Name: microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura
Uploaded: 2021-07-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (Nos.:31772519, 31720103916; ) ומענק פתוח ממעבדת המפתח הממלכתית לביולוגיה של גנום תולעי משי, אוניברסיטת דרום מערב (מס ': sklsgb2013003).

1. גידול ותחזוקה של חרקים
<ol><li>תרבות זחלי Spodoptera litura בתאי סימולציה סביבתיים עם דיאטה מלאכותית עד שהם מגיעים ליום 4 של כוכב 6 ( L6D4). בחר זחלים זכריים כאשר התולעים נכנסות ליום הראשון של האינסטאר השישי (L6D0) בהתבסס על המבנה ההפוך בצורת משולש על הבטן השמינית14. הערה: טכ...

<ol>
	<li>Zeitlinger, J., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thorax+closure+in+Drosophila:+involvement+of+Fos+and+the+JNK+pathway.">Thorax closure in Drosophila: involvement of Fos and the JNK pathway.</a> Development. 126 (17), 3947-3956 (1999).</li><li>Ray, H. J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tissue+fusion+during+development.">Mechanisms of tissue fusion during development.</a> Development. 139 (10), 1701-1711 (2012).</li><li>Ducuing, A., Keeley, C., Mollereau, B., Vincent, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DPP-mediated+feed-forward+loop+canalizes+morphogenesis+during+Drosophila+dorsal+closure.">DPP-mediated feed-forward loop canalizes morphogenesis during Drosophila dorsal closure.</a> The Journal of Cell Biology. 208 (2), 239-248 (2015).</li><li>Du, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+functional+characterization+of+doublesex+gene+in+the+testis+of+Spodoptera+litura.">Identification and functional characterization of doublesex gene in the testis of Spodoptera litura.</a> Insect Science. 26 (6), 1000-1010 (2019).</li><li>Qin, H. G., Ding, J., Ye, Z. X., Huang, S. J., Luo, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+analysis+of+experimental+population+of+Spodoptera+litura.">Dynamic analysis of experimental population of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 13 (2), 45-48 (2004).</li><li>Guan, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+research+in+biology+and+ecology+of+Spodoptera+litura.">The research in biology and ecology of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 8 (1), 57-61 (1999).</li><li>Wen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+testis+development+and+spermatogenesis+in+Spodopture+litura+(lepidoptera:+noctuidae).">The testis development and spermatogenesis in Spodopture litura (lepidoptera: noctuidae).</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition. 51 (4), 47-56 (2019).</li><li>Friedl&#228;nder, M., Seth, R. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eupyrene+and+apyrene+sperm:+dichotomous+spermatogenesis+in+Lepidoptera.">Eupyrene and apyrene sperm: dichotomous spermatogenesis in Lepidoptera.</a> Advances in Insect Physiology. 32, 206 (2010).</li><li>Cook, P. A., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-fertile+sperm+delay+female+remating.">Non-fertile sperm delay female remating.</a> Nature. 397 (6719), 486 (1999).</li><li>Iriki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+function+of+apyrene+spermatozoa+in+the+silk+worm.">On the function of apyrene spermatozoa in the silk worm.</a> Zoological Magazine. 53, 123-124 (1941).</li><li>Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+study+of+fusion+of+testis+in+Lepidoptera+insects.">The study of fusion of testis in Lepidoptera insects.</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition). 46 (5), 1-7 (2014).</li><li>Klowden, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Physiological systems in insects. , (2007).</li><li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+characterization+of+two+testis-specific+promoters+in+the+silkworm,+Bombyx+mori.">Transgenic characterization of two testis-specific promoters in the silkworm, Bombyx mori.</a> Insect Molecular Biology. 24 (2), 183-190 (2015).</li><li>Guo, X. R., Zheng, S. C., Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sterol+carrier+protein+2/3-oxoacyl-CoA+thiolase+(SCPx)+is+involved+in+cholesterol+uptake+in+the+midgut+of+Spodoptera+litura:+gene+cloning,+expression,+localization+and+functional+analyses.">The sterol carrier protein 2/3-oxoacyl-CoA thiolase (SCPx) is involved in cholesterol uptake in the midgut of Spodoptera litura: gene cloning, expression, localization and functional analyses.</a> BioMed Central Molecular Biology. 10, 102 (2009).