Name: analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma
Uploaded: 2021-09-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

ويود المؤلفان أن يشكرا س. بورشيلي (FTGM، بيزا) على مساعدتها في الإجراءات المتعلقة بالحيوانات. وقد تم دعم هذا العمل من قبل ISPRO-Istituto per lo Studio la Prevenzione e la Rete Oncologica التمويل المؤسسي ل LP ؛ MFAG # 17095 منحت من قبل AIRC-Associazione Italiana Ricerca sul Cancro إلى LP.

تمت الموافقة على جميع الطرق الموضحة هنا من قبل وزارة الصحة الإيطالية (بروتوكولات الحيوانات # 754/2015-PR و # 684/2018-PR).
1. تحريض سرطان الجلد
ملاحظة: تم استخدام الفئران Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox [B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten)] في هذه الدرا...

<ol>
	<li>Schvartsman, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+metastatic+cutaneous+melanoma:+updates+in+clinical+practice.">Management of metastatic cutaneous melanoma: updates in clinical practice.</a> Therapeutic Advances in Medical Oncology. 11, 1758835919851663 (2019).</li><li>Blum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+examination+of+regional+lymph+nodes+significantly+improves+early+detection+of+locoregional+metastases+during+the+follow-up+of+patients+with+cutaneous+melanoma+-+Results+of+a+prospective+study+of+1288+patients.">Ultrasound examination of regional lymph nodes significantly improves early detection of locoregional metastases during the follow-up of patients with cutaneous melanoma - Results of a prospective study of 1288 patients.</a> Cancer. 88 (11), 2534-2539 (2000).</li><li>Olmedo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+lymph+node+ultrasound+prior+to+sentinel+lymph+node+biopsy+in+384+patients+with+melanoma:+a+cost-effectiveness+analysis.">Use of lymph node ultrasound prior to sentinel lymph node biopsy in 384 patients with melanoma: a cost-effectiveness analysis.</a> Actas Dermo-Sifiliograficas. 108 (10), 931-938 (2017).</li><li>Voit, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+morphology+criteria+predict+metastatic+disease+of+the+sentinel+nodes+in+patients+with+melanoma.">Ultrasound morphology criteria predict metastatic disease of the sentinel nodes in patients with melanoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (5), 847-852 (2010).</li><li>Hayes, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+cohort+study+of+ultrasound+surveillance+of+regional+lymph+nodes+in+patients+with+intermediate-risk+cutaneous+melanoma.">Prospective cohort study of ultrasound surveillance of regional lymph nodes in patients with intermediate-risk cutaneous melanoma.</a> British Journal of Surgery. 106 (6), 729-734 (2019).</li><li>Ipenburg, N. A., Thompson, J. F., Uren, R. F., Chung, D., Nieweg, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focused+ultrasound+surveillance+of+lymph+nodes+following+lymphoscintigraphy+without+sentinel+node+biopsy:+a+useful+and+safe+strategy+in+elderly+or+frail+melanoma+patients.">Focused ultrasound surveillance of lymph nodes following lymphoscintigraphy without sentinel node biopsy: a useful and safe strategy in elderly or frail melanoma patients.</a> Annals of Surgical Oncology. 26 (9), 2855-2863 (2019).</li><li>Jayapal, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+between+benign+and+metastatic+cervical+lymph+nodes+using+ultrasound.">Differentiation between benign and metastatic cervical lymph nodes using ultrasound.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences. 11, 338-346 (2019).</li><li>Dankort, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Damsky, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-catenin+signaling+controls+metastasis+in+Braf-activated+Pten-deficient+melanomas.">&#946;-catenin signaling controls metastasis in Braf-activated Pten-deficient melanomas.</a> Cancer Cell. 20 (6), 741-754 (2011).</li><li>Xie, X., Koh, J. Y., Price, S., White, E., Mehnert, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atg7+overcomes+senescence+and+promotes+growth+of+BrafV600E-driven+melanoma.">Atg7 overcomes senescence and promotes growth of BrafV600E-driven melanoma.</a> Cancer Discovery. 5 (4), 410-423 (2015).</li><li>Kohler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cutaneous+melanoma+induced+by+mutant+BRaf+arises+from+expansion+and+dedifferentiation+of+mature+pigmented+melanocytes.">Mouse cutaneous melanoma induced by mutant BRaf arises from expansion and dedifferentiation of mature pigmented melanocytes.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 679-693 (2017).</li><li>Yuan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenformin+enhances+the+therapeutic+benefit+of+BRAF(V600E)+inhibition+in+melanoma.">Phenformin enhances the therapeutic benefit of BRAF(V600E) inhibition in melanoma.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (45), 18226-18231 (2013).</li><li>Marsh Durban, V., Deuker, M. M., Bosenberg, M. W., Phillips, W., McMahon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+AKT+dependency+displayed+by+mouse+models+of+BRAFV600E-initiated+melanoma.">Differential AKT dependency displayed by mouse models of BRAFV600E-initiated melanoma.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (12), 5104-5118 (2013).</li><li>Hooijkaas, A. I., Gadiot, J., vander Valk, M., Mooi, W. J., Blank, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+in+an+inducible+murine+model+of+melanoma.">Targeting BRAFV600E in an inducible murine model of melanoma.</a> American Journal of Pathology. 181 (3), 785-794 (2012).</li><li>Steinberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+inhibition+alleviates+immune+suppression+in+murine+autochthonous+melanoma.">BRAF inhibition alleviates immune suppression in murine autochthonous melanoma.</a> Cancer Immunology Research. 2 (11), 1044-1050 (2014).</li><li>Vitiello, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumoral+effects+of+attenuated+Listeria+monocytogenes+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+melanoma.">Antitumoral effects of attenuated Listeria monocytogenes in a genetically engineered mouse model of melanoma.</a> Oncogene. 38 (19), 3756-3762 (2019).</li><li>Moon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Zhao, L., Zhan, Y. T., Rutkowski, J. L., Feuerstein, G. Z., Wang, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+2-and+3-dimensional+assessment+of+tumor+volume+and+vascular+density+by+ultrasonography+in+a+transgenic+mouse+model+of+mammary+carcinoma.">Correlation between 2-and 3-dimensional assessment of tumor volume and vascular density by ultrasonography in a transgenic mouse model of mammary carcinoma.</a> Journal of Ultrasound in Medicine. 29 (4), 587-595 (2010).</li></ol>

