Name: molecular spring constant analysis by biomembrane force probe spectroscopy
Uploaded: 2021-11-20T13:00:00
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Agradecemos a Guillaume Troadec por la útil discusión, a Zihao Wang por la consulta de hardware y a Sydney Manufacturing Hub, Gregg Suaning y Simon Ringer por el apoyo a nuestra startup de laboratorio. Este trabajo fue apoyado por el Proyecto de Descubrimiento del Consejo australiano de Investigación (DP200101970 - L.A.J.), el Programa de Desarrollo de Capacidades Cardiovasculares de NSW (Early-Mid Career Researcher Grant - L.A.J.), el premio Sydney Research Accelerator (SOAR - L.A.J.), Ramaciotti Foundations Health Investment Grant (2020HIG76 - L.A.J.), National Health and Medical Research Council Ideas Grant (APP2003904 - L.A.J.), y The University of Sydney Faculty of Engineering Startup Fund and Major Equipment Scheme (L.A.J.). Lining Arnold Ju es miembro del Consejo Australiano de Investigación DECRA (DE190100609).

1. Obtener eventos DFS analizables
<ol><li>Inicie el experimento en el software (por ejemplo, LabVIEW VI) para el control BFP y la configuración de parámetros(Figura S1A).</li>
	<li>Observe los toques repetitivos de perlas/celdas de la sonda en el software para BFP Monitor(Figura S1B).</li>
	<li>Pruebe y logre la frecuencia de adhesión ≤ 20% dentro de los primeros 50 toques ajustando la fuerza de pinzamiento y el tiempo de contacto, por lo que se asegura que ≥ el 89% del evento ...

