Name: analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma
Uploaded: 2021-09-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

लेखकों को पशु प्रक्रियाओं के साथ उसकी सहायता के लिए एस Burchielli (FTGM, Pisa) धन्यवाद करना चाहते हैं. इस काम को ISPRO-Istituto प्रति lo Studio la Prevenzione e la Rete Oncologica संस्थागत वित्त पोषण द्वारा LP के लिए समर्थित किया गया था; MFAG # 17095 AIRC-Associazione Italiana Ricerca sul Cancro द्वारा LP को सम्मानित किया गया।

यहां वर्णित सभी तरीकों को इतालवी स्वास्थ्य मंत्रालय (पशु प्रोटोकॉल # 754/2015-पीआर और # 684/2018-पीआर) द्वारा अनुमोदित किया गया है।
1. मेलेनोमा प्रेरण
नोट: छह सप्ताह पुराने Tyr:: Creer +, BrafCA / + , Ptenlox /...

<ol>
	<li>Schvartsman, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+metastatic+cutaneous+melanoma:+updates+in+clinical+practice.">Management of metastatic cutaneous melanoma: updates in clinical practice.</a> Therapeutic Advances in Medical Oncology. 11, 1758835919851663 (2019).</li><li>Blum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+examination+of+regional+lymph+nodes+significantly+improves+early+detection+of+locoregional+metastases+during+the+follow-up+of+patients+with+cutaneous+melanoma+-+Results+of+a+prospective+study+of+1288+patients.">Ultrasound examination of regional lymph nodes significantly improves early detection of locoregional metastases during the follow-up of patients with cutaneous melanoma - Results of a prospective study of 1288 patients.</a> Cancer. 88 (11), 2534-2539 (2000).</li><li>Olmedo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+lymph+node+ultrasound+prior+to+sentinel+lymph+node+biopsy+in+384+patients+with+melanoma:+a+cost-effectiveness+analysis.">Use of lymph node ultrasound prior to sentinel lymph node biopsy in 384 patients with melanoma: a cost-effectiveness analysis.</a> Actas Dermo-Sifiliograficas. 108 (10), 931-938 (2017).</li><li>Voit, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+morphology+criteria+predict+metastatic+disease+of+the+sentinel+nodes+in+patients+with+melanoma.">Ultrasound morphology criteria predict metastatic disease of the sentinel nodes in patients with melanoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (5), 847-852 (2010).</li><li>Hayes, A. 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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-catenin+signaling+controls+metastasis+in+Braf-activated+Pten-deficient+melanomas.">&#946;-catenin signaling controls metastasis in Braf-activated Pten-deficient melanomas.</a> Cancer Cell. 20 (6), 741-754 (2011).</li><li>Xie, X., Koh, J. Y., Price, S., White, E., Mehnert, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atg7+overcomes+senescence+and+promotes+growth+of+BrafV600E-driven+melanoma.">Atg7 overcomes senescence and promotes growth of BrafV600E-driven melanoma.</a> Cancer Discovery. 5 (4), 410-423 (2015).</li><li>Kohler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cutaneous+melanoma+induced+by+mutant+BRaf+arises+from+expansion+and+dedifferentiation+of+mature+pigmented+melanocytes.">Mouse cutaneous melanoma induced by mutant BRaf arises from expansion and dedifferentiation of mature pigmented melanocytes.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 679-693 (2017).</li><li>Yuan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenformin+enhances+the+therapeutic+benefit+of+BRAF(V600E)+inhibition+in+melanoma.">Phenformin enhances the therapeutic benefit of BRAF(V600E) inhibition in melanoma.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (45), 18226-18231 (2013).</li><li>Marsh Durban, V., Deuker, M. M., Bosenberg, M. W., Phillips, W., McMahon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+AKT+dependency+displayed+by+mouse+models+of+BRAFV600E-initiated+melanoma.">Differential AKT dependency displayed by mouse models of BRAFV600E-initiated melanoma.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (12), 5104-5118 (2013).</li><li>Hooijkaas, A. I., Gadiot, J., vander Valk, M., Mooi, W. J., Blank, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+in+an+inducible+murine+model+of+melanoma.">Targeting BRAFV600E in an inducible murine model of melanoma.</a> American Journal of Pathology. 181 (3), 785-794 (2012).</li><li>Steinberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+inhibition+alleviates+immune+suppression+in+murine+autochthonous+melanoma.">BRAF inhibition alleviates immune suppression in murine autochthonous melanoma.</a> Cancer Immunology Research. 2 (11), 1044-1050 (2014).</li><li>Vitiello, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumoral+effects+of+attenuated+Listeria+monocytogenes+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+melanoma.">Antitumoral effects of attenuated Listeria monocytogenes in a genetically engineered mouse model of melanoma.</a> Oncogene. 38 (19), 3756-3762 (2019).</li><li>Moon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Zhao, L., Zhan, Y. T., Rutkowski, J. L., Feuerstein, G. Z., Wang, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+2-and+3-dimensional+assessment+of+tumor+volume+and+vascular+density+by+ultrasonography+in+a+transgenic+mouse+model+of+mammary+carcinoma.">Correlation between 2-and 3-dimensional assessment of tumor volume and vascular density by ultrasonography in a transgenic mouse model of mammary carcinoma.</a> Journal of Ultrasound in Medicine. 29 (4), 587-595 (2010).</li></ol>

