Name: in vitro induction of human dental pulp stem cells toward pancreatic lineages
Uploaded: 2021-09-25T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Induction of Human Dental Pulp Stem Cells Toward Pancreatic Lineages at JoVE.com

وقد تم دعم SK وWR وQDL من قبل وحدة أبحاث الخلايا الجذعية البيطرية والهندسة الحيوية ، صندوق الوقف Ratchadaphiseksomphot ، جامعة شولالونغكورن. تم دعم TO و PP من قبل تشولالونغكورن التقدم الأكاديمي في مشروعها القرن2. وقد تم دعم CS من خلال منحة دعم بحثية من كلية العلوم البيطرية ، والتقدم الأكاديمي Chulalongkorn في مشروع القرن الثاني ، والخلايا الجذعية البيطرية ووحدة أبحاثالهندسة الحيوية ، وصندوق الوقف Ratchadaphiseksomphot ، وجامعة شولالونغكورن ، وصندوق البحوث الحكومية.

تم تنفيذ هذا العمل وفقا لإعلان هلسنكي ووافقت عليه لجنة أخلاقيات البحوث البشرية، كلية طب الأسنان، جامعة شولالونغكورن. تم عزل DPSCs البشرية (hDPSCs) من أنسجة لب الأسنان البشرية المستخرجة من كل من premolars والأضراس بسبب مشاكل أسنان العقل. تم الحصول على موافقة مستنيرة من المرضى بموجب بروتوكول معتمد (HRE...