<ol>
	<li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+Biomembrane+Force+Probe:+Concurrent+Quantitation+of+Receptor-ligand+Kinetics+and+Binding-induced+Intracellular+Signaling+on+a+Single+Cell.">Fluorescence Biomembrane Force Probe: Concurrent Quantitation of Receptor-ligand Kinetics and Binding-induced Intracellular Signaling on a Single Cell.</a> The Journal of Visualized Experiments. (102), e52975 (2015).</li><li>Su, Q. P., Ju, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+nanotools+for+single-molecule+dynamics.">Biophysical nanotools for single-molecule dynamics.</a> Biophysics Reviews. 10 (5), 1349-1357 (2018).</li><li>Ju, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+Force+Spectroscopy+Analysis+on+the+Redox+States+of+Protein+Disulphide+Bonds.">Dynamic Force Spectroscopy Analysis on the Redox States of Protein Disulphide Bonds.</a> Methods in Molecular Biology. 1967, 115-131 (2019).</li><li>An, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-stable+Biomembrane+Force+Probe+for+Accurately+Determining+Slow+Dissociation+Kinetics+of+PD-1+Blockade+Antibodies+on+Single+Living+Cells.">Ultra-stable Biomembrane Force Probe for Accurately Determining Slow Dissociation Kinetics of PD-1 Blockade Antibodies on Single Living Cells.</a> Nano Letters. 20 (7), 5133-5140 (2020).</li><li>Chen, Y., Ju, L., Rushdi, M., Ge, C., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor-mediated+cell+mechanosensing.">Receptor-mediated cell mechanosensing.</a> Molecular Biology of the Cell. 28 (23), 3134-3155 (2017).</li><li>Ju, L., Chen, Y., Rushdi, M. N., Chen, W., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-Dimensional+Analysis+of+Cross-Junctional+Molecular+Interaction+by+Force+Probes.">Two-Dimensional Analysis of Cross-Junctional Molecular Interaction by Force Probes.</a> Methods in Molecular Biology. 1584, 231-258 (2017).</li><li>Evans, E., Ritchie, K., Merkel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+force+technique+to+probe+molecular+adhesion+and+structural+linkages+at+biological+interfaces.">Sensitive force technique to probe molecular adhesion and structural linkages at biological interfaces.</a> Biophysical Journal. 68 (6), 2580-2587 (1995).</li><li>Ju, L., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benchmarks+of+Biomembrane+Force+Probe+Spring+Constant+Models.">Benchmarks of Biomembrane Force Probe Spring Constant Models.</a> Biophysical Journal. 113 (12), 2842-2845 (2017).</li><li>Evans, E., Ritchie, K., Merkel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+Force+Technique+to+Probe+Molecular+Adhesion+and+Structural+Linkages+at+Biological+Interfaces.">Sensitive Force Technique to Probe Molecular Adhesion and Structural Linkages at Biological Interfaces.</a> Biophysical Journal. 68, 2580 (1995).</li><li>Fiore, V. F., Ju, L., Chen, Y., Zhu, C., Barker, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+catch+of+a+Thy-1-alpha5beta1+syndecan-4+trimolecular+complex.">Dynamic catch of a Thy-1-alpha5beta1+syndecan-4 trimolecular complex.</a> Nature Communications. 5, 4886 (2014).</li><li>Passam, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechano-redox+control+of+integrin+de-adhesion.">Mechano-redox control of integrin de-adhesion.</a> Elife. 7, (2018).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+integrin+alphaIIbbeta3+intermediate+affinity+state+mediates+biomechanical+platelet+aggregation.">An integrin alphaIIbbeta3 intermediate affinity state mediates biomechanical platelet aggregation.</a> Nature Materials. 18 (7), 760-769 (2019).</li><li>Chen, Y., Lee, H., Tong, H., Schwartz, M., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+regulated+conformational+change+of+integrin+&#945;V&#946;3.">Force regulated conformational change of integrin &#945;V&#946;3.</a> Matrix Biology. 60, 70-85 (2017).</li><li>Liu, B., Chen, W., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+force+spectroscopy+on+cells.">Molecular force spectroscopy on cells.</a> Annual Review of Physical Chemistry. 66, 427-451 (2015).</li><li>Piper, J. W., Swerlick, R. A., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+force+dependence+of+two-dimensional+receptor-ligand+binding+affinity+by+centrifugation.">Determining force dependence of two-dimensional receptor-ligand binding affinity by centrifugation.</a> Biophysical Journal. 74 (1), 492-513 (1998).</li><li>Ju, L., Dong, J. -. f., Cruz, M. A., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+N-terminal+flanking+region+of+the+A1+domain+regulates+the+force-dependent+binding+of+von+Willebrand+factor+to+platelet+glycoprotein+Ib&#945;.">The N-terminal flanking region of the A1 domain regulates the force-dependent binding of von Willebrand factor to platelet glycoprotein Ib&#945;.</a> Journal of Biological Chemistry. 288 (45), 32289-32301 (2013).</li><li>Ju, L., Chen, Y., Xue, L., Du, X., Zhu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cooperative+unfolding+of+distinctive+mechanoreceptor+domains+transduces+force+into+signals.">Cooperative unfolding of distinctive mechanoreceptor domains transduces force into signals.</a> Elife. 5, 15447 (2016).</li></ol>

En resumen, hemos proporcionado un protocolo detallado de análisis de datos para preprocesar los datos brutos de DFS y derivar constantes de resorte molecular en los modos de análisis BFP Bead-Bead y Bead-Cell. Se presentan los modelos biomecánicos y las ecuaciones necesarias para determinar las constantes de resorte moleculares y celulares. Aunque se estudian diferentes integrinas, el kmol medido por el modo Bead-Bead y el modo Bead-Cell posee diferencias de rango significativas<strong class="xfig...