इस अध्ययन में प्राप्त डेटा मेटास्टैटिक मेलेनोमा के ब्रैफ / पीटीएन माउस मॉडल के वंक्षण लिम्फ नोड्स की मेटास्टेटिक भागीदारी की निगरानी करने के लिए अल्ट्रासाउंड इमेजिंग की क्षमता को प्रमाणित करता है। ज...

मेलेनोमा त्वचा कैंसर का एक आक्रामक रूप है जो अक्सर अन्य त्वचा साइटों (चमड़े के नीचे मेटास्टेसिस) के साथ-साथ लिम्फ नोड्स, फेफड़ों, यकृत, मस्तिष्क और हड्डियों में फैलता है। पिछले दशक में, नई दवाओं को नैदानिक अभ्यास में पेश किया गया है और मेटास्टैटिक मेलेनोमा रोगियों की जीवन प्रत्याशा में सुधार करने में योगदान दिया है। हालांकि, सीमाएं बनी हुई हैं, जिसमें प्रतिक्रिया का चर समय और डिग्री, गंभीर दुष्प्रभाव और अधिग्रहित प्रतिरोध 1 का विद्रोह शामिल है। इसलिए, अपने शुरुआती चरणों में मेटास्टैटिक प्रसार का पता लगाना महत्वपूर्ण है, यानी, जब यह स्थानीय लिम्फ नोड्स तक पहुंचता है।
स्थानीय लिम्फ नोड्स (प्रहरी लिम्फ नोड्स) की बायोप्सी आमतौर पर मेलेनोमा कोशिकाओं की उपस्थिति की जांच के लिए की जाती है। हालांकि, अल्ट्रासाउंड इमेजिंग मेटास्टैटिक भागीदारी का पता लगाने की एक गैर-आक्रामक विधि के रूप में पकड़ रही है, क्योंकि यह नैदानिक मूल्यांकन को मात देती है और अनावश्यक बायोप्सी 2,3,4 से बचने में मदद कर सकती है। इसके अलावा, अल्ट्रासाउंड इमेजिंग लिम्फ नोड निगरानी के लिए उपयुक्त लगता है, विशेष रूप से उन्नत उम्र और / या कोमोर्बिडिटीज़ 5,6 के मामले में। अल्ट्रासाउंड विश्लेषण द्वारा पता लगाई जाने वाली विशेषताएं और सामान्य और मेटास्टैटिक लिम्फ नोड्स के बीच भेदभाव की अनुमति देती हैं, उनमें बढ़े हुए आकार (मात्रा), अंडाकार से गोल तक आकार का परिवर्तन, अनियमित मार्जिन, परिवर्तित इकोजेनिक पैटर्न, और परिवर्तित (वृद्धि) संवहनीकरण 7 शामिल हैं।
Tyr::Creer+, BrafCA/+, Ptenlox/lox आनुवंशिक रूप से इंजीनियर चूहों (Braf/Pten चूहों) को हाल ही में वैज्ञानिक समुदाय को मेटास्टैटिक मेलेनोमा 8 के लिए ऊतक-विशिष्ट और अपरिवर्तनीय मॉडल के रूप में उपलब्ध कराया गया है। इस पशु मॉडल में, प्राथमिक ट्यूमर बहुत तेज़ी से विकसित होते हैं: वे जंगली-प्रकार (डब्ल्यूटी) ब्रैफ से ब्राफवी 600ई तक स्विच के प्रेरण के बाद 2-3 सप्ताह के भीतर दिखाई देते हैं और Pten के नुकसान के बाद, जबकि वे 4 सप्ताह के भीतर 50-100 मिमी 3 की मात्रा तक पहुंचते हैं। अगले 2 हफ्तों में, प्राथमिक ट्यूमर की वृद्धि अन्य त्वचा साइटों, लिम्फ नोड्स और फेफड़ों में मेटास्टैटिक बोझ में प्रगतिशील वृद्धि के साथ होती है।
Braf / Pten चूहों को बड़े पैमाने पर कई उद्देश्यों के लिए उपयोग किया गया है, जिसमें मेलेनोमाजेनेसिस 9,10 में शामिल सिग्नलिंग मार्गों का विच्छेदन, मूल 11,12,13 की मेलेनोमा कोशिकाओं की पहचान, और लक्षित चिकित्सा और इम्यूनोथेरेपी दोनों के संदर्भ में नए चिकित्सीय विकल्पों का परीक्षण शामिल है8,14,15,16 . विशेष रूप से, हमने Braf / Pten चूहों का उपयोग यह प्रदर्शित करने के लिए किया कि क्षीण लिस्टेरिया monocytogenes (Lmat) एक विरोधी मेलेनोमा वैक्सीन के रूप में काम करता है। जब चिकित्सीय सेटिंग में व्यवस्थित रूप से प्रशासित किया जाता है, तो एलमैट समग्र विषाक्तता से जुड़ा नहीं होता है क्योंकि यह ट्यूमर साइटों पर चुनिंदा रूप से जमा होता है। इसके अलावा, यह प्राथमिक मेलेनोमा द्रव्यमान में उल्लेखनीय कमी और लिम्फ नोड्स और फेफड़ों में मेटास्टैटिक बोझ में कमी का कारण बनता है। आणविक स्तर पर, एलमैट मेलेनोमा कोशिकाओं की एपोप्टोटिक हत्या का कारण बनता है, जो कम से कम भाग में, गैर-सेल-स्वायत्त गतिविधियों (सीडी 4 + और सीडी 8 + टी लिम्फोसाइट्स की साइट पर भर्ती) 16 के कारण होता है।
