+regulates+the+force-dependent+binding+of+von+Willebrand+factor+to+platelet+glycoprotein+Ib&#945;.">The N-terminal flanking region of the A1 domain regulates the force-dependent binding of von Willebrand factor to platelet glycoprotein Ib&#945;.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (45), 32289-32301 (2013).</li><li>Ju, L., Chen, Y., Xue, L., Du, X., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperative+unfolding+of+distinctive+mechanoreceptor+domains+transduces+force+into+signals.">Cooperative unfolding of distinctive mechanoreceptor domains transduces force into signals.</a> Elife. 5, 15447 (2016).</li></ol>

संक्षेप में, हमने डीएफएस कच्चे डेटा को प्रीप्रोसेस करने और बीएफपी मनका-मनका और मनका-सेल विश्लेषण मोड में आणविक वसंत स्थिरांश प्राप्त करने के लिए एक विस्तृत डेटा विश्लेषण प्रोटोकॉल प्रदान किया है। आण?...

एक लाइव सेल डीएफएस तकनीक के रूप में, बीएफपी एक मानव लाल रक्त कोशिका (आरबीसी) इंजीनियरों; चित्रा 1) 0.1-3 पीएन / एनएम 1 ,2,3पर एक संगत स्प्रिंग लगातार रेंज के साथ एक अल्ट्रासेंसिटिव और ट्यूनबल फोर्स ट्रांसड्यूसर में । लिगांड-रिसेप्टर इंटरैक्शन की जांच करने के लिए, बीएफपी ~ 1 पीएन (10-12 एन), ~ 3 एनएम(10-9 मीटर), और बल में ~ 0.5 एमएस (10-3 एस), स्थानिक, और लौकिक संकल्प 4,5पर डीएफएस माप सक्षम बनाता है। इसके प्रायोगिक विन्यास में दो विरोधी माइक्रोपिपेटेस होते हैं, अर्थात् जांच और लक्ष्य। प्रोब माइक्रोपिपेट एक आरबीसी को एस्पिरेट्स करता है और एक मनका एक बायोटिन-स्ट्रेप्टाविडिन इंटरैक्शन के माध्यम से अपने शीर्ष पर चिपका हुआ है । मनका ब्याज की लिगामेंट(चित्रा 1A)के साथ लेपित है । लक्ष्य माइक्रोपिपेट या तो एक सेल या एक मनका ब्याज के रिसेप्टर असर, मनका सेल(चित्रा 1B)और मनका-मनका(चित्रा 1C)मोड, क्रमशः5के अनुरूप ।
बीएफपी निर्माण, असेंबली और डीएफएस प्रायोगिक प्रोटोकॉल को पहले1,6विस्तार से वर्णित किया गया था। संक्षेप में, एक बीएफपी स्पर्श चक्र में 5 चरण होते हैं: दृष्टिकोण, इम्पिंग, संपर्क, रीक और डिसोसिएट(चित्र 1डी)। क्षैतिज आरबीसी शीर्ष स्थिति को एक्सआरबीसीके रूप में चिह्नित किया गया है। शुरुआत में, अनस्ट्रेस्ट (जीरो-फोर्स) आरबीसी विरूपणएक्सआरबीसी 0(टेबल 1)है। इसके बाद लक्ष्य को जांच मनका(चित्रा 1डी)से अतिक्रमण करने और वापस लेने के लिए एक पीजोट्रांसलेटर द्वारा संचालित किया जाता है। आरबीसी जांच पहले नकारात्मक आरबीसी विरूपण के साथ लक्ष्य से संकुचित हैएक्सआरबीसी < 0 । एक बांड घटना में, सकारात्मक आरबीसी विरूपण के साथ एक तन्य चरण के लिए एक संपीड़न से वापस लेना चरण संक्रमण 0(चित्रा 2C और डी)>एक्सआरबीसी ) । हुक के कानून के अनुसार, बीएफपी असर बल को एफ = केआरबीसी ×एक्सआरबीसीके रूप में मापा जा सकताहै, जहां केआरबीसी (टेबल 1)बीएफपी का आरबीसी स्प्रिंग कॉन्स्टेंट है। बांड टूटना और एक स्पर्श चक्र के पूरा होने पर, जांच मनकाशून्य-बलस्थिति में लौटता है, जिसमें एक्सआरबीसी = 0(चित्रा 1D)है।
के आरबीसी का निर्धारण करने केलिए, हमआरबीसीऔर जांच मनका(चित्रा 1A)के बीच जांच माइक्रोपिपेट इनर छिद्र(आरपी),आर सी(आर0)और परिपत्र संपर्क क्षेत्र(आरसी)की रेडी को मापते और रिकॉर्ड करते हैं। फिर केआरबीसी की गणना इवान के मॉडल (Eq. 1)7, 8के अनुसार की जाती है जो एक लैबव्यू प्रोग्राम का उपयोग करके है जो बीएफपी(चित्रा S1A)8, 9को संचालित करने के लिए एक आभासी साधन (VI) के रूप में कार्य करता है।
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/62490/62490eq01.jpg"> (Eq. 1)