</li><li>Kope&#263;, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+necessity+of+the+brain+for+the+inception+of+insect+metamorphosis.">Studies on the necessity of the brain for the inception of insect metamorphosis.</a> Biological Bulletin. 42 (6), 323-342 (1922).</li><li>Wigglesworth, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+controlling+moulting+and+'metamorphosis'+in+an+insect.">Factors controlling moulting and 'metamorphosis' in an insect.</a> Nature. 133 (5), 725-726 (1934).</li><li>Williams, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+insect+diapause;+the+role+of+the+brain+in+the+production+and+termination+of+pupal+dormancy+in+the+giant+silkworm,+Platysamia+cecropia.">Physiology of insect diapause; the role of the brain in the production and termination of pupal dormancy in the giant silkworm, Platysamia cecropia.</a> Biological Bulletin. 90 (3), 234-243 (1946).</li><li>Fukuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+control+of+molting+and+pupation+in+the+silkworm.">Hormonal control of molting and pupation in the silkworm.</a> Proceedings of the Imperial Academy Tokyo. 16 (8), 417-420 (1940).</li><li>Tian, H. J., Liu, Z. P., Bai, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+methods+to+detect+Sperm+quality+of+mammalian.">Common methods to detect Sperm quality of mammalian.</a> Journal of Economic Zoology. 8 (4), 198-201 (2004).</li><li>Ji, X. S., Chen, S. L., Zhao, Y., Tian, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+the+quality+evaluation+of+fish+sperm.">Progress in the quality evaluation of fish sperm.</a> Chinese Fishery Science. 14 (6), 1048-1054 (2007).</li><li>Baulny, B. O. D., Vern, Y. L., Kerboeuf, D., Maisse, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+evaluation+of+mitochondrial+activity+and+membrane+integrity+in+fresh+and+cryopreserved+rainbow+trout+(Oncorhynchus+mykiss)+spermatozoa.">Flow cytometric evaluation of mitochondrial activity and membrane integrity in fresh and cryopreserved rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) spermatozoa.</a> Cryobiology. 34 (2), 141-149 (1997).</li><li>Krasznai, Z., M&#225;ri&#225;n, T., Balkay, I., Emri, M., Tr&#243;n, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+and+structural+changes+in+the+membrane+of+common+carp+(Cyprinus+carpio+L.)+sperm+induced+by+hypo-osmotic+shock.">Permeabilization and structural changes in the membrane of common carp (Cyprinus carpio L.) sperm induced by hypo-osmotic shock.</a> Aquaculture. 129 (1), 134 (1995).</li><li>Kime, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer-assisted+sperm+analysis+(CASA)+as+a+tool+for+monitoring+sperm+quality+in+fish.">Computer-assisted sperm analysis (CASA) as a tool for monitoring sperm quality in fish.</a> Comparative Biochemistry &amp; Physiology Toxicology &amp; Pharmacology Cbp. 130 (4), 425-433 (2001).</li><li>Rurangwa, E., Volckaert, F. A., Huyskens, G., Kime, D. E., Ollevier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+of+refrigerated+and+cryopreserved+semen+using+computer-assisted+sperm+analysis+(CASA),+viable+staining+and+standardized+fertilization+in+African+catfish+(Clarias+gariepinus).">Quality control of refrigerated and cryopreserved semen using computer-assisted sperm analysis (CASA), viable staining and standardized fertilization in African catfish (Clarias gariepinus).</a> Theriogenology. 55 (3), 751-769 (2001).</li><li>Seth, R. K., Kaur, J. J., Rao, D. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+larval+exposure+to+sublethal+concentrations+of+the+ecdysteroid+agonists+RH-5849+and+tebufenozide+(RH-5992)+on+male+reproductive+physiology+in+Spodoptera+litura.">Effects of larval exposure to sublethal concentrations of the ecdysteroid agonists RH-5849 and tebufenozide (RH-5992) on male reproductive physiology in Spodoptera litura.</a> Journal of Insect Physiology. 50 (6), 505-517 (2004).</li><li>Sweeney, R. M., Watterson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rib+development+in+chick+embryos+analyzed+by+means+of+tantalum+foil+blocks.">Rib development in chick embryos analyzed by means of tantalum foil blocks.</a> American Journal of Anatomy. 126 (2), 127-149 (1969).</li><li>Wilde, S., Logan, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+impermeable+barriers+combined+with+candidate+factor+soaked+beads+to+study+inductive+signals+in+the+chick.">Application of impermeable barriers combined with candidate factor soaked beads to study inductive signals in the chick.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54618 (2016).</li></ol>