जब मेलेनोमा मॉडलिंग के लिए ब्रैफ / पीटीएन चूहों का उपयोग किया जाता है, तो प्राथमिक ट्यूमर और चमड़े के नीचे के मेटास्टेसिस के विकास की निगरानी कैलिपर माप द्वारा की जा सकती है। हालांकि, लिम्फ नोड्स और फेफड़ों की भागीदारी की जांच एक वैकल्पिक तकनीक का उपयोग करके की जानी चाहिए, संभवतः एक गैर-आक्रामक एक जो शोधकर्ताओं को समय के साथ एक ही जानवर का पालन करने की अनुमति देता है। यह पेपर अल्ट्रासाउंड इमेजिंग (चित्रा 1) के उपयोग का वर्णन करता है, जो वंक्षण लिम्फ नोड्स के आकार (मात्रा) में वृद्धि की अनुदैर्ध्य निगरानी के लिए प्राप्त डेटा के बाद के 3 डी वॉल्यूमेट्रिक विश्लेषण के साथ युग्मित है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-hydroxytamoxifen</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H6278</td>
			<td>drug used for tumor induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>013590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blu gel</td>
			<td>Sooft Ialia</td>
			<td></td>
			<td>ophthalmic solution gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAFV600E antibody</td>
			<td>Spring Bioscience Corporation</td>
			<td>E19290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo (isoflorane)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td></td>
			<td>liquid for gaseous anaesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MLANA antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>M2-7C10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma gel</td>
			<td>Parker</td>
			<td></td>
			<td>electrode gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transonic gel clear</td>
			<td>Telic SAU</td>
			<td></td>
			<td>ultrasound gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet</td>
			<td>Reckitt Benckiser IT</td>
			<td></td>
			<td>depilatory cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Dual Anesthesia System</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Isoflurane-based anesthesia system equipped with nose cone and induction chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS linear probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS imaging station and Advancing Physiological Monitoring Unit endowed with heated board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Lab</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>software platform for ultrasound image post-processing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma

Tyr:: Creer +, BrafCA / +, Ptenlox / lox आनुवंशिक रूप से इंजीनियर चूहों (Braf / Pten चूहों) व्यापक रूप से मेटास्टैटिक मेलेनोमा के विवो मॉडल के रूप में उपयोग किया जाता है। एक बार जब एक प्राथमिक ट्यूमर को टैमोक्सीफेन उपचार द्वारा प्रेरित किया जाता है, तो प्रेरण के बाद 4-6 सप्ताह के भीतर मेटास्टैटिक बोझ में वृद्धि देखी जाती है। इस पेपर से पता चलता है कि अल्ट्रा-हाई-फ्रीक्वेंसी अल्ट्रासाउंड (यूएचएफयूएस) इमेजिंग को उनकी मात्रा में वृद्धि को मापने के द्वारा वंक्षण लिम्फ नोड्स की मेटास्टैटिक भागीदारी में वृद्धि की निगरानी करने के लिए शोषण किया जा सकता है।
UHFUS प्रणाली का उपयोग एक UHFUS रैखिक जांच (22-55 मेगाहर्ट्ज, अक्षीय रिज़ॉल्यूशन 40 μm) के साथ anesthetized चूहों को स्कैन करने के लिए किया जाता है। वंक्षण लिम्फ नोड्स (बाएं और दाएं दोनों तरफ) से बी-मोड छवियों को एक लघु-अक्ष दृश्य में अधिग्रहित किया जाता है, जो जानवरों को पृष्ठीय शक्ति में स्थित करता है। अल्ट्रासाउंड रिकॉर्ड एक motorized यांत्रिक हाथ पर एक 44 μm कदम आकार का उपयोग कर अधिग्रहित कर रहे हैं. इसके बाद, दो आयामी (2 डी) बी-मोड अधिग्रहण अल्ट्रासाउंड छवि पोस्ट-प्रोसेसिंग के लिए सॉफ्टवेयर प्लेटफॉर्म में आयात किए जाते हैं, और वंक्षण लिम्फ नोड्स की पहचान की जाती है और अधिग्रहित क्रॉस-सेक्शनल 2 डी छवियों में अर्ध-स्वचालित रूप से विभाजित किया जाता है। अंत में, तीन आयामी (3 डी) वॉल्यूम का कुल पुनर्निर्माण स्वचालित रूप से लिम्फ नोड वॉल्यूम के प्रतिपादन के साथ प्राप्त होता है, जिसे एक पूर्ण माप के रूप में भी व्यक्त किया जाता है।
वीवो तकनीक में यह गैर-इनवेसिव बहुत अच्छी तरह से सहन किया जाता है और 2 सप्ताह में एक ही प्रयोगात्मक जानवर पर कई इमेजिंग सत्रों के शेड्यूलिंग की अनुमति देता है। इसलिए, मेटास्टैटिक बीमारी पर औषधीय उपचार के प्रभाव का आकलन करना आदर्श है।

Tyr की त्वचा पेंटिंग के बाद :: CreER +, BrafCA / +, Ptenlox / lox चूहों के साथ 4-HT, Cre गतिविधि प्रेरित है, जिसके कारण wt Braf से BrafV600E तक जीनोमिक स्तर पर एक स्विच होता है, जबकि Pten खो जाता है (चित्रा 3A)। 2-3 हफ्तों में, च?...

