Name: microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura
Uploaded: 2021-07-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av National Natural Science Foundation of China (Nos.:31772519, 31720103916; ) og et åpent tilskudd fra State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, South West University (No.: sklsgb2013003).

1. Insektoppdrett og vedlikehold
<ol><li>Kultur Spodoptera litura larver i miljøsimuleringskamre med et kunstig kosthold til de når dag 4 av den sjette instar (L6D4). Velg mannlige larver når ormene kommer inn i den første dagen av den sjette instar (L6D0) basert på den omvendte trekantformede strukturen på den åttende magen14. MERK: Larver oppdretts- og vedlikeholdsteknikker ble publisert tidligere4,14...

<ol>
	<li>Zeitlinger, J., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thorax+closure+in+Drosophila:+involvement+of+Fos+and+the+JNK+pathway.">Thorax closure in Drosophila: involvement of Fos and the JNK pathway.</a> Development. 126 (17), 3947-3956 (1999).</li><li>Ray, H. J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tissue+fusion+during+development.">Mechanisms of tissue fusion during development.</a> Development. 139 (10), 1701-1711 (2012).</li><li>Ducuing, A., Keeley, C., Mollereau, B., Vincent, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DPP-mediated+feed-forward+loop+canalizes+morphogenesis+during+Drosophila+dorsal+closure.">DPP-mediated feed-forward loop canalizes morphogenesis during Drosophila dorsal closure.</a> The Journal of Cell Biology. 208 (2), 239-248 (2015).</li><li>Du, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+functional+characterization+of+doublesex+gene+in+the+testis+of+Spodoptera+litura.">Identification and functional characterization of doublesex gene in the testis of Spodoptera litura.</a> Insect Science. 26 (6), 1000-1010 (2019).</li><li>Qin, H. G., Ding, J., Ye, Z. X., Huang, S. J., Luo, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+analysis+of+experimental+population+of+Spodoptera+litura.">Dynamic analysis of experimental population of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 13 (2), 45-48 (2004).</li><li>Guan, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+research+in+biology+and+ecology+of+Spodoptera+litura.">The research in biology and ecology of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 8 (1), 57-61 (1999).</li><li>Wen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+testis+development+and+spermatogenesis+in+Spodopture+litura+(lepidoptera:+noctuidae).">The testis development and spermatogenesis in Spodopture litura (lepidoptera: noctuidae).</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition. 51 (4), 47-56 (2019).</li><li>Friedl&#228;nder, M., Seth, R. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eupyrene+and+apyrene+sperm:+dichotomous+spermatogenesis+in+Lepidoptera.">Eupyrene and apyrene sperm: dichotomous spermatogenesis in Lepidoptera.</a> Advances in Insect Physiology. 32, 206 (2010).</li><li>Cook, P. A., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-fertile+sperm+delay+female+remating.">Non-fertile sperm delay female remating.</a> Nature. 397 (6719), 486 (1999).</li><li>Iriki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+function+of+apyrene+spermatozoa+in+the+silk+worm.">On the function of apyrene spermatozoa in the silk worm.</a> Zoological Magazine. 53, 123-124 (1941).</li><li>Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+study+of+fusion+of+testis+in+Lepidoptera+insects.">The study of fusion of testis in Lepidoptera insects.</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition). 46 (5), 1-7 (2014).</li><li>Klowden, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Physiological systems in insects. , (2007).</li><li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+characterization+of+two+testis-specific+promoters+in+the+silkworm,+Bombyx+mori.">Transgenic characterization of two testis-specific promoters in the silkworm, Bombyx mori.</a> Insect Molecular Biology. 24 (2), 183-190 (2015).</li><li>Guo, X. R., Zheng, S. C., Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sterol+carrier+protein+2/3-oxoacyl-CoA+thiolase+(SCPx)+is+involved+in+cholesterol+uptake+in+the+midgut+of+Spodoptera+litura:+gene+cloning,+expression,+localization+and+functional+analyses.">The sterol carrier protein 2/3-oxoacyl-CoA thiolase (SCPx) is involved in cholesterol uptake in the midgut of Spodoptera litura: gene cloning, expression, localization and functional analyses.</a> BioMed Central Molecular Biology. 10, 102 (2009).