Name: microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura
Uploaded: 2021-07-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura at JoVE.com

Detta arbete stöddes av National Natural Science Foundation of China (Nos.:31772519, 31720103916; ) och ett öppet bidrag från State Key Laboratory of Silkworm Genome Biology, South West University (Nr.: sklsgb2013003).

1. Insektsuppfödning och underhåll
<ol><li>Odla Spodoptera litura larver i miljösimuleringskammare med en konstgjord diet tills de når dag 4 av den 6: e instar (L6D4). Välj manliga larver när maskarna går in i den första dagen av den 6: e instar (L6D0) baserat på den inverterade triangelformade strukturen på den åttonde buken14. OBS: Larver uppfödning och underhåll tekniker publicerades tidigare4,14<sup class="xref...

<ol>
	<li>Zeitlinger, J., Bohmann, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thorax+closure+in+Drosophila:+involvement+of+Fos+and+the+JNK+pathway.">Thorax closure in Drosophila: involvement of Fos and the JNK pathway.</a> Development. 126 (17), 3947-3956 (1999).</li><li>Ray, H. J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+tissue+fusion+during+development.">Mechanisms of tissue fusion during development.</a> Development. 139 (10), 1701-1711 (2012).</li><li>Ducuing, A., Keeley, C., Mollereau, B., Vincent, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DPP-mediated+feed-forward+loop+canalizes+morphogenesis+during+Drosophila+dorsal+closure.">DPP-mediated feed-forward loop canalizes morphogenesis during Drosophila dorsal closure.</a> The Journal of Cell Biology. 208 (2), 239-248 (2015).</li><li>Du, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+functional+characterization+of+doublesex+gene+in+the+testis+of+Spodoptera+litura.">Identification and functional characterization of doublesex gene in the testis of Spodoptera litura.</a> Insect Science. 26 (6), 1000-1010 (2019).</li><li>Qin, H. G., Ding, J., Ye, Z. X., Huang, S. J., Luo, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+analysis+of+experimental+population+of+Spodoptera+litura.">Dynamic analysis of experimental population of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 13 (2), 45-48 (2004).</li><li>Guan, B. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+research+in+biology+and+ecology+of+Spodoptera+litura.">The research in biology and ecology of Spodoptera litura.</a> Journal of Biosafety. 8 (1), 57-61 (1999).</li><li>Wen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+testis+development+and+spermatogenesis+in+Spodopture+litura+(lepidoptera:+noctuidae).">The testis development and spermatogenesis in Spodopture litura (lepidoptera: noctuidae).</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition. 51 (4), 47-56 (2019).</li><li>Friedl&#228;nder, M., Seth, R. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eupyrene+and+apyrene+sperm:+dichotomous+spermatogenesis+in+Lepidoptera.">Eupyrene and apyrene sperm: dichotomous spermatogenesis in Lepidoptera.</a> Advances in Insect Physiology. 32, 206 (2010).</li><li>Cook, P. A., Wedell, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-fertile+sperm+delay+female+remating.">Non-fertile sperm delay female remating.</a> Nature. 397 (6719), 486 (1999).</li><li>Iriki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+function+of+apyrene+spermatozoa+in+the+silk+worm.">On the function of apyrene spermatozoa in the silk worm.</a> Zoological Magazine. 53, 123-124 (1941).</li><li>Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+study+of+fusion+of+testis+in+Lepidoptera+insects.">The study of fusion of testis in Lepidoptera insects.</a> Journal of South China Normal University (Natural Science Edition). 46 (5), 1-7 (2014).</li><li>Klowden, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Physiological systems in insects. , (2007).</li><li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+characterization+of+two+testis-specific+promoters+in+the+silkworm,+Bombyx+mori.">Transgenic characterization of two testis-specific promoters in the silkworm, Bombyx mori.</a> Insect Molecular Biology. 24 (2), 183-190 (2015).</li><li>Guo, X. R., Zheng, S. C., Liu, L., Feng, Q. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+sterol+carrier+protein+2/3-oxoacyl-CoA+thiolase+(SCPx)+is+involved+in+cholesterol+uptake+in+the+midgut+of+Spodoptera+litura:+gene+cloning,+expression,+localization+and+functional+analyses.">The sterol carrier protein 2/3-oxoacyl-CoA thiolase (SCPx) is involved in cholesterol uptake in the midgut of Spodoptera litura: gene cloning, expression, localization and functional analyses.</a> BioMed Central Molecular Biology. 10, 102 (2009).</li><li>Kope&#263;, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+necessity+of+the+brain+for+the+inception+of+insect+metamorphosis.">Studies on the necessity of the brain for the inception of insect metamorphosis.