Name: isolation of primary cancer-associated fibroblasts from a syngeneic murine model of breast cancer for the study of targeted nanoparticles
Uploaded: 2021-05-14T14:30:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Primary Cancer-Associated Fibroblasts from a Syngeneic Murine Model of Breast Cancer for the Study of Targeted Nanoparticles at JoVE.com

Это исследование было поддержано Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (AIRC) в рамках проекта IG 2017-ID. 20172 – P.I. Corsi Fabio. SM признает Педиатрический клинический исследовательский центр «Ромео и Энрика Инверницци», который поддерживает ее позицию. AB благодарит AIRC (id. 20172 project) и Миланский университет за исследовательскую стипендию. Постдокторские и докторские стипендии LS и MS поддерживаются Миланским университетом.

<ol>
	<li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+tumor+progression+and+metastasis.">Microenvironmental regulation of tumor progression and metastasis.</a> Nature Medicine. 19 (11), 1423-1437 (2013).</li><li>Velaei, K., Samadi, N., Barazvan, B., Soleimani Rad, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microenvironment-mediated+chemoresistance+in+breast+cancer.">Tumor microenvironment-mediated chemoresistance in breast cancer.</a> Breast. 30, 92-100 (2016).</li><li>Cheng, J. D., Weiner, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumors+and+their+microenvironments:+tilling+the+soil.+Commentary+re:+A.+M.+Scott+et+al.,+A+Phase+I+dose-escalation+study+of+sibrotuzumab+in+patients+with+advanced+or+metastatic+fibroblast+activation+protein-positive+cancer.">Tumors and their microenvironments: tilling the soil. Commentary re: A. M. Scott et al., A Phase I dose-escalation study of sibrotuzumab in patients with advanced or metastatic fibroblast activation protein-positive cancer.</a> Clinical Cancer Research. 9 (5), 1690-1695 (2003).</li><li>Hui, L., Chen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microenvironment:+Sanctuary+of+the+devil.">Tumor microenvironment: Sanctuary of the devil.</a> Cancer Letters. 368 (1), 7-13 (2015).</li><li>Balkwill, F. R., Capasso, M., Hagemann, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tumor+microenvironment+at+a+glance.">The tumor microenvironment at a glance.</a> Journal of Cell Science. 125, 5591-5596 (2012).</li><li>Chen, X., Song, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Turning+foes+to+friends:+targeting+cancer-associated+fibroblasts.">Turning foes to friends: targeting cancer-associated fibroblasts.</a> Nature Review. Drug Discovery. 18 (2), 99-115 (2019).</li><li>Franco, O. E., Shaw, A. K., Strand, D. W., Hayward, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+associated+fibroblasts+in+cancer+pathogenesis.">Cancer associated fibroblasts in cancer pathogenesis.</a> Seminars in Cell &amp; Developmental Biology. 21 (1), 33-39 (2010).</li><li>LeBleu, V. S., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+peek+into+cancer-associated+fibroblasts:+origins,+functions+and+translational+impact.">A peek into cancer-associated fibroblasts: origins, functions and translational impact.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11, (2018).</li><li>Li, X. -. Y., Hu, S. -. Q., Xiao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cancer-associated+fibroblasts+and+drug+resistance.">The cancer-associated fibroblasts and drug resistance.</a> European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 19 (11), 2112-2119 (2015).</li><li>Luo, H., Tu, G., Liu, Z., Liu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer-associated+fibroblasts:+a+multifaceted+driver+of+breast+cancer+progression.">Cancer-associated fibroblasts: a multifaceted driver of breast cancer progression.</a> Cancer Letters. 361 (2), 155-163 (2015).</li><li>Truffi, M., Sorrentino, L., Corsi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+the+tumor+microenvironment.">Fibroblasts in the tumor microenvironment.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 1234, 15-29 (2020).</li><li>Sugimoto, H., Mundel, T. M., Kieran, M. W., Kalluri, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+fibroblast+heterogeneity+in+the+tumor+microenvironment.">Identification of fibroblast heterogeneity in the tumor microenvironment.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 5 (12), 1640-1646 (2006).</li><li>Costa, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+heterogeneity+and+immunosuppressive+environment+in+human+breast+cancer.">Fibroblast heterogeneity and immunosuppressive environment in human breast cancer.</a> Cancer Cell. 33 (3), 463-479 (2018).</li><li>Ishii, G., Ochiai, A., Neri, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+heterogeneity+of+cancer-associated+fibroblast+within+the+tumor+microenvironment.">Phenotypic and functional heterogeneity of cancer-associated fibroblast within the tumor microenvironment.</a> Advances Drug Delivery Reviews. 99, 186-196 (2016).</li><li>Chen, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remodeling+the+tumor+microenvironment+with+emerging+nanotherapeutics.">Remodeling the tumor microenvironment with emerging nanotherapeutics.</a> Trends in Pharmacological Sciences. 39 (1), 59-74 (2018).</li><li>Truffi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nano-strategies+to+target+breast+cancer-associated+fibroblasts:+rearranging+the+tumor+microenvironment+to+achieve+antitumor+efficacy.">Nano-strategies to target breast cancer-associated fibroblasts: rearranging the tumor microenvironment to achieve antitumor efficacy.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (6), 1263 (2019).</li><li>Tong, R., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicines+Targeting+the+Tumor+Microenvironment.">Nanomedicines Targeting the Tumor Microenvironment.</a> Cancer Journal. 21 (4), 314-321 (2015).</li><li>Kaps, L., Schuppan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+cancer+associated+fibroblasts+in+liver+fibrosis+and+liver+cancer+using+nanocarriers.">Targeting cancer associated fibroblasts in liver fibrosis and liver cancer using nanocarriers.</a> Cells. 9 (9), 2027 (2020).</li><li>Miao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+tumor-associated+fibroblasts+for+therapeutic+delivery+in+desmoplastic+tumors.">Targeting tumor-associated fibroblasts for therapeutic delivery in desmoplastic tumors.</a> Cancer Research. 77 (3), 719-731 (2017).</li><li>Kelly, T., Huang, Y., Simms, A. E., Mazur, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+activation+protein-&#945;:+a+key+modulator+of+the+microenvironment+in+multiple+pathologies.">Fibroblast activation protein-&#945;: a key modulator of the microenvironment in multiple pathologies.</a> International Review of Cell and Molecular Biology. 297, 83-116 (2012).