Name: analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma
Uploaded: 2021-09-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke S. Burchielli (FTGM, Pisa) for hendes hjælp med dyreforsøg. Dette arbejde blev støttet af ISPRO-Istituto per lo Studio la Prevenzione e la Rete Oncologica institutionel finansiering til LP; MFAG #17095 tildelt af AIRC-Associazione Italiana Ricerca sul Cancro til LP.

Alle metoder, der er beskrevet her, er godkendt af det italienske sundhedsministerium (dyreprotokol nr. 754/2015-PR og nr. 684/2018-PR).
1. Induktion af melanom
BEMÆRK: Seks uger gamle Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox mus [B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten)] blev anvendt i denne undersøgelse (se materialetabellen).
<ol><li>Behandl musene med 4-hydroxyt...

<ol>
	<li>Schvartsman, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+metastatic+cutaneous+melanoma:+updates+in+clinical+practice.">Management of metastatic cutaneous melanoma: updates in clinical practice.</a> Therapeutic Advances in Medical Oncology. 11, 1758835919851663 (2019).</li><li>Blum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+examination+of+regional+lymph+nodes+significantly+improves+early+detection+of+locoregional+metastases+during+the+follow-up+of+patients+with+cutaneous+melanoma+-+Results+of+a+prospective+study+of+1288+patients.">Ultrasound examination of regional lymph nodes significantly improves early detection of locoregional metastases during the follow-up of patients with cutaneous melanoma - Results of a prospective study of 1288 patients.</a> Cancer. 88 (11), 2534-2539 (2000).</li><li>Olmedo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+lymph+node+ultrasound+prior+to+sentinel+lymph+node+biopsy+in+384+patients+with+melanoma:+a+cost-effectiveness+analysis.">Use of lymph node ultrasound prior to sentinel lymph node biopsy in 384 patients with melanoma: a cost-effectiveness analysis.</a> Actas Dermo-Sifiliograficas. 108 (10), 931-938 (2017).</li><li>Voit, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+morphology+criteria+predict+metastatic+disease+of+the+sentinel+nodes+in+patients+with+melanoma.">Ultrasound morphology criteria predict metastatic disease of the sentinel nodes in patients with melanoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (5), 847-852 (2010).</li><li>Hayes, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+cohort+study+of+ultrasound+surveillance+of+regional+lymph+nodes+in+patients+with+intermediate-risk+cutaneous+melanoma.">Prospective cohort study of ultrasound surveillance of regional lymph nodes in patients with intermediate-risk cutaneous melanoma.</a> British Journal of Surgery. 106 (6), 729-734 (2019).</li><li>Ipenburg, N. A., Thompson, J. F., Uren, R. F., Chung, D., Nieweg, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focused+ultrasound+surveillance+of+lymph+nodes+following+lymphoscintigraphy+without+sentinel+node+biopsy:+a+useful+and+safe+strategy+in+elderly+or+frail+melanoma+patients.">Focused ultrasound surveillance of lymph nodes following lymphoscintigraphy without sentinel node biopsy: a useful and safe strategy in elderly or frail melanoma patients.</a> Annals of Surgical Oncology. 26 (9), 2855-2863 (2019).</li><li>Jayapal, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+between+benign+and+metastatic+cervical+lymph+nodes+using+ultrasound.">Differentiation between benign and metastatic cervical lymph nodes using ultrasound.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences. 11, 338-346 (2019).</li><li>Dankort, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Damsky, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-catenin+signaling+controls+metastasis+in+Braf-activated+Pten-deficient+melanomas.">&#946;-catenin signaling controls metastasis in Braf-activated Pten-deficient melanomas.</a> Cancer Cell. 20 (6), 741-754 (2011).</li><li>Xie, X., Koh, J. Y., Price, S., White, E., Mehnert, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atg7+overcomes+senescence+and+promotes+growth+of+BrafV600E-driven+melanoma.">Atg7 overcomes senescence and promotes growth of BrafV600E-driven melanoma.</a> Cancer Discovery. 5 (4), 410-423 (2015).</li><li>Kohler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cutaneous+melanoma+induced+by+mutant+BRaf+arises+from+expansion+and+dedifferentiation+of+mature+pigmented+melanocytes.">Mouse cutaneous melanoma induced by mutant BRaf arises from expansion and dedifferentiation of mature pigmented melanocytes.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 679-693 (2017).</li><li>Yuan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenformin+enhances+the+therapeutic+benefit+of+BRAF(V600E)+inhibition+in+melanoma.">Phenformin enhances the therapeutic benefit of BRAF(V600E) inhibition in melanoma.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (45), 18226-18231 (2013).</li><li>Marsh Durban, V., Deuker, M. M., Bosenberg, M. W., Phillips, W., McMahon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+AKT+dependency+displayed+by+mouse+models+of+BRAFV600E-initiated+melanoma.">Differential AKT dependency displayed by mouse models of BRAFV600E-initiated melanoma.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (12), 5104-5118 (2013).</li><li>Hooijkaas, A. I., Gadiot, J., vander Valk, M., Mooi, W. J., Blank, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+in+an+inducible+murine+model+of+melanoma.">Targeting BRAFV600E in an inducible murine model of melanoma.</a> American Journal of Pathology. 181 (3), 785-794 (2012).</li><li>Steinberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+inhibition+alleviates+immune+suppression+in+murine+autochthonous+melanoma.">BRAF inhibition alleviates immune suppression in murine autochthonous melanoma.</a> Cancer Immunology Research. 2 (11), 1044-1050 (2014).</li><li>Vitiello, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumoral+effects+of+attenuated+Listeria+monocytogenes+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+melanoma.">Antitumoral effects of attenuated Listeria monocytogenes in a genetically engineered mouse model of melanoma.</a> Oncogene. 38 (19), 3756-3762 (2019).</li><li>Moon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Zhao, L., Zhan, Y. T., Rutkowski, J. L., Feuerstein, G. Z., Wang, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+2-and+3-dimensional+assessment+of+tumor+volume+and+vascular+density+by+ultrasonography+in+a+transgenic+mouse+model+of+mammary+carcinoma.">Correlation between 2-and 3-dimensional assessment of tumor volume and vascular density by ultrasonography in a transgenic mouse model of mammary carcinoma.</a> Journal of Ultrasound in Medicine. 29 (4), 587-595 (2010).</li></ol>

