Name: analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma
Uploaded: 2021-09-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

המחברים רוצים להודות לס. בורצ'יאלי (FTGM, פיזה) על עזרתה בהליכים בבעלי חיים. עבודה זו נתמכה על ידי ISPRO-Istituto per lo Studio la Prevenzione e la Rete Oncologica institutional Funding to LP; MFAG #17095 הוענק על ידי AIRC-Associazione Italiana Ricerca סול קנקרו ל- LP.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי משרד הבריאות האיטלקי (פרוטוקולים בעלי חיים #754/2015-PR ו #684/2018-PR).
1. אינדוקציה מלנומה
הערה: טיר בן שישה שבועות::CreER +,BrafCA/+,Ptenlox/lox עכברים [B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten)] שימשו במחקר זה (ראו ...

<ol>
	<li>Schvartsman, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+metastatic+cutaneous+melanoma:+updates+in+clinical+practice.">Management of metastatic cutaneous melanoma: updates in clinical practice.</a> Therapeutic Advances in Medical Oncology. 11, 1758835919851663 (2019).</li><li>Blum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+examination+of+regional+lymph+nodes+significantly+improves+early+detection+of+locoregional+metastases+during+the+follow-up+of+patients+with+cutaneous+melanoma+-+Results+of+a+prospective+study+of+1288+patients.">Ultrasound examination of regional lymph nodes significantly improves early detection of locoregional metastases during the follow-up of patients with cutaneous melanoma - Results of a prospective study of 1288 patients.</a> Cancer. 88 (11), 2534-2539 (2000).</li><li>Olmedo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+lymph+node+ultrasound+prior+to+sentinel+lymph+node+biopsy+in+384+patients+with+melanoma:+a+cost-effectiveness+analysis.">Use of lymph node ultrasound prior to sentinel lymph node biopsy in 384 patients with melanoma: a cost-effectiveness analysis.</a> Actas Dermo-Sifiliograficas. 108 (10), 931-938 (2017).</li><li>Voit, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+morphology+criteria+predict+metastatic+disease+of+the+sentinel+nodes+in+patients+with+melanoma.">Ultrasound morphology criteria predict metastatic disease of the sentinel nodes in patients with melanoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (5), 847-852 (2010).</li><li>Hayes, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+cohort+study+of+ultrasound+surveillance+of+regional+lymph+nodes+in+patients+with+intermediate-risk+cutaneous+melanoma.">Prospective cohort study of ultrasound surveillance of regional lymph nodes in patients with intermediate-risk cutaneous melanoma.</a> British Journal of Surgery. 106 (6), 729-734 (2019).</li><li>Ipenburg, N. A., Thompson, J. F., Uren, R. F., Chung, D., Nieweg, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focused+ultrasound+surveillance+of+lymph+nodes+following+lymphoscintigraphy+without+sentinel+node+biopsy:+a+useful+and+safe+strategy+in+elderly+or+frail+melanoma+patients.">Focused ultrasound surveillance of lymph nodes following lymphoscintigraphy without sentinel node biopsy: a useful and safe strategy in elderly or frail melanoma patients.</a> Annals of Surgical Oncology. 26 (9), 2855-2863 (2019).</li><li>Jayapal, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+between+benign+and+metastatic+cervical+lymph+nodes+using+ultrasound.">Differentiation between benign and metastatic cervical lymph nodes using ultrasound.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences. 11, 338-346 (2019).</li><li>Dankort, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Damsky, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-catenin+signaling+controls+metastasis+in+Braf-activated+Pten-deficient+melanomas.">&#946;-catenin signaling controls metastasis in Braf-activated Pten-deficient melanomas.</a> Cancer Cell. 20 (6), 741-754 (2011).</li><li>Xie, X., Koh, J. Y., Price, S., White, E., Mehnert, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atg7+overcomes+senescence+and+promotes+growth+of+BrafV600E-driven+melanoma.">Atg7 overcomes senescence and promotes growth of BrafV600E-driven melanoma.</a> Cancer Discovery. 5 (4), 410-423 (2015).</li><li>Kohler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cutaneous+melanoma+induced+by+mutant+BRaf+arises+from+expansion+and+dedifferentiation+of+mature+pigmented+melanocytes.">Mouse cutaneous melanoma induced by mutant BRaf arises from expansion and dedifferentiation of mature pigmented melanocytes.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 679-693 (2017).</li><li>Yuan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenformin+enhances+the+therapeutic+benefit+of+BRAF(V600E)+inhibition+in+melanoma.">Phenformin enhances the therapeutic benefit of BRAF(V600E) inhibition in melanoma.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (45), 18226-18231 (2013).</li><li>Marsh Durban, V., Deuker, M. M., Bosenberg, M. W., Phillips, W., McMahon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+AKT+dependency+displayed+by+mouse+models+of+BRAFV600E-initiated+melanoma.">Differential AKT dependency displayed by mouse models of BRAFV600E-initiated melanoma.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (12), 5104-5118 (2013).</li><li>Hooijkaas, A. I., Gadiot, J., vander Valk, M., Mooi, W. J., Blank, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+in+an+inducible+murine+model+of+melanoma.">Targeting BRAFV600E in an inducible murine model of melanoma.</a> American Journal of Pathology. 181 (3), 785-794 (2012).</li><li>Steinberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+inhibition+alleviates+immune+suppression+in+murine+autochthonous+melanoma.">BRAF inhibition alleviates immune suppression in murine autochthonous melanoma.</a> Cancer Immunology Research. 2 (11), 1044-1050 (2014).</li><li>Vitiello, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumoral+effects+of+attenuated+Listeria+monocytogenes+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+melanoma.">Antitumoral effects of attenuated Listeria monocytogenes in a genetically engineered mouse model of melanoma.</a> Oncogene. 38 (19), 3756-3762 (2019).</li><li>Moon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Zhao, L., Zhan, Y. T., Rutkowski, J. L., Feuerstein, G. Z., Wang, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+2-and+3-dimensional+assessment+of+tumor+volume+and+vascular+density+by+ultrasonography+in+a+transgenic+mouse+model+of+mammary+carcinoma.">Correlation between 2-and 3-dimensional assessment of tumor volume and vascular density by ultrasonography in a transgenic mouse model of mammary carcinoma.</a> Journal of Ultrasound in Medicine. 29 (4), 587-595 (2010).</li></ol>

