Name: microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura
Uploaded: 2021-07-16T13:00:00
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Este trabalho foi apoiado pela National Natural Science Foundation of China (Nos.:31772519, 31720103916; ) e uma bolsa aberta do Laboratório Estadual de Biologia do Genoma da Bicho-Da-Seda da Universidade do Sudoeste (No.: sklsgb2013003).

1. Criação e manutenção de insetos
<ol><li>Cultura as larvas Spodoptera litura em câmaras de simulação ambiental com uma dieta artificial até chegarem ao 4º dia da 6ª instar (L6D4). Selecione larvas masculinas quando os vermes entrarem no primeiro dia do 6º instar (L6D0) com base na estrutura em forma de triângulo inverso no oitavo abdômen14. NOTA: As técnicas de criação e manutenção de larvas foram publicadas anteriormente4,1...

<ol>
	<li>Zeitlinger, J., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thorax+closure+in+Drosophila:+involvement+of+Fos+and+the+JNK+pathway.">Thorax closure in Drosophila: involvement of Fos and the JNK pathway.</a> Development. 126 (17), 3947-3956 (1999).</li><li>Ray, H. J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tissue+fusion+during+development.">Mechanisms of tissue fusion during development.</a> Development. 139 (10), 1701-1711 (2012).</li><li>Ducuing, A., Keeley, C., Mollereau, B., Vincent, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DPP-mediated+feed-forward+loop+canalizes+morphogenesis+during+Drosophila+dorsal+closure.">DPP-mediated feed-forward loop canalizes morphogenesis during Drosophila dorsal closure.</a> The Journal of Cell Biology. 208 (2), 239-248 (2015).</li><li>Du, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+functional+characterization+of+doublesex+gene+in+the+testis+of+Spodoptera+litura.">Identification and functional characterization of doublesex gene in the testis of Spodoptera litura.</a> Insect Science. 26 (6), 1000-1010 (2019).</li><li>Qin, H. G., Ding, J., Ye, Z. X., Huang, S. J., Luo, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+analysis+of+experimental+population+of+Spodoptera+litura.">Dynamic analysis of experimental population of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 13 (2), 45-48 (2004).</li><li>Guan, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+research+in+biology+and+ecology+of+Spodoptera+litura.">The research in biology and ecology of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 8 (1), 57-61 (1999).</li><li>Wen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+testis+development+and+spermatogenesis+in+Spodopture+litura+(lepidoptera:+noctuidae).">The testis development and spermatogenesis in Spodopture litura (lepidoptera: noctuidae).</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition. 51 (4), 47-56 (2019).</li><li>Friedl&#228;nder, M., Seth, R. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eupyrene+and+apyrene+sperm:+dichotomous+spermatogenesis+in+Lepidoptera.">Eupyrene and apyrene sperm: dichotomous spermatogenesis in Lepidoptera.</a> Advances in Insect Physiology. 32, 206 (2010).</li><li>Cook, P. A., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-fertile+sperm+delay+female+remating.">Non-fertile sperm delay female remating.</a> Nature. 397 (6719), 486 (1999).</li><li>Iriki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+function+of+apyrene+spermatozoa+in+the+silk+worm.">On the function of apyrene spermatozoa in the silk worm.</a> Zoological Magazine. 53, 123-124 (1941).</li><li>Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+study+of+fusion+of+testis+in+Lepidoptera+insects.">The study of fusion of testis in Lepidoptera insects.</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition). 46 (5), 1-7 (2014).</li><li>Klowden, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Physiological systems in insects. , (2007).</li><li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+characterization+of+two+testis-specific+promoters+in+the+silkworm,+Bombyx+mori.">Transgenic characterization of two testis-specific promoters in the silkworm, Bombyx mori.</a> Insect Molecular Biology. 24 (2), 183-190 (2015).</li><li>Guo, X. R., Zheng, S. C., Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sterol+carrier+protein+2/3-oxoacyl-CoA+thiolase+(SCPx)+is+involved+in+cholesterol+uptake+in+the+midgut+of+Spodoptera+litura:+gene+cloning,+expression,+localization+and+functional+analyses.">The sterol carrier protein 2/3-oxoacyl-CoA thiolase (SCPx) is involved in cholesterol uptake in the midgut of Spodoptera litura: gene cloning, expression, localization and functional analyses.