Name: microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura
Uploaded: 2021-07-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door de National Natural Science Foundation of China (Nrs.:31772519, 31720103916; ) en een open subsidie van het State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, South West University (Nr.: sklsgb2013003).

1. Insectenopfok en -onderhoud
<ol><li>Kweek de Spodoptera litura-larven in omgevingssimulatiekamers met een kunstmatig dieet totdat ze dag 4 van de 6e instar (L6D4) bereiken. Selecteer mannelijke larven wanneer de wormen de eerste dag van de 6e instar (L6D0) binnenkomen op basis van de omgekeerde driehoekvormige structuur op het achtste achterlijf14. OPMERKING: De kweek- en onderhoudstechnieken voor larven zijn eerder gepubliceerd4,14<su...

<ol>
	<li>Zeitlinger, J., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thorax+closure+in+Drosophila:+involvement+of+Fos+and+the+JNK+pathway.">Thorax closure in Drosophila: involvement of Fos and the JNK pathway.</a> Development. 126 (17), 3947-3956 (1999).</li><li>Ray, H. J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tissue+fusion+during+development.">Mechanisms of tissue fusion during development.</a> Development. 139 (10), 1701-1711 (2012).</li><li>Ducuing, A., Keeley, C., Mollereau, B., Vincent, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DPP-mediated+feed-forward+loop+canalizes+morphogenesis+during+Drosophila+dorsal+closure.">DPP-mediated feed-forward loop canalizes morphogenesis during Drosophila dorsal closure.</a> The Journal of Cell Biology. 208 (2), 239-248 (2015).</li><li>Du, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+functional+characterization+of+doublesex+gene+in+the+testis+of+Spodoptera+litura.">Identification and functional characterization of doublesex gene in the testis of Spodoptera litura.</a> Insect Science. 26 (6), 1000-1010 (2019).</li><li>Qin, H. G., Ding, J., Ye, Z. X., Huang, S. J., Luo, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+analysis+of+experimental+population+of+Spodoptera+litura.">Dynamic analysis of experimental population of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 13 (2), 45-48 (2004).</li><li>Guan, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+research+in+biology+and+ecology+of+Spodoptera+litura.">The research in biology and ecology of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 8 (1), 57-61 (1999).</li><li>Wen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+testis+development+and+spermatogenesis+in+Spodopture+litura+(lepidoptera:+noctuidae).">The testis development and spermatogenesis in Spodopture litura (lepidoptera: noctuidae).</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition. 51 (4), 47-56 (2019).</li><li>Friedl&#228;nder, M., Seth, R. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eupyrene+and+apyrene+sperm:+dichotomous+spermatogenesis+in+Lepidoptera.">Eupyrene and apyrene sperm: dichotomous spermatogenesis in Lepidoptera.</a> Advances in Insect Physiology. 32, 206 (2010).</li><li>Cook, P. A., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-fertile+sperm+delay+female+remating.">Non-fertile sperm delay female remating.</a> Nature. 397 (6719), 486 (1999).</li><li>Iriki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+function+of+apyrene+spermatozoa+in+the+silk+worm.">On the function of apyrene spermatozoa in the silk worm.</a> Zoological Magazine. 53, 123-124 (1941).</li><li>Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+study+of+fusion+of+testis+in+Lepidoptera+insects.">The study of fusion of testis in Lepidoptera insects.</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition). 46 (5), 1-7 (2014).</li><li>Klowden, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Physiological systems in insects. , (2007).</li><li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+characterization+of+two+testis-specific+promoters+in+the+silkworm,+Bombyx+mori.">Transgenic characterization of two testis-specific promoters in the silkworm, Bombyx mori.</a> Insect Molecular Biology. 24 (2), 183-190 (2015).</li><li>Guo, X. R., Zheng, S. C., Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sterol+carrier+protein+2/3-oxoacyl-CoA+thiolase+(SCPx)+is+involved+in+cholesterol+uptake+in+the+midgut+of+Spodoptera+litura:+gene+cloning,+expression,+localization+and+functional+analyses.">The sterol carrier protein 2/3-oxoacyl-CoA thiolase (SCPx) is involved in cholesterol uptake in the midgut of Spodoptera litura: gene cloning, expression, localization and functional analyses.</a> BioMed Central Molecular Biology. 10, 102 (2009).</li><li>Kope&#263;, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+necessity+of+the+brain+for+the+inception+of+insect+metamorphosis.">Studies on the necessity of the brain for the inception of insect metamorphosis.