הנתונים המתקבלים במחקר זה מעידים על היכולת של הדמיית אולטרסאונד כדי לפקח על המעורבות גרורתית של בלוטות הלימפה מפשעתיות של מודל העכבר Braf / Pten של מלנומה גרורתית. כפי שמוצג בעבר16, טכניקה זו שימושית במיוחד כדי להעריך את היעילות של טיפול תרופתי. הסיבה לכך היא כי זה מאפשר ניטור של הש...

מלנומה היא צורה אגרסיבית של סרטן העור המתפשטת לעתים קרובות לאתרי עור אחרים (גרורות תת עוריות), כמו גם לקשריות לימפה, ריאות, כבד, מוח ועצמות1. בעשור האחרון, תרופות חדשות הוכנסו לפרקטיקה קלינית ותרמו לשיפור תוחלת החיים של חולי מלנומה גרורתית. עם זאת, מגבלות להישאר, כולל זמן משתנה ומידת התגובה, תופעות לוואי חמורות, ואת ההתקוממות של התנגדות שנרכשה1. לכן, חשוב לזהות התפשטות גרורתית בשלביה המוקדמים, כלומר, כאשר היא מגיעה לבלוטות הלימפה המקומיות.
ביופסיה של בלוטות הלימפה המקומיות (בלוטות הלימפה הזקיף) מבוצעת בדרך כלל כדי לבדוק את נוכחותם של תאי מלנומה. עם זאת, הדמיית אולטרסאונד תופסת אחיזה כשיטה לא פולשנית של גילוי מעורבות גרורתית, כפי שהוא עולה על הערכה קלינית והוא יכול לעזור למנוע ביופסיה מיותרת2,3,4. יתר על כן, הדמיית אולטרסאונד נראה מתאים למעקב בלוטות הלימפה, במיוחד במקרה של גיל מתקדם ו/או תחלואה5,6. התכונות שזוהו על ידי ניתוח אולטרסאונד ומאפשרות את ההבחנה בין בלוטות לימפה רגילות גרורתיות כוללות גודל מוגבר (נפח), שינוי צורה מהאליפסה לעגול, שוליים לא סדירים, דפוס אקוגני שונה, ושינוי (מוגבר) כלי דם7.
Tyr::CreER +,BrafCA/+,Ptenlox/lox עכברים מהונדסים גנטית (עכברי Braf/Pten) הפכו לאחרונה לזמינים לקהילה המדעית כמודל ספציפי לרקמות ובלתי ניתן למניעה למלנומה גרורתית8. במודל זה של בעלי חיים, גידולים ראשוניים מתפתחים מהר מאוד: הם הופכים גלויים בתוך 2-3 שבועות לאחר אינדוקציה של המעבר מסוג בר (wt) בראף כדי BrafV600E ועל אובדן Pten, בעוד הם מגיעים נפח של 50-100 mm3 בתוך 4 שבועות. בשבועיים שלאחר מכן, הצמיחה של הגידול העיקרי מלווה בעלייה הדרגתית בנטל גרורתי באתרי עור אחרים, בלוטות הלימפה והריאות.
עכברי Braf/Pten שימשו בהרחבה למטרות רבות, כולל ניתוח של מסלולי איתות המעורבים במלנומגנזה9,10, זיהוי תאי מלנומה ממוצא11,12,13, ובדיקת אפשרויות טיפוליות חדשות במונחים של טיפול ממוקד ואימונותרפיה8,14,15,16 . באופן ספציפי, השתמשנו בעכברים Braf / Pten כדי להוכיח כי מונוציטוגנים ליסטריה מוחלשים (Lmat) עובד כחיסון נגד מלנומה. כאשר מנוהל באופן שיטתי בסביבה הטיפולית, Lmat אינו קשור לרעילות הכללית כפי שהוא מצטבר באופן סלקטיבי באתרי גידול. יתר על כן, זה גורם לירידה יוצאת דופן במסת המלנומה העיקרית וירידה בנטל גרורתי בבלוטות הלימפה והריאות. ברמה המולקולרית, Lmat גורם להרג אפופטוטי של תאי מלנומה, אשר נובע, לפחות בחלקו, לפעילויות שאינן אוטונומיות תאים (גיוס באתר של CD4 + ו CD8 + T לימפוציטים)16.
כאשר עכברי Braf / Pten משמשים למידול מלנומה, הצמיחה של גידולים ראשוניים וגרורות תת עוריות ניתן לפקח על ידי מדידות caliper. עם זאת, יש לחקור את המעורבות של בלוטות הלימפה והריאות באמצעות טכניקה חלופית, אולי לא פולשנית המאפשרת לחוקרים לעקוב אחר אותה חיה לאורך זמן. מאמר זה מתאר את השימוש בהדמיית אולטרסאונד (איור 1), יחד עם ניתוח נפחי תלת-ממדי עוקב של הנתונים המתקבלים, לניטור האורך של הגידול בגודל (נפח) של בלוטות הלימפה המפשעתיות.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-hydroxytamoxifen</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H6278</td>
			<td>drug used for tumor induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>013590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blu gel</td>
			<td>Sooft Ialia</td>
			<td></td>
			<td>ophthalmic solution gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAFV600E antibody</td>
			<td>Spring Bioscience Corporation</td>
			<td>E19290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo (isoflorane)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td></td>
			<td>liquid for gaseous anaesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MLANA antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>M2-7C10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma gel</td>
			<td>Parker</td>
			<td></td>
			<td>electrode gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transonic gel clear</td>
			<td>Telic SAU</td>
			<td></td>
			<td>ultrasound gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet</td>
			<td>Reckitt Benckiser IT</td>
			<td></td>
			<td>depilatory cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Dual Anesthesia System</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Isoflurane-based anesthesia system equipped with nose cone and induction chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS linear probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS imaging station and Advancing Physiological Monitoring Unit endowed with heated board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Lab</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>software platform for ultrasound image post-processing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma

