Name: microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura
Uploaded: 2021-07-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af National Natural Science Foundation of China (nr.:31772519, 31720103916; ) og et åbent tilskud fra State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, South West University (nr.: sklsgb2013003).

1. Insektopdræt og vedligeholdelse
<ol><li>Kultur Spodoptera litura larverne i miljøsimuleringskamre med en kunstig kost, indtil de når dag 4 i den 6. instar (L6D4). Vælg hanlarver, når ormene kommer ind på den første dag i den 6. instar (L6D0) baseret på den omvendte trekantformede struktur på den ottende mave14. BEMÆRK: Larver opdræt og vedligeholdelsesteknikker blev offentliggjort tidligere4,14</...

<ol>
	<li>Zeitlinger, J., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thorax+closure+in+Drosophila:+involvement+of+Fos+and+the+JNK+pathway.">Thorax closure in Drosophila: involvement of Fos and the JNK pathway.</a> Development. 126 (17), 3947-3956 (1999).</li><li>Ray, H. J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tissue+fusion+during+development.">Mechanisms of tissue fusion during development.</a> Development. 139 (10), 1701-1711 (2012).</li><li>Ducuing, A., Keeley, C., Mollereau, B., Vincent, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DPP-mediated+feed-forward+loop+canalizes+morphogenesis+during+Drosophila+dorsal+closure.">DPP-mediated feed-forward loop canalizes morphogenesis during Drosophila dorsal closure.</a> The Journal of Cell Biology. 208 (2), 239-248 (2015).</li><li>Du, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+functional+characterization+of+doublesex+gene+in+the+testis+of+Spodoptera+litura.">Identification and functional characterization of doublesex gene in the testis of Spodoptera litura.</a> Insect Science. 26 (6), 1000-1010 (2019).</li><li>Qin, H. G., Ding, J., Ye, Z. X., Huang, S. J., Luo, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+analysis+of+experimental+population+of+Spodoptera+litura.">Dynamic analysis of experimental population of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 13 (2), 45-48 (2004).</li><li>Guan, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+research+in+biology+and+ecology+of+Spodoptera+litura.">The research in biology and ecology of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 8 (1), 57-61 (1999).</li><li>Wen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+testis+development+and+spermatogenesis+in+Spodopture+litura+(lepidoptera:+noctuidae).">The testis development and spermatogenesis in Spodopture litura (lepidoptera: noctuidae).</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition. 51 (4), 47-56 (2019).</li><li>Friedl&#228;nder, M., Seth, R. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eupyrene+and+apyrene+sperm:+dichotomous+spermatogenesis+in+Lepidoptera.">Eupyrene and apyrene sperm: dichotomous spermatogenesis in Lepidoptera.</a> Advances in Insect Physiology. 32, 206 (2010).</li><li>Cook, P. A., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-fertile+sperm+delay+female+remating.">Non-fertile sperm delay female remating.</a> Nature. 397 (6719), 486 (1999).</li><li>Iriki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+function+of+apyrene+spermatozoa+in+the+silk+worm.">On the function of apyrene spermatozoa in the silk worm.</a> Zoological Magazine. 53, 123-124 (1941).</li><li>Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+study+of+fusion+of+testis+in+Lepidoptera+insects.">The study of fusion of testis in Lepidoptera insects.</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition). 46 (5), 1-7 (2014).</li><li>Klowden, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Physiological systems in insects. , (2007).</li><li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+characterization+of+two+testis-specific+promoters+in+the+silkworm,+Bombyx+mori.">Transgenic characterization of two testis-specific promoters in the silkworm, Bombyx mori.</a> Insect Molecular Biology. 24 (2), 183-190 (2015).</li><li>Guo, X. R., Zheng, S. C., Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sterol+carrier+protein+2/3-oxoacyl-CoA+thiolase+(SCPx)+is+involved+in+cholesterol+uptake+in+the+midgut+of+Spodoptera+litura:+gene+cloning,+expression,+localization+and+functional+analyses.">The sterol carrier protein 2/3-oxoacyl-CoA thiolase (SCPx) is involved in cholesterol uptake in the midgut of Spodoptera litura: gene cloning, expression, localization and functional analyses.</a> BioMed Central Molecular Biology. 10, 102 (2009).