<ol>
	<li>Cho, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IDF+diabetes+atlas:+Global+estimates+of+diabetes+prevalence+for+2017+and+projections+for+2045.">IDF diabetes atlas: Global estimates of diabetes prevalence for 2017 and projections for 2045.</a> Diabetes Research and Clinical Practice. 138, 271-281 (2018).</li><li>Danaei, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=National,+regional,+and+global+trends+in+fasting+plasma+glucose+and+diabetes+prevalence+since+1980:+systematic+analysis+of+health+examination+surveys+and+epidemiological+studies+with+370+country-years+and+2.7+million+participants.">National, regional, and global trends in fasting plasma glucose and diabetes prevalence since 1980: systematic analysis of health examination surveys and epidemiological studies with 370 country-years and 2.7 million participants.</a> Lancet. 378 (9785), 31-40 (2011).</li><li>Diabetes Care. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimizing+hypoglycemia+in+diabetes.">Minimizing hypoglycemia in diabetes.</a> Diabetes Care. 38 (8), 1583 (2015).</li><li>Health Quality Ontario. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation:+an+evidence-based+analysis.">Islet transplantation: an evidence-based analysis.</a> Ontario Health Technology Assessment Series. 3 (4), 1-45 (2003).</li><li>Brennan, D. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+follow-up+of+the+Edmonton+protocol+of+islet+transplantation+in+the+United+States.">Long-term follow-up of the Edmonton protocol of islet transplantation in the United States.</a> American Journal of Transplantation. 16 (2), 509-517 (2016).</li><li>Korsgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+encapsulation:+Physiological+possibilities+and+limitations.">Islet encapsulation: Physiological possibilities and limitations.</a> Diabetes. 66 (7), 1748-1754 (2017).</li><li>Kuncorojakti, S., Srisuwatanasagul, S., Kradangnga, K., Sawangmake, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-Producing+Cell+Transplantation+Platform+for+Veterinary+Practice.">Insulin-Producing Cell Transplantation Platform for Veterinary Practice.</a> Frontiers in Veterinary Science. 7, 4 (2020).</li><li>Sawangmake, C., Nowwarote, N., Pavasant, P., Chansiripornchai, P., Osathanon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+feasibility+study+of+an+in+vitro+differentiation+potential+toward+insulin-producing+cells+by+dental+tissue-derived+mesenchymal+stem+cells.">A feasibility study of an in vitro differentiation potential toward insulin-producing cells by dental tissue-derived mesenchymal stem cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 452 (3), 581-587 (2014).</li><li>Sawangmake, C., Rodprasert, W., Osathanon, T., Pavasant, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrative+protocols+for+an+in+vitro+generation+of+pancreatic+progenitors+from+human+dental+pulp+stem+cells.">Integrative protocols for an in vitro generation of pancreatic progenitors from human dental pulp stem cells.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 530 (1), 222-229 (2020).</li><li>Kuncorojakti, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate/Pluronic+F127-based+encapsulation+supports+viability+and+functionality+of+human+dental+pulp+stem+cell-derived+insulin-producing+cells.">Alginate/Pluronic F127-based encapsulation supports viability and functionality of human dental pulp stem cell-derived insulin-producing cells.</a> Journal of Biological Engineering. 14, 23 (2020).</li><li>Ritz-Laser, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopic+expression+of+the+beta-cell+specific+transcription+factor+Pdx1+inhibits+glucagon+gene+transcription.">Ectopic expression of the beta-cell specific transcription factor Pdx1 inhibits glucagon gene transcription.</a> Diabetologia. 46 (6), 810-821 (2003).</li><li>Pampusch, M. S., Skinner, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transduction+and+expansion+of+primary+T+cells+in+nine+days+with+maintenance+of+central+memory+phenotype.">Transduction and expansion of primary T cells in nine days with maintenance of central memory phenotype.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (157), (2020).</li><li>Fraga, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+transfection+efficiency+of+pIDUA/nanoemulsion+complexes+in+a+mucopolysaccharidosis+type+I+murine+model.">Factors influencing transfection efficiency of pIDUA/nanoemulsion complexes in a mucopolysaccharidosis type I murine model.</a> International Journal of Nanomedicine. 12, 2061-2067 (2017).</li><li>Balak, J. R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+ex+vivo+lentiviral+transduction+of+primary+human+pancreatic+exocrine+cells.">Highly efficient ex vivo lentiviral transduction of primary human pancreatic exocrine cells.</a> Scientific Reports. 9 (1), 15870 (2019).</li><li>Balaji, S., Zhou, Y., Opara, E. C., Soker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinations+of+Activin+A+or+nicotinamide+with+the+pancreatic+transcription+factor+PDX1+support+differentiation+of+human+amnion+epithelial+cells+toward+a+pancreatic+lineage.">Combinations of Activin A or nicotinamide with the pancreatic transcription factor PDX1 support differentiation of human amnion epithelial cells toward a pancreatic lineage.</a> Cellular Reprogramming. 19 (4), 255-262 (2017).</li><li>Spaeth, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+a+novel+role+for+the+Pdx1+transcription+factor+in+islet+&#946;-Cell+maturation+and+proliferation+during+weaning.">Defining a novel role for the Pdx1 transcription factor in islet &#946;-Cell maturation and proliferation during weaning.</a> Diabetes. 66 (11), 2830-2839 (2017).