Tyr::CreER+, BrafCA/+,Ptenlox/lox עכברים מהונדסים גנטית (עכברי Braf/Pten) נמצאים בשימוש נרחב כמודל in vivo של מלנומה גרורתית. לאחר גידול ראשוני כבר המושרה על ידי טיפול טמוקסיפן, עלייה בנטל גרורתי הוא ציין בתוך 4-6 שבועות לאחר אינדוקציה. מאמר זה מראה כיצד ניתן לנצל הדמיית UltraSound בתדר גבוה במיוחד (UHFUS) כדי לעקוב אחר העלייה במעורבות גרורתית של בלוטות הלימפה המפשעתיות על ידי מדידת הגידול בנפחן.
מערכת UHFUS משמשת לסריקת עכברים מורדמים באמצעות בדיקה ליניארית UHFUS (22-55 מגה-הרץ, רזולוציה צירית 40 מיקרומטר). תמונות במצב B מבלוטות הלימפה המפשעתיות (הן בצד שמאל והן בצד ימין) נרכשות בתצוגה של ציר קצר, וממקמות את בעלי החיים באיסוף גב. רשומות אולטראסאונד נרכשות באמצעות גודל צעד 44 מיקרומטר על זרוע מכנית ממונעת. לאחר מכן, רכישות דו-ממדיות (2D) במצב B מיובאות לפלטפורמת התוכנה לתמונת אולטרסאונד לאחר עיבוד, ובלוטות לימפה מפשעתיות מזוהות ומפולחות באופן אוטומטי למחצה בתמונות הדו-ממדיות החתך שנרכשו. לבסוף, שחזור כולל של נפח תלת מימדי (3D) מתקבל באופן אוטומטי יחד עם עיבוד של נפח בלוטות הלימפה, אשר בא לידי ביטוי גם כמדידה מוחלטת.
טכניקת vivo לא פולשנית זו נסבלת היטב ומאפשרת תזמון של מפגשי הדמיה מרובים על אותה חיה ניסיונית במשך שבועיים. זה, אם כן, אידיאלי להעריך את ההשפעה של טיפול תרופתי על מחלות גרורתיות.

לאחר ציור העור של Tyr::CreER +,BrafCA/+,Ptenlox/lox עכברים עם 4-HT, פעילות Cre מושרה, שבגללה יש מתג ברמה הגנומית מ wt Braf ל BrafV600E , בעוד Pten הולך לאיבוד (איור 3A). בתוך 2-3 שבועות, עכברים לפתח גידולים ראשוניים באתר עם 100% חרטה. לאחר ארבעה שבועות מטיפול 4-HT (t0), גידולים ראשוניים ?...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

מלנומה היא מחלה אגרסיבית מאוד שמתפשטת במהירות לאיברים אחרים. פרוטוקול זה מתאר את היישום של הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד, יחד עם עיבוד 3D, כדי לפקח על הנפח של בלוטות הלימפה מפשעתיות במודל העכבר Braf / Pten של מלנומה גרורתית.

ניתוח נפח בלוטות הלימפה על ידי הדמיית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד במודל העכבר המהונדס גנטית Braf /Pten של מלנומה