</li><li>Kope&#263;, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+necessity+of+the+brain+for+the+inception+of+insect+metamorphosis.">Studies on the necessity of the brain for the inception of insect metamorphosis.</a> Biological Bulletin. 42 (6), 323-342 (1922).</li><li>Wigglesworth, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+controlling+moulting+and+'metamorphosis'+in+an+insect.">Factors controlling moulting and 'metamorphosis' in an insect.</a> Nature. 133 (5), 725-726 (1934).</li><li>Williams, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+insect+diapause;+the+role+of+the+brain+in+the+production+and+termination+of+pupal+dormancy+in+the+giant+silkworm,+Platysamia+cecropia.">Physiology of insect diapause; the role of the brain in the production and termination of pupal dormancy in the giant silkworm, Platysamia cecropia.</a> Biological Bulletin. 90 (3), 234-243 (1946).</li><li>Fukuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+control+of+molting+and+pupation+in+the+silkworm.">Hormonal control of molting and pupation in the silkworm.</a> Proceedings of the Imperial Academy Tokyo. 16 (8), 417-420 (1940).</li><li>Tian, H. J., Liu, Z. P., Bai, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+methods+to+detect+Sperm+quality+of+mammalian.">Common methods to detect Sperm quality of mammalian.</a> Journal of Economic Zoology. 8 (4), 198-201 (2004).</li><li>Ji, X. S., Chen, S. L., Zhao, Y., Tian, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+the+quality+evaluation+of+fish+sperm.">Progress in the quality evaluation of fish sperm.</a> Chinese Fishery Science. 14 (6), 1048-1054 (2007).</li><li>Baulny, B. O. D., Vern, Y. L., Kerboeuf, D., Maisse, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+evaluation+of+mitochondrial+activity+and+membrane+integrity+in+fresh+and+cryopreserved+rainbow+trout+(Oncorhynchus+mykiss)+spermatozoa.">Flow cytometric evaluation of mitochondrial activity and membrane integrity in fresh and cryopreserved rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) spermatozoa.</a> Cryobiology. 34 (2), 141-149 (1997).</li><li>Krasznai, Z., M&#225;ri&#225;n, T., Balkay, I., Emri, M., Tr&#243;n, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+and+structural+changes+in+the+membrane+of+common+carp+(Cyprinus+carpio+L.)+sperm+induced+by+hypo-osmotic+shock.">Permeabilization and structural changes in the membrane of common carp (Cyprinus carpio L.) sperm induced by hypo-osmotic shock.</a> Aquaculture. 129 (1), 134 (1995).</li><li>Kime, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer-assisted+sperm+analysis+(CASA)+as+a+tool+for+monitoring+sperm+quality+in+fish.">Computer-assisted sperm analysis (CASA) as a tool for monitoring sperm quality in fish.</a> Comparative Biochemistry &amp; Physiology Toxicology &amp; Pharmacology Cbp. 130 (4), 425-433 (2001).</li><li>Rurangwa, E., Volckaert, F. A., Huyskens, G., Kime, D. E., Ollevier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+of+refrigerated+and+cryopreserved+semen+using+computer-assisted+sperm+analysis+(CASA),+viable+staining+and+standardized+fertilization+in+African+catfish+(Clarias+gariepinus).">Quality control of refrigerated and cryopreserved semen using computer-assisted sperm analysis (CASA), viable staining and standardized fertilization in African catfish (Clarias gariepinus).</a> Theriogenology. 55 (3), 751-769 (2001).</li><li>Seth, R. K., Kaur, J. J., Rao, D. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+larval+exposure+to+sublethal+concentrations+of+the+ecdysteroid+agonists+RH-5849+and+tebufenozide+(RH-5992)+on+male+reproductive+physiology+in+Spodoptera+litura.">Effects of larval exposure to sublethal concentrations of the ecdysteroid agonists RH-5849 and tebufenozide (RH-5992) on male reproductive physiology in Spodoptera litura.</a> Journal of Insect Physiology. 50 (6), 505-517 (2004).</li><li>Sweeney, R. M., Watterson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rib+development+in+chick+embryos+analyzed+by+means+of+tantalum+foil+blocks.">Rib development in chick embryos analyzed by means of tantalum foil blocks.</a> American Journal of Anatomy. 126 (2), 127-149 (1969).</li><li>Wilde, S., Logan, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+impermeable+barriers+combined+with+candidate+factor+soaked+beads+to+study+inductive+signals+in+the+chick.">Application of impermeable barriers combined with candidate factor soaked beads to study inductive signals in the chick.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54618 (2016).</li></ol>