</a> Biological Bulletin. 42 (6), 323-342 (1922).</li><li>Wigglesworth, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+controlling+moulting+and+'metamorphosis'+in+an+insect.">Factors controlling moulting and 'metamorphosis' in an insect.</a> Nature. 133 (5), 725-726 (1934).</li><li>Williams, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+insect+diapause;+the+role+of+the+brain+in+the+production+and+termination+of+pupal+dormancy+in+the+giant+silkworm,+Platysamia+cecropia.">Physiology of insect diapause; the role of the brain in the production and termination of pupal dormancy in the giant silkworm, Platysamia cecropia.</a> Biological Bulletin. 90 (3), 234-243 (1946).</li><li>Fukuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+control+of+molting+and+pupation+in+the+silkworm.">Hormonal control of molting and pupation in the silkworm.</a> Proceedings of the Imperial Academy Tokyo. 16 (8), 417-420 (1940).</li><li>Tian, H. J., Liu, Z. P., Bai, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+methods+to+detect+Sperm+quality+of+mammalian.">Common methods to detect Sperm quality of mammalian.</a> Journal of Economic Zoology. 8 (4), 198-201 (2004).</li><li>Ji, X. S., Chen, S. L., Zhao, Y., Tian, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+the+quality+evaluation+of+fish+sperm.">Progress in the quality evaluation of fish sperm.</a> Chinese Fishery Science. 14 (6), 1048-1054 (2007).</li><li>Baulny, B. O. D., Vern, Y. L., Kerboeuf, D., Maisse, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+evaluation+of+mitochondrial+activity+and+membrane+integrity+in+fresh+and+cryopreserved+rainbow+trout+(Oncorhynchus+mykiss)+spermatozoa.">Flow cytometric evaluation of mitochondrial activity and membrane integrity in fresh and cryopreserved rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) spermatozoa.</a> Cryobiology. 34 (2), 141-149 (1997).</li><li>Krasznai, Z., M&#225;ri&#225;n, T., Balkay, I., Emri, M., Tr&#243;n, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+and+structural+changes+in+the+membrane+of+common+carp+(Cyprinus+carpio+L.)+sperm+induced+by+hypo-osmotic+shock.">Permeabilization and structural changes in the membrane of common carp (Cyprinus carpio L.) sperm induced by hypo-osmotic shock.</a> Aquaculture. 129 (1), 134 (1995).</li><li>Kime, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer-assisted+sperm+analysis+(CASA)+as+a+tool+for+monitoring+sperm+quality+in+fish.">Computer-assisted sperm analysis (CASA) as a tool for monitoring sperm quality in fish.</a> Comparative Biochemistry &amp; Physiology Toxicology &amp; Pharmacology Cbp. 130 (4), 425-433 (2001).</li><li>Rurangwa, E., Volckaert, F. A., Huyskens, G., Kime, D. E., Ollevier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+of+refrigerated+and+cryopreserved+semen+using+computer-assisted+sperm+analysis+(CASA),+viable+staining+and+standardized+fertilization+in+African+catfish+(Clarias+gariepinus).">Quality control of refrigerated and cryopreserved semen using computer-assisted sperm analysis (CASA), viable staining and standardized fertilization in African catfish (Clarias gariepinus).</a> Theriogenology. 55 (3), 751-769 (2001).</li><li>Seth, R. K., Kaur, J. J., Rao, D. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+larval+exposure+to+sublethal+concentrations+of+the+ecdysteroid+agonists+RH-5849+and+tebufenozide+(RH-5992)+on+male+reproductive+physiology+in+Spodoptera+litura.">Effects of larval exposure to sublethal concentrations of the ecdysteroid agonists RH-5849 and tebufenozide (RH-5992) on male reproductive physiology in Spodoptera litura.</a> Journal of Insect Physiology. 50 (6), 505-517 (2004).</li><li>Sweeney, R. M., Watterson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rib+development+in+chick+embryos+analyzed+by+means+of+tantalum+foil+blocks.">Rib development in chick embryos analyzed by means of tantalum foil blocks.</a> American Journal of Anatomy. 126 (2), 127-149 (1969).</li><li>Wilde, S., Logan, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+impermeable+barriers+combined+with+candidate+factor+soaked+beads+to+study+inductive+signals+in+the+chick.">Application of impermeable barriers combined with candidate factor soaked beads to study inductive signals in the chick.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54618 (2016).</li></ol>

Na microchirurgisch belemmeren van teelballenfusie in Spodoptera litura, nam het aantal spermabundels af, wat de hypothese ondersteunde dat deze fusie gunstig is voor het voortplantingsvermogen. Chirurgische manipulatie wordt al sinds het begin van de 20e eeuw gebruikt om de fysiologische ontwikkeling van insecten te bestuderen. Om te bepalen of de hersenzenuw wordt gereguleerd door metamorfose van insecten, voerden sommige onderzoekers procedures uit zoals ligatie en onthoofding op verschillende inse...