</a> BioMed Central Molecular Biology. 10, 102 (2009).</li><li>Kope&#263;, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+necessity+of+the+brain+for+the+inception+of+insect+metamorphosis.">Studies on the necessity of the brain for the inception of insect metamorphosis.</a> Biological Bulletin. 42 (6), 323-342 (1922).</li><li>Wigglesworth, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+controlling+moulting+and+'metamorphosis'+in+an+insect.">Factors controlling moulting and 'metamorphosis' in an insect.</a> Nature. 133 (5), 725-726 (1934).</li><li>Williams, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+insect+diapause;+the+role+of+the+brain+in+the+production+and+termination+of+pupal+dormancy+in+the+giant+silkworm,+Platysamia+cecropia.">Physiology of insect diapause; the role of the brain in the production and termination of pupal dormancy in the giant silkworm, Platysamia cecropia.</a> Biological Bulletin. 90 (3), 234-243 (1946).</li><li>Fukuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+control+of+molting+and+pupation+in+the+silkworm.">Hormonal control of molting and pupation in the silkworm.</a> Proceedings of the Imperial Academy Tokyo. 16 (8), 417-420 (1940).</li><li>Tian, H. J., Liu, Z. P., Bai, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+methods+to+detect+Sperm+quality+of+mammalian.">Common methods to detect Sperm quality of mammalian.</a> Journal of Economic Zoology. 8 (4), 198-201 (2004).</li><li>Ji, X. S., Chen, S. L., Zhao, Y., Tian, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+the+quality+evaluation+of+fish+sperm.">Progress in the quality evaluation of fish sperm.</a> Chinese Fishery Science. 14 (6), 1048-1054 (2007).</li><li>Baulny, B. O. D., Vern, Y. L., Kerboeuf, D., Maisse, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+evaluation+of+mitochondrial+activity+and+membrane+integrity+in+fresh+and+cryopreserved+rainbow+trout+(Oncorhynchus+mykiss)+spermatozoa.">Flow cytometric evaluation of mitochondrial activity and membrane integrity in fresh and cryopreserved rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) spermatozoa.</a> Cryobiology. 34 (2), 141-149 (1997).</li><li>Krasznai, Z., M&#225;ri&#225;n, T., Balkay, I., Emri, M., Tr&#243;n, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+and+structural+changes+in+the+membrane+of+common+carp+(Cyprinus+carpio+L.)+sperm+induced+by+hypo-osmotic+shock.">Permeabilization and structural changes in the membrane of common carp (Cyprinus carpio L.) sperm induced by hypo-osmotic shock.</a> Aquaculture. 129 (1), 134 (1995).</li><li>Kime, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer-assisted+sperm+analysis+(CASA)+as+a+tool+for+monitoring+sperm+quality+in+fish.">Computer-assisted sperm analysis (CASA) as a tool for monitoring sperm quality in fish.</a> Comparative Biochemistry &amp; Physiology Toxicology &amp; Pharmacology Cbp. 130 (4), 425-433 (2001).</li><li>Rurangwa, E., Volckaert, F. A., Huyskens, G., Kime, D. E., Ollevier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+of+refrigerated+and+cryopreserved+semen+using+computer-assisted+sperm+analysis+(CASA),+viable+staining+and+standardized+fertilization+in+African+catfish+(Clarias+gariepinus).">Quality control of refrigerated and cryopreserved semen using computer-assisted sperm analysis (CASA), viable staining and standardized fertilization in African catfish (Clarias gariepinus).</a> Theriogenology. 55 (3), 751-769 (2001).</li><li>Seth, R. K., Kaur, J. J., Rao, D. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+larval+exposure+to+sublethal+concentrations+of+the+ecdysteroid+agonists+RH-5849+and+tebufenozide+(RH-5992)+on+male+reproductive+physiology+in+Spodoptera+litura.">Effects of larval exposure to sublethal concentrations of the ecdysteroid agonists RH-5849 and tebufenozide (RH-5992) on male reproductive physiology in Spodoptera litura.</a> Journal of Insect Physiology. 50 (6), 505-517 (2004).</li><li>Sweeney, R. M., Watterson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rib+development+in+chick+embryos+analyzed+by+means+of+tantalum+foil+blocks.">Rib development in chick embryos analyzed by means of tantalum foil blocks.</a> American Journal of Anatomy. 126 (2), 127-149 (1969).</li><li>Wilde, S., Logan, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+impermeable+barriers+combined+with+candidate+factor+soaked+beads+to+study+inductive+signals+in+the+chick.">Application of impermeable barriers combined with candidate factor soaked beads to study inductive signals in the chick.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54618 (2016).</li></ol>