تشهد البيانات التي تم الحصول عليها في هذه الدراسة على قدرة التصوير بالموجات فوق الصوتية على مراقبة المشاركة النقيلية للعقد الليمفاوية الإربية لنموذج الفأر Braf / Pten للسرطان الميلانيني النقيلي. كما هو موضح سابقا16 ، هذه التقنية مفيدة بشكل خاص لتقييم فعالية العلاج بالعقاقير. هذا ...

سرطان الجلد هو شكل عدواني من سرطان الجلد الذي ينتشر غالبا إلى مواقع جلدية أخرى (النقائل تحت الجلد)، وكذلك إلى الغدد الليمفاوية والرئتين والكبد والدماغ والعظام1. في العقد الماضي ، تم إدخال أدوية جديدة في الممارسة السريرية وساهمت في تحسين متوسط العمر المتوقع لمرضى سرطان الجلد النقيلي. ومع ذلك، لا تزال هناك قيود، بما في ذلك الوقت المتغير ودرجة الاستجابة، والآثار الجانبية الشديدة، وتمرد المقاومة المكتسبة1. لذلك ، من الأهمية بمكان اكتشاف الانتشار النقيلي في مراحله المبكرة ، أي عندما يصل إلى الغدد الليمفاوية المحلية.
عادة ما يتم إجراء خزعة من الغدد الليمفاوية المحلية (الغدد الليمفاوية الخافرة) للتحقق من وجود خلايا سرطان الجلد. ومع ذلك ، فإن التصوير بالموجات فوق الصوتية يترسخ كطريقة غير جراحية للكشف عن تورط النقيلي ، لأنه يتفوق على التقييم السريري ويمكن أن يساعد في تجنب خزعة غير ضرورية2،3،4. علاوة على ذلك ، يبدو التصوير بالموجات فوق الصوتية مناسبا لمراقبة العقدة الليمفاوية ، خاصة في حالة التقدم في العمر و / أو الأمراض المصاحبة5,6. تشمل الميزات التي يتم اكتشافها عن طريق التحليل بالموجات فوق الصوتية والتي تسمح بالتفريق بين الغدد الليمفاوية الطبيعية والنقيلية زيادة الحجم (الحجم) ، وتغيير الشكل من البيضاوي إلى الدائري ، والهامش غير المنتظم ، وتغيير نمط الصدى ، وتغيير (زيادة) الأوعية الدموية 7.
Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox الفئران المهندسة وراثيا (فئران Braf/Pten) تم توفيرها مؤخرا للمجتمع العلمي كنموذج خاص بالأنسجة ومستحث للسرطان الميلانيني النقيلي8. في هذا النموذج الحيواني ، تتطور الأورام الأولية بسرعة كبيرة: تصبح مرئية في غضون 2-3 أسابيع بعد تحريض التحول من النوع البري (wt) Braf إلى BrafV600E وفقدان Pten ، بينما تصل إلى حجم 50-100 مم 3 في غضون 4 أسابيع. في الأسابيع التالية 2 ، يرافق نمو الورم الأساسي زيادة تدريجية في العبء النقيلي في مواقع الجلد الأخرى والغدد الليمفاوية والرئتين.
تم استخدام فئران Braf / Pten على نطاق واسع لأغراض متعددة بما في ذلك تشريح مسارات الإشارات المشاركة في تكوين سرطان الجلد9,10 ، وتحديد خلايا سرطان الجلد من المنشأ11,12,13 ، واختبار خيارات علاجية جديدة من حيث كل من العلاج المستهدف والعلاج المناعي8,14,15,16 . على وجه التحديد ، استخدمنا الفئران Braf / Pten لإثبات أن الليستيريا الأحادية الموهنة (Lmat) تعمل كلقاح مضاد لسرطان الجلد. عندما تدار بشكل منهجي في الإعداد العلاجي ، لا يرتبط Lmat بالسمية الكلية لأنه يتراكم بشكل انتقائي في مواقع الورم. علاوة على ذلك ، فإنه يسبب انخفاضا ملحوظا في كتلة سرطان الجلد الأولي وانخفاضا في العبء النقيلي في الغدد الليمفاوية والرئتين. على المستوى الجزيئي ، يسبب Lmat قتلا استماتيا لخلايا سرطان الجلد ، والذي يرجع ، جزئيا على الأقل ، إلى الأنشطة غير المستقلة للخلايا (التوظيف في الموقع للخلايا الليمفاوية CD4 + و CD8 + T)16.
عندما يتم استخدام الفئران Braf / Pten لنمذجة سرطان الجلد ، يمكن مراقبة نمو الأورام الأولية والنقائل تحت الجلد عن طريق قياسات الفرجار. ومع ذلك ، يجب التحقيق في تورط الغدد الليمفاوية والرئتين باستخدام تقنية بديلة ، ربما تقنية غير غازية تسمح للباحثين بمتابعة نفس الحيوان بمرور الوقت. تصف هذه الورقة استخدام التصوير بالموجات فوق الصوتية (الشكل 1) ، إلى جانب التحليل الحجمي 3D اللاحق للبيانات التي تم الحصول عليها ، للمراقبة الطولية للزيادة في حجم (حجم) الغدد الليمفاوية الأربية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-hydroxytamoxifen</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H6278</td>