</li><li>Brennen, W. N., Isaacs, J. T., Denmeade, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rationale+behind+targeting+fibroblast+activation+protein-expressing+carcinoma-associated+fibroblasts+as+a+novel+chemotherapeutic+strategy.">Rationale behind targeting fibroblast activation protein-expressing carcinoma-associated fibroblasts as a novel chemotherapeutic strategy.</a> Molecular Cancer Therapeutics. 11 (2), 257-266 (2012).</li><li>Juillerat-Jeanneret, L., Tafelmeyer, P., Golshayan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+activation+protein-&#945;+in+fibrogenic+disorders+and+cancer:+more+than+a+prolyl-specific+peptidase.">Fibroblast activation protein-&#945; in fibrogenic disorders and cancer: more than a prolyl-specific peptidase.</a> Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21, 977-991 (2017).</li><li>Falvo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody-drug+conjugates:+targeting+melanoma+with+cisplatin+encapsulated+in+protein-cage+nanoparticles+based+on+human+ferritin.">Antibody-drug conjugates: targeting melanoma with cisplatin encapsulated in protein-cage nanoparticles based on human ferritin.</a> Nanoscale. 5 (24), 12278-12285 (2013).</li><li>Truffi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ferritin+nanocages:+A+biological+platform+for+drug+delivery,+imaging+and+theranostics+in+cancer.">Ferritin nanocages: A biological platform for drug delivery, imaging and theranostics in cancer.</a> Pharmacological Research. 107, 57-65 (2016).</li><li>Cai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+magnetic+resonance+imaging+and+staining+of+cancer+cells+using+ferrimagnetic+H-ferritin+nanoparticles+with+increasing+core+size.">Enhanced magnetic resonance imaging and staining of cancer cells using ferrimagnetic H-ferritin nanoparticles with increasing core size.</a> International Journal of Nanomedicine. 10, 2619-2634 (2015).</li><li>Heger, Z., Skalickova, S., Zitka, O., Adam, V., Kizek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoferritin+applications+in+nanomedicine.">Apoferritin applications in nanomedicine.</a> Nanomedicine. 9 (14), 2233-2245 (2014).</li><li>Mazzucchelli, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanometronomic+treatment+of+4T1+breast+cancer+with+nanocaged+doxorubicin+prevents+drug+resistance+and+circumvents+cardiotoxicity.">Nanometronomic treatment of 4T1 breast cancer with nanocaged doxorubicin prevents drug resistance and circumvents cardiotoxicity.</a> Oncotarget. 8 (5), 8383-8396 (2017).</li><li>Yu, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+cancer-associated+fibroblasts+by+dual-responsive+lipid-albumin+nanoparticles+to+enhance+drug+perfusion+for+pancreatic+tumor+therapy.">Targeting cancer-associated fibroblasts by dual-responsive lipid-albumin nanoparticles to enhance drug perfusion for pancreatic tumor therapy.</a> Journal of Controlled Release. 321, 564-575 (2020).</li><li>Mertens, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+effects+of+deleting+cancer-associated+fibroblasts+in+cholangiocarcinoma.">Therapeutic effects of deleting cancer-associated fibroblasts in cholangiocarcinoma.</a> Cancer Research. 73 (2), 897-907 (2013).</li><li>Kov&#225;cs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Core-shell+nanoparticles+suppress+metastasis+and+modify+the+tumour-supportive+activity+of+cancer-associated+fibroblasts.">Core-shell nanoparticles suppress metastasis and modify the tumour-supportive activity of cancer-associated fibroblasts.</a> Journal of Nanobiotechnology. 18, 18 (2020).</li><li>Sharon, Y., Alon, L., Glanz, S., Servais, C., Erez, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+normal+and+cancer-associated+fibroblasts+from+fresh+tissues+by+Fluorescence+Activated+Cell+Sorting+(FACS).">Isolation of normal and cancer-associated fibroblasts from fresh tissues by Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS).</a> Journal of Visualized Experiments. (71), e4425 (2013).</li><li>Sitia, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+targeting+of+cancer-associated+fibroblasts+by+engineered+H-ferritin+nanocages+loaded+with+navitoclax.">Selective targeting of cancer-associated fibroblasts by engineered H-ferritin nanocages loaded with navitoclax.</a> Cells. 10 (2), 328 (2021).</li><li>Bellini, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+nanocages+for+self-triggered+nuclear+delivery+of+DNA-targeted+chemotherapeutics+in+cancer+cells.">Protein nanocages for self-triggered nuclear delivery of DNA-targeted chemotherapeutics in cancer cells.</a> Journal of Controlled Release. 196, 184-196 (2014).</li><li>Sahai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+framework+for+advancing+our+understanding+of+cancer-associated+fibroblasts.">A framework for advancing our understanding of cancer-associated fibroblasts.</a> Nature Reviews Cancer. 20, 174-186 (2020).</li><li>Dvo&#345;&#225;nkov&#225;, B., Lacina, L., Smetana, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+normal+fibroblasts+and+their+cancer-associated+counterparts+(CAFs)+for+biomedical+research.">Isolation of normal fibroblasts and their cancer-associated counterparts (CAFs) for biomedical research.</a> Methods in Molecular Biology. 1879, 393-406 (2018).</li><li>Calvo, F., Hooper, S., Sahai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+immortalization+of+fibroblasts+from+different+tumoral+stages.">Isolation and immortalization of fibroblasts from different tumoral stages.</a> Bio-protocol. 4 (7), 1097 (2014).</li><li>Sha, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+cancer-associated+fibroblasts+and+its+promotion+to+the+progression+of+intrahepatic+cholangiocarcinoma.">Isolation of cancer-associated fibroblasts and its promotion to the progression of intrahepatic cholangiocarcinoma.</a> Cancer Medicine. 7 (9), 4665-4677 (2018).</li><li>Hwang, R. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer-associated+stromal+fibroblasts+promote+pancreatic+tumor+progression.">Cancer-associated stromal fibroblasts promote pancreatic tumor progression.</a> Cancer Research. 68 (3), 918-926 (2008).</li><li>Zhen, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+nanocage+mediated+fibroblast-activation+protein+targeted+photoimmunotherapy+to+enhance+cytotoxic+T+cell+infiltration+and+tumor+control.">Protein nanocage mediated fibroblast-activation protein targeted photoimmunotherapy to enhance cytotoxic T cell infiltration and tumor control.</a> Nano Letters. 17 (2), 862-869 (2017).</li><li>Ji, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+assembly+integration+of+fibroblast-targeting+and+cell-penetration+features+for+enhanced+antitumor+drug+delivery.">Peptide assembly integration of fibroblast-targeting and cell-penetration features for enhanced antitumor drug delivery.</a> Advances Materials. 27 (11), 1865-1873 (2015).</li></ol>

