Name: isolation of primary cancer-associated fibroblasts from a syngeneic murine model of breast cancer for the study of targeted nanoparticles
Uploaded: 2021-05-14T14:30:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Primary Cancer-Associated Fibroblasts from a Syngeneic Murine Model of Breast Cancer for the Study of Targeted Nanoparticles at JoVE.com

تم دعم هذه الدراسة من قبل Associazione Italiana لكل لا Ricerca sul Cancro (AIRC) بموجب مشروع IG 2017-ID. 20172 - P.I. Corsi Fabio. SM تعترف مركز البحوث السريرية للأطفال "روميو وإنريكا Invernizzi" التي تدعم موقفها. AB تشكر AIRC (مشروع ID. 20172) وجامعة ميلانو على زمالة البحث. زمالات ما بعد الدكتوراه والدكتوراه في جامعة ميلانو تدعمها.

<ol>
	<li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis.">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li><li>Velaei, K., Samadi, N., Barazvan, B., Soleimani Rad, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microenvironment-mediated+chemoresistance+in+breast+cancer.">Tumor microenvironment-mediated chemoresistance in breast cancer.</a> Breast. 30, 92-100 (2016).</li><li>Cheng, J. D., Weiner, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumors+and+their+microenvironments:+tilling+the+soil.+Commentary+re:+A.+M.+Scott+et+al.,+A+Phase+I+dose-escalation+study+of+sibrotuzumab+in+patients+with+advanced+or+metastatic+fibroblast+activation+protein-positive+cancer.">Tumors and their microenvironments: tilling the soil. Commentary re: A. M. Scott et al., A Phase I dose-escalation study of sibrotuzumab in patients with advanced or metastatic fibroblast activation protein-positive cancer.</a> Clinical Cancer Research. 9 (5), 1690-1695 (2003).</li><li>Hui, L., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microenvironment:+Sanctuary+of+the+devil.">Tumor microenvironment: Sanctuary of the devil.</a> Cancer Letters. 368 (1), 7-13 (2015).</li><li>Balkwill, F. R., Capasso, M., Hagemann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tumor+microenvironment+at+a+glance.">The tumor microenvironment at a glance.</a> Journal of Cell Science. 125, 5591-5596 (2012).</li><li>Chen, X., Song, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turning+foes+to+friends:+targeting+cancer-associated+fibroblasts.">Turning foes to friends: targeting cancer-associated fibroblasts.</a> Nature Review. Drug Discovery. 18 (2), 99-115 (2019).</li><li>Franco, O. E., Shaw, A. K., Strand, D. W., Hayward, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+associated+fibroblasts+in+cancer+pathogenesis.">Cancer associated fibroblasts in cancer pathogenesis.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 21 (1), 33-39 (2010).</li><li>LeBleu, V. S., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+peek+into+cancer-associated+fibroblasts:+origins,+functions+and+translational+impact.">A peek into cancer-associated fibroblasts: origins, functions and translational impact.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11, (2018).</li><li>Li, X. -. Y., Hu, S. -. Q., Xiao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cancer-associated+fibroblasts+and+drug+resistance.">The cancer-associated fibroblasts and drug resistance.</a> European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 19 (11), 2112-2119 (2015).</li><li>Luo, H., Tu, G., Liu, Z., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer-associated+fibroblasts:+a+multifaceted+driver+of+breast+cancer+progression.">Cancer-associated fibroblasts: a multifaceted driver of breast cancer progression.</a> Cancer Letters. 361 (2), 155-163 (2015).</li><li>Truffi, M., Sorrentino, L., Corsi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+the+tumor+microenvironment.">Fibroblasts in the tumor microenvironment.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 1234, 15-29 (2020).</li><li>Sugimoto, H., Mundel, T. M., Kieran, M. W., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+fibroblast+heterogeneity+in+the+tumor+microenvironment.">Identification of fibroblast heterogeneity in the tumor microenvironment.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 5 (12), 1640-1646 (2006).</li><li>Costa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+heterogeneity+and+immunosuppressive+environment+in+human+breast+cancer.">Fibroblast heterogeneity and immunosuppressive environment in human breast cancer.</a> Cancer Cell. 33 (3), 463-479 (2018).</li><li>Ishii, G., Ochiai, A., Neri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+heterogeneity+of+cancer-associated+fibroblast+within+the+tumor+microenvironment.">Phenotypic and functional heterogeneity of cancer-associated fibroblast within the tumor microenvironment.</a> Advances Drug Delivery Reviews. 99, 186-196 (2016).</li><li>Chen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remodeling+the+tumor+microenvironment+with+emerging+nanotherapeutics.">Remodeling the tumor microenvironment with emerging nanotherapeutics.</a> Trends in Pharmacological Sciences. 39 (1), 59-74 (2018).</li><li>Truffi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nano-strategies+to+target+breast+cancer-associated+fibroblasts:+rearranging+the+tumor+microenvironment+to+achieve+antitumor+efficacy.">Nano-strategies to target breast cancer-associated fibroblasts: rearranging the tumor microenvironment to achieve antitumor efficacy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (6), 1263 (2019).</li><li>Tong, R., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicines+Targeting+the+Tumor+Microenvironment.">Nanomedicines Targeting the Tumor Microenvironment.</a> Cancer Journal. 21 (4), 314-321 (2015).</li><li>Kaps, L., Schuppan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+cancer+associated+fibroblasts+in+liver+fibrosis+and+liver+cancer+using+nanocarriers.">Targeting cancer associated fibroblasts in liver fibrosis and liver cancer using nanocarriers.</a> Cells. 9 (9), 2027 (2020).</li><li>Miao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+tumor-associated+fibroblasts+for+therapeutic+delivery+in+desmoplastic+tumors.">Targeting tumor-associated fibroblasts for therapeutic delivery in desmoplastic tumors.</a> Cancer Research. 77 (3), 719-731 (2017).</li><li>Kelly, T., Huang, Y., Simms, A. E., Mazur, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+activation+protein-&#945;:+a+key+modulator+of+the+microenvironment+in+multiple+pathologies.">Fibroblast activation protein-&#945;: a key modulator of the microenvironment in multiple pathologies.</a> International Review of Cell and Molecular Biology. 297, 83-116 (2012).