De data, der er opnået i denne undersøgelse, attesterer ultralydsbilleddannelsens evne til at overvåge den metastatiske involvering af indinale lymfeknuder i Braf / Pten-musemodellen for metastatisk melanom. Som vist tidligere16 er denne teknik især nyttig til at vurdere effekten af lægemiddelbehandling. Dette skyldes, at det gør det muligt at overvåge ændringen i lymfeknudevolumen i det samme dyr over tid ved at sammenligne de målinger, der indsamles ved t1 andt2<su...

Melanom er en aggressiv form for hudkræft, der ofte spredes til andre hudsteder (subkutane metastaser) samt til lymfeknuder, lunger, lever, hjerne og knogler1. I det sidste årti er nye lægemidler blevet introduceret i klinisk praksis og har bidraget til at forbedre den forventede levetid for metastatiske melanompatienter. Der er dog fortsat begrænsninger, herunder variabel responstid og -grad, alvorlige bivirkninger og genopblussen af erhvervet resistens1. Derfor er det afgørende at opdage metastatisk spredning i sine tidlige stadier, dvs. når det kommer til de lokale lymfeknuder.
En biopsi af de lokale lymfeknuder (sentinel lymfeknuder) udføres normalt for at kontrollere tilstedeværelsen af melanomceller. Ultralydsbilleddannelse tager imidlertid fat som en ikke-invasiv metode til påvisning af metastatisk involvering, da den overgår klinisk evaluering og kan hjælpe med at undgå en unødvendig biopsi2,3,4. Desuden synes ultralydsbilleddannelse passende til lymfeknudeovervågning, især i tilfælde af fremskreden alder og / eller comorbiditeter5,6. De funktioner, der detekteres ved ultralydsanalyse og tillader differentiering mellem normale og metastatiske lymfeknuder, omfatter øget størrelse (volumen), ændring af form fra oval til rund, uregelmæssig margen, ændret ekkogent mønster og ændret (øget) vaskularisering7.
Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox genetisk manipulerede mus (Braf/Pten-mus) er for nylig blevet stillet til rådighed for det videnskabelige samfund som en vævsspecifik og inducerbar model for metastatisk melanom8. I denne dyremodel udvikler primære tumorer sig meget hurtigt: de bliver synlige inden for 2-3 uger efter induktionen af skiftet fra vildtype (wt) Braf til BrafV600E og af tabet af Pten, mens de når et volumen på 50-100 mm3 inden for 4 uger. I de følgende 2 uger ledsages væksten af den primære tumor af en progressiv stigning i metastatisk byrde på andre hudsteder, lymfeknuder og lunger.
Braf/Pten-mus er blevet anvendt i vid udstrækning til flere formål, herunder dissektion af signalveje involveret i melanomagenese9,10, identifikation af melanomceller af oprindelse11,12,13 og test af nye terapeutiske muligheder med hensyn til både målrettet terapi og immunterapi8,14,15,16 . Specifikt brugte vi Braf/Pten-mus til at demonstrere, at svækkede Listeria monocytogenes (Lmat) virker som en anti-melanomvaccine. Når Lmat administreres systemisk i den terapeutiske indstilling, er Lmat ikke forbundet med den samlede toksicitet, da den selektivt akkumuleres på tumorsteder. Desuden forårsager det et bemærkelsesværdigt fald i primær melanommasse og en reduktion i metastatisk byrde i lymfeknuder og lunger. På molekylært niveau forårsager Lmat apoptotisk drab på melanomceller, hvilket i det mindste delvist skyldes ikke-celleautonome aktiviteter (rekruttering på stedet af CD4 + og CD8 + T-lymfocytter)16.
Når Braf/Pten-mus anvendes til melanommodellering, kan væksten af primære tumorer og subkutane metastaser overvåges ved hjælp af tykkelsesmålinger. Inddragelsen af lymfeknuder og lunger skal dog undersøges ved hjælp af en alternativ teknik, muligvis en ikke-invasiv, der gør det muligt for forskere at følge det samme dyr over tid. Dette papir beskriver brugen af ultralydsbilleddannelse (figur 1) kombineret med en efterfølgende 3D-volumetrisk analyse af de opnåede data til langsgående overvågning af stigningen i størrelse (volumen) af inguinale lymfeknuder.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-hydroxytamoxifen</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H6278</td>
			<td>drug used for tumor induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>013590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blu gel</td>
			<td>Sooft Ialia</td>
			<td></td>
			<td>ophthalmic solution gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAFV600E antibody</td>
			<td>Spring Bioscience Corporation</td>
			<td>E19290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo (isoflorane)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td></td>
			<td>liquid for gaseous anaesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MLANA antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>M2-7C10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma gel</td>
			<td>Parker</td>
			<td></td>
			<td>electrode gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transonic gel clear</td>
			<td>Telic SAU</td>
			<td></td>
			<td>ultrasound gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet</td>
			<td>Reckitt Benckiser IT</td>
			<td></td>
			<td>depilatory cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Dual Anesthesia System</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Isoflurane-based anesthesia system equipped with nose cone and induction chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS linear probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS imaging station and Advancing Physiological Monitoring Unit endowed with heated board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Lab</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>software platform for ultrasound image post-processing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox genetisk manipulerede mus (Braf/Pten mus) anvendes i vid udstrækning som en in vivo-model af metastatisk melanom. Når en primær tumor er blevet induceret ved tamoxifenbehandling, observeres en stigning i metastatisk byrde inden for 4-6 uger efter induktion. Dette papir viser, hvordan Ultra-High-Frequency UltraSound (UHFUS) billeddannelse kan udnyttes til at overvåge stigningen i metastatisk involvering af de indinale lymfeknuder ved at måle stigningen i deres volumen.
UHFUS-systemet bruges til at scanne anæstesierede mus med en UHFUS lineær sonde (22-55 MHz, aksial opløsning 40 μm). B-mode billeder fra de indinale lymfeknuder (både venstre og højre side) erhverves i en kortakse visning, der placerer dyrene i dorsal liggende. Ultralydsoptegnelser erhverves ved hjælp af en 44 μm trinstørrelse på en motoriseret mekanisk arm. Derefter importeres todimensionelle (2D) B-mode erhvervelser til softwareplatformen til ultralydsbilledefterbehandling, og inguinale lymfeknuder identificeres og segmenteres halvautomatisk i de erhvervede tværsnitsbilleder 2D. Endelig opnås en total rekonstruktion af det tredimensionelle (3D) volumen automatisk sammen med gengivelsen af lymfeknudevolumenet, som også udtrykkes som en absolut måling.
Denne ikke-invasive in vivo-teknik tolereres meget godt og tillader planlægning af flere billeddannelsessessioner på det samme forsøgsdyr over 2 uger. Det er derfor ideelt at vurdere virkningen af farmakologisk behandling på metastatisk sygdom.