Fusie is een veel voorkomend fenomeen bij de ontwikkeling van weefsels of organen. Voorbeelden zijn dorsale sluiting en thoraxsluiting bij Drosophila1 en morfogenese van het gehemelte, morfogenese van neurale buizen en morfogenese van het hart bij muizen en kippen2. CRISPR en RNAi zijn toegepast om de rol van genen in het fusieproces te onderzoeken2,3,4.
Spodoptera litura (S. litura, Lepidoptera: Noctuidae) is een schadelijke polyfagote plaag die wijd verspreid is in tropische en subtropische gebieden van Azië, waaronder China4,5,6. De brede verspreiding van S. litura wordt deels toegeschreven aan zijn krachtige voortplantingsvermogen, dat relevant is voor de ontwikkeling van geslachtsklieren. Mannelijke onvruchtbaarheid is een benadering om deze plaag onder controle te houden. Zoals te zien is in de schematische figuur van de testiculaire structuur, worden de testikels omsloten door de testiculaire schede, inclusief de externe schede (peritoneale schede) en de binnenste basale lamina. De basale lamina strekt zich inwendig uit tot het folliculaire epitheel en scheidt het binnenste gedeelte van de testis in vier kamers genaamd follikels (figuur 1).
In de follikels ontwikkelt spermatogonia zich na mitose en meiose tot spermatozoa en vervolgens worden de spermatozoa in de spermazakken in dezelfde richting uitgelijnd om spermabundels te vormen7. Tijdens spermatogenese differentiëren de primaire spermatocyten in eupyreensperma's of apyreensperma's. Spermatocyten in de larvale fase ontwikkelen zich tot eupyreensperma met een lange staart verbonden met een kop van een langwerpige kern; deze kunnen eieren bevruchten. Omgekeerd ontwikkelen spermatocyten in de mid-popale fase zich tot apyreensperma met een afgedankte kern; deze zaadcellen helpen bij de overleving, beweging en bevruchting van eupyreensperma9,10. De 6e dag van de pop is de periode waarin de teelballen overvloedige eupyreen- en apyreenspermabundels hebben.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62524/62524fig01.jpg"> Figuur 1: Schematisch diagram van de testiculaire structuur van Lepidoptera insecten11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62524/62524fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
Testiculaire fusie komt voor bij de meeste insecten van de Lepidoptera-orde11,12, vooral bij die soorten die landbouwongedierte zijn. Testiculaire fusie verwijst naar een paar testikels die bilateraal groeien in de larvale fase, elkaar naderen en zich aan elkaar hechten en uiteindelijk integreren in een enkele gonade11. In Spodoptera litura gebeurt het tijdens metamorfose van het larvale naar het popstadium. Vanaf dag 1 van de 5e instar (L5D1) tot dag 4 van de 6e instar (L6D4) groeit het paar teelballen geleidelijk in omvang en wordt de kleur lichtgeel van ivoorwit. Het wordt zwak rood als het de prepupale fase bereikt (L6D5 tot L6D6). Twee bilaterale symmetrische teelballen naderen elkaar tijdens het prepupale stadium, versmelten tot één en draaien tegen de klok in (doral view) om een enkele testis te produceren in de pop- en volwassen fase11. Dit fenomeen komt niet voor bij zijderupsen, die een aanzienlijk economisch belang hebben en al 5000 jaar worden gedomesticeerd13. Er wordt dus aangenomen dat de fusie van de teelballen het voortplantingsvermogen verbetert.
Om de betekenis van Spodoptera litura testiculaire fusie te bepalen, is het belangrijk om de effecten van het blokkeren van het proces te onderzoeken. In dit protocol werd aluminiumfolie microchirurgisch ingebracht tussen de teelballen om ze gescheiden te houden, en de daaruit voortvloeiende veranderingen in de ontwikkeling van de insecten en hun teelballen werden bestudeerd.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>75% Rubbing alcohol</td>
			<td>Qingdao Hainuo Nuowei Disinfection Technology Co., Ltd</td>
			<td>Q/370285HNW 001-2019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colored Push Pins</td>
			<td>Deli Group Co.,LTD</td>
			<td>0042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corneal Scissors</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-S221A</td>
			<td>Curved and blunt tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glad Aluminum Foil</td>
			<td>Clorox China(Guangzhou) Limited</td>
			<td>831457</td>
			<td>10 cm*2.5 cm*0.6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Cotton Swabs (Sterile)</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>601-022921-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Iodine Cotton Swab</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>608-000247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.</td>
			<td>J32030</td>
			<td>14 cm fine needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blade</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>#11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suigical Blade Holder</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>K6-10</td>
			<td>Straight 3#</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture thread with needle</td>
			<td>Ningbo Medical Stitch Needle Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>needle: 3/8 Circle, 2.5*8 ; Thread: Nylon, 6/0, 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tying Forceps</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-F201T-3</td>
			<td>Straight-pointed; long handle; 0.12 mm-wide-head</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura

In plaats van genetische methoden zoals RNA-interferentie (RNAi) en geclusterde regelmatig interspaced korte palindromische herhalingen (CRISPR) / CRISPR-geassocieerde endonuclease Cas9 te gebruiken, werd een fysieke barrière microchirurgisch ingebracht tussen de teelballen van Spodoptera litura om de impact van deze microchirurgie op de groei en reproductie ervan te bestuderen. Na het inbrengen van aluminiumfolie tussen de teelballen verliep de insectenvervelling tijdens de metamorfose normaal. De groei en ontwikkeling van insecten waren niet opmerkelijk veranderd; het aantal spermabundels veranderde echter als de fusie van teelballen werd gestopt door de microchirurgie. Deze bevindingen impliceren dat het blokkeren van testiculaire fusie het mannelijke voortplantingsvermogen kan beïnvloeden. De methode kan verder worden toegepast om de communicatie tussen organen te onderbreken om de functie van specifieke signaalroutes te bestuderen. In vergelijking met conventionele chirurgie vereist microchirurgie alleen bevriezingsanesing, wat de voorkeur heeft boven kooldioxide-anesthesie. Microchirurgie minimaliseert ook het operatiegebied en vergemakkelijkt de wondgenezing. De selectie van materialen met specifieke functies moet echter verder worden onderzocht. Het vermijden van weefselletsel is cruciaal bij het maken van incisies tijdens de operatie.

De effecten van microchirurgie op de groei en ontwikkeling van Spodoptera litura De microchirurgie liet een 2 mm lange wond achter op de dorsale larvale epidermis die uiteindelijk stopte met het lekken van hemolymfe en genas. De larven doorliepen prepupale en popstadia en sloten zich af, wat aangeeft dat de microchirurgie geen grote invloed had op groei en ontwikkeling. Toen de larven tot poppen vermolten, werden de hechtdraden samen met de opperhuid weggego...

Watch this Scientific Journal Video about Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura at JoVE.com

Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

Aluminiumfolie werd microchirurgisch ingebracht tussen de teelballen van Spodoptera litura om de fusie van testis te belemmeren. De procedure omvat invriezen, bevestigen, desinfecteren, incisie, plaatsen van de barrière, hechten, postoperatief voeren en inspectie. Deze aanpak biedt een methode om weefselvorming te verstoren.

Microchirurgische obstructie van teelballenfusie in Spodoptera litura

Instead of using genetic methods like RNA interference (RNAi) and clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated ...