לאחר הפרעה מיקרוכירורגית היתוך האשכים Spodoptera litura, מספר חבילות הזרע ירד, אשר תמך בהשערה כי היתוך זה מועיל ליכולת הרבייה. מניפולציה כירורגית שימשה לחקר ההתפתחות הפיזיולוגית של חרקים מאז תחילת המאה ה -20. כדי לקבוע אם עצב הגולגולת מוסדר על ידי מטמורפוזה חרקים, כמה חוקרים ביצעו הליכים...

היתוך הוא תופעה נפוצה בהתפתחות רקמות או איברים. דוגמאות כוללות סגירת גב וסגירת בית החזה ב Drosophila1 ומורפוגנזה חיך, מורפוגנזה צינור עצבי, מורפוגנזה לב, מורפוגנזה לב בעכברים ועוף2. CRISPR ו- RNAi יושמו לחקור את תפקידי הגנים בתהליך ההיתוך2,3,4.
ספודופטרה ליטורה (באנגלית: Spodoptera litura; S. litura, Lepidoptera: Noctuidae) הוא מזיק פוליפגוס מזיק המופץ באופן נרחב באזורים טרופיים וסובטרופיים באסיה, כולל סין4,5,6. ההפצה הרחבה של S. litura מיוחסת בחלקה ליכולת הרבייה החזקה שלה, שרלוונטית להתפתחות גונדו. אי פוריות הגבר היא גישה אחת לשלוט במזיק זה. כפי שניתן לראות בדמות הסכמטית של מבנה האשכים, האשכים מוקפים במעטפת האשכים, כולל הנדן החיצוני (נדן הצפק) ולאמינה הבסיסית הפנימית. הלמינה הבסיסית משתרעת באופן פנימי ויוצרת את האפיתל הזקיקי ומפרידה את האזור הפנימי של האשכים לארבעה תאים הנקראים זקיקים (איור 1).
בזקיקים, זרעונים מתפתחים לזרעונים לאחר מיטוזה ומיוזה, ואז הזרעון בשקי הזרע מתיישר באותו כיוון כדי ליצור חבילות זרע7. במהלך spermatogenesis, הזרעונים העיקריים להבדיל לתוך זרעים eupyrene או זרע apyrene. זרעונים בשלב הזחל מתפתחים לזרע אופירין עם זנב ארוך המחובר לראש של גרעין מוארך; אלה יכולים להפרות ביצים. לעומת זאת, זרעונים בשלב אמצע הגולם מתפתחים לזרע apyrene עם גרעין שהושלך; זרעים אלה מסייעים להישרדות, תנועה והפריה של זרע אופירין9,10. היום השישי של הגולם הוא התקופה שבמהלכה האשכים יש חבילות זרע אופירין ו apyrene בשפע.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62524/62524fig01.jpg"> איור 1: דיאגרמה סכמטית של מבנה האשכים של חרקי לפידופטרה11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62524/62524fig01large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר של איור זה.</a>
היתוך האשכים מתרחש ברוב החרקים של סדר לפידופטרה 11,12, במיוחד באותם מינים שהם מזיקים חקלאיים. היתוך האשכים מתייחס זוג האשכים גדל דו צדדי בשלב הזחל, מתקרב ודבק זה בזה, בסופו של דבר משתלב לתוך gonad11 יחיד. ב Spodoptera litura, זה קורה במהלך מטמורפוזה מן הזחל לשלב pupal. מהיום הראשון של האינסטאר החמישי (L5D1) ועד היום הרביעי של האינסטאר השישי (L6D4), זוג האשכים גדל בהדרגה בגודלו, והצבע הופך לצהוב בהיר מלבן שנהב. זה הופך להיות אדום קלוש כפי שהוא מגיע לשלב prepupal (L6D5 כדי L6D6). שני אשכים סימטריים דו-צדדיים מתקרבים זה לזה בשלב שלפני ההשמדה, מתמזגים לאחד, ומעוותים את כיוון השעון (תצוגת דוראל) כדי לייצר אשכים בודדים בשלבי הגולם והמבוגרים11. תופעה זו אינה מתרחשת בתולעי משי, אשר יש חשיבות כלכלית ניכרת כבר מבויתים במשך 5000 שנים13. לכן, ההנחה היא כי ההיתוך של האשכים משפר את יכולת הרבייה.