</a> Biological Bulletin. 42 (6), 323-342 (1922).</li><li>Wigglesworth, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+controlling+moulting+and+'metamorphosis'+in+an+insect.">Factors controlling moulting and 'metamorphosis' in an insect.</a> Nature. 133 (5), 725-726 (1934).</li><li>Williams, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+insect+diapause;+the+role+of+the+brain+in+the+production+and+termination+of+pupal+dormancy+in+the+giant+silkworm,+Platysamia+cecropia.">Physiology of insect diapause; the role of the brain in the production and termination of pupal dormancy in the giant silkworm, Platysamia cecropia.</a> Biological Bulletin. 90 (3), 234-243 (1946).</li><li>Fukuda, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+control+of+molting+and+pupation+in+the+silkworm.">Hormonal control of molting and pupation in the silkworm.</a> Proceedings of the Imperial Academy Tokyo. 16 (8), 417-420 (1940).</li><li>Tian, H. J., Liu, Z. P., Bai, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Common+methods+to+detect+Sperm+quality+of+mammalian.">Common methods to detect Sperm quality of mammalian.</a> Journal of Economic Zoology. 8 (4), 198-201 (2004).</li><li>Ji, X. S., Chen, S. L., Zhao, Y., Tian, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progress+in+the+quality+evaluation+of+fish+sperm.">Progress in the quality evaluation of fish sperm.</a> Chinese Fishery Science. 14 (6), 1048-1054 (2007).</li><li>Baulny, B. O. D., Vern, Y. L., Kerboeuf, D., Maisse, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+evaluation+of+mitochondrial+activity+and+membrane+integrity+in+fresh+and+cryopreserved+rainbow+trout+(Oncorhynchus+mykiss)+spermatozoa.">Flow cytometric evaluation of mitochondrial activity and membrane integrity in fresh and cryopreserved rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) spermatozoa.</a> Cryobiology. 34 (2), 141-149 (1997).</li><li>Krasznai, Z., M&#225;ri&#225;n, T., Balkay, I., Emri, M., Tr&#243;n, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+and+structural+changes+in+the+membrane+of+common+carp+(Cyprinus+carpio+L.)+sperm+induced+by+hypo-osmotic+shock.">Permeabilization and structural changes in the membrane of common carp (Cyprinus carpio L.) sperm induced by hypo-osmotic shock.</a> Aquaculture. 129 (1), 134 (1995).</li><li>Kime, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computer-assisted+sperm+analysis+(CASA)+as+a+tool+for+monitoring+sperm+quality+in+fish.">Computer-assisted sperm analysis (CASA) as a tool for monitoring sperm quality in fish.</a> Comparative Biochemistry &amp; Physiology Toxicology &amp; Pharmacology Cbp. 130 (4), 425-433 (2001).</li><li>Rurangwa, E., Volckaert, F. A., Huyskens, G., Kime, D. E., Ollevier, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+control+of+refrigerated+and+cryopreserved+semen+using+computer-assisted+sperm+analysis+(CASA),+viable+staining+and+standardized+fertilization+in+African+catfish+(Clarias+gariepinus).">Quality control of refrigerated and cryopreserved semen using computer-assisted sperm analysis (CASA), viable staining and standardized fertilization in African catfish (Clarias gariepinus).</a> Theriogenology. 55 (3), 751-769 (2001).</li><li>Seth, R. K., Kaur, J. J., Rao, D. K., Reynolds, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+larval+exposure+to+sublethal+concentrations+of+the+ecdysteroid+agonists+RH-5849+and+tebufenozide+(RH-5992)+on+male+reproductive+physiology+in+Spodoptera+litura.">Effects of larval exposure to sublethal concentrations of the ecdysteroid agonists RH-5849 and tebufenozide (RH-5992) on male reproductive physiology in Spodoptera litura.</a> Journal of Insect Physiology. 50 (6), 505-517 (2004).</li><li>Sweeney, R. M., Watterson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rib+development+in+chick+embryos+analyzed+by+means+of+tantalum+foil+blocks.">Rib development in chick embryos analyzed by means of tantalum foil blocks.</a> American Journal of Anatomy. 126 (2), 127-149 (1969).</li><li>Wilde, S., Logan, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+impermeable+barriers+combined+with+candidate+factor+soaked+beads+to+study+inductive+signals+in+the+chick.">Application of impermeable barriers combined with candidate factor soaked beads to study inductive signals in the chick.</a> Journal of Visualized Experiments. (117), e54618 (2016).</li></ol>

Efter mikrokirurgiskt hindrande testifest fusion i Spodoptera litura minskade antalet spermier buntar, vilket stödde hypotesen att denna fusion är fördelaktig för reproduktionsförmågan. Kirurgisk manipulation har använts för att studera den fysiologiska utvecklingen av insekter sedan början av 1900-talet. För att avgöra om hjärnnerven regleras av insektsmetamorfos utförde vissa forskare procedurer som ligatur och halshuggning på olika insekter (inklusive Rhodnius prolixus of Hem...