Etter mikrokirurgisk hindring av testikler fusjon i Spodoptera litura, reduserte antall sædbunter, noe som støttet hypotesen om at denne fusjonen er gunstig for reproduktiv evne. Kirurgisk manipulasjon har blitt brukt til å studere den fysiologiske utviklingen av insekter siden tidlig på 1900-tallet. For å avgjøre om kranialnerven er regulert av insektmetamorfose, utførte noen forskere prosedyrer som ligasjon og halshugging på forskjellige insekter (inkludert Rhodnius prolixus av Hemi...

Fusjon er et vanlig fenomen i vev eller organutvikling. Eksempler er dorsal lukking og thoraxlukking i Drosophila1 og ganemorfogenese, nevral tube morfogenese og hjertemorfogenese hos mus og kylling2. CRISPR og RNAi har blitt brukt til å undersøke genenes roller i prosessen med fusjon2,3,4.
Spodoptera litura (S. litura, Lepidoptera: Noctuidae) er et skadelig polyfagisk som er utbredt i tropiske og subtropiske områder i Asia, inkludert Kina4,5,6. Den brede fordelingen av S. litura er delvis tilskrevet sin kraftige reproduktive evne, som er relevant for gonadutvikling. Mannlig infertilitet er en tilnærming for å kontrollere dette. Som vist i den skjematiske figuren av testikkelstruktur, er testiklene omsluttet av testikkelhylsen, inkludert den eksterne hylsen (peritonealhylse) og indre basal lamina. Basal lamina strekker seg internt for å danne follikulær epitel og skiller det indre området av testis i fire kamre kalt follikler (figur 1).
I folliklene utvikler spermatogonia seg til spermatozoa etter mitose og meiosis, og deretter er spermatozoa i sperm sacs justert i samme retning for å danne sædbunter7. Under spermatogenese skiller de primære spermatocyttene seg i eupyrene sædceller eller apyren sædceller. Spermatocytter i larvalfasen utvikler seg til eupyren sæd med en lang hale koblet til et hode av en langstrakt kjerne; disse kan gjødsle egg. Omvendt utvikler spermatocytter i midt-pupalfasen til apyren sæd med en kassert kjerne; disse sædcellene hjelper overlevelse, bevegelse og befruktning av eupyren sperm9,10. Den sjette dagen av puppen er perioden der testiklene har rikelig eupyren og apyrene sædbunter.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62524/62524fig01.jpg"> Figur 1: Skjematisk diagram over testikkelstrukturen til Lepidoptera insekter11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62524/62524fig01large.jpg" target="_blank">Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.</a>
Testikkelfusjon forekommer i de fleste insekter av Lepidoptera-ordren11,12, spesielt i de artene som er landbruksskade skadedyr. Testikkelfusjon refererer til et par testikler som vokser bilateralt i larvefasen, nærmer seg og holder seg til hverandre, og til slutt integreres i en enkelt gonad11. I Spodoptera litura skjer det under metamorfose fra larvalen til puppetrinnet. Fra dag 1 av den femte instar (L5D1) til dag 4 av den sjette instar (L6D4), vokser testiklene gradvis i størrelse, og fargen blir lysegul fra elfenbenshvit. Den blir svak rød når den når prepupalfasen (L6D5 til L6D6). To bilaterale symmetriske testikler nærmer seg hverandre i forberedelsesfasen, smelter sammen til en og vri mot urviseren (doralvisning) for å produsere en enkelt testis i pupal- og voksenfasene11. Dette fenomenet forekommer ikke i silkeorm, som har betydelig økonomisk betydning og har blitt tammet i 5000 år13. Dermed antas det at testiklenes fusjon forbedrer reproduktiv evne.
For å bestemme betydningen av Spodoptera litura testikkelfusjon, er det viktig å undersøke effekten av å blokkere prosessen. I denne protokollen ble aluminiumsfolie mikrokirurgisk satt inn mellom testiklene for å holde dem skilt, og de påfølgende endringene i utviklingen av insekter og deres testikler ble studert.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>75% Rubbing alcohol</td>
			<td>Qingdao Hainuo Nuowei Disinfection Technology Co., Ltd</td>
			<td>Q/370285HNW 001-2019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colored Push Pins</td>
			<td>Deli Group Co.,LTD</td>
			<td>0042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corneal Scissors</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-S221A</td>
			<td>Curved and blunt tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glad Aluminum Foil</td>
			<td>Clorox China(Guangzhou) Limited</td>
			<td>831457</td>
			<td>10 cm*2.5 cm*0.6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Cotton Swabs (Sterile)</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>601-022921-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Iodine Cotton Swab</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>608-000247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.</td>
			<td>J32030</td>
			<td>14 cm fine needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blade</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>#11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suigical Blade Holder</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>K6-10</td>
			<td>Straight 3#</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture thread with needle</td>
			<td>Ningbo Medical Stitch Needle Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>needle: 3/8 Circle, 2.5*8 ; Thread: Nylon, 6/0, 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tying Forceps</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-F201T-3</td>
			<td>Straight-pointed; long handle; 0.12 mm-wide-head</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura

I stedet for å bruke genetiske metoder som RNA-interferens (RNAi) og gruppert regelmessig interspaced korte palindromiske repetisjoner (CRISPR)/CRISPR-assosiert endonuklease Cas9, ble en fysisk barriere mikrokirurgisk satt inn mellom testiklene til Spodoptera litura for å studere virkningen av denne mikrokirurgien på veksten og reproduksjonen. Etter å ha satt inn aluminiumsfolie mellom testiklene, fortsatte insektsmelting under metamorfose normalt. Insektvekst og utvikling ble ikke bemerkelsesverdig endret; Imidlertid endret antall sædbunter hvis testikler fusjon ble stoppet av mikrokirurgi. Disse funnene antyder at blokkering av testikkelfusjon kan påvirke mannlig reproduksjonsevne. Metoden kan videre brukes til å avbryte kommunikasjon mellom organer for å studere funksjonen til spesifikke signalveier. Sammenlignet med konvensjonell kirurgi krever mikrokirurgi bare frysebedøvelse, noe som er å foretrekke fremfor karbondioksidbedøvelse. Mikrokirurgi minimerer også operasjonsområdet og letter sårheling. Valg av materialer med spesifikke funksjoner trenger imidlertid videre undersøkelser. Unngå vevsskade er avgjørende når du gjør snitt under operasjonen.

Effektene av mikrokirurgi på Spodoptera litura vekst og utvikling Mikrokirurgien etterlot et 2 mm langt sår på dorsal larval epidermis som til slutt sluttet å lekke hemolymfe og helbredet. Larvene gikk gjennom prepupal og pupal stadier og eclosed, noe som indikerer at mikrokirurgi ikke hadde noen stor innvirkning på vekst og utvikling. Når larvene smeltet inn i pupper, ble suturtrådene kassert sammen med epidermis. Det var ingen åpenbare forskjeller i...

Watch this Scientific Journal Video about Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura at JoVE.com

Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

Aluminiumsfolie ble mikrokirurgisk satt inn mellom testiklene til Spodoptera litura for å hindre sammensmelting av testis. Prosedyren inkluderer frysing, festing, desinfeksjon, snitt, plassering av barrieren, suturering, postoperativ fôring og inspeksjon. Denne tilnærmingen gir en metode for å forstyrre vevsdannelse.

Mikrokirurgisk hindring av testikler Fusion i Spodoptera litura

Instead of using genetic methods like RNA interference (RNAi) and clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated ...