			<td>drug used for tumor induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>013590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blu gel</td>
			<td>Sooft Ialia</td>
			<td></td>
			<td>ophthalmic solution gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAFV600E antibody</td>
			<td>Spring Bioscience Corporation</td>
			<td>E19290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo (isoflorane)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td></td>
			<td>liquid for gaseous anaesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MLANA antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>M2-7C10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma gel</td>
			<td>Parker</td>
			<td></td>
			<td>electrode gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transonic gel clear</td>
			<td>Telic SAU</td>
			<td></td>
			<td>ultrasound gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet</td>
			<td>Reckitt Benckiser IT</td>
			<td></td>
			<td>depilatory cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Dual Anesthesia System</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Isoflurane-based anesthesia system equipped with nose cone and induction chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS linear probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS imaging station and Advancing Physiological Monitoring Unit endowed with heated board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Lab</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>software platform for ultrasound image post-processing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox الفئران المهندسة وراثيا (الفئران Braf/Pten) تستخدم على نطاق واسع كنموذج في الجسم الحي للسرطان الميلانيني النقيلي. بمجرد تحفيز الورم الأولي عن طريق علاج تاموكسيفين ، لوحظت زيادة في العبء النقيلي في غضون 4-6 أسابيع بعد الحث. توضح هذه الورقة كيف يمكن استغلال التصوير بالموجات فوق الصوتية فائقة التردد (UHFUS) لمراقبة الزيادة في المشاركة النقيلية للعقد الليمفاوية الإربية عن طريق قياس الزيادة في حجمها.
يستخدم نظام UHFUS لمسح الفئران المخدرة باستخدام مسبار خطي UHFUS (22-55 ميجاهرتز ، دقة محورية 40 ميكرومتر). يتم الحصول على صور الوضع B من الغدد الليمفاوية الإربية (الجانبين الأيسر والأيمن) في عرض قصير المحور ، مما يضع الحيوانات في حالة استلقاء ظهري. يتم الحصول على سجلات الموجات فوق الصوتية باستخدام حجم خطوة 44 ميكرومتر على ذراع ميكانيكية آلية. بعد ذلك ، يتم استيراد عمليات الاستحواذ ثنائية الأبعاد (2D) B-mode إلى منصة البرامج الخاصة بالمعالجة اللاحقة لصور الموجات فوق الصوتية ، ويتم تحديد الغدد الليمفاوية الإربية وتقسيمها بشكل شبه تلقائي في الصور ثنائية الأبعاد المقطعية المستعرضة المكتسبة. أخيرا ، يتم الحصول على إعادة بناء كاملة لحجم ثلاثي الأبعاد (3D) تلقائيا إلى جانب تقديم حجم العقدة الليمفاوية ، والذي يتم التعبير عنه أيضا كقياس مطلق.
هذه التقنية غير الغازية في الجسم الحي جيدة التحمل للغاية وتسمح بجدولة جلسات تصوير متعددة على نفس التجارب على مدار 2 أسابيع. لذلك ، من المثالي تقييم تأثير العلاج الدوائي على المرض النقيلي.