</li><li>Brennen, W. N., Isaacs, J. T., Denmeade, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rationale+behind+targeting+fibroblast+activation+protein-expressing+carcinoma-associated+fibroblasts+as+a+novel+chemotherapeutic+strategy.">Rationale behind targeting fibroblast activation protein-expressing carcinoma-associated fibroblasts as a novel chemotherapeutic strategy.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 11 (2), 257-266 (2012).</li><li>Juillerat-Jeanneret, L., Tafelmeyer, P., Golshayan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+activation+protein-&#945;+in+fibrogenic+disorders+and+cancer:+more+than+a+prolyl-specific+peptidase.">Fibroblast activation protein-&#945; in fibrogenic disorders and cancer: more than a prolyl-specific peptidase.</a> Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21, 977-991 (2017).</li><li>Falvo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody-drug+conjugates:+targeting+melanoma+with+cisplatin+encapsulated+in+protein-cage+nanoparticles+based+on+human+ferritin.">Antibody-drug conjugates: targeting melanoma with cisplatin encapsulated in protein-cage nanoparticles based on human ferritin.</a> Nanoscale. 5 (24), 12278-12285 (2013).</li><li>Truffi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ferritin+nanocages:+A+biological+platform+for+drug+delivery,+imaging+and+theranostics+in+cancer.">Ferritin nanocages: A biological platform for drug delivery, imaging and theranostics in cancer.</a> Pharmacological Research. 107, 57-65 (2016).</li><li>Cai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+magnetic+resonance+imaging+and+staining+of+cancer+cells+using+ferrimagnetic+H-ferritin+nanoparticles+with+increasing+core+size.">Enhanced magnetic resonance imaging and staining of cancer cells using ferrimagnetic H-ferritin nanoparticles with increasing core size.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 2619-2634 (2015).</li><li>Heger, Z., Skalickova, S., Zitka, O., Adam, V., Kizek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoferritin+applications+in+nanomedicine.">Apoferritin applications in nanomedicine.</a> Nanomedicine. 9 (14), 2233-2245 (2014).</li><li>Mazzucchelli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanometronomic+treatment+of+4T1+breast+cancer+with+nanocaged+doxorubicin+prevents+drug+resistance+and+circumvents+cardiotoxicity.">Nanometronomic treatment of 4T1 breast cancer with nanocaged doxorubicin prevents drug resistance and circumvents cardiotoxicity.</a> Oncotarget. 8 (5), 8383-8396 (2017).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+cancer-associated+fibroblasts+by+dual-responsive+lipid-albumin+nanoparticles+to+enhance+drug+perfusion+for+pancreatic+tumor+therapy.">Targeting cancer-associated fibroblasts by dual-responsive lipid-albumin nanoparticles to enhance drug perfusion for pancreatic tumor therapy.</a> Journal of Controlled Release. 321, 564-575 (2020).</li><li>Mertens, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+effects+of+deleting+cancer-associated+fibroblasts+in+cholangiocarcinoma.">Therapeutic effects of deleting cancer-associated fibroblasts in cholangiocarcinoma.</a> Cancer Research. 73 (2), 897-907 (2013).</li><li>Kov&#225;cs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Core-shell+nanoparticles+suppress+metastasis+and+modify+the+tumour-supportive+activity+of+cancer-associated+fibroblasts.">Core-shell nanoparticles suppress metastasis and modify the tumour-supportive activity of cancer-associated fibroblasts.</a> Journal of Nanobiotechnology. 18, 18 (2020).</li><li>Sharon, Y., Alon, L., Glanz, S., Servais, C., Erez, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+normal+and+cancer-associated+fibroblasts+from+fresh+tissues+by+Fluorescence+Activated+Cell+Sorting+(FACS).">Isolation of normal and cancer-associated fibroblasts from fresh tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS).</a> Journal of Visualized Experiments. (71), e4425 (2013).</li><li>Sitia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+cancer-associated+fibroblasts+by+engineered+H-ferritin+nanocages+loaded+with+navitoclax.">Selective targeting of cancer-associated fibroblasts by engineered H-ferritin nanocages loaded with navitoclax.</a> Cells. 10 (2), 328 (2021).</li><li>Bellini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+nanocages+for+self-triggered+nuclear+delivery+of+DNA-targeted+chemotherapeutics+in+cancer+cells.">Protein nanocages for self-triggered nuclear delivery of DNA-targeted chemotherapeutics in cancer cells.</a> Journal of Controlled Release. 196, 184-196 (2014).</li><li>Sahai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+framework+for+advancing+our+understanding+of+cancer-associated+fibroblasts.">A framework for advancing our understanding of cancer-associated fibroblasts.</a> Nature Reviews Cancer. 20, 174-186 (2020).</li><li>Dvo&#345;&#225;nkov&#225;, B., Lacina, L., Smetana, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+normal+fibroblasts+and+their+cancer-associated+counterparts+(CAFs)+for+biomedical+research.">Isolation of normal fibroblasts and their cancer-associated counterparts (CAFs) for biomedical research.</a> Methods in Molecular Biology. 1879, 393-406 (2018).</li><li>Calvo, F., Hooper, S., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+immortalization+of+fibroblasts+from+different+tumoral+stages.">Isolation and immortalization of fibroblasts from different tumoral stages.</a> Bio-protocol. 4 (7), 1097 (2014).</li><li>Sha, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+cancer-associated+fibroblasts+and+its+promotion+to+the+progression+of+intrahepatic+cholangiocarcinoma.">Isolation of cancer-associated fibroblasts and its promotion to the progression of intrahepatic cholangiocarcinoma.</a> Cancer Medicine. 7 (9), 4665-4677 (2018).</li><li>Hwang, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer-associated+stromal+fibroblasts+promote+pancreatic+tumor+progression.">Cancer-associated stromal fibroblasts promote pancreatic tumor progression.</a> Cancer Research. 68 (3), 918-926 (2008).</li><li>Zhen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+nanocage+mediated+fibroblast-activation+protein+targeted+photoimmunotherapy+to+enhance+cytotoxic+T+cell+infiltration+and+tumor+control.">Protein nanocage mediated fibroblast-activation protein targeted photoimmunotherapy to enhance cytotoxic T cell infiltration and tumor control.</a> Nano Letters. 17 (2), 862-869 (2017).</li><li>Ji, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+assembly+integration+of+fibroblast-targeting+and+cell-penetration+features+for+enhanced+antitumor+drug+delivery.">Peptide assembly integration of fibroblast-targeting and cell-penetration features for enhanced antitumor drug delivery.</a> Advances Materials. 27 (11), 1865-1873 (2015).</li></ol>