Авторам нечего раскрывать.

CAF становятся ключевыми игроками в ремоделировании внеклеточного матрикса, способствуя прогрессированию метастазирования и ограничивая доступ к лекарственным средствам к опухолевой площадке34. Однако из-за их гетерогенности их роли все еще противоречивы — некоторые КАФ являются опухолегенными, тогда как некоторые другие подтипы, по-видимому, играют роль опухолеподавляющей. В этом контексте их изоляция может представлять чрезвычайный интерес, чтобы пролить больше света на их много обсуждаемую роль в прогрессировании рака, что будет иметь важные клинические последствия12,31. Кроме того, успешная экстракция CAF из моделей опухолей человека и доклинических мышей также облегчит разработку новых препаратов, нацеленных на CAF. В этой статье сообщается о методе эффективного выделения и культивирования первичных ЦАФ из сингенной доклинической модели рака молочной железы. Основываясь на опыте, три экспериментальных шага в основном влияют на успех протокола.
Первый работает быстро, чтобы избежать агрегации клеточных суспензий, связанных с риском свертывания в колонке и замедления оттока клеток: на самом деле, когда клетки, прошедшие через столбец, были сгруппированы вместе, вероятность неоптимального процесса изоляции увеличивалась, а конечные культуры содержали «загрязняющие» клеточные клоны. Второй - объединение клеток из разных опухолей после прохождения истощения, чтобы гарантировать достаточное количество клеток для прохождения на заключительном этапе обогащения. Последней критической проблемой является покрытие извлеченных клеток с высокой плотностью клеток, скорее всего, начиная с одной скважины из 24-скважинной пластины, чтобы стимулировать рост клеток и расширение колонии до 4-5 проходов. Если клетки были посеяны при низкой плотности, они расширялись на свободной поверхности и быстро переставали размножаться.
В нескольких исследованиях уже описаны методы экстракции CAF как человеческого, так и мышиного происхождения, чтобы изучить их роль в содействии развитию рака и инвазивности. Это было сделано при многих типах опухолей, включая рак молочной железы, меланому, холангиокарциному и аденокарциному поджелудочной железы35,36,37,38. Однако из-за отсутствия специфических маркеров CAF и их неоднородности результаты этих процессов все еще являются неоптимальными.
Здесь изолированные клетки были использованы для проверки способности НАЦЕЛИВАНИЯ CAF на нанокажей HFn, функционализированных с анти-FAP-целевыми элементами. Использование первичных культур CAF было значительным преимуществом, позволяющим валидировать наностратегию ex vivo с гораздо более простым и экономически эффективным экспериментом по связыванию, чем делать это непосредственно in vivo на этом предварительном этапе оптимизации нанонаругических средств.
В этом смысле тестирование ex vivo на ЦАФ может предшествовать экспериментам in vivo на животных, позволяя проводить скрининг и отбор наиболее перспективных наночастиц для оптимального нацеливания CAF. Представленная здесь модель CAF также может быть использована для предварительных исследований эффективности при загрузке наночастиц активными лекарственными средствами. Животные будут использоваться только позже для оценки биораспределения, фармакокинетики и исследований эффективности.
В настоящее время разрабатывается несколько нанолекарственных КАФ-таргетинга, таких как ферритиновые нанокажи для фотодинамической терапии при раке молочной железы и частицы на основе пептидов для доставки доксорубицина в моделях рака предстательной железы39,40. Тем не менее, не многие исследования были сосредоточены на выделении CAF в качестве клеточных платформ для оптимизации нанонарокарственных устройств.
Этот протокол имеет некоторые ограничения. Во-первых, это трудоемкий протокол, требующий подготовки и закупки нескольких реагентов и материалов. Во-вторых, из-за дефицита ЦАФ в опухоли молочной железы 4T1 их выход низкий. Эксперименты с наночастицами должны планироваться и проводиться, как только будет достигнуто необходимое количество клеток, так как первичные КАФ подвергаются старению и не могут поддерживаться в культуре в течение длительного времени. В заключение, этот метод выделения, культивирования и характеристики КАФ может стать мощным инструментом для ускорения разработки новых целевых наномедицин в борьбе с раком.