Depois de obstruir microsurgicamente a fusão de testículos em Spodoptera litura, o número de espermatozoides diminuiu, o que apoiou a hipótese de que essa fusão é benéfica para a capacidade reprodutiva. A manipulação cirúrgica tem sido usada para estudar o desenvolvimento fisiológico de insetos desde o início do século XX. Para determinar se o nervo craniano é regulado pela metamorfose de insetos, alguns pesquisadores realizaram procedimentos como ligadura e decapitação em diferentes i...

A fusão é um fenômeno comum no desenvolvimento de tecidos ou órgãos. Exemplos incluem fechamento dorsal e fechamento do tórax em Drosophila1 e morfogênese do paladar, morfogênese do tubo neural e morfogênese cardíaca em camundongos e frango2. CRISPR e RNAi têm sido aplicados para investigar os papéis dos genes no processo de fusão2,3,4.
Spodoptera litura (S. litura, Lepidoptera: Noctuidae) é uma praga polifagosa prejudicial que é amplamente distribuída em áreas tropicais e subtropicais da Ásia, incluindo China4,5,6. A ampla distribuição da S. litura é parcialmente atribuída à sua poderosa capacidade reprodutiva, que é relevante para o desenvolvimento da gônada. A infertilidade masculina é uma abordagem para controlar esta praga. Como mostrado na figura esquemática da estrutura testicular, os testículos são incluídos pela baia testicular, incluindo a baáta externa (baia peritoneal) e a lamina basal interna. A lamina basal se estende internamente para formar o epitélio folicular e separa a área interna dos testículos em quatro câmaras chamadas folículos (Figura 1).
Nos folículos, a espermatogonia se desenvolve em espermatozoides após mitose e meiose, e então os espermatozoides nos sacos de esperma se alinham na mesma direção para formar espermatozoides7. Durante a espermatogênese, os espermatotozóides primários se diferenciam em espermatozoides eupyrenos ou espermatozoides apirenos. Os espermatotozóides na fase larval desenvolvem-se em esperma de eupirrena com uma cauda longa conectada a uma cabeça de um núcleo alongado; estes podem fertilizar ovos. Por outro lado, os espermatocitotas na fase de pupal médio desenvolvem-se em espermatozoides apirene com um núcleo descartado; esses espermatozoides auxiliam na sobrevivência, movimento e fertilização do esperma eupyreno9,10. O sexto dia da pupa é o período durante o qual os testículos têm abundantes pacotes de esperma de eupirrena e apirena.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62524/62524fig01.jpg"> Figura 1: Diagrama esquemático da estrutura testicular dos insetos Lepidoptera11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62524/62524fig01large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
A fusão testicular ocorre na maioria dos insetos da ordem Lepidoptera11,12, especialmente nas espécies que são pragas agrícolas. A fusão testicular refere-se a um par de testículos crescendo bilateralmente na fase larval, aproximando-se e aderindo uns aos outros, eventualmente integrando-se em uma única gônada11. Em Spodoptera litura, acontece durante a metamorfose da larval ao estágio pupal. Do primeiro dia do 5º instar (L5D1) ao 4º dia da 6ª instar (L6D4), o par de testículos cresce gradualmente em tamanho, e a cor fica amarelo claro do branco-marfim. Torna-se vermelho fraco à medida que atinge a fase prepupal (L6D5 a L6D6). Dois testículos simétricos bilaterais se aproximam durante o estágio prepupal, fundem-se em um, e torcem no sentido anti-horário (visão doral) para produzir um único testículo nas fases pupal e adulta11. Esse fenômeno não ocorre em bichos-da-seda, que têm considerável importância econômica e foram domesticados por 5000 anos13. Assim, supõe-se que a fusão dos testículos melhora a capacidade reprodutiva.