כדי לקבוע את המשמעות של היתוך האשכים Spodoptera litura , חשוב לחקור את ההשפעות של חסימת התהליך. בפרוטוקול זה, רדיד אלומיניום הוכנס מיקרוכירורגי בין האשכים כדי להפריד ביניהם, ואת השינויים הנובעים מכך בהתפתחות החרקים ואת האשכים שלהם נחקרו.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>75% Rubbing alcohol</td>
			<td>Qingdao Hainuo Nuowei Disinfection Technology Co., Ltd</td>
			<td>Q/370285HNW 001-2019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colored Push Pins</td>
			<td>Deli Group Co.,LTD</td>
			<td>0042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corneal Scissors</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-S221A</td>
			<td>Curved and blunt tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glad Aluminum Foil</td>
			<td>Clorox China(Guangzhou) Limited</td>
			<td>831457</td>
			<td>10 cm*2.5 cm*0.6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Cotton Swabs (Sterile)</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>601-022921-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Iodine Cotton Swab</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>608-000247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.</td>
			<td>J32030</td>
			<td>14 cm fine needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blade</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>#11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suigical Blade Holder</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>K6-10</td>
			<td>Straight 3#</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture thread with needle</td>
			<td>Ningbo Medical Stitch Needle Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>needle: 3/8 Circle, 2.5*8 ; Thread: Nylon, 6/0, 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tying Forceps</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-F201T-3</td>
			<td>Straight-pointed; long handle; 0.12 mm-wide-head</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura

במקום להשתמש בשיטות גנטיות כמו הפרעות RNA (RNAi) ומקובצים באופן קבוע בין-מרחבי של חזרות פלינדרומיות קצרות (CRISPR)/CRISPR הקשורים לאנדונוקלאז Cas9, מחסום פיזי הוכנס מיקרו-כירורגית בין האשכים של Spodoptera litura כדי לחקור את ההשפעה של מיקרו-כירורגיה זו על צמיחתה ורבייתה. לאחר החדרת רדיד אלומיניום בין האשכים, חרקים מותכים במהלך מטמורפוזה המשיך כרגיל. צמיחת חרקים והתפתחותם לא שונו להפליא; עם זאת, מספר חבילות הזרע השתנה אם היתוך האשכים נעצר על ידי המיקרוכירורגיה. ממצאים אלה מרמזים כי חסימת היתוך האשכים יכולה להשפיע על יכולת הרבייה הגברית. השיטה יכולה להיות מיושמת עוד יותר כדי להפריע תקשורת בין איברים כדי ללמוד את הפונקציה של מסלולי איתות ספציפיים. בהשוואה לניתוח קונבנציונלי, מיקרוכירורגיה דורשת רק הרדמה הקפאה, אשר עדיף על פחמן דו חמצני מרדים. מיקרוכירורגיה גם ממזערת את אזור אתר הניתוח ומאפשרת ריפוי פצעים. עם זאת, בחירת חומרים עם פונקציות ספציפיות דורשת חקירה נוספת. הימנעות פגיעה ברקמות היא קריטית בעת ביצוע חתכים במהלך הניתוח.