В течение последних десятилетий стало ясно, что уничтожения опухолевых клеток обычно недостаточно для искоренения злокачественных новообразований, так как микроокружение опухоли может вызвать рецидив опухоли и вызвать терапевтическую резистентность1,2. Затем появилась новая парадигма: нацеливание на опухолевую строму, чтобы лишить опухоль поддерживающих факторов и, таким образом, повысить эффективность химиотерапии3,4,5. В частности, связанные с раком фибробласты (ЦАФ) являются интересной стромальной мишенью во многих солидных опухолях6,7. КАФ представляют собой очень гетерогенную группу клеток, которые взаимодействуют с раковыми клетками и клетками иммунной системы посредством секреции факторов роста, цитокинов и хемокинов; наращивать и реконструирует внеклеточный матрикс; и обеспечивают образование метастазов8,9,10,11,12. В зависимости от типа опухоли, ЦАФ проявляют проопухолевые функции, в то время как другие подтипы ЦАФ, по-видимому, имеют опухолеподавляющие функции13,14. Чтобы лучше прояснить эту дихотомию, важна тщательная характеристика ЦАФ из первичных и метастатических опухолей.
В этом контексте новая область исследований была сосредоточена на разработке наноразмерных агентов, предназначенных для нацеливания и / или разрушения КАФ путем доставки активных молекул и лекарств, способных ремоделировать микросреду опухоли15,16,17,18. Несколько типов наночастиц были разработаны для достижения АБЛЯЦИИ CAF цитотоксическими препаратами, для индуцирования фотодинамической терапии, нацеленной на CAF, или для перепрограммирования CAF путем возвращения их в состояние покоя или индуцирования экспрессии лигандов, связанных с АПОПТОЗом, индуцированной апоптозом, которая индуцирует апоптоз соседних раковых клеток16,19. Более того, потенциал многих наночастиц для активного нацеливания на конкретные биологические маркеры дает надежду на выбор подмножеств CAF для нацеливания. Хотя его абсолютная специфичность для CAF все еще ставится под сомнение, белок активации фибробластов (FAP) является одной из наиболее перспективных мишеней проопухолюменной стромы и используется для управления доставкой нанопрепаратов, тем самым прокладывая путь для разработки CAF-таргетной нанотерапевтики20,21,22.
В этой статье описывается выделение первичных КАФ из сингенной модели рака молочной железы у мыша и сообщается об их использовании при изучении способности нацеливания наночастиц, разработанных для распознавания маркера CAF, FAP. Ферритиновые наноказы используются в качестве потенциальных наносистем для настройки способа, так как их специфичность доставки может быть сформирована поверхностным воздействием целевых объектов23,24. Более того, ферритины были успешно доказаны как отличные биосовместимые челноки для противоопухолевых применений, запускающие быстрое накопление полезной нагрузки в опухолевой массе25,26,27. На сегодняшний день доклинические исследования CAF-таргетных наносистем включали в себя тестирование vitro на клеточных линиях фибробластов, стимулируемых в культуре с трансформацией фактора роста-бета для индуцирования активации клеток и экспрессии некоторых иммунофенотипических особенностей CAF28,29. Этот метод обычно применяется к увековеченным клеточным линиям (таким как NIH3T3, LX-2) и является довольно быстрым и простым, давая активированные клетки за несколько часов или дней. Ограничение заключается в том, что, хотя стимуляция in vitro индуцирует экспрессию некоторых генов, приписываемых активированным миофибробластам, она не может полностью резюмировать все биологические особенности реальных CAF, особенно их гетерогенность in vivo.
Другая стратегия предполагает извлечение первичных ЦАФ из образцов опухолей человека или мыши30,31. Это гарантирует, что активация CAF происходит в физиологическом контексте и что гетерогенность субпопуляций CAF сохраняется. В соответствии с целью исследования, CAF могут быть получены из разных источников, что позволяет изучить наиболее надежное состояние. Протокол, о котором сообщается здесь, будет полезен для ученых, которые стремятся выполнить предварительную оценку функциональности новых наночастиц, предназначенных для нацеливания на CAF из модели рака молочной железы мыша. Изолированные CAF будут полезны для скрининга тех наночастиц, которые достаточно перспективны, чтобы продолжить оценку in vivo на животных моделях рака. Это будет актуально на первых этапах производства наночастиц, что приведет нанотехнологий к совершенствованию дизайна наночастиц, в основном рассматривая стратегию иммобилизации лигандов для достижения оптимальных свойств нацеливания.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>ACK Lysing buffer</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>10-548E</td>
			<td>Store at +15&#176; to +30 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 goat anti-human antibody</td>
			<td>Immunological Science</td>
			<td>IS-20022</td>
			<td>Protect from light.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-FAP Fab fragment (3F2)</td>
			<td>Creative Biolabs</td>
			<td>TAB-024WM-F(E)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>028BALB/C</td>
			<td>7 weeks old female mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td>Store at 2-8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 antibody</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-110-796</td>
			<td>FITC-conjugated fluorescent antibody; clone REA 737; Store protected from light at 2&#8211;8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD90.2 antibody</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-102-960</td>
			<td>PE-conjugated fluorescent antibody; clone 30-H12; Store protected from light at 2&#8211;8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainers 70 &#181;m</td>
			<td>VWR</td>
			<td>732-2758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CytoFLEX</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td></td>
			<td>laser configuration B4-R2-V0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dead cell Removal Kit</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-101</td>