</li><li>Bastidas-Ponce, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxa2+and+Pdx1+cooperatively+regulate+postnatal+maturation+of+pancreatic+&#946;-cells.">Foxa2 and Pdx1 cooperatively regulate postnatal maturation of pancreatic &#946;-cells.</a> Molecular Metabolism. 6 (6), 524-534 (2017).</li><li>Zhu, Y., Liu, Q., Zhou, Z., Ikeda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PDX1,+Neurogenin-3,+and+MAFA:+critical+transcription+regulators+for+beta+cell+development+and+regeneration.">PDX1, Neurogenin-3, and MAFA: critical transcription regulators for beta cell development and regeneration.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 240 (2017).</li><li>Ma, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+and+transcriptome+profiling+of+progenitor-like+colonies+derived+from+adult+mouse+pancreas.">Culturing and transcriptome profiling of progenitor-like colonies derived from adult mouse pancreas.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 8 (1), 172 (2017).</li><li>Tiedemann, H. B., Schneltzer, E., Beckers, J., Przemeck, G. K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hrabe+de+Angelis,+M.+Modeling+coexistence+of+oscillation+and+Delta/Notch-mediated+lateral+inhibition+in+pancreas+development+and+neurogenesis.">Hrabe de Angelis, M. Modeling coexistence of oscillation and Delta/Notch-mediated lateral inhibition in pancreas development and neurogenesis.</a> Journal of Theoretical Biology. 430, 32-44 (2017).</li><li>Xu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+promotes+the+differentiation+of+human+dental+pulp+mesenchymal+stem+cells+into+insulin-producing+cells+for+improving+the+diabetes+therapy.">Three-dimensional culture promotes the differentiation of human dental pulp mesenchymal stem cells into insulin-producing cells for improving the diabetes therapy.</a> Frontiers in Pharmacology. 10, 1576 (2019).</li><li>Grimm, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineering+under+microgravity+conditions-use+of+stem+cells+and+specialized+cells.">Tissue engineering under microgravity conditions-use of stem cells and specialized cells.</a> Stem Cells and Development. 27 (12), 787-804 (2018).</li><li>Tran, R., Moraes, C., Hoesli, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+clustering+enhances+PDX1+and+NKX6.1+expression+in+pancreatic+endoderm+cells+derived+from+pluripotent+stem+cells.">Controlled clustering enhances PDX1 and NKX6.1 expression in pancreatic endoderm cells derived from pluripotent stem cells.</a> Scientific Reports. 10 (1), 1190 (2020).</li><li>Li, X. Y., Zhai, W. J., Teng, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch+signaling+in+pancreatic+development.">Notch signaling in pancreatic development.</a> International Journal of Molecular Sciences. 17 (1), 48 (2015).</li><li>Motoyama, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+with+specific+soluble+factors+promotes+the+functional+maturation+of+transcription+factor-mediated,+pancreatic+transdifferentiated+cells.">Treatment with specific soluble factors promotes the functional maturation of transcription factor-mediated, pancreatic transdifferentiated cells.</a> PLoS One. 13 (5), 0197175 (2018).</li><li>Baldan, J., Houbracken, I., Rooman, I., Bouwens, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+human+pancreatic+acinar+cells+dedifferentiate+into+an+embryonic+progenitor-like+state+in+3D+suspension+culture.">Adult human pancreatic acinar cells dedifferentiate into an embryonic progenitor-like state in 3D suspension culture.</a> Scientific Reports. 9 (1), 4040 (2019).</li><li>Wedeken, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+murine+pancreatic+progenitors+require+epidermal+growth+factor+and+nicotinamide+for+self-renewal+and+differentiation+in+a+serum-+and+conditioned+medium-free+culture.">Adult murine pancreatic progenitors require epidermal growth factor and nicotinamide for self-renewal and differentiation in a serum- and conditioned medium-free culture.</a> Stem Cells and Development. 26 (8), 599-607 (2017).</li><li>Trott, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+culture+of+self-renewing+pancreatic+progenitors+derived+from+human+pluripotent+stem+cells.">Long-term culture of self-renewing pancreatic progenitors derived from human pluripotent stem cells.</a> Stem Cell Reports. 8 (6), 1675-1688 (2017).</li><li>Kim, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+of+EMSC-islet+co-localizing+composites+for+xenogeneic+porcine+islet+transplantation.">Construction of EMSC-islet co-localizing composites for xenogeneic porcine islet transplantation.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 497 (2), 506-512 (2018).</li><li>Gauthaman, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extra-embryonic+human+Wharton's+jelly+stem+cells+do+not+induce+tumorigenesis,+unlike+human+embryonic+stem+cells.">Extra-embryonic human Wharton's jelly stem cells do not induce tumorigenesis, unlike human embryonic stem cells.</a> Reproductive BioMedicine Online. 24 (2), 235-246 (2012).</li><li>Schiesser, J. V., Wells, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+beta+cells+from+human+pluripotent+stem+cells:+are+we+there+yet.">Generation of beta cells from human pluripotent stem cells: are we there yet.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1311, 124-137 (2014).</li><li>Chmielowiec, J., Borowiak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+differentiation+and+expansion+of+human+pluripotent+stem+cell-derived+pancreatic+progenitors.">In vitro differentiation and expansion of human pluripotent stem cell-derived pancreatic progenitors.</a> The Review of Diabetic Studies. 11 (1), 19-34 (2014).</li></ol>

