Name: analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma
Uploaded: 2021-09-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Forfatterne vil takke S. Burchielli (FTGM, Pisa) for hennes hjelp med dyreprosedyrer. Dette arbeidet ble støttet av ISPRO-Istituto per lo Studio la Prevenzione e la Rete Oncologica institusjonell finansiering til LP; MFAG #17095 tildelt av AIRC-Associazione Italiana Ricerca sul Cancro til LP.

Alle metoder beskrevet her er godkjent av det italienske helsedepartementet (dyreprotokoller #754/2015-PR og #684/2018-PR).
1. Melanom induksjon
MERK: Seks uker gamle Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox mus [B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten)] ble brukt i denne studien (se materialtabellen).
<ol><li>Behandle musene med 4-hydroksytamoxifen (4-HT) ved å påf...

<ol>
	<li>Schvartsman, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+metastatic+cutaneous+melanoma:+updates+in+clinical+practice.">Management of metastatic cutaneous melanoma: updates in clinical practice.</a> Therapeutic Advances in Medical Oncology. 11, 1758835919851663 (2019).</li><li>Blum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+examination+of+regional+lymph+nodes+significantly+improves+early+detection+of+locoregional+metastases+during+the+follow-up+of+patients+with+cutaneous+melanoma+-+Results+of+a+prospective+study+of+1288+patients.">Ultrasound examination of regional lymph nodes significantly improves early detection of locoregional metastases during the follow-up of patients with cutaneous melanoma - Results of a prospective study of 1288 patients.</a> Cancer. 88 (11), 2534-2539 (2000).</li><li>Olmedo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+lymph+node+ultrasound+prior+to+sentinel+lymph+node+biopsy+in+384+patients+with+melanoma:+a+cost-effectiveness+analysis.">Use of lymph node ultrasound prior to sentinel lymph node biopsy in 384 patients with melanoma: a cost-effectiveness analysis.</a> Actas Dermo-Sifiliograficas. 108 (10), 931-938 (2017).</li><li>Voit, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+morphology+criteria+predict+metastatic+disease+of+the+sentinel+nodes+in+patients+with+melanoma.">Ultrasound morphology criteria predict metastatic disease of the sentinel nodes in patients with melanoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (5), 847-852 (2010).</li><li>Hayes, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+cohort+study+of+ultrasound+surveillance+of+regional+lymph+nodes+in+patients+with+intermediate-risk+cutaneous+melanoma.">Prospective cohort study of ultrasound surveillance of regional lymph nodes in patients with intermediate-risk cutaneous melanoma.</a> British Journal of Surgery. 106 (6), 729-734 (2019).</li><li>Ipenburg, N. A., Thompson, J. F., Uren, R. F., Chung, D., Nieweg, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focused+ultrasound+surveillance+of+lymph+nodes+following+lymphoscintigraphy+without+sentinel+node+biopsy:+a+useful+and+safe+strategy+in+elderly+or+frail+melanoma+patients.">Focused ultrasound surveillance of lymph nodes following lymphoscintigraphy without sentinel node biopsy: a useful and safe strategy in elderly or frail melanoma patients.</a> Annals of Surgical Oncology. 26 (9), 2855-2863 (2019).</li><li>Jayapal, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+between+benign+and+metastatic+cervical+lymph+nodes+using+ultrasound.">Differentiation between benign and metastatic cervical lymph nodes using ultrasound.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences. 11, 338-346 (2019).</li><li>Dankort, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Damsky, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-catenin+signaling+controls+metastasis+in+Braf-activated+Pten-deficient+melanomas.">&#946;-catenin signaling controls metastasis in Braf-activated Pten-deficient melanomas.</a> Cancer Cell. 20 (6), 741-754 (2011).</li><li>Xie, X., Koh, J. Y., Price, S., White, E., Mehnert, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atg7+overcomes+senescence+and+promotes+growth+of+BrafV600E-driven+melanoma.">Atg7 overcomes senescence and promotes growth of BrafV600E-driven melanoma.</a> Cancer Discovery. 5 (4), 410-423 (2015).</li><li>Kohler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cutaneous+melanoma+induced+by+mutant+BRaf+arises+from+expansion+and+dedifferentiation+of+mature+pigmented+melanocytes.">Mouse cutaneous melanoma induced by mutant BRaf arises from expansion and dedifferentiation of mature pigmented melanocytes.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 679-693 (2017).</li><li>Yuan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenformin+enhances+the+therapeutic+benefit+of+BRAF(V600E)+inhibition+in+melanoma.">Phenformin enhances the therapeutic benefit of BRAF(V600E) inhibition in melanoma.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (45), 18226-18231 (2013).</li><li>Marsh Durban, V., Deuker, M. M., Bosenberg, M. W., Phillips, W., McMahon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+AKT+dependency+displayed+by+mouse+models+of+BRAFV600E-initiated+melanoma.">Differential AKT dependency displayed by mouse models of BRAFV600E-initiated melanoma.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (12), 5104-5118 (2013).</li><li>Hooijkaas, A. I., Gadiot, J., vander Valk, M., Mooi, W. J., Blank, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+in+an+inducible+murine+model+of+melanoma.">Targeting BRAFV600E in an inducible murine model of melanoma.</a> American Journal of Pathology. 181 (3), 785-794 (2012).</li><li>Steinberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+inhibition+alleviates+immune+suppression+in+murine+autochthonous+melanoma.">BRAF inhibition alleviates immune suppression in murine autochthonous melanoma.</a> Cancer Immunology Research. 2 (11), 1044-1050 (2014).</li><li>Vitiello, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumoral+effects+of+attenuated+Listeria+monocytogenes+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+melanoma.">Antitumoral effects of attenuated Listeria monocytogenes in a genetically engineered mouse model of melanoma.</a> Oncogene. 38 (19), 3756-3762 (2019).</li><li>Moon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Zhao, L., Zhan, Y. T., Rutkowski, J. L., Feuerstein, G. Z., Wang, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+2-and+3-dimensional+assessment+of+tumor+volume+and+vascular+density+by+ultrasonography+in+a+transgenic+mouse+model+of+mammary+carcinoma.">Correlation between 2-and 3-dimensional assessment of tumor volume and vascular density by ultrasonography in a transgenic mouse model of mammary carcinoma.</a> Journal of Ultrasound in Medicine. 29 (4), 587-595 (2010).</li></ol>