			<td>contains 10 mL of Dead Cell Removal MicroBeads; 25 mL of 20&#215; Binding Buffer Stock Solution. Store protected from light at 2&#8722;8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin</td>
			<td>Caliper</td>
			<td>760504</td>
			<td>reagent for in vivo imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM High Glucose w/o L-Glutamine&#160; w/ Sodium Pyruvate</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB7501L</td>
			<td>Warm at 37 &#176;C in a water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS w/o Calcium, w/o Magnesium</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB4004L</td>
			<td>Keep at room temperature.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECS0180L</td>
			<td>Before use, heat at 56 &#176;C for 30 min to kill all the complement proteins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescein Istothiocyanate isomer I (FITC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F7250</td>
			<td>Store protected from light at 2&#8211;8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS C Tubes</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-334</td>
			<td>They are used in combination with the gentleMACS Dissociator.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GentleMACS dissociator</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
			<td>Two samples can be processed in parallel. Special protocols have been developed for various tissues.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECS0200D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ham&#39;s F12&#160; w/o L-Glutamine</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB7502L</td>
			<td>Warm at 37 &#176;C in a water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS Lumina II imaging system</td>
			<td>Caliper Life Sciences</td>
			<td></td>
			<td>This imaging system is easy to use for both fluorescent and bioluminescent imaging in vivo. Equipped with a Living Image Software for analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LD columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-901</td>
			<td>Composed of ferromagnetic spheres, designed for stringent depletion of unwanted cells. Position the required number of columns on the magnetic Separation Unit and equilibrate with buffer before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB3000D</td>
			<td>200 mM stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light/fluorescence microscope equipped with camera</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DM IL LED Fluo/ ICC50 W CameraModule</td>
			<td>inverted microscope for live cells with camera</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS MultiStand</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Separation Unit</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-976</td>
			<td>Position the magnet on appropriate stand before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Tissue Storage Solution</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-100-008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS columns</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-201</td>
			<td>Composed of ferromagnetic spheres, designed for positive selection of cells. Position the required number of columns on the magnetic Separation Unit and equilibrate with buffer before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycoplasma Removal Agent</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECMC210A</td>
			<td>Dilute in culture medium 1:100.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>ND-2000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non essential aminoacids</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB3054D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB3001D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human apoferritin H-homopolymer (HFn)&#160;</td>
			<td>Molirom</td>
			<td>MLR-P018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 w/o L-Glutamine</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ECB9006L</td>
			<td>Warm at 37 &#176;C in a water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tumor-Associated Fibroblast Isolation kit</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-116-474</td>
			<td>Contains 1 mL of Non-Tumor-Associated Fibroblast Depletion Cocktail, mouse; 1 mL of CD90.2 (Tumor-Associated Fibroblast) MicroBeads,mouse. Store protected from light at 2-8 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tumor Dissociation Kit</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-730</td>
			<td>Contains lyophilized enzymes (D, R, A) and buffer A; reconstitute enzymes according to the manufacturer&#39;s instructions, aliquot and store at - 20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue 0.4%</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>17-942E</td>
			<td>dilute 1:1 with a sample of cell suspension before counting the cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE select</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12563-029</td>
			<td>use at room temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>BE17-161E</td>
			<td>Warm at 37 &#176;C in a water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 Primo TC flask</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ET7076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeba Spin Desalting Columns</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>89890</td>
			<td>7K MWCO, 2 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL tubes</td>
			<td>Biosigma</td>
			<td>CL15.002.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL tubes</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ET5015B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4T1-luc2</td>
			<td>Caliper</td>
			<td></td>
			<td>Mouse mammary gland cancer cell line stably transfected with firefly luciferase gene</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>Euroclone</td>
			<td>ET5050B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of primary cancer-associated fibroblasts from a syngeneic murine model of breast cancer for the study of targeted nanoparticles