Como una técnica de DFS de células vivas, BFP diseña un glóbulo rojo humano (RBC; Figura 1) en un transductor de fuerza ultrasensible y sintonizable con un rango constante de resorte compatible a 0.1-3 pN/nm1,2,3. Para sondear la interacción ligando-receptor, BFP permite mediciones de DFS a ~1 pN(10 -12 N), ~3 nm(10 -9 m) y ~0.5 ms (10-3 s) en resolución de fuerza, espacial y temporal4,5. Su configuración experimental consiste en dos micropipetas opuestas, a saber, la sonda y el objetivo. La micropipeta de la sonda aspira un glóbulo rojo y una cuenta se pega en su ápice a través de una interacción biotina-estreptavidina. La cuenta está recubierta con el ligando de interés(Figura 1A). La micropipeta objetivo aspira una célula o una cuenta que lleva el receptor de interés, correspondiente a los modos Bead-Cell (Figura 1B) y Bead-Bead (Figura 1C), respectivamente5.
La construcción de BFP, el montaje y los protocolos experimentales DFS se describieron en detalle anteriormente1,6. Brevemente, un ciclo táctil BFP consta de 5 etapas: Aproximación, Incidente, Contacto, Retracción y Disociación(Figura 1D). La posición horizontal del ápice de RBC se denota como ΔxRBC. Al principio, la deformación de RBC no astresada (fuerza cero) ΔxRBC es 0 (Tabla 1). El objetivo es entonces impulsado por un piezotraduclador para inmisionar y retraerse de la cuenta de sonda (Figura 1D). La sonda RBC es comprimida primero por el Target con deformación negativa de RBC ΔxRBC < 0. En un evento de Bond, la etapa de retracción pasa de una fase compresiva a una fase de tracción con deformación positiva deRBC ΔxRBC > 0 ( Figura2C y D). De acuerdo con la ley de Hooke, la fuerza de soporte BFP puede medirse como F = kRBC × ΔxRBC, donde kRBC (Tabla 1)es la constante de resorte RBC del BFP. Tras la ruptura del enlace y la finalización de un ciclo de toque, la cuenta de sonda vuelve a la posición de fuerza cero con ΔxRBC = 0 (Figura 1D).
Para determinar el kRBC,medimos y registramos los radios del orificio interno de la micropipeta de la sonda (Rp), el RBC (R0) y el área de contacto circular (Rc) entre el RBC y la cuenta de la sonda ( Figura1A). Luego se calcula kRBC de acuerdo con el modelo de Evan (Eq. 1)7,8 utilizando un programa LabVIEW que actúa como un instrumento virtual (VI) para operar el BFP(Figura S1A)8,9.
<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/62490/62490eq01.jpg"> (Eq. 1)
Con un BFP establecido y datos brutos DFS obtenidos, a continuación presentamos cómo analizar la constante de resorte del par ligando-receptor o células. Los datos brutos de DFS sobre la interacción de la proteína glicosilada Thy-1 y la integrina portadora de células K562 α5β1 (Thy-1-α5β1; Figuras 3A y 3B)10 y la de la integrina recubierta de fibrinógeno y cuentas αIIbβ3 (FGN-αIIbβ3; Figura 3C) 11,12 se han utilizado para demostrar los modos de análisis Bead-Cell y Bead-Bead, respectivamente.
Preparación experimental BFP Para obtener detalles sobre la preparación experimental y la instrumentación de BFP, consulte los protocolos publicados anteriormente3. En resumen, los glóbulos rojos humanos se han biotinilado utilizando la biotina-PEG3500-NHS en el tampón de carbono / bicarbonato. Las proteínas de interés se han acoplado covalentemente a las perlas de vidrio de borosilicato utilizando MAL-PEG3500-NHS en el tampón de fosfato. Para adherirse al RBC biotinilado, la perla de la sonda también está recubierta con estreptavidina (SA) utilizando el MAL-SA. Consulte la Tabla de materiales y la Tabla 2.
Para ensamblar el BFP(Figura 1, izquierda),se utilizará la tercera micropipeta denominada 'Ayudante' para entregar la cuenta de sonda y pegarla al vértice1,3del RBC. La interacción covalente entre la cuenta de sonda recubierta de SA y los glóbulos rojos biotinilados es mucho más fuerte que el enlace ligando-receptor de interés. Por lo tanto, la etapa disociada puede interpretarse como la ruptura del enlace ligando-receptor en lugar del desprendimiento de la cuenta de sonda del RBC.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-Mercaptopropyltrimethoxysilane (MPTMS)</td>
			<td>Uct, Specialties, llc</td>
			<td>4420-74-0</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anhy. Sodium Phosphate Dibasic (Na2HPO4)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7907</td>
			<td>Phosphate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BFP data acquisition VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP control and parameter setting</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BFP data analysis VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP raw data analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotin-PEG3500-NHS</td>
			<td>JenKem</td>
			<td>A5026-1</td>
			<td>RBC biotinylation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate Glass beads</td>
			<td>Distrilab Particle Technology, Netherlands</td>
			<td>9002</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A0336</td>
			<td>Ligand functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Camera VI</td>
			<td>LabVIEW</td>
			<td></td>
			<td>BFP monitoring</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7021</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3375</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MAL-PEG3500-NHS</td>
			<td>JenKem</td>
			<td>A5002-1</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S5761</td>
			<td>Carbonate/bicarbonate buffer preparation; Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Carbonate (Na2CO3)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2127</td>
			<td>Carbonate/bicarbonate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td>Tyrode&#8217;s buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Phosphate Monobasic Monohydrate (NaH2PO4&#8226;H2O)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td>Phosphate buffer preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin-Maleimide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S9415</td>
			<td>Glass bead functionalization</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