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

تظهر CAFs كلاعبين رئيسيين في إعادة عرض المصفوفة خارج الخلية ، وتعزيز تطور الانبثاث ، والحد من الوصول إلى الدواء إلى موقع الورم34. ومع ذلك ، نظرا تجانسها ، لا تزال أدوارها مثيرة للجدل - بعض CAFs هي الأورام ، في حين يبدو أن بعض الأنواع الفرعية الأخرى لها دور قمع الورم. في هذا السياق، يمكن عزلتهم تكون ذات أهمية قصوى لتسليط المزيد من الضوء على دورها الكثير من الجدل في تطور السرطان، والتي سيكون لها آثار سريرية هامة12،31. وعلاوة على ذلك، فإن الاستخراج الناجح ل CAF من نماذج ورم الفأر البشرية وقبل السريرية من شأنه أيضا أن يسهل تطوير أدوية جديدة تستهدف CAF. هذه الورقة تقارير طريقة لعزل بكفاءة والثقافة CAFs الأولية من نموذج ما قبل السريرية syngeneic من سرطان الثدي. واستنادا إلى الخبرة، تؤثر ثلاث خطوات تجريبية في الغالب على نجاح البروتوكول.
الأول يعمل بسرعة لتجنب تجميع تعليق الخلايا المرتبطة بخطر التخثر في العمود وإبطاء ارتجاع الخلايا: في الواقع، عندما تم تجميع الخلايا التي مرت عبر العمود معا، زاد احتمال حدوث عملية عزل دون المستوى الأمثل، واحتوت الثقافات النهائية على استنساخ خلايا "ملوثة". والثاني هو تجميع الخلايا من أورام مختلفة بعد مرور الاستنفاد لضمان ما يكفي من الخلايا لتمريرها في خطوة الإثراء النهائية. القضية الحرجة الأخيرة هي طلاء الخلايا المستخرجة بكثافات خلايا عالية ، على الأرجح بدءا من بئر واحد من لوحة 24 بئرا لتعزيز نمو الخلايا وتوسع المستعمرة لمدة تصل إلى 4-5 مقاطع. إذا كانت الخلايا بذر في كثافات منخفضة، فإنها توسعت على السطح الحر وتوقفت بسرعة تكرار.
وقد وصفت العديد من الدراسات بالفعل أساليب استخراج CAF من أصل الإنسان والفأر على حد سواء، لدراسة دورها في تعزيز تطور السرطان والتوغل. وقد تم ذلك في العديد من أنواع الأورام, بما في ذلك سرطان الثدي, سرطان الجلد, سرطان الأوعية الدموية, وسرطان الغدة ال غدي البنكرياس35,36,37,38. ومع ذلك ، بسبب عدم وجود علامات CAF محددة وعدم تجانسها ، لا تزال نتائج هذه العمليات دون المستوى الأمثل.
هنا، تم استخدام الخلايا المعزولة للتحقق من صحة قدرة استهداف CAF من الكعك النانوي HFn وظيفية مع مكافحة FAP استهداف moieties. كان استخدام الثقافات الأولية ل CAFs ميزة كبيرة ، مما سمح بالتحقق من صحة النانوستراتيجي ex vivo بتجربة ربط أبسط بكثير وفعالة من حيث التكلفة من القيام بذلك مباشرة في الجسم الحي في هذه المرحلة الأولية من تحسين المخدرات النانوية.
وبهذا المعنى، يمكن أن يسبق اختبار الجسم الحي السابق على CAFs في التجارب الحيوانية الحية من خلال السماح بفحص واختيار الجسيمات النانوية الواعدة للاستهداف الأمثل ل CAF. يمكن أيضا استخدام نموذج CAF المعروض هنا لدراسات الفعالية الأولية ، عند تحميل الجسيمات النانوية بالأدوية النشطة. سيتم استخدام الحيوانات في وقت لاحق فقط لتقييم التوزيع الحيوي ، وعلم الصيدلة ، ودراسات الفعالية.
ويجري تطوير العديد من العقاقير النانوية التي تستهدف CAF، مثل الكوابير النانوية فيريتين للعلاج الضوئي في سرطان الثدي والجسيمات القائمة على الببتيد لتقديم الدوكسوروبيسين في نماذج سرطان البروستاتا39،40. ومع ذلك ، لم تركز العديد من الدراسات على عزل CAFs كمنصات للخلايا لتحسين المخدرات النانوية.
هذا البروتوكول له بعض القيود. أولا، إنه بروتوكول يستغرق وقتا طويلا، ويتطلب إعداد وشراء العديد من الكواشف والمواد. ثانيا، نظرا لندرة CAFs في ورم الثدي 4T1، غلتها منخفضة. وينبغي التخطيط لتجارب الجسيمات النانوية وتنفيذها بمجرد تحقيق رقم الخلية المطلوب، حيث تخضع الخلايا الكافورة الأولية للانارة ولا يمكن الحفاظ عليها في الثقافة لفترة طويلة. في الختام، يمكن أن تكون هذه الطريقة لعزل وزراعة وتوصيف CAFs أداة قوية لتسريع تطوير أدوية نانوية مستهدفة جديدة في مكافحة السرطان.