يؤدي تحقيق إنتاج أعلى من الشركات عبر بروتوكول الإنترنت من الشركات ذات التصلب المتعدد دورا أساسيا في علاج مرض السكري. تعتمد الخطوات الحاسمة للبروتوكول التكاملي على جودة الخلايا التي ستستخدم في النقل ونوعية الخلايا المنقولة. بعض متطلبات الخلية التي يجب التحقق من تحويلها بنجاح هي ضمان صحة ?...

مرض السكري هو مصدر قلق عالمي مستمر. وقدر تقرير للاتحاد الدولي للسكري أن الانتشار العالمي لمرض السكري سيرتفع من 151 مليون في عام 2000 إلى 415 مليون في عام 20151،2. وقد توقعت أحدث دراسة قائمة على علم الأوبئة أن انتشار مرض السكري في جميع أنحاء العالم المقدر سيرتفع من 451 مليون في عام 2017 إلى 693 مليون في عام 20451. وقد تجلى نجاح زرع جزيرة البنكرياس باستخدام بروتوكول ادمونتون لأول مرة في عام 2000، عندما ثبت للحفاظ على إنتاج الأنسولين الذاتية وتحقيق الاستقرار في حالة normoglycemic في النوع الأول مرضى السكري3. ومع ذلك، فإن تطبيق بروتوكول إدمونتون لا يزال يواجه مشكلة اختناق. العدد المحدود من المتبرعين البنكرياس الجثث هي القضية الرئيسية منذ كل مريض مع مرض السكري من النوع الأول يتطلب ما لا يقل عن 2-4 المتبرعين الجزيرة. وعلاوة على ذلك, استخدام على المدى الطويل من العوامل المثبطة للمناعة قد يسبب آثار جانبية تهدد الحياة4,5. ولمعالجة هذا الأمر، ركز تطوير علاج محتمل لمرض السكري في العقد الماضي بشكل رئيسي على توليد خلايا فعالة منتجة للأنسولين (IPCs) من مصادر مختلفة للخلايا الجذعية6.
أصبحت الخلايا الجذعية علاجا بديلا في العديد من الأمراض، بما في ذلك مرض السكري من النوع الأول، والذي يسببه فقدان خلايا بيتا. زرع IPCs هو الأسلوب الواعد الجديد للسيطرة على جلوكوز الدم في هؤلاء المرضى7. 10- وفي هذه المقالة، يعرض نهجان لإنشاء مراكز تشجيع الاستثمار، وهما بروتوكولات تعريف التكاملية وغير التكاملية. بروتوكول التعريفي تحاكي عملية نمو البنكرياس الطبيعية للحصول على IPCs ناضجة وظيفية8,9.
لهذه الدراسة، وتميزت hDPSCs من قبل قياس التدفق الخلوي للكشف عن علامة سطح MSC، وإمكانات التمايز متعدد الخطوط، وRT-qPCR لتحديد التعبير عن خاصية الجذعية وعلامات الجينات التكاثرية (البيانات غير مبين)8،9،10. تم حث hDPSCs نحو الاندوديرم النهائي ، بطانة البنكرياس ، الغدد الصماء البنكرياسية ، وخلايا بيتا البنكرياسية أو IPCs (الشكل 1) ، على التوالي7. للحث على الخلايا، تم استخدام نهج التعريفي من ثلاث خطوات كبروتوكول العمود الفقري. كان يسمى هذا البروتوكول بروتوكول غير تكاملي. في حالة البروتوكول التكاملي ، كان عامل النسخ البنكرياسي الأساسي ، PDX1، مفرط التعبير في hDPSCs يليه تحريض PDX1 مفرط التعبير في hDPSCs باستخدام بروتوكول تمايز من ثلاث خطوات. الفرق بين البروتوكول غير التكاملي والتكاملي هو التعبير المفرط عن PDX1 في البروتوكول التكاملي وليس في البروتوكول غير التكاملي. تمت مقارنة تمايز البنكرياس بين البروتوكولات التكاملية وغير التكاملية في هذه الدراسة.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell Culture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Corporation, USA</td>
			<td>15240062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning&#174; 60 mm TC-treated Culture Dish</td>
			<td>Corning&#174;</td>
			<td>430166</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td>
			<td>12800017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td>
			<td>10270106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX&#8482;</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td>
			<td>35050061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS) powder, pH 7.4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3813-10PAK</td>
			<td>One pack is used for preparing 1 L of PBS solution with sterile DDI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td>
			<td>25200072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentiviral Vector Carrying PDX1 Preparation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon&#174; Ultra-15 Centrifugal Filter</td>
			<td>Merck Millipore, USA</td>
			<td>UFC910024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human pWPT-PDX1 plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>12256</td>
			<td>Gift from Didier Trono; http://n2t.net/addgene:12256; RRID: Addgene_12256</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-HV Syringe Filter Unit, 0.45&#160;&#181;m</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLHV033RB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pMD2.G plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>12259</td>
			<td>Gift from Didier Trono; http://n2t.net/addgene:12259; RRID: Addgene_12259</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene Infection / Transfection Reagent</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>TR-1003-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>psPAX2 plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>12260</td>
			<td>Gift from Didier Trono; http://n2t.net/addgene:12260; RRID: Addgene_12260</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Three-step Induction Protocol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Activin A Recombinant Human Protein</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>GF300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beta-mercaptoethanol</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td>
			<td>21985-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA, Cohn fraction V, fatty acid free)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucagon-like peptide (GLP)-1</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G3265</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin-Transferrin-Selenium (ITS)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>41400-045</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nicotinamide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N0636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Essential Amino Acids (NEAAs)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-treated cell culture dish, 60mm</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30701011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium butyrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B5887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taurine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0625</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro induction of human dental pulp stem cells toward pancreatic lineages