molecular spring constant analysis by biomembrane force probe spectroscopy

Una sonda de fuerza de biomembrana (BFP) ha surgido recientemente como una nanoherramienta de espectroscopia de fuerza dinámica (DFS) de superficie celular nativa o in situ que puede medir la cinética de unión molecular única, evaluar las propiedades mecánicas de las interacciones ligando-receptor, visualizar los cambios conformacionales dinámicos de proteínas y dilucidar de manera más emocionante los mecanismos de menosensión celular mediados por el receptor. Más recientemente, BFP se ha utilizado para medir la constante de resorte de los enlaces moleculares. Este protocolo describe el procedimiento paso a paso para realizar el análisis DFS constante de resorte molecular. Específicamente, se discuten dos modos de operación BFP, a saber, los modos Bead-Cell y Bead-Bead. Este protocolo se centra en derivar constantes de resorte del enlace molecular y la célula a partir de datos brutos de DFS.

En este trabajo, hemos demostrado el protocolo del análisis de constantes de resorte BFP. Para el modo de análisis Bead-Cell, se analizó el kmol del enlace molecular entre la proteína glicosilada Thy-1 recubierta en la cuenta probe y la integrina α5β1 expresada en la célula Target K562 (Thy-1-integrina α5β1; Figura 3A) 10. Lacelda ktambién se deriva del modo Bead-Cell (K562 ...

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Molecular Spring Constant Analysis by Biomembrane Force Probe Spectroscopy

Una sonda de fuerza de biomembrana (BFP) es una técnica de espectroscopia de fuerza dinámica in situ (DFS). BFP se puede utilizar para medir la constante de resorte de las interacciones moleculares en las células vivas. Este protocolo presenta análisis constantes de resorte para enlaces moleculares detectados por BFP.

Análisis constante de resorte molecular mediante espectroscopia de sonda de fuerza de biomembrana

A biomembrane force probe (BFP) has recently emerged as a native-cell-surface or in situ dynamic force spectroscopy (DFS) nanotool that can measure ...