</li><li>Kope&#263;, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+necessity+of+the+brain+for+the+inception+of+insect+metamorphosis.">Studies on the necessity of the brain for the inception of insect metamorphosis.</a> Biological Bulletin. 42 (6), 323-342 (1922).</li><li>Wigglesworth, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+controlling+moulting+and+'metamorphosis'+in+an+insect.">Factors controlling moulting and 'metamorphosis' in an insect.</a> Nature. 133 (5), 725-726 (1934).</li><li>Williams, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+insect+diapause;+the+role+of+the+brain+in+the+production+and+termination+of+pupal+dormancy+in+the+giant+silkworm,+Platysamia+cecropia.">Physiology of insect diapause; the role of the brain in the production and termination of pupal dormancy in the giant silkworm, Platysamia cecropia.</a> Biological Bulletin. 90 (3), 234-243 (1946).</li><li>Fukuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+control+of+molting+and+pupation+in+the+silkworm.">Hormonal control of molting and pupation in the silkworm.</a> Proceedings of the Imperial Academy Tokyo. 16 (8), 417-420 (1940).</li><li>Tian, H. J., Liu, Z. P., Bai, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+methods+to+detect+Sperm+quality+of+mammalian.">Common methods to detect Sperm quality of mammalian.</a> Journal of Economic Zoology. 8 (4), 198-201 (2004).</li><li>Ji, X. S., Chen, S. L., Zhao, Y., Tian, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+the+quality+evaluation+of+fish+sperm.">Progress in the quality evaluation of fish sperm.</a> Chinese Fishery Science. 14 (6), 1048-1054 (2007).</li><li>Baulny, B. O. D., Vern, Y. L., Kerboeuf, D., Maisse, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+evaluation+of+mitochondrial+activity+and+membrane+integrity+in+fresh+and+cryopreserved+rainbow+trout+(Oncorhynchus+mykiss)+spermatozoa.">Flow cytometric evaluation of mitochondrial activity and membrane integrity in fresh and cryopreserved rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) spermatozoa.</a> Cryobiology. 34 (2), 141-149 (1997).</li><li>Krasznai, Z., M&#225;ri&#225;n, T., Balkay, I., Emri, M., Tr&#243;n, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+and+structural+changes+in+the+membrane+of+common+carp+(Cyprinus+carpio+L.)+sperm+induced+by+hypo-osmotic+shock.">Permeabilization and structural changes in the membrane of common carp (Cyprinus carpio L.) sperm induced by hypo-osmotic shock.</a> Aquaculture. 129 (1), 134 (1995).</li><li>Kime, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer-assisted+sperm+analysis+(CASA)+as+a+tool+for+monitoring+sperm+quality+in+fish.">Computer-assisted sperm analysis (CASA) as a tool for monitoring sperm quality in fish.</a> Comparative Biochemistry &amp; Physiology Toxicology &amp; Pharmacology Cbp. 130 (4), 425-433 (2001).</li><li>Rurangwa, E., Volckaert, F. A., Huyskens, G., Kime, D. E., Ollevier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+of+refrigerated+and+cryopreserved+semen+using+computer-assisted+sperm+analysis+(CASA),+viable+staining+and+standardized+fertilization+in+African+catfish+(Clarias+gariepinus).">Quality control of refrigerated and cryopreserved semen using computer-assisted sperm analysis (CASA), viable staining and standardized fertilization in African catfish (Clarias gariepinus).</a> Theriogenology. 55 (3), 751-769 (2001).</li><li>Seth, R. K., Kaur, J. J., Rao, D. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+larval+exposure+to+sublethal+concentrations+of+the+ecdysteroid+agonists+RH-5849+and+tebufenozide+(RH-5992)+on+male+reproductive+physiology+in+Spodoptera+litura.">Effects of larval exposure to sublethal concentrations of the ecdysteroid agonists RH-5849 and tebufenozide (RH-5992) on male reproductive physiology in Spodoptera litura.</a> Journal of Insect Physiology. 50 (6), 505-517 (2004).</li><li>Sweeney, R. M., Watterson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rib+development+in+chick+embryos+analyzed+by+means+of+tantalum+foil+blocks.">Rib development in chick embryos analyzed by means of tantalum foil blocks.</a> American Journal of Anatomy. 126 (2), 127-149 (1969).</li><li>Wilde, S., Logan, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+impermeable+barriers+combined+with+candidate+factor+soaked+beads+to+study+inductive+signals+in+the+chick.">Application of impermeable barriers combined with candidate factor soaked beads to study inductive signals in the chick.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54618 (2016).</li></ol>

