Name: analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma
Uploaded: 2021-09-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Författarna vill tacka S. Burchielli (FTGM, Pisa) för hennes hjälp med djurprocedurer. Detta arbete stöddes av ISPRO-Istituto per lo Studio la Prevenzione e la Rete Oncologica institutionell finansiering till LP; MFAG #17095 tilldelas av AIRC-Associazione Italiana Ricerca sul Cancro till LP.

Alla metoder som beskrivs här har godkänts av det italienska hälsoministeriet (djurprotokollen #754/2015-PR och #684/2018-PR).
1. Melanominduktion
OBS: Sex veckor gamla Tyr::CreER+, BrafCA/+,Ptenlox/lox möss [B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten)] användes i denna studie (se tabellen över material).
<ol><li>Behandla mössen med 4-hydroxitamoxifen (4-H...

<ol>
	<li>Schvartsman, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+metastatic+cutaneous+melanoma:+updates+in+clinical+practice.">Management of metastatic cutaneous melanoma: updates in clinical practice.</a> Therapeutic Advances in Medical Oncology. 11, 1758835919851663 (2019).</li><li>Blum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+examination+of+regional+lymph+nodes+significantly+improves+early+detection+of+locoregional+metastases+during+the+follow-up+of+patients+with+cutaneous+melanoma+-+Results+of+a+prospective+study+of+1288+patients.">Ultrasound examination of regional lymph nodes significantly improves early detection of locoregional metastases during the follow-up of patients with cutaneous melanoma - Results of a prospective study of 1288 patients.</a> Cancer. 88 (11), 2534-2539 (2000).</li><li>Olmedo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+lymph+node+ultrasound+prior+to+sentinel+lymph+node+biopsy+in+384+patients+with+melanoma:+a+cost-effectiveness+analysis.">Use of lymph node ultrasound prior to sentinel lymph node biopsy in 384 patients with melanoma: a cost-effectiveness analysis.</a> Actas Dermo-Sifiliograficas. 108 (10), 931-938 (2017).</li><li>Voit, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+morphology+criteria+predict+metastatic+disease+of+the+sentinel+nodes+in+patients+with+melanoma.">Ultrasound morphology criteria predict metastatic disease of the sentinel nodes in patients with melanoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (5), 847-852 (2010).</li><li>Hayes, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+cohort+study+of+ultrasound+surveillance+of+regional+lymph+nodes+in+patients+with+intermediate-risk+cutaneous+melanoma.">Prospective cohort study of ultrasound surveillance of regional lymph nodes in patients with intermediate-risk cutaneous melanoma.</a> British Journal of Surgery. 106 (6), 729-734 (2019).</li><li>Ipenburg, N. A., Thompson, J. F., Uren, R. F., Chung, D., Nieweg, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focused+ultrasound+surveillance+of+lymph+nodes+following+lymphoscintigraphy+without+sentinel+node+biopsy:+a+useful+and+safe+strategy+in+elderly+or+frail+melanoma+patients.">Focused ultrasound surveillance of lymph nodes following lymphoscintigraphy without sentinel node biopsy: a useful and safe strategy in elderly or frail melanoma patients.</a> Annals of Surgical Oncology. 26 (9), 2855-2863 (2019).</li><li>Jayapal, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+between+benign+and+metastatic+cervical+lymph+nodes+using+ultrasound.">Differentiation between benign and metastatic cervical lymph nodes using ultrasound.