خلال العقود الماضية ، أصبح من الواضح أن قتل الخلايا السرطانية عادة ما لا يكفي للقضاء على الأورام الخبيثة ، حيث أن البيئة الدقيقة للورم قد تدفع إلى انتكاس الورم وتحفز المقاومة العلاجية1،2. ثم ظهر نموذج جديد: استهداف الورم ستروما لحرمان الورم من العوامل الداعمة وبالتالي، تعزيز فعالية العلاج الكيميائي3،4،5. على وجه الخصوص، الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAFs) هي هدف سترومال مثيرة للاهتمام في العديد من الأورام الصلبة6،7. CAFs هي مجموعة غير متجانسة جدا من الخلايا التي تتفاعل مع الخلايا السرطانية وخلايا الجهاز المناعي من خلال إفراز عوامل النمو والسيتوكينات والكيموكينات. بناء وإعادة تشكيل مصفوفة خارج الخلية؛ وتمكين تشكيل الانبثاث8،9،10،11،12. اعتمادا على نوع الورم، تظهر CAFs وظائف مؤيدة للورم، في حين أن الأنواع الفرعية الأخرى من CAFs يبدو أن لديها وظائف قمع الورم13،14. لتوضيح هذا الانقسام بشكل أفضل ، من المهم توصيف شامل ل CAFs من الأورام الأولية والمنقشورية.
في هذا السياق، ركز مجال أبحاث ناشئ على تطوير عوامل نانوية مصممة لاستهداف و/أو تدمير CAFs من خلال تقديم جزيئات وأدوية نشطة قادرة على إعادة تشكيل البيئة الدقيقة للورم15و16و17و18. وقد تم تصميم عدة أنواع من الجسيمات النانوية لتحقيق الاستئصال CAF عن طريق الأدوية السامة للخلايا, للحث على العلاج الديناميكي الضوئي CAF المستهدفة, أو لإعادة برمجة CAFs عن طريق إعادتها إلى حالة هادئة أو حث TNF ذات الصلة المبرمج الناجم عن تعبير ليغاند, الذي يحفز موت الخلايا السرطانية المجاورة16,19. وعلاوة على ذلك، فإن قدرة العديد من الجسيمات النانوية على استهداف علامات بيولوجية محددة بنشاط تثير الأمل في اختيار مجموعات فرعية من ال CAF لاستهدافها. على الرغم من أن خصوصية مطلقة ل CAF لا يزال موضع تساؤل, بروتين تنشيط الخلايا الليفية (FAP) هي واحدة من الأهداف الواعدة من ستروما الموالية tumorigenic ويتم استغلالها لتوجيه تسليم المخدرات النانوية, مما يمهد الطريق لتطوير العلاج النانوي CAF استهداف20,21,22.
تصف هذه الورقة عزل CAFs الأولية من نموذج سينجيني لسرطان الثدي مورين وتقارير استخدامها في دراسة القدرة على استهداف الجسيمات النانوية المهندسة للتعرف على علامة CAF، FAP. وتستخدم الكواجس النانوية فيريتين كأنظمة نانوية مرشحة لإعداد هذه الطريقة، كما قد تتشكل خصوصية التسليم من قبل التعرض السطحي لاستهداف moieties23،24. وعلاوة على ذلك، ثبت بنجاح فيريتينس أن تكون ممتازة مكوكات متوافقة بيولوجيا لتطبيقات مضادة للورم، مما أدى إلى تراكم سريع للحمولة في كتلة الورم25،26،27. حتى الآن، وقد شاركت الدراسات قبل السريرية من أنظمة النانو CAF استهداف في المختبر اختبار على خطوط الخلايا الليفية حفز في الثقافة مع تحويل عامل النمو بيتا للحث على تنشيط الخلية والتعبير عن بعض الميزات المناعية من CAFs28،29. عادة ما يتم تطبيق هذه الطريقة على خطوط الخلايا الخالدة (مثل NIH3T3، LX-2) وسريعة وبسيطة جدا، مما يؤدي إلى تنشيط الخلايا في غضون ساعات أو أيام قليلة. وهناك قيود على أنه على الرغم من التحفيز في المختبر يحفز التعبير عن بعض الجينات المنسوبة إلى الخلايا الميوفيبروبلاست المنشطة، فإنه لا يمكن تلخيص تماما جميع السمات البيولوجية من CAFs الحقيقي، وخاصة عدم التجانس في الجسم الحي.
استراتيجية أخرى تنطوي على استخراج CAFs الأولية من عينات ورم الإنسان أو الماوس30،31. وهذا يضمن أن يحدث تنشيط CAF في سياق فسيولوجي، وأنه يتم الحفاظ على عدم التجانس من الخلايا الفرعية CAF. ووفقا لهدف البحث، يمكن أن تستمد الصناديق الاستئمانية المعتمدة من مصادر مختلفة، مما يتيح إمكانية دراسة الحالة الأكثر موثوقية. البروتوكول المبلغ عنه هنا سيكون ذا قيمة للعلماء الذين يسعون إلى إجراء تقييم أولي لوظائف الجسيمات النانوية الجديدة المصممة لاستهداف CAFs من نموذج سرطان الثدي مورين. CAFs معزولة ستكون مفيدة لفحص تلك الجسيمات النانوية التي تعد بما فيه الكفاية للمضي قدما في تقييم الجسم الحي في النماذج الحيوانية للسرطان. وسيكون ذلك ذا صلة خلال الخطوات الأولى لإنتاج الجسيمات النانوية، مما يدفع علماء التكنولوجيا النانوية نحو تحسين تصميم الجسيمات النانوية من خلال النظر بشكل رئيسي في استراتيجية شل حركة الليغند لتحقيق خصائص الاستهداف المثلى.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ACK Lysing buffer</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>10-548E</td>
			<td>Store at +15&#176; to +30 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 goat anti-human antibody</td>
			<td>Immunological Science</td>
			<td>IS-20022</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-FAP Fab fragment (3F2)</td>
			<td>Creative Biolabs</td>
			<td>TAB-024WM-F(E)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>028BALB/C</td>
			<td>7 weeks old female mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td>Store at 2-8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 antibody</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-110-796</td>
			<td>FITC-conjugated fluorescent antibody; clone REA 737; Store protected from light at 2&#8211;8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD90.2 antibody</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-102-960</td>
			<td>PE-conjugated fluorescent antibody; clone 30-H12; Store protected from light at 2&#8211;8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainers 70 &#181;m</td>
			<td>VWR</td>
			<td>732-2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoFLEX</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td>laser configuration B4-R2-V0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dead cell Removal Kit</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-101</td>
			<td>contains 10 mL of Dead Cell Removal MicroBeads; 25 mL of 20&#215; Binding Buffer Stock Solution. Store protected from light at 2&#8722;8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin</td>
			<td>Caliper</td>
			<td>760504</td>
			<td>reagent for in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM High Glucose w/o L-Glutamine&#160; w/ Sodium Pyruvate</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB7501L</td>
			<td>Warm at 37 &#176;C in a water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS w/o Calcium, w/o Magnesium</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB4004L</td>
			<td>Keep at room temperature.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECS0180L</td>
			<td>Before use, heat at 56 &#176;C for 30 min to kill all the complement proteins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein Istothiocyanate isomer I (FITC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7250</td>
			<td>Store protected from light at 2&#8211;8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS C Tubes</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td>They are used in combination with the gentleMACS Dissociator.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS dissociator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td>Two samples can be processed in parallel. Special protocols have been developed for various tissues.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECS0200D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#39;s F12&#160; w/o L-Glutamine</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB7502L</td>
			<td>Warm at 37 &#176;C in a water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II imaging system</td>
			<td>Caliper Life Sciences</td>
			<td></td>
			<td>This imaging system is easy to use for both fluorescent and bioluminescent imaging in vivo. Equipped with a Living Image Software for analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LD columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-901</td>
			<td>Composed of ferromagnetic spheres, designed for stringent depletion of unwanted cells. Position the required number of columns on the magnetic Separation Unit and equilibrate with buffer before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB3000D</td>
			<td>200 mM stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light/fluorescence microscope equipped with camera</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DM IL LED Fluo/ ICC50 W CameraModule</td>
			<td>inverted microscope for live cells with camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS MultiStand</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Separation Unit</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-976</td>
			<td>Position the magnet on appropriate stand before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Tissue Storage Solution</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-100-008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-201</td>
			<td>Composed of ferromagnetic spheres, designed for positive selection of cells. Position the required number of columns on the magnetic Separation Unit and equilibrate with buffer before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycoplasma Removal Agent</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECMC210A</td>
			<td>Dilute in culture medium 1:100.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND-2000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non essential aminoacids</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB3054D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB3001D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human apoferritin H-homopolymer (HFn)&#160;</td>
			<td>Molirom</td>
			<td>MLR-P018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 w/o L-Glutamine</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB9006L</td>
			<td>Warm at 37 &#176;C in a water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tumor-Associated Fibroblast Isolation kit</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-116-474</td>
			<td>Contains 1 mL of Non-Tumor-Associated Fibroblast Depletion Cocktail, mouse; 1 mL of CD90.2 (Tumor-Associated Fibroblast) MicroBeads,mouse. Store protected from light at 2-8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tumor Dissociation Kit</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-730</td>
			<td>Contains lyophilized enzymes (D, R, A) and buffer A; reconstitute enzymes according to the manufacturer&#39;s instructions, aliquot and store at - 20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue 0.4%</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-942E</td>
			<td>dilute 1:1 with a sample of cell suspension before counting the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE select</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12563-029</td>
			<td>use at room temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE17-161E</td>
			<td>Warm at 37 &#176;C in a water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 Primo TC flask</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ET7076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeba Spin Desalting Columns</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>89890</td>
			<td>7K MWCO, 2 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL tubes</td>
			<td>Biosigma</td>
			<td>CL15.002.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ET5015B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4T1-luc2</td>
			<td>Caliper</td>
			<td></td>
			<td>Mouse mammary gland cancer cell line stably transfected with firefly luciferase gene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ET5050B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of primary cancer-associated fibroblasts from a syngeneic murine model of breast cancer for the study of targeted nanoparticles

الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان (CAFs) هي الجهات الفاعلة الرئيسية في سياق البيئة الدقيقة للورم. على الرغم من انخفاض عددها بالمقارنة مع الخلايا السرطانية ، فإن CAFs تنظم تطور الورم وتوفر الحماية من مناعة مضادة للورم. تهدف استراتيجيات مضادات السرطان الناشئة إلى إعادة تشكيل البيئة الدقيقة للورم من خلال استئصال CAFs المؤيدة للورم أو إعادة برمجة وظائف CAFs وحالة تنشيطها. ومن النهج الواعدة تطوير عوامل توصيل نانوية الحجم قادرة على استهداف ال CAFs، مما يسمح بتوصيل الأدوية والجزيئات النشطة على وجه التحديد. وفي هذا السياق، قد يوفر النموذج الخلوي لصناديق الخلايا المكيالة أداة مفيدة للفحص المختبري والتحقيق الأولي في هذه الأشكال النانوية.
تصف هذه الدراسة عزلة وثقافة CAFs الأولية من نموذج مورين 4T1 syngeneic لسرطان الثدي الثلاثي السلبي. استخدمت الخرز المغناطيسي في عملية فصل من خطوتين لاستخراج CAFs من الأورام المفككة. تم إجراء التحكم في الفينوتيبينج المناعي باستخدام قياس التدفق الخلوي بعد كل مقطع للتحقق من عائد العملية. يمكن استخدام CAFs المعزولة لدراسة القدرة على استهداف الأشكال النانوية المختلفة المصممة لمعالجة البيئة الدقيقة للورم. تم استخدام الجسيمات النانوية H-ferritin المسماة بالفلورسنت كجسيمات نانوية مرشحة لإعداد الطريقة. تم تحليل الجسيمات النانوية ، إما عارية أو مترافقة مع ليغاند الاستهداف ، لربطها ب CAFs. تشير النتائج إلى أن استخراج الجسم الحي السابق من CAFs الثدي قد يكون نظاما مفيدا لاختبار والتحقق من صحة الجسيمات النانوية لاستهداف محدد من CAFs tumorigenic.