Efter mikrokirurgisk obstruktion af testiklernes fusion i Spodoptera litura faldt antallet af sædbundter, hvilket understøttede hypotesen om, at denne fusion er gavnlig for reproduktionsevnen. Kirurgisk manipulation er blevet brugt til at studere den fysiologiske udvikling af insekter siden begyndelsen af det 20. århundrede. For at afgøre, om kranialnerven er reguleret af insektmetamorfose, udførte nogle forskere procedurer såsom ligation og halshugning på forskellige insekter (herunder Rho...

Fusion er et almindeligt fænomen i vævs- eller organudvikling. Eksempler inkluderer dorsal lukning og thorax lukning i Drosophila1 og gane morphogenese, neuralrør morfogenese, og hjerte morfogenese i mus og kylling2. CRISPR og RNAi er blevet anvendt til at undersøge genernes roller i fusionsprocessen2,3,4.
Spodoptera litura (S. litura, Lepidoptera: Noctuidae) er et skadeligt polyfagisk skadedyr, der er bredt udbredt i tropiske og subtropiske områder i Asien, herunder Kina4,5,6. Den brede fordeling af S. litura tilskrives delvis dens kraftige reproduktionsevne, som er relevant for gonadudvikling. Mandlig infertilitet er en tilgang til at kontrollere dette skadedyr. Som vist i den skematiske figur af testikelstruktur er testiklerne omgivet af testikeskeden, herunder den ydre kappe (peritoneal kappe) og indre basale lamina. Den basale lamina strækker sig internt for at danne follikulært epitel og adskiller testiklernes indre område i fire kamre ved navn follikler (figur 1).
I folliklerne udvikler spermatogonia sig til spermatozoer efter mitose og meiose, og derefter justeres spermatozoerne i sædsækkene i samme retning for at danne sædbundter7. Under spermatogenese differentierer de primære spermatocytter sig til eupyrensædceller eller apyrensædceller. Spermatocytter i larvefasen udvikler sig til eupyrensæd med en lang hale forbundet med et hoved af en langstrakt kerne; disse kan befrugte æg. Omvendt udvikler spermatocytter i midten af puppefasen sig til apyrensæd med en kasseret kerne; disse sædceller hjælper med overlevelse, bevægelse og befrugtning af eupyrensæd9,10. Den 6. dag i puppen er den periode, hvor testiklerne har rigelige eupyren- og apyrensædbundter.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62524/62524fig01.jpg"> Figur 1: Skematisk diagram over testikelstrukturen af Lepidoptera insekter11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62524/62524fig01large.jpg" target="_blank">Klik her for at se en større version af denne figur.</a>
Testikelfusion forekommer i de fleste insekter af Lepidoptera-ordenen11,12, især i de arter, der er landbrugsskadedyr. Testikelfusion refererer til et par testikler, der vokser bilateralt i larvefasen, nærmer sig og klæber til hinanden og til sidst integreres i en enkelt gonad11. I Spodoptera litura sker det under metamorfose fra larven til puppestadiet. Fra dag 1 i den 5. instar (L5D1) til dag 4 i den 6. instar (L6D4) vokser parret testikler gradvist i størrelse, og farven bliver lysegul fra elfenbenshvid. Det bliver svagt rødt, når det når prepupalfasen (L6D5 til L6D6). To bilaterale symmetriske testikler nærmer sig hinanden i præpuppestadiet, smelter sammen til en og vrider mod uret (doral visning) for at producere en enkelt testikler i puppe- og voksenfasen11. Dette fænomen forekommer ikke i silkeorme, som har stor økonomisk betydning og er blevet tæmmet i 5000 år13. Det antages således, at testiklernes fusion forbedrer reproduktionsevnen.
For at bestemme betydningen af Spodoptera litura testikelfusion er det vigtigt at undersøge virkningerne af at blokere processen. I denne protokol blev aluminiumsfolie mikrokirurgisk indsat mellem testiklerne for at holde dem adskilt, og de deraf følgende ændringer i udviklingen af insekterne og deres testikler blev undersøgt.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>75% Rubbing alcohol</td>
			<td>Qingdao Hainuo Nuowei Disinfection Technology Co., Ltd</td>
			<td>Q/370285HNW 001-2019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colored Push Pins</td>
			<td>Deli Group Co.,LTD</td>
			<td>0042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corneal Scissors</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-S221A</td>
			<td>Curved and blunt tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glad Aluminum Foil</td>
			<td>Clorox China(Guangzhou) Limited</td>
			<td>831457</td>
			<td>10 cm*2.5 cm*0.6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Cotton Swabs (Sterile)</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>601-022921-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Iodine Cotton Swab</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>608-000247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.</td>
			<td>J32030</td>
			<td>14 cm fine needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blade</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>#11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suigical Blade Holder</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>K6-10</td>
			<td>Straight 3#</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture thread with needle</td>
			<td>Ningbo Medical Stitch Needle Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>needle: 3/8 Circle, 2.5*8 ; Thread: Nylon, 6/0, 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tying Forceps</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-F201T-3</td>
			<td>Straight-pointed; long handle; 0.12 mm-wide-head</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura

I stedet for at anvende genetiske metoder som RNA-interferens (RNAi) og grupperet regelmæssigt interspaced korte palindromiske gentagelser (CRISPR) / CRISPR-associeret endonuklease Cas9, blev en fysisk barriere mikrokirurgisk indsat mellem testiklerne af Spodoptera litura for at studere virkningen af denne mikrokirurgi på dens vækst og reproduktion. Efter indsættelse af aluminiumsfolie mellem testiklerne fortsatte insektsmeltning under metamorfose normalt. Insektvækst og -udvikling blev ikke bemærkelsesværdigt ændret; Antallet af sædbundter ændrede sig imidlertid, hvis testiklernes fusion blev stoppet af mikrooperationen. Disse resultater indebærer, at blokering af testikelfusion kan påvirke mandlig reproduktionsevne. Metoden kan yderligere anvendes til at afbryde kommunikationen mellem organer for at studere funktionen af specifikke signalveje. Sammenlignet med konventionel kirurgi kræver mikrokirurgi kun frysende anæstesi, hvilket foretrækkes frem for kuldioxidanæstetisering. Mikrokirurgi minimerer også operationsstedets område og letter sårheling. Udvælgelsen af materialer med specifikke funktioner kræver dog yderligere undersøgelse. Undgå vævsskade er afgørende, når du laver snit under operationen.

Virkningerne af mikrokirurgi på Spodoptera litura vækst og udvikling Mikrooperationen efterlod et 2 mm langt sår på den dorsale larveepidermis, der til sidst stoppede med at lække hæmolymfe og helede. Larverne gennemgik præpuppe- og puppestadier og lukkede, hvilket indikerer, at mikrooperationen ikke havde nogen større indflydelse på vækst og udvikling. Når larverne smeltede i pupper, blev suturtrådene kasseret sammen med epidermis. Der var ingen ...

Watch this Scientific Journal Video about Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura at JoVE.com

Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

Aluminiumsfolie blev mikrokirurgisk indsat mellem testiklerne af Spodoptera litura for at hindre fusionen af testikler. Proceduren omfatter frysning, fastgørelse, desinfektion, snit, placering af barrieren, suturering, postoperativ fodring og inspektion. Denne tilgang giver en metode til at forstyrre vævsdannelsen.

Mikrokirurgisk obstruktion af testiklerne fusion i Spodoptera litura

Instead of using genetic methods like RNA interference (RNAi) and clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated ...