एक BFP की स्थापना की और DFS कच्चे डेटा प्राप्त के साथ, इसके द्वारा हम मौजूद कैसे ligand-रिसेप्टर जोड़ी या कोशिकाओं के वसंत स्थिर विश्लेषण करने के लिए । ग्लाइकोसाइलेटेड प्रोटीन थाय-1 और K562 सेल असर इंटीग्रिन α 5 β1(तेरा-1-α 5 β1) कीबातचीत परडीएफएसकच्चे डेटा; आंकड़े 3ए और 3 बी)10 औरफाइबα फाइ β3 (एफजीएन-αआईआईबीβ3) फिब्रिनोजेन और मनका कोटेड इंटीग्रीन के हैं । चित्रा 3C) 11,12 का उपयोग क्रमशः मनका-सेल और मनका-मनका विश्लेषण मोड प्रदर्शित करने के लिए किया गया है।
बीएफपी प्रायोगिक तैयारी बीएफपी प्रायोगिक तैयारी और इंस्ट्रूमेंटेशन के विवरण के लिए, कृपया पहले प्रकाशित प्रोटोकॉल3का उल्लेख करें। संक्षेप में, कार्बन/बाइकार्बोनेट बफर में बायोटिन-PEG3500-NHS का उपयोग करके मानव आरबीसी को बायोटिनीलेटेड किया गया है । फास्फेट बफर में मल-PEG3500-NHS का उपयोग करके बोरोसिलिकेट ग्लास मोतियों के लिए ब्याज के प्रोटीन को एकजुट रूप से जोड़ा गया है । बायोटिनेलेटेड आरबीसी से अटैच करने के लिए, जांच मनका भी MAL-SA का उपयोग कर स्ट्रेप्टाविडिन (एसए) के साथ लेपित है । कृपया सामग्री और तालिका 2की तालिका देखें ।
बीएफपी(चित्रा 1, बाएं)को इकट्ठा करने के लिए, तीसरे माइक्रोपिपेट को 'हेल्पर' कहा जाता है, इसका उपयोग जांच मनका को वितरित करने और इसे आरबीसी के शीर्ष1, 3पर गोंद करने के लिए किया जाएगा। एसए कोटेड प्रोब बीड और बायोटिनेलेटेड आरबीसी के बीच सहसंयोजक बातचीत ब्याज के लिगांड-रिसेप्टर बॉन्ड की तुलना में काफी मजबूत है । इस प्रकार, असंबद्ध चरण को आरबीसी से जांच मनका की टुकड़ी के बजाय लिगांड-रिसेप्टर बॉन्ड टूटना के रूप में समझा जा सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-Mercaptopropyltrimethoxysilane (MPTMS)</td>
			<td>Uct, Specialties, llc</td>
			<td>4420-74-0</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anhy. Sodium Phosphate Dibasic (Na2HPO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7907</td>
			<td>Phosphate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BFP data acquisition VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP control and parameter setting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BFP data analysis VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP raw data analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-PEG3500-NHS</td>
			<td>JenKem</td>
			<td>A5026-1</td>
			<td>RBC biotinylation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate Glass beads</td>
			<td>Distrilab Particle Technology, Netherlands</td>
			<td>9002</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A0336</td>
			<td>Ligand functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP monitoring</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAL-PEG3500-NHS</td>
			<td>JenKem</td>
			<td>A5002-1</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>Carbonate/bicarbonate buffer preparation; Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Carbonate (Na2CO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2127</td>
			<td>Carbonate/bicarbonate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic Monohydrate (NaH2PO4&#8226;H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td>Phosphate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin-Maleimide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9415</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