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

השיטה שלנו מאפשרת ניטור הגידול במעורבות גרורתית של בלוטות הלימפה המפשעתיות על ידי מדידת הגידול בנפחן. שיטה לא פולשנית זו נסבלת היטב, ולכן ניתן לתזמן מפגשי הדמיה מרובים על אותה חיה ניסיונית במהלך שבועיים. שיטה זו אידיאלית להערכת ההשפעה של טיפול תרופתי על מחלות גרורתיות.יישמנו שיטה זו למודל מלנומה Braf / Pten, אבל באופן עקרוני, זה יכול להיות מותאם כדי להעריך את היעילות של תרופות שונות במגוון מודלים של עכבר פרה קליני של סרטן גרורתי. הדגמת ההליך תהיה ד"ר מריאנה ויטילו, פוסט-דוקטורנטית מהמעבדה שלי, וד"ר קלאודיה קוסמיק, חוקרת עמיתה ב-IFC-CNR. עבור אינדוקציה מלנומה, להחיל שלושה microliters של חמישה מילימולרי 4-hydroxytamoxifen על כ סנטימטר מרובע אחד של עור מגולח של הגב העליון במשך שלושה ימים ברציפות.שישה שבועות לאחר צביעת העור, השתמשו בקליפרים כדי למדוד את נפח הגידול העיקרי, ובסופו של דבר, של גרורות תת עוריות. לאחר מכן, השתמש הדמיית אולטרסאונד כדי למדוד את הנפח של בלוטות הלימפה מפשעתיות. לאחר ניתוח הגידול העיקרי ובלוטות הלימפה על ידי בדיקה חזותית, excise אותם למחקרים היסטולוגיים.לאחר אישור הרדמה, להעביר את החיה ללוח מחומם של תחנת הדמיה אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד, מחזיק את החיה בתנוחה עלובה. התאם את טמפרטורת הלוח באמצעות בדיקה רקטלית משומנת בג'לי נפט כדי לשמור על טמפרטורת הגוף של העכבר בטווח הפיזיולוגי. מצופים את כפות הרגליים הקדמיות והאחוריות בדבק מוליך ומדביקים אותן לאלקטרודות צלחת האק"ג המוטמעות בלוח.ודא שהפרמטרים הפיזיולוגיים נרכשים ומוצגים כראוי. הסר את השיער משני האזורים מפשעתיים על ידי החלת סוכן depilatory וציפוי אותם עם מדיום צימוד אקוסטי. לאחר מכן, מהדק את הבדיקה הליניארית אולטרסאונד בתדר גבוה במיוחד לתוך מנוע 3D מיוחד מוטבע בתחנת ההדמיה, המאפשר תנועה אוטומטית צעד של הגשוש.כראוי לכוון ולהתאים את המיקום של הבדיקה אולטרסאונד כדי לקבל תמונות גישה קצרה של בלוטות הלימפה מפשעתי, ולמקם את האזור של עניין את אזור המוקד. הגדר את מרחק הסריקה בין שניים לחמישה מילימטרים, גודל צעד ל -44 מיקרומטר עם תוצאה של 46 עד 114 שלבי סריקה לכל פרוסת בלוטות הלימפה, וזמן רכישה של דקה עד שלוש דקות לכל בעל חיים. סרוק את כל הנפח של בלוטות הלימפה המפשעתיות כרצף של תמונות במצב B 2D, רכישת תמונות ברמות מרובות על ידי תנועה ליניארית של המתמר עם גדלי צעדים בסולם מיקרומטר כדי ליצור נתונים תלת-ממדיים במונחים של נשימה ולולאות cine מגודרות לב.