Name: analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma
Uploaded: 2021-09-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить С. Буркьелли (FTGM, Пиза) за ее помощь в процедурах для животных. Эта работа была поддержана ISPRO-Istituto per lo Studio la Prevenzione e la Rete Oncologica институциональное финансирование LP; MFAG #17095 присужден AIRC-Associazione Italiana Ricerca sul Cancro LP.

Все методы, описанные здесь, были одобрены Министерством здравоохранения Италии (протоколы для животных #754/2015-PR и #684/2018-PR).
1. Индукция меланомы
ПРИМЕЧАНИЕ: В этом исследовании использовались шестинедельные мыши Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox [B6.Cg-Braftm1Mmc...

<ol>
	<li>Schvartsman, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+metastatic+cutaneous+melanoma:+updates+in+clinical+practice.">Management of metastatic cutaneous melanoma: updates in clinical practice.</a> Therapeutic Advances in Medical Oncology. 11, 1758835919851663 (2019).</li><li>Blum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+examination+of+regional+lymph+nodes+significantly+improves+early+detection+of+locoregional+metastases+during+the+follow-up+of+patients+with+cutaneous+melanoma+-+Results+of+a+prospective+study+of+1288+patients.">Ultrasound examination of regional lymph nodes significantly improves early detection of locoregional metastases during the follow-up of patients with cutaneous melanoma - Results of a prospective study of 1288 patients.</a> Cancer. 88 (11), 2534-2539 (2000).</li><li>Olmedo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+lymph+node+ultrasound+prior+to+sentinel+lymph+node+biopsy+in+384+patients+with+melanoma:+a+cost-effectiveness+analysis.">Use of lymph node ultrasound prior to sentinel lymph node biopsy in 384 patients with melanoma: a cost-effectiveness analysis.</a> Actas Dermo-Sifiliograficas. 108 (10), 931-938 (2017).</li><li>Voit, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+morphology+criteria+predict+metastatic+disease+of+the+sentinel+nodes+in+patients+with+melanoma.">Ultrasound morphology criteria predict metastatic disease of the sentinel nodes in patients with melanoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (5), 847-852 (2010).</li><li>Hayes, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+cohort+study+of+ultrasound+surveillance+of+regional+lymph+nodes+in+patients+with+intermediate-risk+cutaneous+melanoma.">Prospective cohort study of ultrasound surveillance of regional lymph nodes in patients with intermediate-risk cutaneous melanoma.</a> British Journal of Surgery. 106 (6), 729-734 (2019).</li><li>Ipenburg, N. A., Thompson, J. F., Uren, R. F., Chung, D., Nieweg, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focused+ultrasound+surveillance+of+lymph+nodes+following+lymphoscintigraphy+without+sentinel+node+biopsy:+a+useful+and+safe+strategy+in+elderly+or+frail+melanoma+patients.">Focused ultrasound surveillance of lymph nodes following lymphoscintigraphy without sentinel node biopsy: a useful and safe strategy in elderly or frail melanoma patients.</a> Annals of Surgical Oncology. 26 (9), 2855-2863 (2019).</li><li>Jayapal, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+between+benign+and+metastatic+cervical+lymph+nodes+using+ultrasound.">Differentiation between benign and metastatic cervical lymph nodes using ultrasound.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences. 11, 338-346 (2019).</li><li>Dankort, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Damsky, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-catenin+signaling+controls+metastasis+in+Braf-activated+Pten-deficient+melanomas.">&#946;-catenin signaling controls metastasis in Braf-activated Pten-deficient melanomas.</a> Cancer Cell. 20 (6), 741-754 (2011).</li><li>Xie, X., Koh, J. Y., Price, S., White, E., Mehnert, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atg7+overcomes+senescence+and+promotes+growth+of+BrafV600E-driven+melanoma.">Atg7 overcomes senescence and promotes growth of BrafV600E-driven melanoma.</a> Cancer Discovery. 5 (4), 410-423 (2015).</li><li>Kohler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cutaneous+melanoma+induced+by+mutant+BRaf+arises+from+expansion+and+dedifferentiation+of+mature+pigmented+melanocytes.">Mouse cutaneous melanoma induced by mutant BRaf arises from expansion and dedifferentiation of mature pigmented melanocytes.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 679-693 (2017).</li><li>Yuan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenformin+enhances+the+therapeutic+benefit+of+BRAF(V600E)+inhibition+in+melanoma.">Phenformin enhances the therapeutic benefit of BRAF(V600E) inhibition in melanoma.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (45), 18226-18231 (2013).</li><li>Marsh Durban, V., Deuker, M. M., Bosenberg, M. W., Phillips, W., McMahon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+AKT+dependency+displayed+by+mouse+models+of+BRAFV600E-initiated+melanoma.">Differential AKT dependency displayed by mouse models of BRAFV600E-initiated melanoma.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (12), 5104-5118 (2013).</li><li>Hooijkaas, A. I., Gadiot, J., vander Valk, M., Mooi, W. J., Blank, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+in+an+inducible+murine+model+of+melanoma.">Targeting BRAFV600E in an inducible murine model of melanoma.</a> American Journal of Pathology. 181 (3), 785-794 (2012).</li><li>Steinberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+inhibition+alleviates+immune+suppression+in+murine+autochthonous+melanoma.">BRAF inhibition alleviates immune suppression in murine autochthonous melanoma.</a> Cancer Immunology Research. 2 (11), 1044-1050 (2014).</li><li>Vitiello, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumoral+effects+of+attenuated+Listeria+monocytogenes+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+melanoma.">Antitumoral effects of attenuated Listeria monocytogenes in a genetically engineered mouse model of melanoma.</a> Oncogene. 38 (19), 3756-3762 (2019).</li><li>Moon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Zhao, L., Zhan, Y. T., Rutkowski, J. L., Feuerstein, G. Z., Wang, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+2-and+3-dimensional+assessment+of+tumor+volume+and+vascular+density+by+ultrasonography+in+a+transgenic+mouse+model+of+mammary+carcinoma.">Correlation between 2-and 3-dimensional assessment of tumor volume and vascular density by ultrasonography in a transgenic mouse model of mammary carcinoma.</a> Journal of Ultrasound in Medicine. 29 (4), 587-595 (2010).</li></ol>