Связанные с раком фибробласты (ЦАФ) являются ключевыми действующими лицами в контексте микроокружения опухоли. Несмотря на сокращение количества по сравнению с опухолевыми клетками, ЦАФ регулируют прогрессирование опухоли и обеспечивают защиту от противоопухоляющего иммунитета. Новые противоопухолевые стратегии направлены на ремоделирование микроокружения опухоли путем абляции проопухолевых ЦАФ или перепрограммирования функций ЦАФ и их статуса активации. Перспективным подходом является разработка наноразмерных агентов доставки, способных нацеливаться на ЦАФ, что позволяет осуществлять специфическую доставку лекарств и активных молекул. В этом контексте клеточная модель ЦАФ может стать полезным инструментом для скрининга in vitro и предварительного исследования таких наноформуляций.
Это исследование описывает выделение и культуру первичных КАФ из сингенной мышиной модели 4T1 тройного негативного рака молочной железы. Магнитные шарики использовались в 2-ступенчатом процессе разделения для извлечения ЦАФ из диссоциированных опухолей. Иммунофенотипирование контроля проводили с помощью проточной цитометрии после каждого прохода для проверки выхода процесса. Изолированные CAF могут быть использованы для изучения способности нацеливания различных наноформуляций, предназначенных для борьбы с микроокружением опухоли. Флуоресцентно меченые Н-ферритиновые нанокажи использовались в качестве наночастиц-кандидатов для создания метода. Наночастицы, либо голые, либо сопряженные с целевым лигандом, были проанализированы на их связывание с ЦАФ. Результаты показывают, что экстракция ex vivo ЦАФ молочной железы может быть полезной системой для тестирования и проверки наночастиц для специфического нацеливания на опухолевые ЦАФ.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Primary Cancer-Associated Fibroblasts from a Syngeneic Murine Model of Breast Cancer for the Study of Targeted Nanoparticles at JoVE.com

Isolation of Primary Cancer-Associated Fibroblasts from a Syngeneic Murine Model of Breast Cancer for the Study of Targeted Nanoparticles

Целью данной статьи является предоставление протокола выделения и культивирования первичных связанных с раком фибробластов из сингенной мышиной модели тройного негативного рака молочной железы и их применения для доклинического исследования новых наночастиц, предназначенных для нацеливания на микроокружение опухоли.

Выделение первичных связанных с раком фибробластов из сингенной мышиной модели рака молочной железы для изучения целевых наночастиц

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) are key actors in the context of the tumor microenvironment. Despite being reduced in number as compared to tumor ...