Fusion är ett vanligt fenomen i vävnads- eller organutveckling. Exempel inkluderar dorsala stängning och bröstkorg stängning i Drosophila1 och gommen morfogenes, neurala röret morfogenes och hjärtat morfogenes hos möss och kyckling2. CRISPR och RNAi har tillämpats för att undersöka genernas roller i fusionsprocessen2,3,4.
Spodoptera litura (S. litura, Lepidoptera: Noctuidae) är ett skadligt polyfag skadedjur som är utbredd i tropiska och subtropiska områden i Asien, inklusive Kina4,5,6. Den breda fördelningen av S. litura tillskrivs delvis dess kraftfulla reproduktiva förmåga, vilket är relevant för gonadutveckling. Manlig infertilitet är ett tillvägagångssätt för att bekämpa detta skadedjur. Som visas i den schematiska figuren testikelstruktur omges testiklarna av testikelslidan, inklusive den yttre manteln (peritonealslida) och inre basal lamina. Den basala laminan sträcker sig invändigt för att bilda follikulärt epitel och separerar testikelns inre område i fyra kammare som heter folliklar (figur 1).
I folliklarna utvecklas spermatogonia till spermatozoa efter mitos och meios, och sedan justerar spermatozoerna i spermasäckarna i samma riktning för att bilda spermier7. Under spermatogenes skiljer sig de primära spermatocyterna i eupyrenspermatrar eller apyrenspermas. Spermatocyter i larvfasen utvecklas till eupyrensperma med en lång svans ansluten till ett huvud av en långsträckt kärna; dessa kan befrukta ägg. Omvänt utvecklas spermatocyter i mitten av pupalfasen till apyrensperma med en kasserad kärna; dessa spermier hjälper överlevnad, rörelse och befruktning av eupyren sperm9,10. Den 6: e dagen av poppan är den period under vilken testikarna har rikliga eupyrene och apyrene spermiebuntar.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62524/62524fig01.jpg"> Bild 1: Schematiskt diagram över testikelstrukturen hos Lepidoptera insekter11. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62524/62524fig01large.jpg" target="_blank">Klicka här för att se en större version av denna figur.</a>
Testikelfusion förekommer i de flesta insekter i Lepidoptera-ordningen11,12, särskilt hos de arter som är jordbruksskadedjur. Testikelfusion avser ett par testiklar som växer bilateralt i larvfasen, närmar sig och följer varandra och så småningom integreras i en enda gonad11. I Spodoptera litura händer det under metamorfos från larven till pupalstadiet. Från dag 1 av den 5: e instar (L5D1) till dag 4 av den 6: e instar (L6D4) växer testikeparet gradvis i storlek och färgen blir ljusgul från elfenbensvit. Det blir svagt rött när det når prepupalfasen (L6D5 till L6D6). Två bilaterala symmetriska testiklar närmar sig varandra under prepupalstadiet, smälter till en och vrider motsols (doral view) för att producera en enda testikel i pupal- och vuxenfaserna11. Detta fenomen förekommer inte i silkesmaskar, som har betydande ekonomisk betydelse och har tämjts i 5000 år13. Det antas således att testikeernas fusion förbättrar reproduktionsförmågan.
För att bestämma betydelsen av Spodoptera litura testikelfusion är det viktigt att undersöka effekterna av att blockera processen. I detta protokoll sattes aluminiumfolie mikrokirurgiskt in mellan testikarna för att hålla dem åtskilda, och de därav följande förändringarna i utvecklingen av insekterna och deras testi testierna studerades.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>75% Rubbing alcohol</td>
			<td>Qingdao Hainuo Nuowei Disinfection Technology Co., Ltd</td>
			<td>Q/370285HNW 001-2019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colored Push Pins</td>
			<td>Deli Group Co.,LTD</td>
			<td>0042</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corneal Scissors</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-S221A</td>
			<td>Curved and blunt tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glad Aluminum Foil</td>
			<td>Clorox China(Guangzhou) Limited</td>
			<td>831457</td>
			<td>10 cm*2.5 cm*0.6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Cotton Swabs (Sterile)</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>601-022921-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical Iodine Cotton Swab</td>
			<td>Winner Medical Co., Ltd.</td>
			<td>608-000247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp.</td>
			<td>J32030</td>
			<td>14 cm fine needle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile surgical blade</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>#11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suigical Blade Holder</td>
			<td>Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., LTD</td>
			<td>K6-10</td>
			<td>Straight 3#</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture thread with needle</td>
			<td>Ningbo Medical Stitch Needle Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td>needle: 3/8 Circle, 2.5*8 ; Thread: Nylon, 6/0, 25 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tying Forceps</td>
			<td>Suzhou Xiehe Medical Device Co., Ltd</td>
			<td>MR-F201T-3</td>
			<td>Straight-pointed; long handle; 0.12 mm-wide-head</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microsurgical obstruction of testes fusion in spodoptera litura