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Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

मेलेनोमा एक बहुत ही आक्रामक बीमारी है जो जल्दी से अन्य अंगों में फैलती है। यह प्रोटोकॉल मेटास्टैटिक मेलेनोमा के ब्रैफ / पेंटन माउस मॉडल में वंक्षण लिम्फ नोड्स की मात्रा की निगरानी करने के लिए 3 डी रेंडरिंग के साथ मिलकर अल्ट्रा-हाई-फ्रीक्वेंसी अल्ट्रासाउंड इमेजिंग के आवेदन का वर्णन करता है।

मेलेनोमा के Braf / Pten आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल में अल्ट्रा-उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड इमेजिंग द्वारा लिम्फ नोड वॉल्यूम का विश्लेषण

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

हमारी विधि उनकी मात्रा में वृद्धि को मापने के द्वारा वंक्षण लिम्फ नोड्स की मेटास्टैटिक भागीदारी में वृद्धि की निगरानी करने में सक्षम बनाती है। यह uninvasive विधि बहुत अच्छी तरह से सहन की जाती है, इसलिए, कई इमेजिंग सत्रों को दो सप्ताह के दौरान एक ही प्रयोगात्मक जानवर पर निर्धारित किया जा सकता है। यह विधि मेटास्टैटिक रोग पर औषधीय उपचार के प्रभाव का आकलन करने के लिए आदर्श है।हमने इस विधि को ब्रैफ / पीटीएन मेलेनोमा मॉडल पर लागू किया, लेकिन सिद्धांत रूप में, इसे मेटास्टैटिक कैंसर के विभिन्न प्रकार के प्रीक्लिनिकल माउस मॉडल में विभिन्न दवाओं की प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। प्रक्रिया का प्रदर्शन डॉ Marianna Vitiello, मेरी प्रयोगशाला से एक पोस्ट-डॉक्टर, और Dr.Claudia Kusmic, IFC-CNR में साथी शोधकर्ता हो जाएगा। मेलेनोमा प्रेरण के लिए, एक पंक्ति में तीन दिनों के लिए ऊपरी पीठ की शेव्ड त्वचा के लगभग एक वर्ग सेंटीमीटर पर पांच-मिलीमोलर 4-hydroxytamoxifen के तीन माइक्रोलीटर लागू करें।त्वचा पेंटिंग के छह सप्ताह बाद, प्राथमिक ट्यूमर की मात्रा को मापने के लिए कैलिपर्स का उपयोग करें, और अंततः, चमड़े के नीचे मेटास्टेसिस के। फिर, वंक्षण लिम्फ नोड्स की मात्रा को मापने के लिए अल्ट्रासाउंड इमेजिंग का उपयोग करें। दृश्य निरीक्षण द्वारा प्राथमिक ट्यूमर और लिम्फ नोड्स का विश्लेषण करने के बाद, हिस्टोलॉजिकल अध्ययन के लिए उन्हें एक्साइज करें।संज्ञाहरण की पुष्टि करने के बाद, जानवर को अल्ट्रा-हाई-फ्रीक्वेंसी अल्ट्रासाउंड इमेजिंग स्टेशन के एक गर्म बोर्ड पर स्थानांतरित करें, जानवर को एक सुपाइन स्थिति में रखें। शारीरिक सीमा में माउस के शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए पेट्रोलियम जेली के साथ स्नेहक एक रेक्टल जांच का उपयोग करके बोर्ड के तापमान को समायोजित करें। प्रवाहकीय पेस्ट के साथ अग्र और हिंद पंजे को कोट करें और उन्हें बोर्ड में एम्बेडेड ईसीजी प्लेट इलेक्ट्रोड पर टेप करें।जाँचें कि शारीरिक पैरामीटर सही ढंग से अधिग्रहित और प्रदर्शित किए गए हैं। एक depilatory एजेंट लागू करके दोनों वंक्षण क्षेत्रों से बालों को निकालें और उन्हें एक ध्वनिक युग्मन माध्यम के साथ कोट। फिर, इमेजिंग स्टेशन में एम्बेडेड एक विशेष 3 डी मोटर में अल्ट्रा-हाई-फ्रीक्वेंसी अल्ट्रासाउंड रैखिक जांच को क्लैंप करें, जिससे जांच के स्वचालित और चरणबद्ध आंदोलन की अनुमति मिलती है।वंक्षण लिम्फ नोड की लघु-पहुंच छवियों को प्राप्त करने के लिए अल्ट्रासाउंड जांच की स्थिति को ठीक से उन्मुख और समायोजित करें, और क्षेत्र-के-ब्याज को फोकल ज़ोन रखें। दो और पांच मिलीमीटर के बीच स्कैन दूरी सेट करें, लिम्फ नोड स्लाइस प्रति 46 से 114 स्कैन चरणों के परिणाम के साथ 44 माइक्रोमीटर के लिए चरण आकार, और प्रति जानवर एक से तीन मिनट का अधिग्रहण समय। 