Данные, полученные в этом исследовании, свидетельствуют о способности ультразвуковой визуализации контролировать метастатическое вовлечение паховых лимфатических узлов мышиной модели метастатической меланомы Брафа/Птена. Как показано ранее16, данная методика особенно ...

Меланома является агрессивной формой рака кожи, которая часто распространяется на другие участки кожи (подкожные метастазы), а также на лимфатические узлы, легкие, печень, мозг и кости1. В последнее десятилетие в клиническую практику были введены новые препараты, которые способствовали улучшению продолжительности жизни пациентов с метастатической меланомой. Тем не менее, ограничения остаются, включая переменное время и степень реакции, серьезные побочные эффекты и рост приобретенной резистентности1. Поэтому крайне важно обнаружить метастатическое распространение на ранних стадиях, т. е. когда оно попадает в местные лимфатические узлы.
Биопсия местных лимфатических узлов (сторожевых лимфатических узлов) обычно проводится для проверки наличия клеток меланомы. Тем не менее, ультразвуковая визуализация закрепляется как неинвазивный метод обнаружения метастатического поражения, поскольку она превосходит клиническую оценку и может помочь избежать ненужной биопсии2,3,4. Кроме того, ультразвуковая визуализация представляется подходящей для наблюдения за лимфатическими узлами, особенно в случае пожилого возраста и / или сопутствующих заболеваний5,6. Признаки, которые выявляются ультразвуковым анализом и позволяют дифференцировать нормальные и метастатические лимфатические узлы, включают увеличение размера (объема), изменение формы от овала до круглого, неправильное краевое, измененный эхогенный рисунок и измененную (повышенную) васкуляризацию7.
Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox генетически модифицированные мыши (мыши Braf/Pten) недавно стали доступны научному сообществу в качестве тканеспецифической и индуцируемой модели метастатической меланомы8. В этой животной модели первичные опухоли развиваются очень быстро: они становятся видимыми в течение 2-3 недель после индукции перехода с брафа дикого типа (wt) на BrafV600E и потери Pten, при этом они достигают объема 50-100 мм3 в течение 4 недель. В последующие 2 недели рост первичной опухоли сопровождается прогрессирующим увеличением метастатической нагрузки на другие участки кожи, лимфатические узлы, легкие.
Мыши Braf/Pten широко использовались для различных целей, включая рассечение сигнальных путей, участвующих в меланомагенезе9,10, идентификацию клеток меланомы происхождения11,12,13 и тестирование новых терапевтических вариантов с точки зрения как таргетной терапии, так и иммунотерапии8,14,15,16 . В частности, мы использовали мышей Braf / Pten, чтобы продемонстрировать, что ослабленный Listeria monocytogenes (Lmat) работает как вакцина против меланомы. При систематическом введении в терапевтических условиях Lmat не связан с общей токсичностью, поскольку он избирательно накапливается в опухолевых участках. Кроме того, это вызывает заметное снижение массы первичной меланомы и снижение метастатической нагрузки в лимфатических узлах и легких. На молекулярном уровне Lmat вызывает апоптотическое уничтожение клеток меланомы, что обусловлено, по крайней мере частично, неэлементно-автономной деятельностью (рекрутирование на месте CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов)16.
Когда мыши Braf / Pten используются для моделирования меланомы, рост первичных опухолей и подкожных метастазов может контролироваться с помощью измерений суппорта. Тем не менее, вовлечение лимфатических узлов и легких должно быть исследовано с использованием альтернативной техники, возможно, неинвазивной, которая позволяет исследователям следить за одним и тем же животным с течением времени. В данной работе описано использование ультразвуковой визуализации (рисунок 1) в сочетании с последующим 3D объемным анализом полученных данных, для продольного мониторинга увеличения размеров (объема) паховых лимфатических узлов.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-hydroxytamoxifen</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H6278</td>
			<td>drug used for tumor induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>013590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blu gel</td>
			<td>Sooft Ialia</td>
			<td></td>
			<td>ophthalmic solution gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAFV600E antibody</td>
			<td>Spring Bioscience Corporation</td>
			<td>E19290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo (isoflorane)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td></td>
			<td>liquid for gaseous anaesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MLANA antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>M2-7C10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma gel</td>
			<td>Parker</td>
			<td></td>
			<td>electrode gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transonic gel clear</td>
			<td>Telic SAU</td>
			<td></td>
			<td>ultrasound gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet</td>
			<td>Reckitt Benckiser IT</td>
			<td></td>
			<td>depilatory cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Dual Anesthesia System</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Isoflurane-based anesthesia system equipped with nose cone and induction chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS linear probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS imaging station and Advancing Physiological Monitoring Unit endowed with heated board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Lab</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>software platform for ultrasound image post-processing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox генетически модифицированные мыши (мыши Braf/Pten) широко используются в качестве модели in vivo метастатической меланомы. После того, как первичная опухоль была индуцирована лечением тамоксифеном, увеличение метастатической нагрузки наблюдается в течение 4-6 недель после индукции. В этой статье показано, как ультравысокочастотная ультразвуковая (UHFUS) визуализация может быть использована для мониторинга увеличения метастатического поражения паховых лимфатических узлов путем измерения увеличения их объема.
Система UHFUS используется для сканирования обезболенных мышей с помощью линейного зонда UHFUS (22-55 МГц, осевое разрешение 40 мкм). Изображения B-режима из паховых лимфатических узлов (как с левой, так и с правой стороны) получаются в виде с короткой осью, позиционируя животных в дорсальной лежачем положении. Ультразвуковые записи приобретаются с использованием шага размером 44 мкм на моторизованной механической руке. После этого двухмерные (2D) B-режимы импортируются в программную платформу для постобработки ультразвуковых изображений, а паховые лимфатические узлы идентифицируются и сегментируются полуавтоматически в полученных поперечных 2D-изображениях. Наконец, автоматически получается полная реконструкция трехмерного (3D) объема вместе с визуализацией объема лимфатического узла, что также выражается в виде абсолютного измерения.
Этот неинвазивный метод in vivo очень хорошо переносится и позволяет планировать несколько сеансов визуализации на одном и том же экспериментальном животном в течение 2 недель. Поэтому идеально оценивать влияние фармакологического лечения на метастатическое заболевание.