Istället för att använda genetiska metoder som RNA-interferens (RNAi) och grupperade regelbundet interspaced korta palindromiska repetitioner (CRISPR)/CRISPR-associerade endonuclease Cas9, sattes en fysisk barriär mikrokirurgiskt in mellan testikel av Spodoptera litura för att studera effekten av denna mikrokirurgi på dess tillväxt och reproduktion. Efter att ha infogat aluminiumfolie mellan testikerna fortsatte insektssmältning under metamorfos normalt. Insektstillväxt och utveckling ändrades inte anmärkningsvärt; Antalet spermiebuntar ändrades dock om testiklar fusion stoppades av mikrokirurgin. Dessa resultat innebär att blockera testikel fusion kan påverka manliga reproduktionsförmåga. Metoden kan tillämpas ytterligare för att avbryta kommunikationen mellan organ för att studera funktionen hos specifika signalvägar. Jämfört med konventionell kirurgi kräver mikrokirurgi endast frysning av bedövning, vilket är att föredra framför koldioxidestetisering. Mikrokirurgi minimerar också området för operationsplatsen och underlättar sårläkning. Valet av material med specifika funktioner behöver dock undersökas ytterligare. Att undvika vävnadsskada är avgörande när man gör snitt under operationen.

Mikrokirurgins effekter på Spodoptera litura tillväxt och utveckling Mikrokirurgi lämnade ett 2 mm långt sår på dorsala larval epidermis som så småningom slutade läcka hemolymph och läkt. Larverna gick igenom prepupal och pupal stadier och eclosed, vilket indikerar att mikrokirurgi hade någon större inverkan på tillväxt och utveckling. När larverna smälte till puppar kasserades suturtrådarna tillsammans med epidermis. Det fanns inga uppenbara...

Watch this Scientific Journal Video about Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura at JoVE.com

Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

Aluminiumfolie sattes mikrokirurgiskt in mellan testikelerna i Spodoptera litura för att hindra fusionen av testikel. Förfarandet omfattar frysning, fixering, desinfektion, snitt, placering av barriär, suturering, postoperativ utfodring och inspektion. Detta tillvägagångssätt ger en metod för att störa vävnadsbildning.

Mikrokirurgisk obstruktion av testikel fusion i Spodoptera litura

Instead of using genetic methods like RNA interference (RNAi) and clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/CRISPR-associated ...