2 डी बी-मोड छवियों के अनुक्रम के रूप में वंक्षण लिम्फ नोड की पूरी मात्रा को स्कैन करें, श्वसन और कार्डियक-गेटेड सिने लूप के संदर्भ में 3 डी डेटा उत्पन्न करने के लिए माइक्रोमीटर पैमाने पर चरण आकार के साथ ट्रांसड्यूसर के रैखिक आंदोलन द्वारा कई स्तरों पर छवियों को प्राप्त करें।इमेजिंग के बाद, डिजिटल रूप से अधिग्रहित छवियों को आगे ऑफ़लाइन विश्लेषण के लिए कच्चे प्रारूप में संग्रहीत करें। अल्ट्रासाउंड छवियों के पोस्ट-प्रोसेसिंग के लिए, 3 डी वंक्षण लिम्फ नोड छवियों के डेटासेट को खोलें, बहु-स्लाइस विधि का चयन करें और 3 डी अधिग्रहण के दौरान कैप्चर की गई प्रत्येक छवि के अनुरूप सभी फ्रेम के वर्तमान फ्रेम और थंबनेल दोनों की कल्पना करने के लिए स्टार्ट बटन दबाएं। पहले फ्रेम के थंबनेल का चयन करें जहां लिम्फ नोड इसे समोच्च दृश्य में लोड करने के लिए स्पष्ट है।समोच्च दृश्य में, लिम्फ नोड की सीमा के साथ बिंदुओं को छोड़ने के लिए माउस पर बाएँ-क्लिक करें. एक बार अंक की वांछित संख्या निर्धारित किया गया है, सही समोच्च को पूरा करने के लिए चाटना. पहला समोच्च पूरा होने के बाद, contouring के लिए अगली छवि का चयन करने के लिए थंबनेल दृश्य का उपयोग करें।यदि आवश्यक हो, तो प्रत्येक 3 डी वॉल्यूम के लिए आवश्यक मैनुअल ट्रेस की संख्या को कम करने के लिए समोच्च के बीच कई छवियों पर छोड़ दें। इस प्रक्रिया को तब तक दोहराएं जब तक कि पूरी मात्रा को रेखांकित नहीं किया जाता है, फिर, समाप्त पर क्लिक करें। जबकि 3 डी मोड विंडो कार्यक्षेत्र में, लिम्फ नोड वॉल्यूम के संख्यात्मक मूल्य की कल्पना करने के लिए छवि प्रदर्शन क्षेत्र के नीचे वॉल्यूम माप आइकन पर क्लिक करें, और लिम्फ नोड वॉल्यूम के 3 डी रेंडरिंग के साथ सतह दृश्य को सक्रिय करें।4-hydroxytamoxifen के साथ चूहों का इलाज Creer एंजाइम गतिविधि को प्रेरित करता है, जिससे जंगली-प्रकार के Braf से उत्परिवर्तित Braf V600E तक जीनोमिक स्तर पर एक स्विच होता है, जबकि Pten खो जाता है। 4-hydroxytamoxifen उपचार के चार सप्ताह बाद, प्राथमिक ट्यूमर 50 से 100 घन मिलीमीटर की मात्रा तक पहुंचते हैं और उनके विकास को अतिरिक्त दो सप्ताह के लिए कैलिपर्स द्वारा मापा जा सकता है, जिससे वंक्षण लिम्फ नोड्स में देखे गए रंजकता में क्रमिक वृद्धि दिखाई देती है। मेलेनिन जमा हमेशा मेटास्टेसाइज्ड मेलेनोमा कोशिकाओं की उपस्थिति के कारण होते हैं, जैसा कि मेलेनोमा एंटीजन मेलाना और ब्रैफ वी 600 ई के इम्यूनोहिस्टोकेमिकल स्टेनिंग द्वारा पुष्टि की जाती है।विभाजन चरण के अंत में, सभी वर्गों ने लिम्फ नोड के बाहरी समोच्च के ओवरले को दिखाया। एक सही वंक्षण लिम्फ नोड के 3 डी रेंडरिंग, 4-एचटी उपचार के बाद चार, पांच और छह सप्ताह में विश्लेषण किया गया है, यहां दिखाया गया है। समय के साथ एक ही जानवर के बाएं और दाएं वंक्षण लिम्फ नोड्स की मात्रा में वृद्धि को भी परिमाणित किया गया था।उचित इम्यूनोहिस्टोकेमिकल स्टेनिंग के साथ अल्ट्रासाउंड इमेजिंग को जोड़ने की सिफारिश की जाती है, ताकि आणविक स्तर पर कैंसर कोशिकाओं की उपस्थिति की पुष्टि हो सके। लिम्फ नोड्स के अलावा, अल्ट्रासाउंड इमेजिंग का उपयोग करके समय के साथ चमड़े के नीचे मेटास्टेसिस की मात्रा की भी निगरानी की जा सकती है। यदि अध्ययन के तहत दवा के प्रभावों की सराहना करने के लिए दो सप्ताह की समय सीमा बहुत कम है, तो अधिक परिधीय प्रेरण साइट या कम ट्यूमर-प्रवण जीनोटाइप का चयन करें।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