اعتبارا من عام 2000 ، ونجاح زرع جزيرة البنكرياس باستخدام بروتوكول ادمونتون لعلاج مرض السكري من النوع الأول لا تزال تواجه بعض العقبات. وتشمل هذه العدد المحدود من المتبرعين البنكرياس الجثث والاستخدام طويل الأجل لمثبطات المناعة. تعتبر الخلايا الجذعية المتوسطة (MSCs) مرشحا محتملا كمصدر بديل لتوليد خلايا تشبه الجزيرة. وقد أوضحت تقاريرنا السابقة بنجاح وضع بروتوكولات تعريفية للتمييز بين الخلايا الجذعية لب الأسنان البشري (hDPSCs) والخلايا المنتجة للأنسولين (IPCs). ومع ذلك، تباينت كفاءة الاستقراء بشكل كبير. في هذه الورقة، نبين مقارنة كفاءة تحريض البنكرياس hDPSCs عن طريق بروتوكولات تعريفية تكاملية (التلاعب بالبيئات الدقيقة والجينية) وبروتوكولات تعريفية غير تكاملية (التلاعب بالبيئات الدقيقة) لتقديم IPCs المشتقة من hDPSC (hDPSC-IPCs). النتائج تشير إلى كفاءة التعريفي متميزة لكلا النهج التعريفي من حيث هيكل مستعمرة 3 الأبعاد, العائد, علامات مرنا البنكرياس, والممتلكات وظيفية على التحدي الجلوكوز متعددة الجرعة. وستدعم هذه النتائج إنشاء مراكز IPCs منطبقة سريريا ومنصة لإنتاج نسب البنكرياس في المستقبل.

في هذه المقالة، تمت مقارنة نتائج كل من بروتوكولات التعريف. ويتضح المخططات من كل بروتوكولات التعريفي في الشكل 2A، C. في كلا البروتوكولين، تم إجراء التقييم تحت المجهر الخفيف، وتم تحليل الصور مع ImageJ. وتمكنت مركبات الهيدروفلوريك من تشكيل هياكل شبيهة بالمستعمرة منذ الي...

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Induction of Human Dental Pulp Stem Cells Toward Pancreatic Lineages at JoVE.com

In vitro Induction of Human Dental Pulp Stem Cells Toward Pancreatic Lineages

يقدم هذا البروتوكول مقارنة بين بروتوكولين تعريفيين مختلفين للتمييز بين الخلايا الجذعية لب الأسنان البشري (hDPSCs) نحو أنساب البنكرياس في المختبر:البروتوكول التكاملي والبروتوكول غير التكاملي. يولد البروتوكول التكاملي المزيد من الخلايا المنتجة للأنسولين (IPCs).