Dataene som er oppnådd i denne studien, vitner om evnen til ultralydavbildning for å overvåke metastatisk involvering av inguinale lymfeknuter i Braf / Pten-musemodellen av metastatisk melanom. Som vist tidligere16, er denne teknikken spesielt nyttig for å vurdere effekten av narkotikabehandling. Dette er fordi det tillater overvåking av endringen i lymfeknutevolumet i samme dyr over tid, ved å sammenligne målingene samlet på t1 andt2  med de som samles in...

Melanom er en aggressiv form for hudkreft som ofte sprer seg til andre hudsteder (subkutane metastaser), samt til lymfeknuter, lunger, lever, hjerne og bein1. I løpet av det siste tiåret har nye legemidler blitt introdusert i klinisk praksis og har bidratt til å forbedre forventet levetid for metastatiske melanompasienter. Imidlertid forblir begrensninger, inkludert variabel tid til og grad av respons, alvorlige bivirkninger og opprøret av ervervet motstand1. Derfor er det avgjørende å oppdage metastatisk spredning i sine tidlige stadier, det vil si når det kommer til de lokale lymfeknuter.
En biopsi av de lokale lymfeknuter (sentinel lymfeknuter) utføres vanligvis for å sjekke om det finnes melanomceller. Imidlertid tar ultralydavbildning tak som en ikke-invasiv metode for å oppdage metastatisk involvering, da det overgår klinisk evaluering og kan bidra til å unngå en unødvendig biopsi2,3,4. Videre synes ultralydavbildning hensiktsmessig for lymfeknuteovervåking, spesielt når det gjelder avansert alder og / eller komorbiditeter5,6. Funksjonene som oppdages ved ultralydanalyse og tillater differensiering mellom normale og metastatiske lymfeknuter, består av økt størrelse (volum), endring av form fra oval til rund, uregelmessig margin, endret ekkogent mønster og endret (økt) vaskularisering7.
Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox genetisk konstruerte mus (Braf/Pten mus) har nylig blitt gjort tilgjengelig for det vitenskapelige samfunnet som en vevsspesifikk og indusert modell for metastatisk melanom8. I denne dyremodellen utvikler primære svulster veldig raskt: de blir synlige innen 2-3 uker etter induksjonen av bryteren fra wild-type (wt) Braf til BrafV600E og av tapet av Pten, mens de når et volum på 50-100 mm3 innen 4 uker. I de følgende 2 ukene er veksten av den primære svulsten ledsaget av en progressiv økning i metastatisk byrde i andre hudsteder, lymfeknuter og lunger.
Braf/Pten-mus har blitt mye brukt til flere formål, inkludert disseksjonen av signalveier involvert i melanomagenese9,10, identifisering av melanomceller av opprinnelse11,12,13, og testing av nye terapeutiske alternativer når det gjelder både målrettet terapi og immunterapi8,14,15,16 . Spesielt brukte vi Braf/Pten mus for å demonstrere at svekkede Listeria monocytogenes (Lmat) fungerer som en anti-melanom vaksine. Når det administreres systemisk i terapeutisk setting, er Lmat ikke forbundet med generell toksisitet, da det selektivt akkumuleres på tumorsteder. Videre forårsaker det en bemerkelsesverdig nedgang i primær melanommasse og en reduksjon i metastatisk byrde i lymfeknuter og lunger. På molekylært nivå forårsaker Lmat apoptotisk drap på melanomceller, noe som i det minste delvis skyldes ikke-celle-autonome aktiviteter (rekruttering på stedet av CD4 + og CD8 + T lymfocytter)16.