После окраски кожи Мышей Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox с 4-HT индуцируется активность Cre, из-за чего происходит переключение на геномном уровне с wt Braf на BrafV600E, при этом Pten теряется (рисунок 3A). Через 2-3 недели у мышей развиваются первичные опухоли на месте со 100% пен?...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

Меланома – очень агрессивное заболевание, которое быстро распространяется на другие органы. Этот протокол описывает применение ультравысокочастотной ультразвуковой визуализации в сочетании с 3D-рендерингом для мониторинга объема паховых лимфатических узлов в мышиной модели метастатической меланомы Брафа / Птена.

Анализ объема лимфатических узлов с помощью ультравысокочастотной ультразвуковой визуализации в генно-инженерной мышиной модели меланомы Braf/Pten

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Наш метод позволяет контролировать увеличение метастатического поражения паховых лимфатических узлов путем измерения увеличения их объема. Этот неинвазивный метод очень хорошо переносится, поэтому на одном и том же экспериментальном животном в течение двух недель могут быть запланированы несколько сеансов визуализации. Этот метод идеально подходит для оценки влияния фармакологического лечения на метастатическое заболевание.Мы применили этот метод к модели меланомы Брафа/Птена, но в принципе он может быть адаптирован для оценки эффективности различных препаратов в различных доклинических мышиных моделях метастатического рака. Продемонстрировать процедуру будут д-р Марианна Витиелло, постдок из моей лаборатории, и д-р Клаудия Кусмич, научный сотрудник IFC-CNR. Для индукции меланомы наносите три микролитра пятимимолярного 4-гидрокситамоксифена примерно на один квадратный сантиметр бритой кожи верхней части спины в течение трех дней подряд.Через шесть недель после окрашивания кожи используйте суппорты для измерения объема первичной опухоли и, в конечном итоге, подкожных метастазов. Затем используйте ультразвуковую визуализацию для измерения объема паховых лимфатических узлов. Проанализировав первичную опухоль и лимфатические узлы путем визуального осмотра, иссекают их для гистологических исследований.После подтверждения анестезии переведите животное на подогреваемую доску станции ультравысокочастотной ультразвуковой томографии, удерживая животное в положении лежа на спине. Отрегулируйте температуру доски с помощью ректального зонда, смазанного вазелином, чтобы поддерживать температуру тела мыши в физиологическом диапазоне. Покройте передние и задние лапы проводящей пастой и приклейте их к электродам пластины ЭКГ, встроенным в доску.Убедитесь, что физиологические параметры правильно получены и отображены. Удалите волосы с обеих паховых областей, нанеся средство для депиляции и покрывайте их акустической связующей средой. Затем зажмите ультравысокочастотный ультразвуковой линейный зонд в специализированный 3D-двигатель, встроенный в станцию визуализации, что позволит автоматизировать и ступенчато перемещать зонд.Правильно сориентируйте и отрегулируйте положение ультразвукового зонда для получения изображений пахового лимфатического узла с коротким доступом и поместите интересующую область фокальной зоны. Установите расстояние сканирования от двух до пяти миллиметров, размер шага до 44 микрометров с результатом от 46 до 114 шагов сканирования на срез лимфатического узла и временем сбора от одной до трех минут на животное. Сканируйте весь объем пахового лимфатического узла в виде последовательности 2D изображений B-режима, получая изображения на нескольких уровнях путем линейного движения датчика с размерами шагов на микрометровом масштабе для генерации 3D-данных с точки зрения дыхания и сердечных циновых петель.