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences. 11, 338-346 (2019).</li><li>Dankort, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Damsky, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-catenin+signaling+controls+metastasis+in+Braf-activated+Pten-deficient+melanomas.">&#946;-catenin signaling controls metastasis in Braf-activated Pten-deficient melanomas.</a> Cancer Cell. 20 (6), 741-754 (2011).</li><li>Xie, X., Koh, J. Y., Price, S., White, E., Mehnert, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atg7+overcomes+senescence+and+promotes+growth+of+BrafV600E-driven+melanoma.">Atg7 overcomes senescence and promotes growth of BrafV600E-driven melanoma.</a> Cancer Discovery. 5 (4), 410-423 (2015).</li><li>Kohler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cutaneous+melanoma+induced+by+mutant+BRaf+arises+from+expansion+and+dedifferentiation+of+mature+pigmented+melanocytes.">Mouse cutaneous melanoma induced by mutant BRaf arises from expansion and dedifferentiation of mature pigmented melanocytes.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 679-693 (2017).</li><li>Yuan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenformin+enhances+the+therapeutic+benefit+of+BRAF(V600E)+inhibition+in+melanoma.">Phenformin enhances the therapeutic benefit of BRAF(V600E) inhibition in melanoma.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (45), 18226-18231 (2013).</li><li>Marsh Durban, V., Deuker, M. M., Bosenberg, M. W., Phillips, W., McMahon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+AKT+dependency+displayed+by+mouse+models+of+BRAFV600E-initiated+melanoma.">Differential AKT dependency displayed by mouse models of BRAFV600E-initiated melanoma.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (12), 5104-5118 (2013).</li><li>Hooijkaas, A. I., Gadiot, J., vander Valk, M., Mooi, W. J., Blank, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+in+an+inducible+murine+model+of+melanoma.">Targeting BRAFV600E in an inducible murine model of melanoma.</a> American Journal of Pathology. 181 (3), 785-794 (2012).</li><li>Steinberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+inhibition+alleviates+immune+suppression+in+murine+autochthonous+melanoma.">BRAF inhibition alleviates immune suppression in murine autochthonous melanoma.</a> Cancer Immunology Research. 2 (11), 1044-1050 (2014).</li><li>Vitiello, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumoral+effects+of+attenuated+Listeria+monocytogenes+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+melanoma.">Antitumoral effects of attenuated Listeria monocytogenes in a genetically engineered mouse model of melanoma.</a> Oncogene. 38 (19), 3756-3762 (2019).</li><li>Moon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Zhao, L., Zhan, Y. T., Rutkowski, J. L., Feuerstein, G. Z., Wang, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+2-and+3-dimensional+assessment+of+tumor+volume+and+vascular+density+by+ultrasonography+in+a+transgenic+mouse+model+of+mammary+carcinoma.">Correlation between 2-and 3-dimensional assessment of tumor volume and vascular density by ultrasonography in a transgenic mouse model of mammary carcinoma.</a> Journal of Ultrasound in Medicine. 29 (4), 587-595 (2010).</li></ol>