Detta protokoll föreslår att en fysisk metod kan antas för att hjälpa till att räkna ut biologiska problem. Denna teknik ger en metod för att placera material i insekter med minimalt snitt och studera mikrokirurgins påverkan på individers utveckling. Denna metod kan tillämpas på andra Lepidoptera larver och andra delar av insekterna, inklusive huvudet och bröstkorgen.Det är mycket viktigt att öva på att göra snitt i visst material och suturera skickligt. Börja med att placera Spodoptera litura manliga larver på dag 4 av den 6: e instar, eller L6D4, på is i 10 till 30 minuter för att hålla dem sövda under operationen. Placera den sövda larven på vaxbrickan med dorsalsidan uppåt.Fixa larvens huvud och svans med stift och trådar och desinficera operationsområdet genom att applicera 3% jodtinktur med en bomullspinne på epidermis, följt av 70%alkohol. Gör ett 2 millimeter långt snitt på dorsala epidermis vid 9: e kroppssegmentet och använd en steril bomullspinne för att ta bort läckande hemolymph och fettkroppar för att få en tydlig bild av operationsområdet. Använd kirurgiska pincett, sätt in en bit aluminiumfolie mellan testiklarna och stäng sedan epidermis med en löpande sutur.Knyt en kirurgisk fyrkantig knut med hjälp av en nålhållare och kirurgiska pincett. Skär överskottet sutur från slinga svansar med sax, lämnar en 2-millimeters tråd bakom. Efter suturering, lägg försiktigt larven i uppfödningslådan och behåll dem i en ren miljösimuleringskammare med kontinuerlig observation.Tillväxten och utvecklingen av Spodoptera litura manliga larver efter mikrokirurgi övervakades. Larvdödligheten var något högre i den kirurgiska gruppen, medan procentandelarna av pupation, vuxna uppkomst och framgångsrika parning var något lägre i den kirurgiska gruppen än i kontrollgruppen. I den experimentella gruppen var antalet totala spermiebuntar i eupyrene och apyren spermiebuntar betydligt lägre än kontroll- och skenkontrollgruppen.Å andra sidan hade procentandelarna av eupyrene spermiebuntar inga betydande skillnader mellan alla tre grupperna. Efter att ha tagit bort en ensidig testike av larverna var antalet totala spermiebuntar och eupyrene och apyren spermiebuntar i mikrokirurgigrupper betydligt lägre än kontrollgruppen. Andelen eupyren spermiebuntar på den sjätte dagen av pupalstadiet var jämförbar i alla tre grupperna.Det är mycket viktigt att märka sårets placering och undvika att skada andra organ under snittet. Denna teknik kan användas för att studera den biologiska betydelsen av testikelfusion genom att applicera läkemedel på organen. Drogernas effekt på målorganet kan undersökas.

Research

JoVE Journal

Biology

Microsurgical Obstruction of Testes Fusion in Spodoptera litura

Microsurgical Clip Obliteration of Middle Cerebral Aneurysm Using Intraoperative Flow Assessment

Mikrokirurgisk Clip Obliteration av Middle cerebral aneurysm Använda Intraoperativ Flow Bedömning

Cerebral aneurysms are abnormal widening or ballooning of a localized segment of an intracranial blood vessel.  Surgical clipping is an important ...

Anterior Cervical Discectomy and Fusion in the Ovine Model

Anterior cervikal discectomy och Fusion i Får Modell

Anterior cervical discectomy and fusion (ACDF) is the most common surgical operation for cervical radiculopathy and/or myelopathy in patients who have ...

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Isolation of Drosophila melanogaster Testes

Isolering av Drosophila melanogaster Testiklar

The testes of Drosophila melanogaster provide an important model for the study of stem cell maintenance and differentiation, meiosis, and soma-germline ...

Analysis of SNARE-mediated Membrane Fusion Using an Enzymatic Cell Fusion Assay

Analys av SNARE-medierad membran fusion Använda en enzymatisk analys Cellfusion

The interactions of SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor)  proteins on vesicles (v-SNAREs) and on target membranes ...

Identification of Metabolically Active Bacteria in the Gut of the Generalist Spodoptera littoralis via DNA Stable Isotope Probing Using 13C-Glucose

Identification of Metabolically Active Bacteria in the Gut of the Generalist Spodoptera littoralis via DNA Stable Isotope Probing Using 13C-Glucose

Identifiering av metaboliskt aktiva bakterier i tarmen hos Generalist<em&gt; Spodoptera littoralis</em&gt; Via DNA stabil isotop Probing Använda<sup&gt; 13</sup&gt; C-Glukos

Guts of most insects are inhabited by complex communities of symbiotic nonpathogenic bacteria. Within such microbial communities it is possible to ...

Imaging Centrosomes in Fly Testes

Imaging centrosomes i Fly Testiklar

Centrosomes are conserved microtubule-based organelles whose structure and function change dramatically throughout the cell cycle and cell ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Cytologisk analys av Spermatogenesen: Live och fasta Beredningar av<em&gt; Drosophila</em&gt; Testiklar

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Cryopreservation of Zebrafish Spermatogonia by Whole Testes Needle Immersed Ultra-Rapid Cooling

Frysförvaring av zebrafisk spermatogonier av hela testiklarna nål nedsänkt Ultra snabb kylning

Current trends in science and biotechnology lead to creation of thousands of new lines in model organisms thereby leading to the necessity for new methods ...

Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection

Bedömningen av urinvägarna Junction obstruktion defekter av metylenblått Dye injektion

Urinary tract junction obstruction defects are congenital anomalies inducing hydronephrosis and hydroureter. Murine urinary tract junction obstruction ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

En musmodell av partiell tarmobstruktion

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...