molecular spring constant analysis by biomembrane force probe spectroscopy

एक बायोमेम्ब्रान फोर्स प्रोब (बीएफपी) हाल ही में एक देशी-सेल-सतह के रूप में या सीटू डायनामिक फोर्स स्पेक्ट्रोस्कोपी (डीएफएस) नैनोटूल के रूप में उभरा है जो एकल आणविक बाध्यकारी गतिज को माप सकता है, लिगांड-रिसेप्टर इंटरैक्शन के यांत्रिक गुणों का आकलन कर सकता है, प्रोटीन गतिशील संरचना परिवर्तनों की कल्पना करता है और अधिक रोमांचक रूप से रिसेप्टर मध्यस्थता सेल मेचनो संवेदन तंत्र को स्पष्ट करता है। हाल ही में, BFP आणविक बांड के वसंत स्थिर उपाय करने के लिए इस्तेमाल किया गया है । यह प्रोटोकॉल आणविक वसंत निरंतर डीएफएस विश्लेषण करने के लिए कदम-दर-कदम प्रक्रिया का वर्णन करता है। विशेष रूप से, दो बीएफपी ऑपरेशन मोड पर चर्चा की जाती है, अर्थात् मनका-सेल और मनका-मनका मोड। यह प्रोटोकॉल डीएफएस कच्चे डेटा से आणविक बंधन और सेल के वसंत स्थिरांक प्राप्त करने पर केंद्रित है।

इस काम में, हमने बीएफपी स्प्रिंग लगातार विश्लेषण के प्रोटोकॉल का प्रदर्शन किया है। मनका-सेल विश्लेषण मोड के लिए, हमने जांच मनका पर लेपित ग्लाइकोसाइलेटेड प्रोटीन थाय-1 के बीच आणविक बंधन के कश्मीरम?...

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Molecular Spring Constant Analysis by Biomembrane Force Probe Spectroscopy

एक बायोमेम्ब्रेन फोर्स प्रोब (बीएफपी) सीटू डायनामिक फोर्स स्पेक्ट्रोस्कोपी (डीएफएस) तकनीक में है। BFP का उपयोग जीवित कोशिकाओं पर आणविक बातचीत के वसंत को मापने के लिए किया जा सकता है। यह प्रोटोकॉल बीएफपी द्वारा पता लगाया आणविक बांड के लिए वसंत निरंतर विश्लेषण प्रस्तुत करता है।

बायोमेम्ब्रान फोर्स प्रोब स्पेक्ट्रोस्कोपी द्वारा आणविक स्प्रिंग निरंतर विश्लेषण

A biomembrane force probe (BFP) has recently emerged as a native-cell-surface or in situ dynamic force spectroscopy (DFS) nanotool that can measure ...