Этот протокол позволяет успешно изолировать и культивировать первичные связанные с раком фибробласты из муринового рака молочной железы, для скрининга новых наночастиц, предназначенных для нацеливания на опухолевую микросреду. Первичные CAF представляют собой наиболее надежную и физиологическую модель для исследований опухолевой стромы in vitro. В этом протоколе мы описываем, как достичь оптимального урожая.Для начала приготовьте смесь для пищеварения для диссоциации опухоли и замочите от трех до пяти миллиметровых фрагментов опухоли в растворе после плотного закрытия трубки. Переверните трубку вверх дном, проверив, что все кусочки опухоли находятся в нижней части трубки по направлению к колпачку. Затем прикрепите трубку к механическому диссоциатеру в соответствующем корпусе и запустите программу диссоциации, специально разработанную для тяжелых опухолей.После пробега отсоеднейте трубку и поместите ее вверх дном, чтобы инкубировать образец при 37 градусах Цельсия в течение 40 минут с легким встряхиванием. Затем повторно прикрепите трубку к диссоциатеру в правильном корпусе и дважды запустите программу диссоциации для жестких опухолей, гарантируя, что в конце процедуры не останется больших кусочков ткани. Отфильтруйте образец через 40-микрон-клеточный сетчатый фильтр в 50-миллилитровой трубке.Затем промыть фильтр 10 миллилитрами среды RPMI 1640 и центрифугой. После центрифугирования повторно суспендируют гранулу в буфере PBE, состоящем из PBS, 0,5% BSA и двух миллимоляров ЭДТА, и подсчитайте ячейки с Trypan Blue. Восстановите буфер связывания удаления мертвых клеток, разбавляя 20-кратный связывающий буферный раствор стерильной двойной дистиллированной водой.Промыть ячейки пятью миллилитрами 1X связывающего буфера и центрифуги. После центрифугирования повторно суспендируют клеточную гранулу с 0,1 миллилитра микрошаров удаления мертвых клеток на срок до 10-седьмых клеток и инкубируют при комнатной температуре в течение 15 минут. Во время инкубации подготовьте магнитную подставку под капотом и повесьте к ней ферромагнитные разделительные колонны, кончики которого направлены вниз.Уравновешивайте колонны 0,5 миллилитрами буфера холодного связывания и дождитесь, пока раствор не протечет. После инкубации добавьте 400 микролитров буфера холодного связывания в шариковую и клеточную суспензию. Загрузите весь объем на колонну и соберите стоки в 15-миллилитровую трубку.Промыть колонну четыре раза 0,5 миллилитрами буфера холодного связывания и собрать общий объем сточных вод в той же трубе. Для истощения фибробластов, не связанных с раком, отфильтруйте клеточную суспензию с помощью 70-микронный клеточный ситечко, смоченное PBS, и центрифугируют клетки. Удалите супернатант и повторно суспендирует гранулу в 80 микролитрах холодного буфера ПБЭ.Добавьте 20 микролитров коктейля истощения фибробластов, не связанного с опухолью. Хорошо перемешайте и высиживайте образец при 4 градусах Цельсия в течение 15 минут в темноте. Во время инкубации с шариками подготовьте ферромагнитные обеднители колонны на магнитной подставке.Уравновесьте колонны двумя миллилитрами холодного буфера PBE и подождите, пока раствор не пройдет. После инкубации добавьте 400 микролитров буфера в шариковую и клеточную суспензию. Загрузите весь объем на колонну и соберите стоки в 15-миллилитровую трубку.Дважды промыть колонну двумя миллилитрами ПБЭ. Соберите общий объем сточных вод в ту же трубу и центрифугировать стоки. Для положительного отбора связанных с раком фибробластов повторно суспендируют гранулу в 80 микролитров холодного буфера ПБЭ.Затем на 20 микролитров опухолеассированных фибробластов микрограбластов и инкубируют образцы при 4 градусах Цельсия в течение 15 минут в темноте. Во время инкубации подготовьте ферромагнитные разделительные колонны на магнитной подставке и уравновесьте их 0,5 миллилитрами холодного буфера ПБЭ. После инкубации добавьте 400 микролитров ПБЭ в шариковую и клеточную суспензию.Загрузите весь объем на колонну и позвольте немаркированным ячейкам течь в 15-миллилитровую трубку. Промыть колонну три раза 0,5 миллилитрами буфера ПБЭ и собрать общий объем сточных вод в той же трубе. Снимите колонку с магнита и поместите ее в трубку размером 1,5 миллилита.Добавьте один миллилитр ПБЭ на колонну и немедленно втолкните плунжер в колонну, чтобы промыть ячейки. После центрифугирования повторно суспендируют клеточную гранулу в соответствующем объеме DMEM и засейте клетки в тканевую культурную пластину. Проверьте плотность клеток под микроскопом и поместите пластину на 37 градусов по Цельсию и 5% углекислого газа, чтобы позволить клеткам прилипать и расти.Инъекция клеток люциферазы 4T1 в жировую подушку молочной железы самок мышей привела к росту обнаруживаемой опухолевой массы через пять дней после имплантации. Чтобы найти окно жертвоприношения, адекватное для изоляции CAF, был достигнут оптимальный компромисс между более высоким размером опухоли и визуализацией биолюминесценции, с одной стороны, и возникающим изъязвлением и некрозом опухоли, с другой стороны. День 20 был установлен в качестве временной точки для оптимизации восстановления клеток после процесса изоляции.Еще два прохода были необходимы для изоляции популяции ЦАФ из панели собранных жизнеспособных клеток, истощения неопухородных фибробластов и обогащения опухолеациоциоцироваженных фибробластов. Клетки CAF выявили большую морфологию верететенообразной формы, типичную для фибробластов, и отличались от опухолевых клеток 4T1. Выражение FAP, последовавшее за пятью отрывками, подтверждает, что первичная культура CAF сохранила свои первоначальные характеристики.Когда продолжительность и температура инкубаций с микробусами не поддерживались, среди выделенной культуры были обнаружены клоны с различной морфологией. Эти загрязняющие клетки росли быстрее и преобладали над первичной культурой CAF. Связывание CAF с функционализированным нанопрепаратом Hfn-FAP ферритина человека увеличивалось при концентрации фрагментов антител один к одному и от одного до пяти в три раза по сравнению с голым HFN.Напротив, для опухолевых клеток 4T1 голый HFN показал более высокое связывание, чем функционализированный HFN. Чтобы увеличить выход примеси изолированного CAF, держите буферы холодными, соблюдайте время инкубации с шариками и вытягивайте до четырех опухолей на столб перед заключительным этапом обогащения. Изолированные КАФ могут быть использованы для скрининга нескольких потенциальных нанопретратов с точки зрения связывания, поглощения и фармакологической эффективности, прежде чем приступать к доклиническим экспериментам in vivo.Изоляция CAF позволила нам проверить, могут ли наночастицы быть использованы для нацеливания на микроокружение опухоли. Таким образом, прокладывая путь к новым таргетным методам лечения, работающим в синергии с химиотерапией.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Anticancer Efficacy of Photodynamic Therapy with Lung Cancer-Targeted Nanoparticles