Efter hudmaling af Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox-mus med 4-HT induceres Cre-aktivitet, hvorfor der sker et skift på genomisk niveau fra wt Braf til Braf600E, mens Pten går tabt (figur 3A). I 2-3 uger udvikler mus primære tumorer på stedet med 100% penetrans. Efter fire uger fra 4-HT-behandling (t0) når primære tumorer et volumen på 50-100 mm3, og deres vækst kan måles med kalibre i yderligere 2 uger ((t1 og ...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

Melanom er en meget aggressiv sygdom, der hurtigt spredes til andre organer. Denne protokol beskriver anvendelsen af ultrahøjfrekvent ultralydsbilleddannelse kombineret med 3D-gengivelse for at overvåge volumenet af de indinale lymfeknuder i Braf / Pten-musemodellen af metastatisk melanom.

Analyse af lymfeknudevolumen ved ultrahøjfrekvent ultralydsbilleddannelse i Braf / Pten genetisk manipuleret musemodel af melanom

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Vores metode gør det muligt at overvåge stigningen i metastatisk involvering af lyske lymfeknuder ved at måle stigningen i deres volumen. Denne uinvasive metode tolereres meget godt, derfor kan flere billeddannelsessessioner planlægges på det samme forsøgsdyr i løbet af to uger. Denne metode er ideel til vurdering af virkningen af farmakologisk behandling på metastatisk sygdom.Vi anvendte denne metode på Braf/Pten melanommodellen, men i princippet kan den tilpasses til at vurdere effekten af forskellige lægemidler i en række prækliniske musemodeller af metastatisk kræft. Demonstration af proceduren vil være Dr. Marianna Vitiello, en postdoc fra mit laboratorium, og Dr. Claudia Kusmic, forskerkollega ved IFC-CNR. Til induktion af melanom skal du anvende tre mikroliter fem millimolær 4-hydroxytamoxifen på ca. en kvadratcentimeter barberet hud på den øvre del af ryggen i tre dage i træk.Seks uger efter hudmaling skal du bruge kalipre til at måle volumenet af den primære tumor og til sidst af subkutane metastaser. Brug derefter ultralydsbilleddannelse til at måle volumenet af de indinale lymfeknuder. Efter at have analyseret de primære tumor- og lymfeknuder ved visuel inspektion, punktafgiftspligtige dem til histologiske undersøgelser.Efter bekræftelse af anæstesi skal du overføre dyret til et opvarmet bord på den ultrahøjfrekvente ultralydsbilleddannelsesstation, der holder dyret i liggende stilling. Juster bordtemperaturen ved hjælp af en rektal sonde smurt med vaselin for at opretholde musens kropstemperatur i det fysiologiske område. Belæg for- og bagpoterne med ledende pasta og tape dem til EKG-pladeelektordenderne indlejret i brættet.Kontroller, at de fysiologiske parametre er korrekt erhvervet og vist. Fjern hår fra begge lyskeområder ved at påføre et hårfjerningsmiddel og belæg dem med et akustisk koblingsmedium. Klem derefter den ultrahøjfrekvente ultralyd lineære sonde ind i en specialiseret 3D-motor indlejret i billeddannelsesstationen, hvilket muliggør automatiseret og trinvis bevægelse af sonden.Korrekt orientere og justere placeringen af ultralydsonden for at opnå kortadgangsbilleder af den indinale lymfeknude, og placer interesseområdet brændvidden. Indstil scanningsafstanden mellem to og