यह वीडियो आणविक वसंत को स्थिर मापने के लिए बायोमेम्ब्रान फोर्स प्रोब, या बीएफपी का उपयोग करने पर कदम-दर-कदम प्रक्रियाओं का वर्णन करता है। बल जांच में, बीएफपी हाल ही में देशी कोशिका की सतह में या सीटू डायनामिक फोर्स स्पेक्ट्रोस्कोपी विश्लेषण में उभरा है । इस तकनीक का मुख्य उद्देश्य एकल अणु बाध्यकारी आनुवंशिकी को मापना है।यह डेटा विश्लेषण प्रक्रिया एक सरल लेकिन शक्तिशाली संदेश है और यांत्रिक जानकारी प्रदान करता है, विशेष रूप से गतिशील बल और अणुओं को व्यक्त करने वाली कोशिका झिल्ली की सूजन। बीएफपी प्रयोग चक्र के दौरान, लाल रक्त कोशिका और प्रोबेट के साथ जांच माइक्रोबायोम शर्त, लक्ष्य कोशिका और जांच और लक्ष्य के बीच लिगांड रिसेप्टर आणविक संबंध एक श्रृंखला जुड़े मस्तिष्क प्रणाली के रूप में माना जा सकता है । है Hooke कानून के आधार पर, एक श्रृंखला जुड़े वसंत प्रणाली के कुल वसंत स्थिर के पारस्परिक प्रत्येक एक घटक के व्युत्क्रम वसंत स्थिर के योग के बराबर है, के रूप में समीकरण से पता चलता है ।लाल रक्त कोशिका के वसंत स्थिर की गणना घटनाओं की गति के आधार पर की जाती है, जो छिद्र में जांच माइक्रोपिपेट के रेडियल पर निर्भर करती है। लाल रक्त कोशिका, लाल रक्त कोशिका और प्रोबेट और माइक्रो-पिपेट एस्पिरेटिंग प्रेस के बीच परिपत्र संपर्क क्षेत्र। बीएफपी रोड डेटा एक होममेड लेफ्ट व्यू वर्चुअल इंस्ट्रूमेंट द्वारा प्राप्त किया जाता है, जो एक पीए अनुवादक द्वारा लक्ष्य माइक्रो-पिपेट के आंदोलन को नियंत्रित करता है।एक पूर्ण पीएफपी स्पर्श चक्र में पांच चरण होते हैं। दृष्टिकोण. Impinge.Contact. वापस लेना और अलग करना । शुरुआत में, तनाव करता है रोबस्टो APICS स्थिति को चिह्नित किया जाता है क्योंकि एक्स काले देश में 0 के बराबर होता है।लक्ष्य तो एक टुकड़ा या अनुवादक द्वारा प्रेरित करने पर अतिक्रमण और मजबूत सेक करने के लिए नकारात्मक प्रोबेट आंदोलन का कारण है । आप इसे लाल डैश लाइन में शून्य से छोटे एक्स के रूप में नोट करते हैं। रियाव चरण में, लाल बुस्टो शीर्ष एक्स से शून्य स्थिति से छोटे होते हैं जो शून्य स्थिति के बराबर होते हैं जिसे कंप्रेसिव चरण के रूप में संदर्भित किया जाता है।यदि लिगांड रिसेप्टर अणु परिसर के बीच एक बंधन बनता है, तो लाल रक्त कोशिका अन्य सकारात्मक दिशा से अलग होगी। शून्य अवधि से अधिक इस एक्स को वापस लेने के चरण के रूप में जाना जाता है। वापस लेना चरण संबंध के अणु के वसंत स्थिर निर्धारित करने के लिए सबसे महत्वपूर्ण हिस्सा है।बीएसपी डेटा अधिग्रहण मंच का उपयोग करके बल बनाम समय सड़क डेटा एकत्र करें। प्रत्येक प्रयोग आमतौर पर 50 से 200 स्पर्श चक्र रिकॉर्ड करते हैं, पीएफपी डेटा विश्लेषण सॉफ्टवेयर खोलें। येलो फोल्डर आइकन पर क्लिक करें और उन पर डबल क्लिक करके संबंधित पंक्ति डेटा फ़ाइल का चयन करें।हम कार्यक्रम पर हैं। फिर घटनाओं के बीच स्विच करने के लिए अप और डाउन एरो बटन पर क्लिक करें। अमान्य घटनाओं को स्क्रीन करने के लिए आउटलियर अपवर्जन मानदंडों का उपयोग करना।निर्यात करने वाले डेटा प्रकार का चयन करें जो समय प्रारूप के लिए मजबूर है और उचित समय सीमा चुनता है। एक्सपोर्ट प्लॉट डाटा बटन पर क्लिक करें। निर्यात किए गए डेटा को डिफ़ॉल्ट रूप से टेक्स्ट फाइल के रूप में सहेजा जाता है।