לאחר ההדמיה, אחסן באופן דיגיטלי את התמונות שנרכשו בתבנית גולמית לניתוחים לא מקוונים נוספים. לאחר עיבוד תמונות אולטרסאונד, פתחו את ערכת הנתונים של תמונות בלוטות הלימפה המפשעתיות התלת-ממדיות, בחרו בשיטה מרובת פרוסות ולחצו על כפתור 'התחל' כדי להמחיש הן את המסגרות הנוכחיות והן את התמונות הממוזערות של כל המסגרות המתאימות לכל תמונה שנלכדה במהלך רכישת התלת-ממד. בחר את התמונה הממוזערת של המסגרת הראשונה שבה בלוטות הלימפה ניכרת כדי לטעון אותה לתצוגת קווי המתאר.בתצוגת המתאר, לחץ באמצעות לחצן העכבר הימני כדי להוריד נקודות לאורך גבול בלוטות הלימפה. לאחר שנקבע מספר הנקודות הרצוי, ללקק ימינה כדי להשלים את קווי המתאר. לאחר השלמת קווי המתאר הראשונים, השתמשו בתצוגת התמונות הממוזערות כדי לבחור את התמונה הבאה לקווי מתאר.במידת הצורך, דלג/י על מספר תמונות בין קווי מתאר כדי להפחית את מספר המעקבים הידניים הדרושים לכל אמצעי אחסון תלת-ממדי. חזור על תהליך זה עד לחלוקה לרמות של אמצעי האחסון כולו ולאחר מכן לחץ על סיום. בסביבת העבודה של החלון במצב תלת-ממד, לחצו על סמל מדידת עוצמת הקול מתחת לאזור תצוגת התמונה כדי להמחיש את הערך המספרי של נפח בלוטות הלימפה, ולהפעיל את תצוגת פני השטח עם העיבוד התלת-ממדי של נפח בלוטות הלימפה.טיפול בעכברים עם 4-hydroxytamoxifen גורם לפעילות האנזים CreER, וגורם למתג ברמה הגנומית מ בראף מסוג בר ל- Braf V600E שעבר מוטציה, בעוד Pten הולך לאיבוד. ארבעה שבועות לאחר טיפול 4-hydroxytamoxifen, גידולים ראשוניים להגיע לנפח של 50 עד 100 מילימטרים מעוקבים ואת הצמיחה שלהם ניתן למדוד על ידי calipers במשך שבועיים נוספים, ובכך מראה עלייה הדרגתית פיגמנטציה נצפתה בלוטות הלימפה מפשעתית. מרבצי המלנין הם תמיד בשל נוכחות של תאי מלנומה גרורות, כפי שאושר על ידי כתמים אימונוהיסטוכימיקלים של מלנומה אנטיגן מלנה ו Braf V600E.בסוף שלב הפילוח, כל החלקים הראו את שכבת העל של קווי המתאר החיצוניים של בלוטות הלימפה. העיבודים התלת-ממדיים של בלוטות לימפה מפשעתיות ימניות, מנותחים בארבעה, חמישה ושישה שבועות לאחר טיפול 4-HT מוצגים כאן. הגידול בנפח של בלוטות הלימפה המפשעתיות השמאלית והימנית של אותה חיה לאורך זמן היה גם כימת.מומלץ להצמיד הדמיית אולטרסאונד עם כתמים אימונוהיסטוכימיים מתאימים, כך שנוכחותם של תאים סרטניים מאושרת ברמה המולקולרית. מלבד בלוטות הלימפה, הנפח של גרורות תת עוריות יכול גם להיות במעקב לאורך זמן באמצעות הדמיית אולטרסאונד. אם מסגרת הזמן של שבועיים קצרה מדי כדי להעריך את ההשפעות של התרופה תחת המחקר, בחר אתר אינדוקציה היקפי יותר או גנוטיפ פחות נוטה לגידול.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