Para determinar a significância da fusão testicular Spodoptera litura , é importante investigar os efeitos do bloqueio do processo. Neste protocolo, a folha de alumínio foi microsurgicamente inserida entre os testículos para mantê-los separados, e foram estudadas as consequentes mudanças no desenvolvimento dos insetos e seus testículos.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>75% Rubbing alcohol</td>
			<td>Qingdao Hainuo Nuowei Disinfection Technology Co., Ltd</td>
			<td>Q/370285HNW 001-2019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colored Push Pins</td>
			<td>Deli Group Co.,LTD</td>
			<td>0042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corneal Scissors</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-S221A</td>
			<td>Curved and blunt tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glad Aluminum Foil</td>
			<td>Clorox China(Guangzhou) Limited</td>
			<td>831457</td>
			<td>10 cm*2.5 cm*0.6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Cotton Swabs (Sterile)</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>601-022921-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Iodine Cotton Swab</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>608-000247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.</td>
			<td>J32030</td>
			<td>14 cm fine needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blade</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>#11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suigical Blade Holder</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>K6-10</td>
			<td>Straight 3#</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture thread with needle</td>
			<td>Ningbo Medical Stitch Needle Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>needle: 3/8 Circle, 2.5*8 ; Thread: Nylon, 6/0, 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tying Forceps</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-F201T-3</td>
			<td>Straight-pointed; long handle; 0.12 mm-wide-head</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura

Em vez de usar métodos genéticos como a interferência de RNA (RNAi) e agrupar regularmente repetições palindrômicas curtas interespaçadas (CRISPR)/CRISPR-associated Cas9, uma barreira física foi microsurgicamente inserida entre os testículos de Spodoptera litura para estudar o impacto desta microcirurgia em seu crescimento e reprodução. Após inserir papel alumínio entre os testículos, a fusão de insetos durante a metamorfose prosseguiu normalmente. O crescimento e o desenvolvimento de insetos não foram notavelmente alterados; no entanto, o número de pacotes de esperma mudou se a fusão de testículos fosse interrompida pela microcirurgia. Esses achados implicam que o bloqueio da fusão testicular pode influenciar a capacidade de reprodução masculina. O método pode ser aplicado ainda mais para interromper a comunicação entre órgãos para estudar a função de vias de sinalização específicas. Em comparação com a cirurgia convencional, a microcirurgia requer apenas uma anestesia congelante, que é preferível à anestesia de dióxido de carbono. A microcirurgia também minimiza a área do local da cirurgia e facilita a cicatrização da ferida. No entanto, a seleção de materiais com funções específicas precisa ser aprofundada. Evitar lesões teciduais é crucial ao fazer incisões durante a operação.