ההשפעות של מיקרוכירורגיה על Spodoptera ליטורה צמיחה ופיתוח המיקרוכירורגיה הותירה פצע באורך 2 מ"מ על אפידרמיס זחל הגב שבסופו של דבר הפסיק לדלוף המולימפה ונרפא. הזחלים עברו שלבים מוקדמים וגולם ועיקלו, מה שמצביע על כך שלמיקרוכירורגיה לא הייתה השפעה משמעותית על ה...

Watch this Scientific Journal Video about Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura at JoVE.com

Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

רדיד אלומיניום הוכנס מיקרוכירורגי בין האשכים של Spodoptera litura כדי לחסום את ההיתוך של האשכים. ההליך כולל הקפאה, תיקון, חיטוי, חתך, הצבת המכשול, תפירה, האכלה לאחר הניתוח ובדיקה. גישה זו מספקת שיטה להפריע להיווצרות רקמות.

חסימה מיקרוכירורגית של היתוך האשכים בספודופטרה ליטורה

Instead of using genetic methods like RNA interference (RNAi) and clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated ...

פרוטוקול זה מציע כי ניתן לאמץ שיטה פיזית כדי לסייע בפתרון בעיות ביולוגיות. טכניקה זו מספקת שיטה למקם חומר בחרקים עם חתך מינימלי וללמוד את ההשפעה של מיקרוכירורגיה על התפתחותם של אנשים. שיטה זו יכולה לחול על זחלי לפידופטרה אחרים וחלקים אחרים של החרקים, כולל הראש ובית החזה.חשוב מאוד לתרגל ביצוע חתכים בחומר מסוים ותפירה במיומנות. התחל על ידי הצבת Spodoptera ליטורה זחלים זכרים ביום 4 של כוכב 6, או L6D4, על קרח במשך 10 עד 30 דקות כדי לשמור אותם מורדמים במהלך הניתוח. מניחים את הזחל המרדים על מגש השעווה עם הצד הגבי למעלה.לתקן את הראש והזנב של הזחל עם סיכות וחוטים ולחטא את האזור הניתוחי על ידי החלת 3% תמיסת יוד עם צמר גפן ספוגית על האפידרמיס, ואחריו 70% אלכוהול. בצע חתך באורך 2 מילימטר על האפידרמיס הגבי בחלק הגוף ה -9 והשתמש בספוגית כותנה סטרילית כדי להסיר דולף המולימפה וגופי שומן כדי לקבל תצוגה ברורה של האזור הכירורגי. באמצעות פינצטה כירורגית, להכניס חתיכת רדיד אלומיניום בין האשכים, ולאחר מכן לסגור את האפידרמיס עם תפר פועל.לקשור קשר מרובע כירורגי בעזרת מחזיק מחט ופינצטה כירורגית. חותכים את התפר העודף מזנבות הלולאה עם מספריים, משאיר חוט 2 מ"מ מאחור. לאחר התפירה, מניחים בעדינות את הזחלים בתיבת הגידול ושומרים עליהם בתא סימולציה סביבתי נקי עם תצפית רציפה.הצמיחה וההתפתחות של הזחלים הזכריים Spodoptera litura לאחר מיקרוכירורגיה היה במעקב. שיעור התמותה מהזחלים היה מעט גבוה יותר בקבוצה הכירורגית, בעוד שאחוזי הגור, הופעת המבוגרים והזדווגות מוצלחת היו מעט נמוכים יותר בקבוצה הכירורגית מאשר בקבוצת הביקורת. בקבוצת הניסוי, מספר חבילות הזרע הכוללות בחבילות הזרע של אופירין ואפירין היו נמוכות משמעותית מקבוצת הבקרה והבקרה המזויפת.מצד שני, האחוזים של חבילות זרע eupyrene לא היו הבדלים משמעותיים בין כל שלוש הקבוצות. לאחר הסרת אשכים חד-צדדיים של הזחלים, המספרים של חבילות הזרע הכוללות וחבילות הזרע של אופירין ואפירן בקבוצות מיקרו-כירורגיה היו נמוכים משמעותית מקבוצת הביקורת. אחוז חבילות הזרע של אופירין ביום השישי של שלב הגולם היה דומה בכל שלוש הקבוצות.חשוב מאוד להבחין במיקום הפצע ולהימנע מפגיעה באיברים אחרים במהלך החתך. טכניקה זו יכולה לשמש כדי ללמוד את המשמעות הביולוגית של היתוך האשכים על ידי החלת תרופות על האיברים. ניתן לחקור את השפעת הסמים על איבר המטרה.