דגם עכבר מהונדס גנטית של סרטן המעי הגס ספוראדי

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

ניצול אולטרסאונד ברזולוציה גבוהה על צג תחילת גידול וצמיחה מודלים מהונדס גנטית לסרטן הלבלב

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

בשנת הקמת מבחנה של הראש מהונדסים גנטית מורה וצוואר הסרטן קו תא באמצעות Adeno משויך וירוס-Cas9 מערכת

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

אולטרה סאונד-הדרכה אורתודפית של הלבלב מורלין אדנוקרצינומה

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

קוונפיקציה של הדבקה תא הגידול בצומת לימפה קריוסעיפים

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

זיהוי של התקדמות הגידול ריאה בעכברים על ידי הדמיה אולטרסאונד

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Sentinel Lymph Node Mapping and Biopsy for Endometrial Cancer at Early Stage with Laparoscopy

מיפוי בלוטות הלימפה סנטינל וביופסיה לסרטן רירית הרחם בשלב מוקדם עם לפרוסקופיה

Sentinel lymph node (SLN) mapping and biopsy is a promising technique for visualizing and evaluating lymph node status in cancer. This approach has been ...

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

פלטפורמת גילוי חזקה לזיהוי מתווכים חדשים של גרורות מלנומה

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

טכניקות מולקולריות ואימונולוגיות במודל עכבר מהונדס גנטית של גידול סטרומלי במערכת העיכול

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

Non-Invasive PET/MR Imaging in an Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma

הדמיית PET/MR לא פולשנית במודל עכבר אורתוטופי של קרצינומה הפטוצלולרית

Preclinical experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate human disease represent an important tool to study tumorigenesis and ...