स्पोराडिक कोलोरेक्टल कैंसर का आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

आनुवंशिक रूप से इंजीनियर अग्नाशय के कैंसर के मॉडल में ट्यूमर की शुरुआत और विकास की निगरानी करने के लिए उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड का उपयोग

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

एक आनुवंशिक रूप से इंजीनियर Murine सिर और गर्दन कैंसर सेल लाइन के विट्रो स्थापना में एक Adeno-एसोसिएटेड वायरस-Cas9 प्रणाली का उपयोग कर

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

मैरिन अग्नाशय के डक्टल एडेनोकार्सिनोमा के अल्ट्रासाउंड-गाइडेड ऑर्थोटोपिक इम्प्लांटेशन

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

लिम्फ नोड क्रायोसेक्शन में ट्यूमर सेल आसंजन का परिमाणीकरण

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

अल्ट्रासाउंड इमेजिंग द्वारा चूहों में फेफड़ों के ट्यूमर प्रगति का पता लगाना

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Sentinel Lymph Node Mapping and Biopsy for Endometrial Cancer at Early Stage with Laparoscopy

लेप्रोस्कोपी के साथ प्रारंभिक चरण में एंडोमेट्रियल कैंसर के लिए प्रहरी लिम्फ नोड मैपिंग और बायोप्सी

Sentinel lymph node (SLN) mapping and biopsy is a promising technique for visualizing and evaluating lymph node status in cancer. This approach has been ...

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

मेलेनोमा मेटास्टेसिस के उपन्यास मध्यस्थों की पहचान के लिए एक मजबूत डिस्कवरी प्लेटफ़ॉर्म

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल स्ट्रोमल ट्यूमर के आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल में आणविक और इम्यूनोलॉजिकल तकनीकें

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

Non-Invasive PET/MR Imaging in an Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma

हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा के ऑर्थोटोपिक माउस मॉडल में गैर-इनवेसिव पीईटी / एमआर इमेजिंग

Preclinical experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate human disease represent an important tool to study tumorigenesis and ...