في إعداد نموذج vivo لعزل CAFs الأمثل حقن 105 4T1-luc الخلايا في وسادة الدهون الثديي من الفئران BALB / ج الإناث يؤدي إلى نمو كتلة الورم يمكن الكشف عنها في 5 أيام بعد زرع. من خلال قياس حجم الورم من قبل الفرجار وقابلية بقاء الخلية السرطانية من قبل BLI ، تم رصد نمو الورم لمدة شهر واحد بعد الزرع. لإيجاد نافذة التضحية التي هي كافية لعزل CAFs، تم السعي إلى حل وسط الأمثل بين ارتفاع حجم الورم وBLI من ناحية وتقرح الورم الناشئة ونخر من ناحية أخرى (الشكل 1). كما يظهر نواة نخرية بعد 20 يوما من زرع، ويتضخم في 25 و 30 يوما (كما هو موثق من قبل الصور BLI في الشكل 1C)،تم تعيين اليوم 20 كنقطة زمنية لتحسين استعادة الخلية بعد عملية العزل. حتى بعد إزالة جميع المناطق النخرية المرئية بعناية خلال الخطوات الأولى من التعامل مع الورم في الجسم الحي ،تم العثور على نسبة عالية من الخلايا الميتة في نهاية الانفصال إلى خلايا واحدة ( الجدول1). وبما أن هذه النسبة المئوية قد تكون ذات صلة، خاصة مع الزيادة في حجم الورم، فإن إزالة الخلايا الميتة ضرورية دائما عند العمل مع نموذج 4T1.
تحسين إجراءات عزل CAFs والثقافة والتوصيف هناك حاجة إلى مقطعين آخرين لعزل سكان CAFs (CD90.2+ CD45- )من لوحة الخلايا القابلة للحياة التي تم جمعها: استنفاد الخلايا الليفية غير المرتبطة بالورم وإثراء الخلايا الليفية المرتبطة بالورم (الشكل 2). مزيج حبة الاستنفاد يزيل بكفاءة CD45+ الخلايا (تمثل 67.35٪ و 0.69٪ من إجمالي الخلايا قبل وبعد الاستنفاد، على التوالي، الجدول 2)، وكان يستخدم دائما لمعالجة ورم واحد واحد في كل عمود. وكما هو مبين في الجدول 1،انخفض عدد الخلايا الملتوية من متوسط 3 × 106 إلى 1 × 105 بعد خطوة الاستنفاد. بسبب هذا الانخفاض الهائل في إجمالي عدد الخلايا ، من المريح تجميع الخلايا التي تم جمعها من 2 على الأقل إلى 4 أورام كحد أقصى في أنبوب واحد قبل المضي قدما في خطوة التخصيب. من خلال القيام بذلك ، تم الحصول على عدد كاف من الخلايا لاحتضان حبات الخلايا الليفية المرتبطة بالورم ومرت عبر عمود فصل واحد للحصول على متوسط نهائي قدره 93٪ من CD90.2+ CD45- الخلايا (الجدول 2).
مرة واحدة بذر على لوحات زراعة الأنسجة، وهذه الخلايا المستردة تعلق على البلاستيك وكشفت عن مورفولوجيا كبيرة على شكل مغزل نموذجية من الخلايا الليفية(الشكل 3A،B)ومختلفة عن الخلايا السرطانية 4T1 (الشكل 3D). عدم تجميع الأورام بعد الاستنفاد يسبب العائد الخلوي مع الميكروبات الليفية المرتبطة بالورم لتكون منخفضة جدا لتأسيس ثقافة. في حالات أخرى، عندما لا يتم الحفاظ على مدة ودرجة حرارة الحضانات مع الميكروبات بعناية، قد تحدث بعض الربط غير محددة. وفي مثل هذه الحالات، كانت خطوات الإثراء أقل كفاءة، كما تم استرداد نسب أعلى من CD90.2- CD45+ وCD90.2- CD45- مع CD90.2+ CAFs (5.97 ± 1.5 و 16.75 ± 1.1 على التوالي)(الشكل 4 والجدول 3). هذه الخلايا الملوثة من المرجح أن تكون مسؤولة عن وجود في ثقافة المستنسخين الصغيرة مع مورفولوجيا مختلفة(الشكل 4B، رؤوس الأسهم السوداء) التي نمت بشكل أسرع من CAFs وغلبت على ثقافة CAF الأولية(الشكل 4C). أكدت هذه النتائج دون المستوى الأمثل أهمية التحقق المزدوج دائما من تعبير CD90.2 و CD45 ، وكذلك مورفولوجيا الخلايا في نهاية عملية الإثراء وأثناء نمو الخلايا في الثقافة.
استخدام الخلايا المعزولة لتقييم إمكانات استهداف CAF للأدوية النانوية المهندسة يمكن استخدام CAFs المعزولة حديثا للعديد من التطبيقات التي تتراوح بين الأبحاث الأساسية والدراسات الدوائية. هدف هذه المجموعة هو تطوير أقفاص نانوية HFn التي يمكن أن تستهدف على وجه التحديد CAFs. تم تشغيل HFn مع جزء معين من الأجسام المضادة ل FAP (HFn-FAP) بنسبتين مختلفتين من البروتين: الأجسام المضادة (أقل 1:1 وأعلى 1:5) ، وتم اختبار ربطها مع CAFs. كما تم استخدام FAP كعلامة بيولوجية سطحية من CAFs الموالية tumorigenic، كان من الأهمية الأساسية للتحقق من التعبير FAP على CAFs معزولة(الشكل 3C). تم اتباع تعبير FAP على مدى 5 مقاطع في الثقافة لتأكيد أن ثقافة CAF الأساسية حافظت على خصائصها الأصلية.
تبين أن الوظيفة FAP على HFn تساهم في تحول كبير نحو استهداف CAF بالمقارنة مع HFn العارية ، وكان انخفاض كمية الأجسام المضادة (1:1) كافيا لمراقبة هذا التأثير(الشكل 5A). ومع ذلك، لم يلاحظ هذا مع خلايا الورم 4T1 المستخدمة لإعداد نموذج الورم في الجسم الحي، حيث أظهرت HFn عارية ملزمة أعلى من HFn وظيفية (الشكل 5B). وكان هذا على الأرجح بسبب عدم وجود التعبير المفرط FAP في خلايا 4T1 والتفاعل التفضيلي لHFN مع TfR1، الذي ينظم امتصاص HFn في الخلايا، كما ذكرت على نطاق واسع من قبل هذه المجموعة27،33. تؤكد هذه النتائج فائدة استخدام الثقافات الأولية ل CAFs الثدي لفحص قدرة استهداف الجسيمات النانوية المصممة لمعالجة البيئة الدقيقة للورم بشكل أولي.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62504/62504fig01.jpg"> الشكل 1: إنشاء نموذج الورم 4T1. تم حقن الخلايا(10 5 خلايا / الماوس) في وسادة الدهون الثديية. وأعقب نمو الورم في الأيام 5 و 10 و 15 و 20 و 25 و 30 بعد الزرع(أ)عن طريق قياس حجم الورم مع الفرجار و (ب) عن طريق التصوير الإضاءة الحيوية. يتم التعبير عن أحجام الورم وBLI كملم3 والتهم، على التوالي. يتم الإبلاغ عن النتائج كمتوسط ± SEM (n = 6). (ج)صور ممثل BLI التي تم الحصول عليها 5 و 10 و 15 و 20 و 25 و 30 يوما بعد زرع الخلايا تؤكد نمو الورم حتى اليوم 25 ، عندما يبدو أنه يصل إلى هضبة. في آخر نقطة تحليل (30 يوما) ، لا يزيد BLI بالمقارنة مع اليوم 25. ابتداء من اليوم 20 ، تبدأ مناطق النخر والتقرح في الظهور في الجزء الأوسط من الورم. مقياس اللون: الحد الأدنى = 1,194، الحد الأقصى = 20,462. المختصرات: BLI = التصوير الإضاءة الحيوية؛ SEM = خطأ قياسي في المتوسط. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62504/62504fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62504/62504fig02.jpg"> الشكل 2: إعداد عينة الورم وتوصيف قياس التدفق الخلوي ل CAFs المعزولة. تم استئصال الأورام وخفضها إلى (أ) قطع صغيرة من 1-2 مم تقريبا بمساعدة مشرط. (ب) تعليق خلية واحدة بعد هضم الأنسجة والتفكك الميكانيكي للورم المقتطع؛ (ج) بيليه الخلية التي تم الحصول عليها بعد تحلل خلايا الدم الحمراء; (د)تحليل تدفق قياس الخلايا من CD45 و CD90.2 التعبير في الخلايا التي تم الحصول عليها بعد إزالة خلايا الدم الحمراء والخلايا الميتة،(ه)بعد استنفاد الخلايا الليفية غير المرتبطة بالسرطان، و (F) بعد إثراء الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان، حيث غالبية الخلايا هي CD90.2+ CD45- (المستطيل الأزرق). المختصرات: CAFs = الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان؛ CD = مجموعة من التمايز؛ PE-A = منطقة فيكوريثرين; FITC-A = مناطق ايزوثيوسيانات الفلورسين. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62504/62504fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62504/62504fig03.jpg"> الشكل 3: تم فحصالتحليل المورفولوجيللتعبير CAFs و FAP. (A ، B) CAFs morphology في جميع مقاطع الثقافة عن طريق المجهر البصري (مستويات مختلفة من الالتقاء عند الممر 2 والممر 5) وبالمقارنة مع (D) 4T1 الخلايا السرطانية ؛ تم تقييم أشرطة المقياس = 10 ميكرومتر (C) تعبير تنشيط الخلايا الليفية (FAP) عن طريق قياس التدفق الخلوي في نهاية عملية العزل على CD90.2+ CD45- الخلايا لتأكيد خصائصها الجزيئية. تم تعيين عتبة مضان على خلايا التحكم غير الملطخة (الرسم البياني الأحمر) لتحديد متوسط كثافة الفلورسينس والنسبة المئوية للخلايا الإيجابية (FAP+) بين الخلايا الملطخة بالأجسام المضادة (الرسم البياني الأزرق). المختصرات: CAFs = الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان؛ FAP = بروتين تنشيط الخلايا الليفية؛ CD = مجموعة من التمايز؛ MFI = متوسط كثافة الفلورسينس؛ Ab = الأجسام المضادة; FITC-A = منطقة ايزوثيوسيانات الفلورسين; FAP + = الخلايا الإيجابية FAP. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62504/62504fig03large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62504/62504fig04.jpg"> الشكل 4: مثال على عملية عزل CAFs دون المستوى الأمثل. (أ) كشف تقييم قياس التدفق الخلوي بعد خطوة العزل النهائية عن وجود خلايا CD90.2- CD45+ و CD90.2- CD45- الخلايا. (ب)يمكن أن ينظر إلى هذه الخلايا على أنها استنساخ مع مورفولوجيا مستديرة صغيرة على البذر (رؤوس الأسهم السوداء و inset في الزاوية اليسرى السفلى من اللوحة) أن(C)سادت على CAFs بعد مرور الثالث في الثقافة. أشرطة المقياس = 10 ميكرومتر. المختصرات: CAF = الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان؛ CD = مجموعة من التمايز؛ PE-A = منطقة فيكوريثرين; FITC-A = مناطق ايزوثيوسيانات الفلورسين. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62504/62504fig04large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62504/62504fig05.jpg"> الشكل 5: ربط أقفاص نانوية HFn على CAFs و 4T1. تم تسمية أقفاص نانوية HFn بفلورسنت مع FITC ، تعمل بشظايا الأجسام المضادة ل FAP (HFn-FAP) بنسبتين مختلفتين للبروتين والأجسام المضادة (1:1 و 1:5) ، وتم احتضانها مع (A) CAFs الهدف و (B) 4T1 الخلايا في 4 درجة مئوية لمدة 2 ساعة. تم تقييم الربط عن طريق قياس التدفق الخلوي. (أ)HFn-FAP الربط مع CAFs هو زيادة كبيرة في كل من تركيزات شظايا الأجسام المضادة من قبل ثلاثة أضعاف بالمقارنة مع HFn العارية. (ب) في المقابل، لوحظ ربط أعلى بكثير من HFn عارية في الخلايا 4T1، حيث لا يتم تعزيز الربط من قبل الاعتراف FAP. يتم الإبلاغ عن النتائج كمتوسط انحراف معياري ± ثلاث تجارب مستقلة. p = 0.0003; °° p = 0.0021 ; °°p = 0.0008. المختصرات: CAFs = الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان؛ FAP = بروتين تنشيط الخلايا الليفية؛ HFn = البديل المؤتلف من سلسلة الفيريتين الثقيلة البشرية المستخدمة كجسيمات نانوية عارية أو مترافقة؛ HFN-FAP = جسيمات نانوية HFn تعمل مع الجزء المتغير من الأجسام المضادة ل FAP التي تم إعدادها في نسبتين ضوليتين HFn:Fab@FAP، 1:1 و 1:5. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62504/62504fig05large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>رقم الخلية (متوسط ± SD)</td>
			<td>إجمالي غلة الاستخراج (لكل مرور)</td>
		</tr>
<tr>
<td>استئصال الورم (بعد إزالة خلايا الدم الحمراء)</td>
			<td>1.27 × 108 ± 9.81 × 107
</td>
			<td>100%</td>
		</tr>
<tr>
<td>استئصال الورم (إزالة الخلايا الميتة بعد)</td>
			<td>3.01 × 106 ± 9.61 × 105
</td>
			<td>2.38%</td>
		</tr>
<tr>
<td>كوكتيل ما بعد الاستنفاد</td>
			<td>1.15 × 105 ± 4.95 × 104
</td>
			<td>0.11% (3.82%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>إثراء ما بعد</td>
			<td>3.00 × 104 ± 1.2 × 104
</td>
			<td>0.027% (26.09%)</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1: إجمالي عدد الخلايا بعد كل خطوة من عزل الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>توزيع الخلية (٪)</td>
			<td>CD90.2+ CD45-
</td>
			<td>CD90.2+ CD45+
</td>
			<td>CD90.2- CD45+
</td>
			<td>CD90.2- CD45-
</td>
		</tr>
<tr>
<td>استئصال الورم (إزالة الخلايا الميتة بعد)</td>
			<td>1.81 ± 0.98</td>
			<td>10.78 ± 4.51</td>
			<td>56.57 ± 14.05</td>
			<td>28.20 ± 17.57</td>
		</tr>
<tr>
<td>كوكتيل ما بعد الاستنفاد</td>
			<td>69.33 ± 16.75</td>
			<td>0.14 ± 0.13</td>
			<td>0.55 ± 0.63</td>
			<td>39.89 ± 30.31</td>
		</tr>
<tr>
<td>إثراء ما بعد</td>
			<td>93.14 ± 3.3</td>
			<td>0.09 ± 0.1</td>
			<td>0.09 ± 0.08</td>
			<td>6.69 ± 3.4</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 2: توزيع الخلايا وفقا للتعبير عن CD90.2 و CD45 بعد كل مرور عزل الخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>توزيع الخلية (٪)</td>
			<td>CD90.2+ CD45-
</td>
			<td>CD90.2+ CD45+
</td>
			<td>CD90.2- CD45+
</td>
			<td>CD90.2- CD45-
</td>
		</tr>
<tr>
<td>إثراء آخر (بدون تجميع)</td>
			<td>75.80 ± 2.9</td>
			<td>1.49 ± 0.4</td>
			<td>5.97 ± 1.5</td>
			<td>16.75 ± 1.1</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 3: تعبير CD90.2 وCD45 عن الخلايا التي تم جمعها بعد تجربة عزل شبه مثالية مرتبطة بالسرطان في الخلايا الليفية.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Primary Cancer-Associated Fibroblasts from a Syngeneic Murine Model of Breast Cancer for the Study of Targeted Nanoparticles at JoVE.com