Os efeitos da microcirurgia no crescimento e desenvolvimento da Spodoptera litura A microcirurgia deixou uma ferida de 2 mm de comprimento na epiderme larval dorsal que eventualmente parou de vazar hemoglifo e se curou. As larvas passaram por estágios prepupal e pupal e foram fechadas, indicando que a microcirurgia não teve grande impacto no crescimento e desenvolvimento. Quando as larvas se fundiram em pupas, os fios de sutura foram descartados junto com ...

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Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

A folha de alumínio foi microsurgicamente inserida entre os testículos de Spodoptera litura para obstruir a fusão de testis. O procedimento inclui congelamento, fixação, desinfecção, incisão, colocação da barreira, sutura, alimentação pós-operatória e inspeção. Essa abordagem fornece um método para interferir na formação de tecidos.

Obstrução microcirúrgica de Testes Fusion em Spodoptera litura

Instead of using genetic methods like RNA interference (RNAi) and clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated ...

Este protocolo sugere que um método físico pode ser adotado para auxiliar na desfísão de problemas biológicos. Esta técnica fornece um método para colocar material em insetos com incisão mínima e estudar a influência da microcirurgia no desenvolvimento dos indivíduos. Este método pode se aplicar a outras larvas lepidoptera e outras partes dos insetos, incluindo a cabeça e o tórax.É muito importante praticar a confecção de incisões em determinado material e suturar habilmente. Comece colocando larvas masculinas Spodoptera litura no 4º dia da 6ª instar, ou L6D4, no gelo por 10 a 30 minutos para mantê-las anestesiadas durante a operação. Coloque a larva anestesiada na bandeja de cera com o lado dorsal para cima.Fixar a cabeça e a cauda da larva com pinos e fios e desinfetar a área cirúrgica aplicando 3% de tintura de iodo com um cotonete na epiderme, seguido de 70% de álcool. Faça uma incisão de 2 milímetros de comprimento na epiderme dorsal no segmento do 9º corpo e use um cotonete estéril para remover o vazamento de hemoglifos e corpos de gordura para obter uma visão clara da área cirúrgica. Usando pinças cirúrgicas, insira um pedaço de papel alumínio entre os testículos e, em seguida, feche a epiderme com uma sutura em execução.Amarre um nó quadrado cirúrgico com a ajuda de um suporte de agulha e pinça cirúrgica. Corte o excesso de sutura das caudas de loop com uma tesoura, deixando um fio de 2 milímetros para trás. Após a sutura, coloque delicadamente a larva na caixa de criação e mantenha-as em uma câmara de simulação ambiental limpa com observação contínua.O crescimento e desenvolvimento das larvas masculinas Spodoptera litura pós-microcirurgia foi monitorado. A taxa de mortalidade larval foi ligeiramente maior no grupo cirúrgico, enquanto os percentuais de pupação, emergência adulta e acasalamento bem sucedido foram ligeiramente menores no grupo cirúrgico do que no grupo controle. No grupo experimental, o número de pacotes totais de esperma em pacotes de esperma de eupyrene e apirena foi significativamente menor do que o grupo de controle e controle falso.Por outro lado, os percentuais de espermatozoides eupiresto não apresentaram diferenças significativas entre os três grupos. Após a remoção de um teste unilateral das larvas, o número de pacotes totais de espermatozoides e pacotes de esperma de eupiro e apirena em grupos de microcirurgia foram significativamente menores do que o grupo controle. A porcentagem de espermatozoides eupires no sexto dia do estágio pupal foi comparável nos três grupos.É muito importante notar a localização da ferida e evitar danificar outros órgãos durante a incisão. Esta técnica pode ser usada para estudar a significância biológica da fusão testicular aplicando drogas aos órgãos. O efeito das drogas no órgão alvo pode ser explorado.

Research

JoVE Journal

Biology

Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

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Identificação de bactérias metabolicamente ativas no intestino do Generalista<em&gt; Spodoptera littoralis</em&gt; Via DNA Isótopos Estáveis ​​Sondagem Usando<sup&gt; 13</sup&gt; C-Glicose

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