في المختبر تحريض الخلايا الجذعية لب الأسنان البشري نحو أنساب البنكرياس

As of 2000, the success of pancreatic islet transplantation using the Edmonton protocol to treat type I diabetes mellitus still faced some obstacles. ...

يظهر هذا الفيديو التعريفي في المختبر للخلايا الجذعية لب الأسنان البشري نحو أنساب البنكرياس. تعطي الخلايا الجذعية علاجا بديلا في العديد من الأمراض بما في ذلك مرض السكري من النوع الأول الذي يسبب الخبث البيولوجي لخلايا بيتا. زرع الخلايا المنتجة للأنسولين سيكون الأسلوب الواعد الجديد للتسبب مدى الحياة.في هذا الفيديو يتم وصف نهجين لتوليد الأنسولين إنتاج الخلية، بما في ذلك بروتوكول التعريفي التكاملي وغير التكاملي. وفي هذا الجزء يتم شرح بروتوكول التكامل لتحفيز الخلايا المنتجة للأنسولين من الخلايا الجذعية لب الأسنان البشري. لبروتوكول التعريفي هو لخلط عملية نمو البنكرياس الطبيعية.للحصول على الخلايا الطبيعية والوظيفية المنتجة للأنسولين. لتوليد الأنسولين إنتاج الخلايا من الخلايا الجذعية mesenchymal مثل الخلايا الجذعية لب الأسنان، ويستخدم بروتوكول التعريفي خطوة متعددة. وتستخدم الخلايا الجذعية Mesenchymal في كلمة endoderm نهائي, بطانة البنكرياس, الغدد الصماء البنكرياس ثم البنكرياس بيتا الخلية أو الأنسولين الخلايا المنتجة على التوالي.للحث على الخلايا، يتم استخدام نهج التعريفي ثلاث خطوات كبروتوكول العمود الفقري. استخدم البروتوكول التكاملي انتهاء صلاحية عامل نسخ البنكرياس الأساسي ، PDX-1 ، بواسطة الخلايا الجذعية لب الأسنان البشري. ثم سيتم حث PDX-1 على الخلايا الجذعية المعبر عنها باستخدام بروتوكول التمايز ثلاث خطوات.ويمكن مقارنة إمكانات تمايز البنكرياس، من خلال البروتوكول التكاملي، مع البروتوكول غير التكاملي كما هو موضح في الرسوم المتحركة. تم تنفيذ هذه الفكرة بموجب البروتوكول المعتمد من قبل لجنة أخلاقيات البحوث البشرية ، كلية طب الأسنان ، جامعة شولالونغكورن بموافقة المرضى المستنيرة. بدأ هذا البروتوكول مع انتهاء صلاحية PDX-1.وتستخدم الخلايا الجذعية لب الأسنان البشرية في أجزاء من 2 إلى 5، مع التقاء 70-80٪، ل transduction. يتم محاولة الخلايا والعد. ثم يجلس مليون من الخلايا على وعاء العدوى واحتضانها بين عشية وضحاها.24 ساعة في وقت لاحق يتم إضافة الفيروسات الطازجة التي تحمل الجين PDX-1 إلى السفينة المستزرعة وفقا للتعدد المطلوب من العدوى. ثم يتم الاحتفاظ بالخلايا المصابة في الحاضنة لمدة 24 ساعة. ثم يتم تغيير وسط مثقف جديد والحفاظ عليها لفترة 48 أخرى.يتم فحص مورفولوجيا الخلايا المصابة قبل استخدامها لمزيد من الخطوة التعريفية. ثم يتم Tryptimized الخلايا الجذعية لب الأسنان البشري مع PDX-1 على انتهاء الصلاحية وتعليقها في أول وسيط التعريفي البنكرياس، ما يسمى المتوسطة A.In هذه الخطوة، يتم استخدام مرفق منخفض السفينة المستزرعة. مورفولوجيا PDX-1 على الخلايا الجذعية لب الأسنان البشرية أعرب في اليوم 3 بعد لوحظ التعريفي المتوسطة A.ثم سيتم استخدام الخلايا مع مورفولوجيا جيدة لمزيد من خطوة التعريفي. الخطوة التالية، يتم إضافة وسيط التعريفي الثاني، ما يسمى المتوسط B إلى السفينة المستزرعة. مورفولوجيا PDX-1 على الخلايا الجذعية لب الأسنان البشرية أعرب في اليوم الثاني بعد التعريفي المتوسط لوحظ.