इस टेक्स्ट फाइल में डेटा के दो कॉलम होते हैं। यह पहला कॉलम है जो समय के पिता का प्रतिनिधित्व करता है और दूसरा कॉलम प्रत्येक समय बिंदु पर इसी बल का प्रतिनिधित्व करता है। बल बनाम समय वक्र स्प्रेडशीट सॉफ्टवेयर का उपयोग करने के लिए मजबूर बनाम विस्थापन वक्र प्राप्त करने के लिए साजिश ।विलो स्टील पीएसओ आंदोलन द्वारा प्रत्येक डेटा बिंदु के समय मूल्य को गुणा करें। प्रत्येक डेटा बिंदु से सबसे छोटे विस्थापन मूल्य को घटाकर पहले डेटा बिंदु को शून्य करें। यह क्षैतिज परिवर्तन बाद के वसंत निरंतर गणना को प्रभावित नहीं करता है।बल बनाम विस्थापन वक्र में, दो अलग अभिनेता समूह अलग था अगर नए बल ढलान की पहचान की जा सकती है । प्रत्येक कंप्रेसिव चरण और 10 शैली चरण का प्रतिनिधित्व करता है। प्रत्येक डेटा समूह के लिए एक प्रतिगमन लाइन फिट करें।खड़ी ढलान के साथ लाइन K1 के रूप में चिह्नित एक कंप्रेसर चरण में कुल वसंत स्थिर का प्रतिनिधित्व करता है । और लाइन है कि सबसे छोटा शीर्ष था इस 10 शैली चरण में लाइन का प्रतिनिधित्व करता है K2.As मैंने उल्लेख किया है के रूप में चिह्नित, कुल वसंत स्थिर श्रृंखला वसंत प्रत्येक घटक के स्थिर के बेटे के पारस्परिक है । बीट टू सेल मोड के कंप्रेसिव चरण के दौरान, आणविक संबंध नहीं बढ़ाया जाता है, इसलिए आणविक संबंध वसंत स्थिर को ध्यान में नहीं रखा जाता है। लक्ष्य सेल के वसंत स्थिर समीकरण प्रदर्शित जहां K1 कंप्रेसर चरण के दौरान कुल वसंत स्थिर का प्रतिनिधित्व करता है के रूप में वर्णित है ।मोड बेचने के लिए हरा के 10 शैली चरण में, कुल वसंत स्थिर लाल रक्त कोशिका आणविक बांड के उवर्स वसंत स्थिर का सूर्य है। और लक्ष्य सेल, अणु संबंध वसंत स्थिर है, जो K2 कुल वसंत स्थिर का प्रतिनिधित्व करता है की गणना करने के लिए प्रदर्शित समीकरण का उपयोग करें । आप 10 स्टॉप फेज पढ़ें ।बीट टू बीट मोड में, चूंकि बी विरूपण नगण्य है, इसलिए वह शब्द जो लक्ष्य सेल स्प्रिंग निरंतर दृष्टिकोण शून्य के विपरीत का वर्णन करता है, इसलिए कंप्रेसर चरण में कुल वसंत स्थिर लाल रक्त कोशिका वसंत के बराबर है जो निम्नलिखित समीकरण के रूप में लगातार दिखा रहा है। तन्य चरण में, आणविक संबंध के वसंत स्थिर लाल रक्त कोशिका के प्रभाव को घटाकर निम्नलिखित समीकरण के रूप में दिखा सकते हैं। साइड-विंड इंटीग्रेटिंग रवैया बी, बीटा 3 कॉम्प्लेक्स, K562 सेल और फेब्रिफुजिन एकीकृत रवैया बी बीटा तीन जटिल के वसंत स्थिरांक ले लीजिए, न्यूटन या नैनोमीटर स्केल लेने पर व्युत्पन्न वसंत स्थिरांक के मतलब और मानक विचलन की गणना करें।अब आपको इस बात की बेहतर समझ होनी चाहिए कि वीएफडी डेटा से लगातार मापने और वसंत के लिए क्या आवश्यकताएं हैं। बीट टू सेल मोड और बीट टू बीट मोड के बीच मतभेदों को देखा जाना चाहिए। विभिन्न अणु प्रस्तुत सेवा वसंत स्थिर के उपाय करने के लिए अलग सुरक्षा होगी ।अंत में, यह कदम-दर-कदम प्रक्रिया बीएफपी का उपयोग करके आणविक वसंत निरंतर विश्लेषण करने का वर्णन करती है। हमें उम्मीद है कि बीएफपी डेटा अधिग्रहण और डीएफएस विश्लेषण को एक कंप्यूटर रेस्ट प्रोग्राम में स्वचालित और एकीकृत करने के लिए भविष्य के प्रयास किए जाएंगे। पूरे बीएफपी ऑपरेशन डेटा विश्लेषण को अधिक उपयोगकर्ता के अनुकूल और उच्च बना रहा है।

Research

JoVE Journal

Bioengineering

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