Når Braf/Pten-mus brukes til melanommodellering, kan veksten av primære svulster og subkutane metastaser overvåkes av kalipermålinger. Imidlertid må involvering av lymfeknuter og lunger undersøkes ved hjelp av en alternativ teknikk, muligens en ikke-invasiv som gjør det mulig for forskere å følge samme dyr over tid. Dette dokumentet beskriver bruken av ultralydavbildning (figur 1), kombinert med en påfølgende 3D-volumetrisk analyse av de oppnådde dataene, for langsgående overvåking av økningen i størrelse (volum) av inguinale lymfeknuter.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-hydroxytamoxifen</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H6278</td>
			<td>drug used for tumor induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>013590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blu gel</td>
			<td>Sooft Ialia</td>
			<td></td>
			<td>ophthalmic solution gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAFV600E antibody</td>
			<td>Spring Bioscience Corporation</td>
			<td>E19290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo (isoflorane)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td></td>
			<td>liquid for gaseous anaesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MLANA antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>M2-7C10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma gel</td>
			<td>Parker</td>
			<td></td>
			<td>electrode gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transonic gel clear</td>
			<td>Telic SAU</td>
			<td></td>
			<td>ultrasound gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet</td>
			<td>Reckitt Benckiser IT</td>
			<td></td>
			<td>depilatory cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Dual Anesthesia System</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Isoflurane-based anesthesia system equipped with nose cone and induction chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS linear probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS imaging station and Advancing Physiological Monitoring Unit endowed with heated board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Lab</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>software platform for ultrasound image post-processing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox genmodifiserte mus (Braf/Pten mus) er mye brukt som en in vivo modell av metastatisk melanom. Når en primærsvulst har blitt indusert ved tamoksifenbehandling, observeres en økning i metastatisk byrde innen 4-6 uker etter induksjon. Dette dokumentet viser hvordan Ultra-High-Frequency UltraSound (UHFUS) avbildning kan utnyttes for å overvåke økningen i metastatisk involvering av inguinale lymfeknuter ved å måle økningen i volumet.
UHFUS-systemet brukes til å skanne bedøvede mus med en UHFUS lineær sonde (22-55 MHz, aksial oppløsning 40 μm). B-modus bilder fra inguinale lymfeknuter (både venstre og høyre side) er anskaffet i en kortaksevisning, og plasserer dyrene i dorsal recumbency. Ultralydposter er anskaffet ved hjelp av en trinnstørrelse på 44 μm på en motorisert mekanisk arm. Etterpå importeres todimensjonale (2D) B-modus-oppkjøp til programvareplattformen for ultralydbilde etter behandling, og inguinale lymfeknuter identifiseres og segmenteres halvautomatisk i de oppkjøpte tverrsnitts 2D-bildene. Til slutt oppnås en total rekonstruksjon av det tredimensjonale (3D) volumet automatisk sammen med gjengivelsen av lymfeknutevolumet, som også uttrykkes som en absolutt måling.
Denne ikke-invasive in vivo-teknikken tolereres veldig godt og tillater planlegging av flere bildebehandlingsøkter på samme eksperimentelle dyr over 2 uker. Det er derfor ideelt å vurdere effekten av farmakologisk behandling på metastatisk sykdom.