بعد طلاء الجلد من Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox الفئران مع 4-HT, يتم تحفيز نشاط Cre, بسبب وجود تحول على المستوى الجينومي من wt Braf إلى BrafV600E, في حين يتم فقدان Pten (الشكل 3A). في غضون 2-3 أسابيع ، تطور الفئران أورام أولية في الموقع مع اختراق 100٪. بعد أربعة أسابيع من علاج 4-HT (t0) ، ت?...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

سرطان الجلد هو مرض عدواني للغاية ينتشر بسرعة إلى الأعضاء الأخرى. يصف هذا البروتوكول تطبيق التصوير بالموجات فوق الصوتية عالية التردد ، إلى جانب تقديم 3D ، لمراقبة حجم الغدد الليمفاوية الإربية في نموذج الفأر Braf / Pten للسرطان الميلانيني النقيلي.

تحليل حجم العقدة الليمفاوية بواسطة التصوير بالموجات فوق الصوتية فائقة التردد في نموذج الفأر المصمم وراثيا Braf/Pten لسرطان الجلد

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

تتيح طريقتنا مراقبة الزيادة في المشاركة النقيلية للعقد الليمفاوية الإربية عن طريق قياس الزيادة في حجمها. هذه الطريقة غير الغازية جيدة التحمل ، لذلك ، يمكن جدولة جلسات تصوير متعددة على نفس التجربة على مدار أسبوعين. هذه الطريقة مثالية لتقييم تأثير العلاج الدوائي على المرض النقيلي.لقد طبقنا هذه الطريقة على نموذج الورم الميلانيني Braf / Pten ، ولكن من حيث المبدأ ، يمكن تكييفها لتقييم فعالية الأدوية المختلفة في مجموعة متنوعة من نماذج الفئران قبل السريرية للسرطان النقيلي. وستشارك في هذا الإجراء الدكتورة ماريانا فيتيلو، وهي باحثة ما بعد الدكتوراه من مختبري، والدكتورة كلوديا كوسميك، باحثة زميلة في مؤسسة التمويل الدولية-CNR. لتحريض سرطان الجلد ، ضع ثلاثة ميكرولترات من خمسة ملليمولار 4-هيدروكسي تاموكسيفين على ما يقرب من سنتيمتر مربع واحد من الجلد الحليق في الجزء العلوي من الظهر لمدة ثلاثة أيام متتالية.بعد ستة أسابيع من طلاء الجلد ، استخدم الفرجار لقياس حجم الورم الأساسي ، وفي النهاية ، من النقائل تحت الجلد. ثم استخدم التصوير بالموجات فوق الصوتية لقياس حجم الغدد الليمفاوية الأربية. بعد تحليل الورم الأولي والغدد الليمفاوية عن طريق الفحص البصري ، قم باستئصالها للدراسات النسيجية.بعد التأكد من التخدير ، انقل الحيوان إلى لوحة ساخنة في محطة التصوير بالموجات فوق الصوتية فائقة التردد ، مع إبقاء الحيوان في وضع ضعيف. اضبط درجة حرارة اللوحة باستخدام مسبار مستقيمي مشحم بالفازلين للحفاظ على درجة حرارة جسم الماوس في النطاق الفسيولوجي. قم بتغطية الكفوف الأمامية والخلفية بعجينة موصلة وقم بلصقها على أقطاب لوحة ECG المضمنة في اللوحة.تحقق من الحصول على المعلمات الفسيولوجية وعرضها بشكل صحيح. قم بإزالة الشعر من كلتا المنطقتين الإربيتين عن طريق تطبيق عامل مزيل للشعر وتغطيته بوسط اقتران صوتي. ثم ، قم بتثبيت المسبار الخطي بالموجات فوق الصوتية فائقة التردد في محرك 3D متخصص مدمج في محطة التصوير ، مما يسمح بالحركة الآلية والتدريجية للمسبار.