Denne protokollen antyder at en fysisk metode kan vedtas for å hjelpe til med å finne ut biologiske problemer. Denne teknikken gir en metode for å plassere materiale i insekter med minimal snitt og studere påvirkning av mikrokirurgi på enkeltpersoners utvikling. Denne metoden kan gjelde for andre Lepidoptera larver og andre deler av insekter, inkludert hodet og thorax.Det er svært viktig å øve på å lage snitt i visse materialer og suturere dyktig. Begynn med å plassere Spodoptera litura mannlige larver på dag 4 av den sjette instar, eller L6D4, på is i 10 til 30 minutter for å holde dem bedøvet under operasjonen. Legg den bedøvede larven på voksbrettet med dorsalsiden opp.Fest hodet og halen av larven med pinner og tråder og desinfiser det kirurgiske området ved å bruke 3% jodtinktur med en bomullspinne til epidermis, etterfulgt av 70% alkohol. Lag et 2 millimeter langt snitt på dorsal epidermis ved det niende kroppssegmentet og bruk en steril bomullspinne for å fjerne lekkende hemolymfe og fettlegemer for å få et klart syn på det kirurgiske området. Bruk kirurgisk pinsett, sett inn et stykke aluminiumsfolie mellom testiklene, og lukk deretter epidermis med en løpende sutur.Bind en kirurgisk firkantet knute ved hjelp av en nåleholder og kirurgisk pinsett. Klipp overflødig sutur fra løkkehalene med saks, og la en 2 millimeter tråd bak. Etter suturering legger du forsiktig larven i oppdrettsboksen og opprettholder dem i et rent miljøsimuleringskammer med kontinuerlig observasjon.Veksten og utviklingen av Spodoptera litura mannlige larver postmikrokirurgi ble overvåket. Larvaldødeligheten var litt høyere i den kirurgiske gruppen, mens prosentandelen av pupering, voksen fremvekst og vellykket parring var litt lavere i den kirurgiske gruppen enn i kontrollgruppen. I den eksperimentelle gruppen var antall totale sædbunter i eupyren og apyren sædbunter betydelig lavere enn kontroll- og sham-kontrollgruppen.På den annen side hadde prosentandelen av eupyren sædbunter ingen signifikante forskjeller mellom alle tre gruppene. Etter å ha fjernet en ensidig testis av larver, var antall totale sædbunter og eupyren og apyren sædbunter i mikrokirurgigrupper betydelig lavere enn kontrollgruppen. Prosentandelen av eupyren sædbunter på den sjette dagen av puppetrinnet var sammenlignbar i alle tre gruppene.Det er svært viktig å legge merke til sårets plassering og unngå å skade andre organer under snittet. Denne teknikken kan brukes til å studere den biologiske betydningen av testikkelfusjon ved å bruke legemidler på organene. Medikamentenes effekt på målorganet kan utforskes.

Research

JoVE Journal

Biology

Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

Microsurgical Clip Obliteration of Middle Cerebral Aneurysm Using Intraoperative Flow Assessment

Cerebral aneurysms are abnormal widening or ballooning of a localized segment of an intracranial blood vessel.  Surgical clipping is an important ...

Anterior Cervical Discectomy and Fusion in the Ovine Model

Anterior cervical discectomy and fusion (ACDF) is the most common surgical operation for cervical radiculopathy and/or myelopathy in patients who have ...

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Analysis of SNARE-mediated Membrane Fusion Using an Enzymatic Cell Fusion Assay

Analyse av snare-mediert membran fusion Bruke en Enzymatisk Cell Fusion Assay

The interactions of SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor)  proteins on vesicles (v-SNAREs) and on target membranes ...

Identification of Metabolically Active Bacteria in the Gut of the Generalist Spodoptera littoralis via DNA Stable Isotope Probing Using 13C-Glucose

Identification of Metabolically Active Bacteria in the Gut of the Generalist Spodoptera littoralis via DNA Stable Isotope Probing Using 13C-Glucose

Identifisering av metabolsk aktiv bakterier i tarmen av generalist<em&gt; Spodoptera littoralis</em&gt; Via DNA stabile isotoper Verifiserer Bruke<sup&gt; 13</sup&gt; C-Glukose

Guts of most insects are inhabited by complex communities of symbiotic nonpathogenic bacteria. Within such microbial communities it is possible to ...

Imaging Centrosomes in Fly Testes

Imaging centrosomes i Fly Testes

Centrosomes are conserved microtubule-based organelles whose structure and function change dramatically throughout the cell cycle and cell ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytologisk Analyse spermatogenese: Skarp og Faste Preparater av<em&gt; Drosophila</em&gt; Testikler

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Cryopreservation of Zebrafish Spermatogonia by Whole Testes Needle Immersed Ultra-Rapid Cooling

Kryonisk bevaring av sebrafisk Spermatogonia av hele testiklene p midt ultra rask nedkjøling

Current trends in science and biotechnology lead to creation of thousands of new lines in model organisms thereby leading to the necessity for new methods ...

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

Vurdere urinveisinfeksjon Junction obstruksjon defekter ved Methylene blåfarge fargestoff injeksjon

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

En musemodell av Intestinal delvis hindringer

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...