Etter hudmaling av Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox mus med 4-HT, blir Cre-aktiviteten indusert, på grunn av hvilken det er en bryter på genomisk nivå fra wt Braf til BrafV600E, mens Pten går tapt (figur 3A). I løpet av 2-3 uker utvikler mus primære svulster på stedet med 100% penetrans. Etter fire uker fra 4-HT-behandling (t0) når primærsvulster et volum på 50-100 mm3, og veksten kan måles med kalipere i ytterligere 2 ...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

Melanom er en veldig aggressiv sykdom som raskt sprer seg til andre organer. Denne protokollen beskriver anvendelsen av ultra-høyfrekvent ultralydavbildning, kombinert med 3D-gjengivelse, for å overvåke volumet av inguinale lymfeknuter i Braf / Pten-musemodellen av metastatisk melanom.

Analyse av lymfeknutervolum ved ultra-høyfrekvent ultralydavbildning i Braf / Pten genetisk konstruert musemodell av melanom

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Vår metode gjør det mulig å overvåke økningen i metastatisk involvering av inguinale lymfeknuter ved å måle økningen i volumet. Denne uinvasive metoden er veldig godt tolerert, derfor kan flere bildebehandlingsøkter planlegges på samme eksperimentelle dyr i løpet av to uker. Denne metoden er ideell for å vurdere effekten av farmakologisk behandling på metastatisk sykdom.Vi brukte denne metoden på Braf / Pten melanom-modellen, men i prinsippet kan den tilpasses for å vurdere effekten av ulike legemidler i en rekke prekliniske musemodeller av metastatisk kreft. Demonstrere prosedyren vil være Dr.Marianna Vitiello, en post-doc fra laboratoriet mitt, og Dr.Claudia Kusmic, medforsker ved IFC-CNR. For melanominduksjon, bruk tre mikroliter av fem millimolar 4-hydroksytamoxifen på omtrent en kvadratcentimeter barbert hud i øvre rygg i tre dager på rad.Seks uker etter hudmaling, bruk kalipere for å måle volumet av den primære svulsten, og til slutt av subkutane metastaser. Bruk deretter ultralydavbildning for å måle volumet av inguinale lymfeknuter. Etter å ha analysert den primære svulsten og lymfeknuter ved visuell inspeksjon, sluk dem for histologiske studier.Etter å ha bekreftet anestesi, overfør dyret til et oppvarmet brett på den ultra-høyfrekvente ultralydavbildningsstasjonen, og hold dyret i en liggende stilling. Juster bordtemperaturen ved hjelp av en rektal sonde smurt med petroleumjell for å opprettholde musens kroppstemperatur i det fysiologiske området. Belegge for- og bakpoten med ledende pasta og tape dem til EKG-plateelektrodene som er innebygd i brettet.Kontroller at de fysiologiske parametrene er riktig anskaffet og vist. Fjern hår fra begge inguinale områder ved å påføre et depilatorisk middel og belegge dem med et akustisk koblingsmedium. Klem deretter den ultra-høyfrekvente ultralyd lineære sonden inn i en spesialisert 3D-motor innebygd i bildestasjonen, noe som muliggjør automatisert og trinnvis bevegelse av sonden.Orienter og juster plasseringen av ultralydsonden riktig for å få kort tilgang til bilder av den inguinale lymfeknuten, og plasser den interesseområde for fokussonen. Sett skanneavstanden mellom to og fem millimeter, trinnstørrelse til 44 mikrometer med et resultat på 46 til 114 skannetrinn per lymfeknuteskive, og en oppkjøpstid på ett til tre minutter per dyr. Skann hele volumet av den inguinale lymfeknuten som en sekvens av bilder i 2D B-modus, og skaff bilder på flere nivåer ved lineær bevegelse av svingeren med trinnstørrelser på en mikrometerskala for å generere 3D-data når det gjelder åndedrett og hjerteporterte cine looper.Etter avbildning lagrer du de oppkjøpte bildene digitalt i RAW-format for videre offline analyser. For etterbehandling av ultralydbilder, åpne datasettet til 3D-inguinale lymfeknutebilder, velg flerskivemetode og trykk på Start-knappen for å visualisere både gjeldende rammer og miniatyrbilder av alle rammer som tilsvarer hvert bilde som er tatt under 3D-oppkjøpet. Velg miniatyrbildet av den første rammen der lymfeknuten er tydelig for å laste den inn i konturvisningen.I konturvisningen, venstreklikk på musen for å slippe punkter langs kanten av lymfeknuten. Når ønsket antall poeng er satt, høyre slikke for å fullføre konturen. Når den første konturen er fullført, bruker du miniatyrvisningen til å merke neste bilde for konturering.Hopp om nødvendig over flere bilder mellom konturene for å redusere antall manuelle spor som trengs for hvert 3D-volum. Gjenta denne prosessen til hele volumet er skissert, og klikk deretter på Fullfør. Mens du er i arbeidsområdet for 3D-modus, klikker du på volummålingsikonet under bildevisningsområdet for å visualisere den numeriske verdien av lymfeknutevolumet, og aktiverer overflatevisningen med 3D-gjengivelsen av lymfeknutevolumet.Behandling av mus med 4-hydroksytamoxifen induserer CreER-enzymaktivitet, noe som forårsaker en bryter på genomisk nivå fra villtype Braf til mutert Braf V600E, mens Pten går tapt. Fire uker etter 4-hydroksytamoxifen behandling, når primære svulster et volum på 50 til 100 kubikkmillimeter, og veksten kan måles av kalipere i ytterligere to uker, og viser dermed en gradvis økning i pigmentering observert i inguinale lymfeknuter. Melaninavsetningene skyldes alltid tilstedeværelsen av metastaserte melanomceller, som bekreftet av immunhiistokjemisk farging av melanomantigenet MelanA og Braf V600E.På slutten av segmenteringsfasen viste alle seksjoner overlegget av lymfeknutens ytre kontur. 3D-gjengivelsene av en høyre inguinal lymfeknute, analysert ved fire, fem og seks uker etter 4-HT-behandling, vises her. Økningen i volumet av venstre og høyre inguinale lymfeknuter av samme dyr over tid ble også kvantifisert.Det anbefales å koble ultralydavbildning med passende immunhiistokjemisk farging, slik at tilstedeværelsen av kreftceller bekreftes på molekylært nivå. Foruten lymfeknuter, kan volumet av subkutan metastase også overvåkes over tid ved hjelp av ultralydavbildning. Hvis tidsrammen på to uker er for kort til å sette pris på effekten av stoffet som studeres, velg et mer perifert induksjonssted eller en mindre tumorutsatt genotype.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