Антираковая Эффективность фотодинамической терапии рака легких с таргетингом наночастицами

Photodynamic therapy (PDT) is a non-invasive and non-surgical method representing an attractive alternative choice for lung cancer treatment. ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

Воротной вены для инъекций модель для изучения печени метастазирования рака молочной железы

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

Ячейка Карцинома Сингенной Мышь Модели метастатического Почечной для количественных и Продольных оценок доклинических Терапии

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Мышь Модель усталости, индуцированный Peripheral Облучение

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

A Syngeneic Pancreatic Cancer Mouse Model to Study the Effects of Irreversible Electroporation

Модель мышь сингенных рака поджелудочной железы для изучения последствий необратимой электропорации

Pancreatic cancer (PC), a disease which kills approximately 40,000 patients each year in the US, has successfully evaded several therapeutic approaches ...

A Bioluminescent and Fluorescent Orthotopic Syngeneic Murine Model of Androgen-dependent and Castration-resistant Prostate Cancer

Биолюминесцентных и флуоресцентный ортотопическая сингенных мышиных модель андроген зависимых и кастрация стойкие рака простаты

Orthotopic tumor modeling is a valuable tool for pre-clinical prostate cancer research, as it has multiple advantages over both subcutaneous and ...

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft (Syngeneic) of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Immunophenotyping of Orthotopic Homograft Syngeneic of Murine Primary KPC Pancreatic Ductal Adenocarcinoma by Flow Cytometry

Иммунофенотипирование ортотопическая Homograft (сингенных) из мышиных первичной КЗК аденокарциномы поджелудочной железы протоковой подачей Cytometry

Homograft (syngeneic) tumors are the workhorse of today&#39;s immuno-oncology (I/O) preclinical research. The tumor microenvironment (TME), particularly ...

Orthotopic Transplantation of Syngeneic Lung Adenocarcinoma Cells to Study PD-L1 Expression

Ортотопическая трансплантация клеток аденокарциномы сингенных легкого учиться выражение PD-L1

The use of mouse models is indispensable for studying the pathophysiology of various diseases. With respect to lung cancer, several models are available, ...

A 3D Spheroid Model as a More Physiological System for Cancer-Associated Fibroblasts Differentiation and Invasion In Vitro Studies

3D сфероидная модель как более физиологическая система для рака связанных фибробластов дифференциации и вторжения в vitro исследований

Defining the ideal model for an in vitro study is essential, mainly if studying physiological processes such as differentiation of cells. In the tumor ...