fem millimeter, trinstørrelse til 44 mikrometer med et resultat på 46 til 114 scanningstrin pr. lymfeknudeskive og en anskaffelsestid på et til tre minutter pr. Dyr. Scan hele volumenet af den indinale lymfeknude som en sekvens af 2D B-mode billeder, der erhverver billeder på flere niveauer ved lineær bevægelse af transduceren med trinstørrelser på mikrometer skala for at generere 3D-data med hensyn til åndedræt og hjerte-gated cine loops.Efter billeddannelse skal du gemme de erhvervede billeder digitalt i raw-format til yderligere offlineanalyser. Til efterbehandling af ultralydsbilleder skal du åbne datasættet for 3D-inguinale lymfeknudebilleder, vælge multi-slice-metode og trykke på Start-knappen for at visualisere både de aktuelle rammer og miniaturebilleder af alle rammer, der svarer til hvert billede, der er taget under 3D-erhvervelsen. Vælg miniaturebilledet af den første ramme, hvor lymfeknuden er tydelig, for at indlæse den i konturvisningen.I konturvisningen skal du venstreklik på musen for at slippe punkter langs lymfeknudens kant. Når det ønskede antal punkter er indstillet, skal du slikke rigtigt for at fuldføre konturen. Når den første kontur er fuldført, skal du bruge miniaturevisningen til at vælge det næste billede til konturering.Hvis det er nødvendigt, skal du springe over flere billeder mellem konturer for at reducere antallet af manuelle spor, der er nødvendige for hver 3D-diskenhed. Gentag denne proces, indtil hele lydstyrken er skitseret, og klik derefter på Udfør. Mens du er i 3D-tilstandsvinduets arbejdsområde, skal du klikke på ikonet for lydstyrkemåling under billedvisningsområdet for at visualisere den numeriske værdi af lymfeknudevolumenet og aktivere overfladevisningen med 3D-gengivelsen af lymfeknudevolumenet.Behandling af mus med 4-hydroxytamoxifen inducerer CreER-enzymaktivitet, hvilket forårsager en switch på genomisk niveau fra vildtype Braf til muteret Braf V600E, mens Pten går tabt. Fire uger efter 4-hydroxytamoxifen-behandling når primære tumorer et volumen på 50 til 100 kubikmillimeter, og deres vækst kan måles med kalipre i yderligere to uger og derved vise en gradvis stigning i pigmentering observeret i de indinale lymfeknuder. Melaninaflejringerne skyldes altid tilstedeværelsen af metastaserede melanomceller, som bekræftet ved immunohistokemisk farvning af melanomantigenet MelanA og Braf V600E.I slutningen af segmenteringsfasen viste alle sektioner overlejringen af lymfeknudens ydre kontur. 3D-gengivelserne af en højre lyskelymfeknude, analyseret ved fire, fem og seks uger efter 4-HT-behandling, er vist her. Stigningen i volumen af venstre og højre inguinale lymfeknuder af det samme dyr over tid blev også kvantificeret.Det anbefales at parre ultralydsbilleddannelse med passende immunohistokemisk farvning, så tilstedeværelsen af kræftceller bekræftes på molekylært niveau. Udover lymfeknuder kan mængden af subkutan metastase også overvåges over tid ved hjælp af ultralydsbilleddannelse. Hvis tidsrammen på to uger er for kort til at forstå virkningerne af det undersøgte lægemiddel, skal du vælge et mere perifert induktionssted eller en mindre tumorudsat genotype.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