Este video describe los procedimientos paso a paso sobre el uso de la sonda de fuerza de biomembrana, o BFP para medir la constante de resorte molecular. En la sonda de fuerza, BFP ha surgido recientemente en la superficie celular nativa o en el análisis de espectroscopia de fuerza dinámica SITU. El objetivo principal de esta técnica es medir la genética de unión a una sola molécula.Este procedimiento de análisis de datos es un mensaje simple pero poderoso y proporciona información mecánica, específicamente la fuerza dinámica y la inflamación de las moléculas que expresan la membrana celular. Durante el ciclo de experimento BFP, el microbioma de la sonda apuesta con el glóbulo rojo y la sucesión, la célula objetivo y el enlace molecular del receptor de ligando entre la sonda y el objetivo puede considerarse como un sistema cerebral conectado en serie. Basado en la ley de Hooke, el recíproco de la constante de resorte total de un sistema de resorte conectado en serie es igual a la suma de la constante de resorte inverso de cada componente individual, como muestra la ecuación.La constante de resorte de los glóbulos rojos se calcula en función del movimiento de los eventos, que depende de la radial de la micropipeta de la sonda en el orificio. El glóbulo rojo, el área de contacto circular entre el glóbulo rojo y la sucesión y la presión aspiradora de micro-pipeta. Los datos de la carretera BFP se obtienen mediante un instrumento virtual de vista izquierda casero, que controla el movimiento de la micro-pipeta objetivo por un traductor de PA.Un ciclo táctil PFP completo consta de cinco etapas. Approach.Impinge.Contact. Retraerse y disociarse. Al principio, enfatiza que la posición robusto de APICS se denota como X es igual a 0 en negro deshine.El objetivo es entonces impulsado por una pieza o traductor para incider y comprimir el robusto para causar un movimiento de sucesión negativo. Lo notas como X más pequeño que cero en la línea de guión roja. En la etapa de retracción, el vértice busto rojo se mueve de la posición X más pequeña que cero a la posición X igual a cero conocida como la fase de compresión.Si se forma un enlace entre el complejo de moléculas receptoras de ligando, el glóbulo rojo sería aún más diferente a otra dirección positiva. Este período X mayor que cero se conoce como la fase de tracción de la etapa de retracción. La etapa de retracción es la parte más crítica para determinar la constante de resorte de la molécula de enlace.Recopile datos de carretera de fuerza versus tiempo utilizando la plataforma de adquisición de datos BSP. Cada experimento suele grabar de 50 a 200 ciclos táctiles, Abra el software de análisis de datos PFP. Haga clic en el icono de carpeta amarilla y seleccione el archivo de datos de fila correspondiente haciendo doble clic en ellos.Estamos en el programa. Luego haga clic en los botones de flecha arriba y abajo para cambiar entre eventos. Uso de los criterios de exclusión de valores atípicos para descartar eventos no válidos.Seleccione el tipo de datos de exportación que se fuerza al formato de tiempo y elija el intervalo de tiempo de estado adecuado. Haga clic en el botón exportar datos de gráfico. Los datos exportados se guardan como archivo de texto de forma predeterminada.Este archivo de texto contiene dos columnas de datos. Es la primera columna que representa los papás del tiempo y la segunda columna que representa la fuerza correspondiente en cada punto de tiempo. Traza la curva de fuerza versus tiempo usando software de hojas de cálculo para obtener la curva forzada versus desplazamiento.Multiplica el valor de tiempo de cada punto de datos por el movimiento PSO de Willow Steel. Cero el primer punto de datos restando el valor de desplazamiento más pequeño de cada punto de datos. Esta transformación horizontal no afecta al cálculo posterior de la constante de resorte.En la curva de fuerza versus desplazamiento, dos grupos de actores distintos fueron diferentes si se puede identificar la nueva pendiente de fuerza. Cada uno representa la fase compresiva y la fase de estilo 10. Ajuste una línea de regresión a cada grupo de datos.La línea con pendiente más pronunciada representa la constante total del resorte en una fase de compresor denotada como K1. Y la línea que era la parte superior más pequeña representa la línea en esta fase de estilo 10 denotada como K2.As he mencionado, la constante de resorte total es la recíproca del hijo de la constante de resorte de serie de cada componente. Durante la fase de compresión del modo latido a célula, el enlace molecular no se estira, por lo tanto, no se tiene en cuenta la constante de resorte de enlace molecular. La constante de resorte de la celda objetivo se describe como la ecuación que se muestra donde K1 representa la constante de resorte total durante la fase del compresor.En la fase de estilo 10 del modo beat to sell, la constante total de primavera es la constante de primavera del sol de la constante de primavera inversa del enlace molecular de glóbulos rojos. Y la célula objetivo, use la ecuación que se muestra para calcular la constante de resorte de enlace del molécular, que K2 representa la constante de resorte total. Lees la fase de 10 paradas.En el modo latido a latido, dado que la deformación B es insignificante, el término que describe el inverso de la constante de resorte de la célula objetivo se acerca a cero, por lo tanto, la constante de resorte total en la fase del compresor es equivalente a la constante de resorte de glóbulos rojos que se muestra como la siguiente ecuación. En la fase de tracción, la constante de resorte del enlace molecular se puede calcular restando el efecto del glóbulo rojo que se muestra como la siguiente ecuación. Recopile las constantes de resorte del complejo de integración de viento lateral B, beta 3, la celda K562 y el complejo de actitud integradora de febrifugina B Beta tres, calcule la media y la desviación estándar de las constantes de resorte derivadas a una escala de Newton o nanómetros.Ahora debe tener una mejor comprensión de cuáles son los requisitos para la medición y la constante de resorte de los datos VFD. Se deben notar las diferencias entre el modo beat to cell y el modo beat to beat. Diferentes moléculas que presentan servicio tendrán diferentes defensas a la medida de la constante de resorte.En conclusión, este procedimiento paso a paso describe cómo realizar análisis constantes de resorte molecular utilizando BFP. Prevemos que se harán esfuerzos futuros para automatizar e integrar la adquisición de datos BFP y el análisis DFS en un programa de descanso informático. Haciendo que todo el análisis de datos de operación de BFP sea más fácil de usar y alto en todo momento.

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