En genetisk utviklet musemodell av sporadisk kolorektal kreft

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

Utnytte høyoppløselig ultralyd Monitor svulst utbruddet og vekst i genmodifiserte bukspyttkjertelkreft modeller

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

Opprettelse av en genetisk konstruert murine hode-og nakke kreftcelle linje ved bruk av et Adeno-tilknyttet virus Cas9 system

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Ultralyd-guidet Orthotopic implantation av murine bukspyttkjertelen ductal Adenokarsinom

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

Kvantifisering av tumorcellevedheft i lymfeknute kryoseksjoner

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Påvisning av lungetumorprogresjon hos mus ved ultralydavbildning

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Sentinel Lymph Node Mapping and Biopsy for Endometrial Cancer at Early Stage with Laparoscopy

Sentinel lymfeknuter kartlegging og biopsi for endometrial kreft på tidlig stadium med Laparoscopy

Sentinel lymph node (SLN) mapping and biopsy is a promising technique for visualizing and evaluating lymph node status in cancer. This approach has been ...

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

En robust oppdagelsesplattform for identifisering av nye meklere av melanommetastase

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

Molekylære og immunologiske teknikker i en genetisk konstruert musemodell av gastrointestinal stromal tumor

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

Non-Invasive PET/MR Imaging in an Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma

Ikke-invasiv PET/MR-avbildning i en ortotopisk musemodell av hepatocellulært karsinom

Preclinical experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate human disease represent an important tool to study tumorigenesis and ...