En genetisk manipuleret musemodel af sporadisk kolorektal cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

Udnytte høj opløsning ultralyd skærm Tumor indsættende og vækst i gensplejsede bugspytkirtelkræft modeller

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

In vitro etablering af en genetisk manipuleret murine hoved og hals Cancer cellelinje ved hjælp af en adeno-associeret virus-Cas9 system

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Ultralyd-guidet Ortotopisk implantation af murin Pankreatisk ductal adenocarcinoma

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

Kvantificering af tumorcellevedhæftning i lymfeknude Cryosektioner

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Påvisning af lungetumorprogression hos mus ved ultralydsscanning

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Sentinel Lymph Node Mapping and Biopsy for Endometrial Cancer at Early Stage with Laparoscopy

Sentinel lymfeknude kortlægning og biopsi for endometriecancer på et tidligt stadium med Laparoskopi

Sentinel lymph node (SLN) mapping and biopsy is a promising technique for visualizing and evaluating lymph node status in cancer. This approach has been ...

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

En robust opdagelsesplatform til identifikation af nye mediatorer af melanommetastase

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

Molekylære og immunologiske teknikker i en genetisk manipuleret musemodel af gastrointestinal stromal tumor

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

Non-Invasive PET/MR Imaging in an Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma

Ikke-invasiv PET/MR-billeddannelse i en ortopisk musemodel af hepatocellulært karcinom

Preclinical experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate human disease represent an important tool to study tumorigenesis and ...