Dit protocol suggereert dat een fysieke methode kan worden gebruikt om te helpen bij het uitzoeken van biologische problemen. Deze techniek biedt een methode om materiaal in insecten te plaatsen met minimale incisie en de invloed van microchirurgie op de ontwikkeling van individuen te bestuderen. Deze methode kan van toepassing zijn op andere Lepidoptera-larven en andere delen van de insecten, waaronder het hoofd en de thorax.Het is erg belangrijk om te oefenen met het maken van incisies in bepaald materiaal en het vakkundig hechten. Begin met het plaatsen van Spodoptera litura mannelijke larven op dag 4 van de 6e instar, of L6D4, op ijs gedurende 10 tot 30 minuten om ze tijdens de operatie verdoofd te houden. Plaats de verdoofde larve op het wasbakje met de dorsale kant naar boven.Fixeer de kop en de staart van de larve met pinnen en draden en desinfecteer het operatiegebied door 3% jodiumtinctuur met een wattenstaafje op de opperhuid aan te brengen, gevolgd door 70% alcohol. Maak een 2 millimeter lange incisie op de dorsale epidermis bij het 9e lichaamssegment en gebruik een steriel wattenstaafje om lekkende hemolymfe- en vetlichamen te verwijderen om een duidelijk zicht op het operatiegebied te krijgen. Plaats met behulp van een chirurgisch pincet een stuk aluminiumfolie tussen de teelballen en sluit vervolgens de opperhuid met een lopende hechting.Bind een chirurgische vierkante knoop met behulp van een naaldhouder en een chirurgisch pincet. Knip de overtollige hechtdraad van de lusstaarten met een schaar, waardoor een draad van 2 millimeter achterblijft. Leg na het hechten de larve voorzichtig in de kweekbak en onderhoud ze in een schone omgevingssimulatiekamer met continue observatie.De groei en ontwikkeling van de Spodoptera litura mannelijke larven na de microchirurgie werd gemonitord. Het larvale sterftecijfer was iets hoger in de chirurgische groep, terwijl de percentages van verpopping, volwassen opkomst en succesvolle paring iets lager waren in de chirurgische groep dan in de controlegroep. In de experimentele groep was het aantal totale spermabundels in eupyreen- en apyreenspermabundels significant lager dan de controle- en schijncontrolegroep.Aan de andere kant hadden de percentages eupyreen spermabundels geen significante verschillen tussen alle drie de groepen. Na het verwijderen van een unilaterale testis van de larven waren de aantallen totale spermabundels en eupyreen- en apyreenspermabundels in microchirurgiegroepen significant lager dan in de controlegroep. Het percentage eupyreenspermabundels op de zesde dag van het popstadium was vergelijkbaar in alle drie de groepen.Het is erg belangrijk om de locatie van de wond op te merken en te voorkomen dat andere organen tijdens de incisie worden beschadigd. Deze techniek kan worden gebruikt om de biologische betekenis van testiculaire fusie te bestuderen door geneesmiddelen op de organen aan te brengen. Het effect van de geneesmiddelen op het doelorgaan kan worden onderzocht.

Research

JoVE Journal

Biology

Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

Microsurgical Clip Obliteration of Middle Cerebral Aneurysm Using Intraoperative Flow Assessment

Microchirurgische Clip Vernietiging van het Midden-cerebraal aneurysma Met behulp van Intraoperatieve Flow Assessment

Cerebral aneurysms are abnormal widening or ballooning of a localized segment of an intracranial blood vessel.  Surgical clipping is an important ...

Anterior Cervical Discectomy and Fusion in the Ovine Model

Anterior cervicale discectomie en fusie in de Schapen Model

Anterior cervical discectomy and fusion (ACDF) is the most common surgical operation for cervical radiculopathy and/or myelopathy in patients who have ...

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Isolatie van Drosophila melanogaster Testes

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Analysis of SNARE-mediated Membrane Fusion Using an Enzymatic Cell Fusion Assay

Analyse van SNARE gemedieerde membraanfusie gebruiken enzymatische celfusie Assay

The interactions of SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor)  proteins on vesicles (v-SNAREs) and on target membranes ...

Identification of Metabolically Active Bacteria in the Gut of the Generalist Spodoptera littoralis via DNA Stable Isotope Probing Using 13C-Glucose

Identification of Metabolically Active Bacteria in the Gut of the Generalist Spodoptera littoralis via DNA Stable Isotope Probing Using 13C-Glucose

Identificatie van metabool actieve bacteriën in de darm van de Generalist<em&gt; Spodoptera littoralis</em&gt; Via DNA Stabiele Isotopen Onderzoek naar gebruik van<sup&gt; 13</sup&gt; C-Glucose

Guts of most insects are inhabited by complex communities of symbiotic nonpathogenic bacteria. Within such microbial communities it is possible to ...

Imaging Centrosomes in Fly Testes

Imaging Centrosomes in Fly Testikels

Centrosomes are conserved microtubule-based organelles whose structure and function change dramatically throughout the cell cycle and cell ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytologische analyse van Spermatogenese: Live and Vaste Bereidingen van<em&gt; Drosophila</em&gt; Testes

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Cryopreservation of Zebrafish Spermatogonia by Whole Testes Needle Immersed Ultra-Rapid Cooling

Cryopreservatie van zebravis testis van hele Testes Needle ondergedompeld Ultra snelle koeling

Current trends in science and biotechnology lead to creation of thousands of new lines in model organisms thereby leading to the necessity for new methods ...

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

Beoordeling van de urinewegen Junction obstructie gebreken door methyleenblauw kleurstof injectie

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

Een muismodel van intestinale gedeeltelijke obstructie

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...