После получения изображения в цифровом виде сохраните полученные изображения в необработанном формате для дальнейшего автономного анализа. Для постобработки ультразвуковых изображений откройте набор данных 3D-изображений паховых лимфатических узлов, выберите многосрезовый метод и нажмите кнопку «Пуск», чтобы визуализировать как текущие кадры, так и миниатюры всех кадров, соответствующих каждому изображению, снятому во время 3D-съемки. Выберите миниатюру первого кадра, где лимфатический узел виден, чтобы загрузить его в контурное представление.В контурном виде щелкните левой кнопкой мыши, чтобы сбросить точки вдоль границы лимфатического узла. После того, как нужное количество точек было установлено, щелкните правой кнопкой мыши, чтобы завершить контур. После завершения первого контура используйте представление эскизов, чтобы выбрать следующее изображение для контурирования.При необходимости пропустите несколько изображений между контурами, чтобы уменьшить количество ручных трассировок, необходимых для каждого 3D-тома. Повторяйте этот процесс до тех пор, пока не будет выделен весь том, затем нажмите «Готово». Находясь в рабочем пространстве окна 3D-режима, нажмите на значок измерения объема под областью отображения изображения, чтобы визуализировать числовое значение объема лимфатических узлов, и активируйте вид поверхности с помощью 3D-рендеринга объема лимфатических узлов.Лечение мышей 4-гидрокситамоксифеном индуцирует активность фермента CreER, вызывая переключение на геномном уровне с Braf дикого типа на мутировавший Braf V600E, в то время как Pten теряется. Через четыре недели после лечения 4-гидрокситамоксифеном первичные опухоли достигают объема от 50 до 100 кубических миллиметров и их рост можно измерить суппортами в течение дополнительных двух недель, тем самым показывая постепенное увеличение пигментации, наблюдаемое в паховых лимфатических узлах. Отложения меланина неизменно обусловлены наличием метастазированных клеток меланомы, что подтверждается иммуногистохимическим окрашиванием антигена меланомы MelanA и Braf V600E.В конце фазы сегментации все участки показывали наложение внешнего контура лимфатического узла. Здесь показаны 3D-визуализации правого пахового лимфатического узла, проанализированные через четыре, пять и шесть недель после лечения 4-НТ. Увеличение объема левого и правого паховых лимфатических узлов одного и того же животного с течением времени также было количественно определено.Рекомендуется сочетать ультразвуковую визуализацию с соответствующим иммуногистохимическим окрашиванием, чтобы наличие раковых клеток было подтверждено на молекулярном уровне. Помимо лимфатических узлов, объем подкожных метастазов также можно контролировать с течением времени с помощью ультразвуковой визуализации. Если двухнедельный срок слишком короткий, чтобы оценить эффекты исследуемого препарата, выберите более периферический индукционный участок или менее склонный к опухоли генотип.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Генетически спроектированная мышь Модель спорадического колоректального рака