توجيه وضبط موضع مسبار الموجات فوق الصوتية بشكل صحيح للحصول على صور قصيرة الوصول للعقدة الليمفاوية الأربية ، ووضع المنطقة محل الاهتمام في المنطقة البؤرية. اضبط مسافة المسح الضوئي بين اثنين وخمسة ملليمترات ، وحجم الخطوة على 44 ميكرومتر مع نتيجة من 46 إلى 114 خطوة مسح لكل شريحة عقدة ليمفاوية ، ووقت اكتساب من دقيقة إلى ثلاث دقائق لكل. مسح الحجم الكامل للعقدة الليمفاوية الإربية كسلسلة من الصور 2D B-mode ، والحصول على صور على مستويات متعددة عن طريق الحركة الخطية لمحول الطاقة مع أحجام الخطوات على مقياس ميكرومتر لتوليد بيانات 3D من حيث التنفس وحلقات سينمائية ذات بوابات قلبية.بعد التصوير ، قم بتخزين الصور المكتسبة رقميا بتنسيق خام لمزيد من التحليلات في وضع عدم الاتصال. بالنسبة لما بعد المعالجة لصور الموجات فوق الصوتية ، افتح مجموعة بيانات صور العقدة الليمفاوية الإربية 3D ، وحدد طريقة متعددة الشرائح واضغط على زر Start (ابدأ) لتصور كل من الإطارات الحالية والصور المصغرة لجميع الإطارات المقابلة لكل صورة تم التقاطها أثناء الاستحواذ على 3D. حدد الصورة المصغرة للإطار الأول حيث تكون العقدة الليمفاوية واضحة لتحميلها في طريقة عرض الكنتوري.في طريقة عرض الكنتوري ، انقر بزر الماوس الأيسر لإسقاط النقاط على طول حدود العقدة الليمفاوية. بمجرد تعيين العدد المطلوب من النقاط ، قم بلعق الحق لإكمال الكفاف. بعد اكتمال الكفاف الأول، استخدم طريقة عرض الصورة المصغرة لتحديد الصورة التالية للكفاف.إذا لزم الأمر ، تخطي العديد من الصور بين الخطوط لتقليل عدد الآثار اليدوية اللازمة لكل وحدة تخزين 3D. كرر هذه العملية حتى يتم تحديد وحدة التخزين بأكملها ، ثم انقر فوق إنهاء. أثناء وجودك في مساحة عمل نافذة الوضع 3D ، انقر فوق رمز قياس الحجم أسفل منطقة عرض الصورة لتصور القيمة العددية لحجم العقدة الليمفاوية ، وتنشيط عرض السطح باستخدام العرض ثلاثي الأبعاد لحجم العقدة الليمفاوية.علاج الفئران مع 4-هيدروكسي تاموكسيفين يحفز نشاط إنزيم CreER ، مما يسبب تحولا على المستوى الجينومي من Braf من النوع البري إلى Braf V600E المتحور ، بينما يتم فقدان Pten. بعد أربعة أسابيع من علاج 4-hydroxytamoxifen ، تصل الأورام الأولية إلى حجم يتراوح بين 50 و 100 ملم مكعب ويمكن قياس نموها بواسطة الفرجار لمدة أسبوعين إضافيين ، وبالتالي تظهر زيادة تدريجية في التصبغ الذي لوحظ في الغدد الليمفاوية الأربية. ترسيب الميلانين ترجع دائما إلى وجود خلايا سرطان الجلد المنتشرة ، كما هو مؤكد من خلال تلطيخ المناعة النسيجية الكيميائية لمستضد سرطان الجلد MelanA و Braf V600E.في نهاية مرحلة التجزئة ، أظهرت جميع الأقسام تراكب المحيط الخارجي للعقدة الليمفاوية. يتم عرض العروض ثلاثية الأبعاد للعقدة الليمفاوية الإربية اليمنى ، التي تم تحليلها في أربعة وخمسة وستة أسابيع بعد علاج 4-HT هنا. كما تم تحديد الزيادة في حجم الغدد الليمفاوية الإربية اليسرى واليمنى لنفس الحيوان بمرور الوقت.يوصى بإقران التصوير بالموجات فوق الصوتية مع تلطيخ كيميائي نسيجي مناعي مناسب ، بحيث يتم تأكيد وجود الخلايا السرطانية على المستوى الجزيئي. إلى جانب الغدد الليمفاوية ، يمكن أيضا مراقبة حجم الانبثاث تحت الجلد بمرور الوقت باستخدام التصوير بالموجات فوق الصوتية. إذا كان الإطار الزمني لمدة أسبوعين قصيرا جدا لتقدير آثار الدواء قيد الدراسة ، فحدد موقعا تحريضيا أكثر محيطية أو نمطا وراثيا أقل عرضة للورم.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