ثم سيتم استخدام الخلايا ذات المورفولوجيا الجيدة لمزيد من الخطوة التعريفية. الخطوة التالية، يتم إضافة وسائل الإعلام التعريفي الثالث، ما يسمى المتوسطة C إلى السفينة مثقف. 5 أيام في وقت لاحق لوحظ مورفولوجيا الخلية.يتم جمع مستعمرات الخلايا لمزيد من التحليل. بما في ذلك مورفولوجيا المستعمرة وحجمها ، والتعبير عن علامة جين البنكرياس والممتلكات الوظيفية فيما يتعلق بإفراز الببتيد C -peptide المحفز للجلوكوز أو فحص GSCS. وبالنسبة لنهج الاستقراء غير التكاملي، يستخدم بروتوكول تعريفي من ثلاث خطوات سبق ذكره.يتم إعادة تعليق مليون من الخلايا في المتوسط A ويجلس على وعاء ثقافة مرفق منخفض. ثم استزراع لمدة ثلاثة أيام. بعد فحص مورفولوجيا، تضاف سلسلة من المتوسط التعريفي، بما في ذلك المتوسط B و C في وقت لاحق إلى السفينة المستزرعة في اليوم الثالث والخامس، على التوالي.في اليوم العاشر، يلاحظ مورفولوجيا الخلايا. يتم جمع مستعمرات الخلايا لمزيد من التحليل، بما في ذلك مورفولوجيا المستعمرة وحجمها، والتعبير عن علامة جين البنكرياس، والممتلكات الوظيفية فيما يتعلق بإفراز الببتيد C-peptide المحفز للجلوكوز أو فحص GSCS. تتم مقارنة نتائج كلا البروتوكولين التعريفيين في كلا البروتوكولين.الخلايا الجذعية لب الأسنان البشرية قادرة على تشكيل مستعمرة مثل هيكل منذ اليوم الأول من التعريفي. مظهر المستعمرات مستدير وكثيف. جميع المستعمرات تطفو في أوعية الثقافة طوال فترة التعريفي.مجموع عدد مستعمرة من بروتوكول التعريفي التكاملي هو أعلى قليلا من ذلك من التعريفي غير التكاملي. التطور تحت مستعمرة الحجم النسبة المئوية يظهر اتجاها مفيدا، من تشكيل مستعمرة صغيرة إلى متوسطة الحجم على التعريفي التكاملي، وهو أمر مهم للحد من جوهر نخر داخل المستعمرة. كشف تحليل علامة جين البنكرياس أن البروتوكول الاستقرائي التكاملي ينتج المستعمرات ذات انتهاء صلاحية عالية لعلامات البنكرياس ، بما في ذلك MAP-A و GLUT-2 والأنسولين وGLP-1R ، مما يشير إلى التمايز نحو الخلايا المنتجة للأنسولين المقاسة.إلى وظيفة الجلوكوز C-الببتيد إفراز مهم. تظهر النتائج أن كلا البروتوكولين التعريفيين ينتجان المستعمرات مع استجابة جيدة لتحدي الجلوكوز. من هذه الدراسة, كل من بروتوكولات التعريفي البنكرياس قادرة على توليد الخلايا المنتجة للأنسولين في المختبر من حيث انتهاء صلاحية علامة البنكرياس والخصائص الوظيفية, البروتوكولات يظهر نوعية أفضل من الأنسولين إنتاج تشكيل الخلايا.مما يشير إلى اتجاهات الخلايا الجذعية mesenchymal الإنسان مثل تطبيق الخلايا الجذعية لب الأسنان البشرية في علاج مرض السكري القائم على الخلايا الجذعية في المستقبل القريب.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

In vitro Induction of Human Dental Pulp Stem Cells Toward Pancreatic Lineages

Use of Human Perivascular Stem Cells for Bone Regeneration

استخدام الخلايا الجذعية البشرية ارتشاح لتجديد العظام

Human perivascular stem cells (PSCs) can be isolated in sufficient numbers from multiple tissues for purposes of skeletal tissue engineering1-3. PSCs are ...