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

Использование УЗИ высоким разрешением монитор опухоль начала и роста в модели генно-инженерных рака поджелудочной железы

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

В vitro Создание генетически инженерии Murine головы и шеи рак овой линии с использованием Адено-ассоциированных Вирус-Cas9 системы

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Ультразвуковая ортотопическая имплантация мурин поджелудочной железы Ductal Аденокарцинома

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

Количественная оценка прижатки опухолевых клеток в криосекциях лимфатических узлов

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Обнаружение прогрессирования опухоли легких у мышей с помощью ультразвуковой визуализации

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Sentinel Lymph Node Mapping and Biopsy for Endometrial Cancer at Early Stage with Laparoscopy

Картирование сторожевых лимфатических узлов и биопсия рака эндометрия на ранней стадии с лапароскопией

Sentinel lymph node (SLN) mapping and biopsy is a promising technique for visualizing and evaluating lymph node status in cancer. This approach has been ...

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

Надежная платформа discovery для идентификации новых медиаторов метастазирования меланомы

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

Молекулярные и иммунологические методы в генетически модифицированной мышиной модели стромальной опухоли желудочно-кишечного тракта

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

Non-Invasive PET/MR Imaging in an Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma

Неинвазивная ПЭТ/МРТ визуализация на ортотопической мышиной модели гепатоцеллюлярной карциномы

Preclinical experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate human disease represent an important tool to study tumorigenesis and ...