نموذج الفأر المهندسة وراثيا لسرطان القولون والمستقيم المتفرقة

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

استخدام الموجات فوق الصوتية عالية الدقة لرصد ظهور ورم والنمو في نماذج سرطان البنكرياس المهندسة وراثيا

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

في المختبر إنشاء خط الخلايا السرطانية للراس والرقبة المهندسة جينيا باستخدام نظام كاس 9 الفيروسات المرتبطة Adeno

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

الموجات فوق الصوتية غرس العظام البنكرياس الاقنيه اللحمية

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

القياس الكمي لالتصاق خلايا الورم في أقسام التبريد في العقدة الليمفاوية

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

الكشف عن تطور ورم الرئة في الفئران عن طريق التصوير بالموجات فوق الصوتية

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Sentinel Lymph Node Mapping and Biopsy for Endometrial Cancer at Early Stage with Laparoscopy

الحارس الليمفاوية رسم الخرائط وخزعة لسرطان بطانة الرحم في مرحلة مبكرة مع تنظير البطن

Sentinel lymph node (SLN) mapping and biopsy is a promising technique for visualizing and evaluating lymph node status in cancer. This approach has been ...

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

منصة اكتشاف قوية لتحديد الوسطاء الجدد لورم خبيث سرطان الجلد

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

التقنيات الجزيئية والمناعية في نموذج فأر مهندس وراثيا لورم الجهاز الهضمي اللثوي

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

Non-Invasive PET/MR Imaging in an Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma

التصوير غير الجراحي PET / MR في نموذج فأر تقويمي لسرطان الخلايا الكبدية

Preclinical experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate human disease represent an important tool to study tumorigenesis and ...