Isolation of Primary Cancer-Associated Fibroblasts from a Syngeneic Murine Model of Breast Cancer for the Study of Targeted Nanoparticles

تهدف هذه الورقة إلى توفير بروتوكول لعزل وثقافة الخلايا الليفية الأولية المرتبطة بالسرطان من نموذج مورين سينجيني لسرطان الثدي ثلاثي السلبية وتطبيقها للدراسة قبل السريرية للجسيمات النانوية الجديدة المصممة لاستهداف البيئة الدقيقة للورم.

عزل الخلايا الليفية الأولية المرتبطة بالسرطان من نموذج مورين السينجيني لسرطان الثدي لدراسة الجسيمات النانوية المستهدفة

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) are key actors in the context of the tumor microenvironment. Despite being reduced in number as compared to tumor ...

هذا البروتوكول يجعل من الممكن لعزل بنجاح والثقافة السرطان الأولي المرتبطة الخلايا الليفية من سرطان الثدي مورين, لفحص الجسيمات النانوية الجديدة المصممة لاستهداف البيئة الدقيقة الورم. يمثل CAF الأولي النموذج الأكثر موثوقية وفسيولوجية للدراسات المختبرية لستروما الورم. في هذا البروتوكول، نقوم بوصف كيفية تحقيق أفضل عائد.للبدء، قم بإعداد مزيج الهضم لتفكك الورم، ونقع شظايا الورم من ثلاثة إلى خمسة ملليمترات في المحلول بعد إغلاق الأنبوب بإحكام. قلب الأنبوب رأسا على عقب، والتحقق من أن جميع قطع الورم في الجزء السفلي من الأنبوب نحو الغطاء. ثم إرفاق أنبوب إلى الفصام الميكانيكية في السكن المناسب، وتشغيل برنامج الانفصال مصممة خصيصا للأورام صعبة.بعد الركض، افصل الأنبوب، وضعه رأسا على عقب لاحتضان العينة عند 37 درجة مئوية لمدة 40 دقيقة مع اهتزاز لطيف. ثم إعادة ربط الأنبوب إلى المفك في السكن المناسب، وتشغيل برنامج الانفصال عن الأورام صعبة مرتين، وضمان عدم وجود قطع الأنسجة الكبيرة تبقى في نهاية الإجراء. تصفية العينة من خلال مصفاة خلية 40 ميكرون في أنبوب 50 ملليلتر.ثم اغسل الفلتر بعشرة ملليلترات من جهاز RPMI 1640 المتوسط والطرد المركزي. بعد الطرد المركزي، إعادة إنفاق بيليه في المخزن المؤقت PBE، تتألف من برنامج تلفزيوني، 0.5٪BSA، واثنين من EDTA ملليمولار، والعد الخلايا مع تريبان الأزرق. إصلاح العازلة إزالة الخلية الميتة ملزمة عن طريق تخفيف 20X ملزمة العازلة الأسهم الحل مع الماء المقطر مزدوجة معقمة.اغسل الخلايا بخمسة ملليلترات من العازلة الملزمة 1X والطرد المركزي. بعد الطرد المركزي، إعادة إنفاق بيليه الخلية مع 0.1 ملليلتر من الميكروبات إزالة الخلايا الميتة لمدة تصل إلى 10 إلى الخلايا السابعة، واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة. أثناء الحضانة ، قم بإعداد حامل مغناطيسي تحت غطاء محرك السيارة ، وشنق أعمدة الفصل المغناطيسي الحديدي إليها ، مع الإشارة إلى النصائح لأسفل.وازن الأعمدة مع 0.5 ملليلتر من المخزن المؤقت الربط البارد، وانتظر حتى يتم تدفق الحل من خلال. بعد الحضانة، إضافة 400 ميكرولتر من العازلة ملزمة الباردة إلى حبة وتعليق الخلية. قم بتحميل وحدة التخزين بالكامل على العمود وجمع النفايات السائلة في أنبوب 15 ملليلتر.اغسل العمود أربع مرات مع 0.5 ملليلتر من العازلة الباردة ملزمة، وجمع مجموع النفايات السائلة في نفس الأنبوب. لاستنفاد الخلايا الليفية غير السرطانية المرتبطة بها، قم بتصفية تعليق الخلية باستخدام مصفاة خلايا 70 ميكرون مبللة ب PBS، وطاردة الخلايا. إزالة supernatant وإعادة إنفاق بيليه في 80 ميكرولتر من العازلة PBE الباردة.إضافة 20 ميكرولتر من غير المرتبطة الورم الورم استنفاد كوكتيل. تخلط جيدا، واحتضان العينة في 4 درجات مئوية لمدة 15 دقيقة في الظلام. أثناء الحضانة بالخرز، قم بإعداد أعمدة الاستنفاد المغناطيسي الحديدي على حامل مغناطيسي.توازن الأعمدة مع اثنين من ملليلتر من المخزن المؤقت PBE الباردة وانتظر حتى يتم تدفق الحل من خلال. بعد الحضانة، إضافة 400 ميكرولتر من العازلة إلى حبة وتعليق الخلية. قم بتحميل وحدة التخزين بالكامل على العمود وجمع النفايات السائلة في أنبوب 15 ملليلتر.اغسل العمود مرتين مع اثنين من ملليلتر من PBE. جمع مجموع النفايات السائلة في نفس الأنبوب، والطرد المركزي للنفايات السائلة. للاختيار الإيجابي للخلايا الليفية المرتبطة بالسرطان ، وإعادة إنفاق بيليه في 80 ميكرولتر من العازلة PBE الباردة.ثم في 20 ميكرولتر من الميكروبات الخلايا الليفية المرتبطة بالورم، واحتضان العينات في 4 درجات مئوية لمدة 15 دقيقة في الظلام. أثناء الحضانة، قم بإعداد أعمدة فصل المغناطيسي الحديدي على حامل مغناطيسي وتوازنها مع 0.5 ملليلتر من العازلة PBE الباردة. بعد الحضانة، إضافة 400 ميكرولتر من PBE إلى حبة وتعليق الخلية.قم بتحميل وحدة التخزين بالكامل على العمود، ودع الخلايا غير المبوبة تتدفق إلى أنبوب 15 ملليلتر. اغسل العمود ثلاث مرات مع 0.5 ملليلتر من المخزن المؤقت PBE ، وجمع إجمالي النفايات السائلة في نفس الأنبوب. إزالة العمود من المغناطيس ووضعه في أنبوب 1.5 ملليلتر.إضافة ملليلتر واحد من PBE على العمود، ودفع المكبس فورا في العمود لطرد الخلايا. بعد الطرد المركزي، وإعادة إنفاق بيليه الخلية في حجم مناسب من DMEM، والبذور الخلايا في لوحة زراعة الأنسجة. تحقق من كثافة الخلية تحت المجهر، ووضع لوحة في 37 درجة مئوية، وثاني أكسيد الكربون 5٪ للسماح للخلايا على الانضمام والنمو.أدى حقن خلايا لوسيفيراز 4T1 في وسادة الدهون الثديية للفئران الإناث إلى نمو كتلة ورم يمكن اكتشافها بعد خمسة أيام من الزرع. للعثور على نافذة التضحية التي هي كافية لعزل CAF، تم البحث عن حل وسط الأمثل بين ارتفاع حجم الورم والتصوير الإضاءة الحيوية من ناحية، وتقرح الورم الناشئة ونخر من ناحية أخرى. تم تعيين اليوم 20 كنقطة زمنية لتحسين استرداد الخلية، بعد عملية العزل.وهناك حاجة إلى ممرين آخرين لعزل سكان CAFs ، من لوحة الخلايا القابلة للحياة التي تم جمعها ، واستنفاد الخلايا الليفية غير المرتبطة بالورم ، وإثراء الخلايا الليفية المرتبطة بالورم. كشفت خلايا CAF مورفولوجيا كبيرة على شكل مغزل ، نموذجية من الخلايا الليفية ، وكانت مختلفة عن الخلايا السرطانية 4T1. يتبع التعبير FAP أكثر من خمسة مقاطع تؤكد أن ثقافة CAF الأولية حافظت على خصائصها الأصلية.عندما لم يتم الحفاظ على مدة ودرجة حرارة الحضانات مع الميكروبات ، تم العثور على استنساخ مع مورفولوجيا مختلفة بين الثقافة المعزولة. نمت هذه الخلايا الملوثة بشكل أسرع وسادت على ثقافة CAF الأساسية. CAFs ملزمة مع الإنسان فيريتين Hfn-FAP وظيفية نانو المخدرات زيادة في واحد إلى واحد، وتركيزات جزء الأجسام المضادة واحد إلى خمسة بثلاثة أضعاف، مقارنة مع HFN عارية.على العكس من ذلك، بالنسبة للخلايا الورم 4T1، أظهرت HFN عارية ملزمة أعلى من HFN وظيفية. لزيادة شوائب الغلة من CAF معزولة، والحفاظ على المخازن المؤقتة الباردة، واحترام وقت الحضانة مع الخرز، وسحب ما يصل إلى أربعة أورام لكل عمود قبل خطوة الإثراء النهائي. يمكن استخدام CAFs المعزولة لفحص العديد من أدوية النانو المرشحة من حيث الفعالية الملزمة والإقبالية والصيدلانية قبل الشروع في تجارب ما قبل السريرية في الجسم الحي.سمحت لنا عزلة CAF باختبار ما إذا كان يمكن استخدام الجسيمات النانوية لاستهداف البيئة الدقيقة للورم. مما يمهد الطريق إلى علاجات مستهدفة جديدة تعمل بالتعاون مع العلاج الكيميائي.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

المضادة للسرطان فعالية من العلاج الضوئي مع النانوية المستهدفة السرطان والرئة

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

والوريد البابي حقن نموذج لدراسة الكبد الانبثاث من سرطان الثدي

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

وسرطان الخلايا مسانج ماوس نموذج الإنتقالية الكلوي لتقييم الكمي وطولية من قبل السريرية العلاج

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

نموذج الفأر من التعب المستحث بواسطة الطرفية تشعيع

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

نموذج سرطان البنكرياس سينجينيك ماوس دراسة آثار انهانسر لا رجعة فيه

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

نموذج أورثوتوبيك طرحه ونيون مورين سينجينيك المعتمدة على الاندروجين والاخصاء مقاومة سرطان البروستاتا

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

إيمونوفينوتيبينج من أورثوتوبيك هوموجرافت (سينجينيك) من الفيلق الابتدائي موريني البنكرياس الأقنية غدية بالتدفق الخلوي

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

أورثوتوبيك زرع الخلايا غدية الرئة سينجينيك لدراسة التعبير PD-L1

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

A 3D Spheroid Model as a More Physiological System for Cancer-Associated Fibroblasts Differentiation and Invasion In Vitro Studies

نموذج Spheroid 3D كنظام أكثر فسيولوجية للتمييز الليفي المرتبطة بالسرطان والغزو في الدراسات المختبرية

Defining the ideal model for an in vitro study is essential, mainly if studying physiological processes such as differentiation of cells. In the tumor ...