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells hESC to Different Lineages

Microcapsule الجينات كمنصة 3D لإكثار وتمايز الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) إلى أنساب مختلفة

Human embryonic stem cells (hESC) are emerging as an attractive alternative source for cell replacement therapy since they can be expanded in culture ...

Therapeutic Gene Delivery and Transfection in Human Pancreatic Cancer Cells using Epidermal Growth Factor Receptor-targeted Gelatin Nanoparticles

تسليم الجينات والخلايا البشرية في ترنسفكأيشن سرطان البنكرياس باستخدام مستقبلات عامل نمو البشرة استهداف الجيلاتين المستندة Nanovectors المهندسة

More than 32,000 patients are diagnosed with pancreatic cancer in the United States per year and the disease is associated with very high mortality 1. ...

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells (hESCs) and Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs)

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells hESCs and Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs

التنمية، والتوسع، و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; رصد خلايا NK الإنسان من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) وافرة القوة والتي يسببها الخلايا الجذعية (iPSCs)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to ...

Transplantation of Induced Pluripotent Stem Cell-derived Mesoangioblast-like Myogenic Progenitors in Mouse Models of Muscle Regeneration

زرع المستحثة متعددة القدرات الخلايا الجذعية المشتقة من Mesoangioblast مثل السلف الميوجينيك في نماذج الماوس من تجديد العضلات

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells ...

Use of a High-throughput In Vitro Microfluidic System to Develop Oral Multi-species Biofilms

Use of a High-throughput In Vitro Microfluidic System to Develop Oral Multi-species Biofilms

استخدام إنتاجية عالية<em&gt; في المختبر</em&gt; نظام ميكروفلويديك لتطوير الأغشية الحيوية متعدد الأنواع عن طريق الفم

There are few high-throughput in vitro systems which facilitate the development of multi-species biofilms that contain numerous species commonly detected ...

Eye Irritation Test (EIT) for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial (RhCE) Tissue Model

Eye Irritation Test EIT for Hazard Identification of Eye Irritating Chemicals using Reconstructed Human Cornea-like Epithelial RhCE Tissue Model

العين تهيج اختبار (EIT) لتحديد مخاطر العين مهيج للمواد الكيميائية باستخدام يعيد الإنسان القرنية مثل الظهارية (RHCE) الأنسجة نموذج

To comply with the Seventh Amendment to the EU Cosmetics Directive and EU REACH legislation, validated non-animal alternative methods for reliable and ...

Efficient Generation and Editing of Feeder-free IPSCs from Human Pancreatic Cells Using the CRISPR-Cas9 System

كفاءة توليد وتحرير إيبسكس تغذية خالية من خلايا البنكرياس البشرية باستخدام نظام كريسبر-Cas9

Embryonic and induced pluripotent stem cells can self-renew and differentiate into multiple cell types of the body. The pluripotent cells are thus coveted ...

Advanced 3D Liver Models for In vitro Genotoxicity Testing Following Long-Term Nanomaterial Exposure

نماذج متقدمة الكبد 3D لاختبار السمية الجينية في المختبر بعد التعرض للمواد النانوية على المدى الطويل

Due to the rapid development and implementation of a diverse array of engineered nanomaterials (ENM), exposure to ENM is inevitable and the development of ...

Single-Cell Optical Action Potential Measurement in Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cardiomyocytes

قياس إمكانات العمل البصري أحادي الخلية في خلايا القلب المشتقة من الخلايا الجذعية المتعددة القدرات

Conventional intracellular microelectrode techniques to quantify cardiomyocyte electrophysiology are extremely complex, labor intensive, and typically ...