Research

JoVE Journal

Biology

Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

Microsurgical Clip Obliteration of Middle Cerebral Aneurysm Using Intraoperative Flow Assessment

Microsurgical הכחדה קליפ של מפרצת במוח התיכון באמצעות הערכת תזרים intraoperative

Cerebral aneurysms are abnormal widening or ballooning of a localized segment of an intracranial blood vessel.  Surgical clipping is an important ...

Anterior Cervical Discectomy and Fusion in the Ovine Model

Discectomy צוואר הרחם Fusion Anterior ו במודל Ovine

Anterior cervical discectomy and fusion (ACDF) is the most common surgical operation for cervical radiculopathy and/or myelopathy in patients who have ...

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

בידוד תסיסנית melanogaster האשכים

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Analysis of SNARE-mediated Membrane Fusion Using an Enzymatic Cell Fusion Assay

ניתוח איחוי מלכודת בתיווך באמצעות Assay איחוי תאים אנזימתי

The interactions of SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor)  proteins on vesicles (v-SNAREs) and on target membranes ...

Identification of Metabolically Active Bacteria in the Gut of the Generalist Spodoptera littoralis via DNA Stable Isotope Probing Using 13C-Glucose

Identification of Metabolically Active Bacteria in the Gut of the Generalist Spodoptera littoralis via DNA Stable Isotope Probing Using 13C-Glucose

זיהוי של חיידקים פעילים מטבולית במעיים של Generalist<em&gt; Spodoptera littoralis</em&gt; באמצעות איזוטופ יציב DNA גשוש שימוש<sup&gt; 13</sup&gt; C-גלוקוז

Guts of most insects are inhabited by complex communities of symbiotic nonpathogenic bacteria. Within such microbial communities it is possible to ...

Imaging Centrosomes in Fly Testes

Centrosomes הדמיה באשכים טוס

Centrosomes are conserved microtubule-based organelles whose structure and function change dramatically throughout the cell cycle and cell ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

ניתוח ציטולוגית של תאי זרע: הכנות בשידור חי והקבועות של<em&gt; דרוזופילה</em&gt; אשכים

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Cryopreservation of Zebrafish Spermatogonia by Whole Testes Needle Immersed Ultra-Rapid Cooling

הקפאה קריוגנית של דג זברה Spermatogonia על ידי מחט האשכים כולו שקוע צינון אולטרה מהיר

Current trends in science and biotechnology lead to creation of thousands of new lines in model organisms thereby leading to the necessity for new methods ...

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

הערכת בדרכי השתן צומת פגמים חסימה על ידי הזרקת מתילן כחול צבע

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

דגם העכבר של חסימת מעיים חלקית

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...