Denne protokol antyder, at en fysisk metode kan vedtages for at hjælpe med at finde ud af biologiske problemer. Denne teknik giver en metode til at placere materiale i insekter med minimalt snit og studere mikrokirurgiens indflydelse på individers udvikling. Denne metode kan gælde for andre Lepidoptera larver og andre dele af insekterne, herunder hovedet og thoraxen.Det er meget vigtigt at øve sig i at lave snit i bestemt materiale og suturere dygtigt. Begynd med at placere Spodoptera litura mandlige larver på dag 4 i den 6. instar, eller L6D4, på is i 10 til 30 minutter for at holde dem anæstetiseret under operationen. Placer den aresthetiserede larve på voksbakken med den dorsale side opad.Fastgør larvens hoved og hale med stifter og tråde og desinficer det kirurgiske område ved at påføre 3% jodtinktur med en vatpind på epidermis efterfulgt af 70% alkohol. Lav et 2 millimeter langt snit på den dorsale epidermis ved det 9. kropssegment og brug en steril vatpind til at fjerne lækkende hæmolymfe og fedtlegemer for at få et klart overblik over det kirurgiske område. Brug kirurgisk pincet til at indsætte et stykke aluminiumsfolie mellem testiklerne, og luk derefter epidermis med en løbende sutur.Bind en kirurgisk firkantet knude ved hjælp af en nåleholder og kirurgisk pincet. Skær den overskydende sutur fra løkkehalerne med en saks, og efterlad en 2 millimeter tråd bagved. Efter suturering skal du forsigtigt lægge larven i opdrætskassen og vedligeholde dem i et rent miljøsimuleringskammer med kontinuerlig observation.Væksten og udviklingen af Spodoptera litura mandlige larver efter mikrokirurgi blev overvåget. Larvedødeligheden var lidt højere i den kirurgiske gruppe, mens procentdelen af hvalp, voksenfremkomst og vellykket parring var lidt lavere i den kirurgiske gruppe end i kontrolgruppen. I den eksperimentelle gruppe var antallet af samlede sædbundter i eupyren og apyren sædbundter signifikant lavere end kontrol- og sham-kontrolgruppen.På den anden side havde procentdelen af eupyrensædbundter ingen signifikante forskelle mellem alle tre grupper. Efter fjernelse af en ensidig testis af larverne var antallet af samlede sædbundter og eupyren- og apyrensædbundter i mikrokirurgiske grupper signifikant lavere end kontrolgruppen. Procentdelen af eupyrensædbundter på den sjette dag i puppestadiet var sammenlignelig i alle tre grupper.Det er meget vigtigt at bemærke sårets placering og undgå at beskadige andre organer under snittet. Denne teknik kan bruges til at studere den biologiske betydning af testikelfusion ved at anvende lægemidler på organerne. Lægemidlernes virkning på målorganet kan undersøges.

Research

JoVE Journal

Biology

Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

Microsurgical Clip Obliteration of Middle Cerebral Aneurysm Using Intraoperative Flow Assessment

Cerebral aneurysms are abnormal widening or ballooning of a localized segment of an intracranial blood vessel.  Surgical clipping is an important ...

Anterior Cervical Discectomy and Fusion in the Ovine Model

Anterior cervical discectomy and fusion (ACDF) is the most common surgical operation for cervical radiculopathy and/or myelopathy in patients who have ...

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Analysis of SNARE-mediated Membrane Fusion Using an Enzymatic Cell Fusion Assay

Analyse af SNARE-medieret membranfusion anvendelse af en enzymatisk Cellefusion Assay

The interactions of SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor)  proteins on vesicles (v-SNAREs) and on target membranes ...

Identification of Metabolically Active Bacteria in the Gut of the Generalist Spodoptera littoralis via DNA Stable Isotope Probing Using 13C-Glucose

Identification of Metabolically Active Bacteria in the Gut of the Generalist Spodoptera littoralis via DNA Stable Isotope Probing Using 13C-Glucose

Identifikation af metabolisk aktive bakterier i tarmen af ​​generalist<em&gt; Spodoptera littoralis</em&gt; Via DNA stabile isotoper Probing Brug<sup&gt; 13</sup&gt; C-glucose

Guts of most insects are inhabited by complex communities of symbiotic nonpathogenic bacteria. Within such microbial communities it is possible to ...

Imaging Centrosomes in Fly Testes

Imaging centrosomes i Fly Testiklerne

Centrosomes are conserved microtubule-based organelles whose structure and function change dramatically throughout the cell cycle and cell ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytologiske Analyse af Spermatogenese: Levende og Faste Tilberedt<em&gt; Drosophila</em&gt; Testikler

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Cryopreservation of Zebrafish Spermatogonia by Whole Testes Needle Immersed Ultra-Rapid Cooling

Kryopræservering af zebrafisk Spermatogonia af hele testiklerne nål nedsænket ultra-hurtig nedkøling

Current trends in science and biotechnology lead to creation of thousands of new lines in model organisms thereby leading to the necessity for new methods ...

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

Vurdering af urinvejene Junction obstruktion defekter ved methylenblåt farvning injektion

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

En musemodel af delvis tarmobstruktion

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...