De data som erhålls i denna studie intygar förmågan av ultraljud imaging att övervaka den metastaserande medverkan av inguinallymfknutor lymfkörtlar i Braf/Pten mus modell av metastaserad melanom. Som visats tidigare16 är denna teknik särskilt användbar för att bedöma effekten av läkemedelsbehandling. Detta beror på att det gör det möjligt att övervaka förändringen i lymfkörtelvolymen hos samma djur över tiden, genom att jämföra de mätningar som samlats in vid t1 <...

Melanom är en aggressiv form av hudcancer som ofta sprider sig till andra hudplatser (subkutana metastaser), liksom till lymfkörtlar, lungor, lever, hjärna och ben1. Under det senaste decenniet har nya läkemedel introducerats i klinisk praxis och har bidragit till att förbättra livslängden för metastaserande melanompatienter. Begränsningar kvarstår dock, inklusive variabel tid till och grad av svar, allvarliga biverkningar och uppror av förvärvad resistens1. Därför är det viktigt att upptäcka metastaserad spridning i dess tidiga skeden, det vill säga när det kommer till de lokala lymfkörtlarna.
En biopsi av de lokala lymfkörtlarna (sentinel lymfkörtlar) utförs vanligtvis för att kontrollera förekomsten av melanomceller. Ultraljud imaging håller dock på att få fäste som en icke-invasiv metod för att upptäcka ögonbevarande engagemang, eftersom det överträffar klinisk utvärdering och kan bidra till att undvika en onödig biopsi2,3,4. Dessutom verkar ultraljud imaging lämpligt för lymfkörteln övervakning, särskilt vid hög ålder och/eller samsjuklighet5,6. De funktioner som detekteras genom ultraljud analys och tillåter differentiering mellan normala och ögonbevarande lymfkörtlar omfattar ökad storlek (volym), förändring av form från oval till rund, oregelbunden marginal, förändrat ekogent mönster och förändrad (ökad) vaskulärisering7.
Tyr::CreER+, BrafCA/+, Ptenlox/lox genetiskt modifierade möss (Braf/Pten möss) har nyligen gjorts tillgängliga för forskarsamhället som en vävnadsspecifik och inducerbar modell för metastaserat melanom8. I denna djurmodell utvecklas primära tumörer mycket snabbt: de blir synliga inom 2-3 veckor efter induktion av övergången från wild-type (wt) Braf till BrafV600E och förlusten av Pten, medan de når en volym på 50-100 mm3 inom 4 veckor. Under de följande 2 veckorna åtföljs tillväxten av den primära tumören av en progressiv ökning av metastaserad börda i andra hudplatser, lymfkörtlar och lungor.
Braf/Pten möss har använts i stor utsträckning för flera ändamål, inklusive dissekering av signalvägar involverade i melanomgenes9,10, identifiering av melanomceller av ursprung11,12,13 och testning av nya terapeutiska alternativ när det gäller både riktad terapi och immunterapi8,14,15,16 . Specifikt använde vi Braf/Pten möss för att visa att försvagade Listeria monocytogenes (Lmat) fungerar som ett anti-melanom vaccin. När det administreras systemiskt i den terapeutiska inställningen är Lmat inte associerad med övergripande toxicitet eftersom den selektivt ackumuleras på tumör platser. Dessutom orsakar det en anmärkningsvärd minskning av primär melanom massa och en minskning av metastaserad börda i lymfkörtlar och lungor. På molekylär nivå orsakar Lmat apoptotisk avlivning av melanomceller, vilket åtminstone delvis beror på icke-cell-autonoma aktiviteter (rekrytering på plats av CD4+ och CD8 + T lymfocyter)16.
När Braf/Pten möss används för melanom modellering, tillväxten av primära tumörer och subkutana metastaser kan övervakas av caliper mätningar. Lymfkörtlarnas och lungornas inblandning måste dock undersökas med hjälp av en alternativ teknik, möjligen en icke-invasiv teknik som gör det möjligt för forskare att följa samma djur över tid. Detta dokument beskriver användningen av ultraljud imaging (figur 1), tillsammans med en efterföljande 3D volymetrisk analys av erhållna data, för longitudinell övervakning av ökningen av storlek (volym) av inguinallymfknutor lymfkörtlar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-hydroxytamoxifen</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H6278</td>
			<td>drug used for tumor induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>013590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blu gel</td>
			<td>Sooft Ialia</td>
			<td></td>
			<td>ophthalmic solution gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAFV600E antibody</td>
			<td>Spring Bioscience Corporation</td>
			<td>E19290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo (isoflorane)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td></td>
			<td>liquid for gaseous anaesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MLANA antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>M2-7C10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma gel</td>
			<td>Parker</td>
			<td></td>
			<td>electrode gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transonic gel clear</td>
			<td>Telic SAU</td>
			<td></td>
			<td>ultrasound gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet</td>
			<td>Reckitt Benckiser IT</td>
			<td></td>
			<td>depilatory cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Dual Anesthesia System</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Isoflurane-based anesthesia system equipped with nose cone and induction chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS linear probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS imaging station and Advancing Physiological Monitoring Unit endowed with heated board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Lab</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>software platform for ultrasound image post-processing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma

Tyr::CreER+, BrafCA/+, Ptenlox/lox genetiskt konstruerade möss (Braf/Pten möss) används ofta som en in vivo-modell av metastaserat melanom. När en primär tumör har framkallats av tamoxifenbehandling observeras en ökning av metastaserad börda inom 4-6 veckor efter induktion. Detta dokument visar hur Ultra-High-Frequency UltraSound (UHFUS) imaging kan utnyttjas för att övervaka ökningen av metastaserad inblandning av de inguinallymfknutna lymfkörtlarna genom att mäta ökningen av deras volym.
UHFUS-systemet används för att skanna bedövade möss med en UHFUS linjär sond (22-55 MHz, axiell upplösning 40 μm). B-lägesbilder från de inguinallymfknutna lymfkörtlarna (både vänster och höger sida) förvärvas i en kortaxlig vy, placera djuren i dorsala recumbency. Ultraljudsjournaler förvärvas med hjälp av en stegstorlek på 44 μm på en motoriserad mekanisk arm. Efteråt importeras tvådimensionella (2D) B-läge förvärv till mjukvaruplattformen för ultraljud bild efterbehandling, och inguinallymfknutor lymfkörtlar identifieras och segmenteras semi-automatiskt i de förvärvade tvärsnitts 2D-bilderna. Slutligen erhålls en total rekonstruktion av den tredimensionella (3D) volymen automatiskt tillsammans med renderingen av lymfkörtelvolymen, som också uttrycks som en absolut mätning.
Denna icke-invasiva in vivo-teknik tolereras mycket väl och möjliggör schemaläggning av flera bildbehandlingssessioner på samma försöksdjur under 2 veckor. Det är därför idealiskt att bedöma effekten av farmakologisk behandling på metastaserad sjukdom.

Efter hudmålning av Tyr::CreER+, BrafCA/+,Ptenlox/lox möss med 4-HT induceras Cre-aktivitet, på grund av vilken det finns en strömbrytare på genomisk nivå från wt Braf till BrafV600E, medan Pten går förlorad (figur 3A). På 2-3 veckor utvecklar möss primära tumörer på plats med 100% penetrance. Efter fyra veckor från 4-HT behandling (t0), primära tumörer nå en volym av 50-100 mm3, och deras tillväxt kan mätas me...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

Melanom är en mycket aggressiv sjukdom som snabbt sprider sig till andra organ. Detta protokoll beskriver tillämpningen av ultra-högfrekvent ultraljud imaging, tillsammans med 3D rendering, för att övervaka volymen av inguinallymfknutor lymfkörtlar i Braf/Pten mus modell av ögonbevarande melanom.

Analys av lymfkörtelvolym av ultrahögfrekvent ultraljudsavbildning i Braf/Pten genetiskt konstruerad musmodell av melanom

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Vår metod gör det möjligt att övervaka ökningen av metastaserad inblandning av inguinallymfknutor lymfkörtlar genom att mäta ökningen av deras volym. Denna oinvasiva metod tolereras mycket väl, därför kan flera bildbehandlingssessioner schemaläggas på samma försöksdjur under loppet av två veckor. Denna metod är idealisk för att bedöma effekten av farmakologisk behandling på metastaserad sjukdom.Vi tillämpade denna metod på Braf / Pten melanom modell, men i princip kan den anpassas för att bedöma effekten av olika läkemedel i en mängd prekliniska musmodeller av metastaserad cancer. Dr. Marianna Vitiello, en postdoktor från mitt laboratorium, och Dr.Claudia Kusmic, forskare vid IFC-CNR. För melanominduktion, applicera tre mikroliter av fem-millimolar 4-hydroxytamoxifen på ungefär en kvadratcentimeter rakad hud i övre ryggen tre dagar i rad.Sex veckor efter hudmålning, använd bromsok för att mäta volymen av den primära tumören, och så småningom av subkutana metastaser. Använd sedan ultraljudsavbildning för att mäta volymen av de inguinallymfknutna lymfkörtlarna. Efter att ha analyserat de primära tumör och lymfkörtlar genom visuell inspektion, punkt dem för histologiska studier.Efter att ha bekräftat anestesi, överför djuret till en uppvärmd bräda på den ultrahögfrekventa ultraljudsavbildningsstationen och håller djuret i en supin position. Justera brädtemperaturen med hjälp av en rektalsond smörjd med petroleumgel för att bibehålla musens kroppstemperatur i det fysiologiska intervallet. Täck fram- och bakpottarna med ledande pasta och tejpa fast dem på EKG-plattelektroderna inbäddade i brädan.Kontrollera att de fysiologiska parametrarna är korrekt förvärvade och visade. Ta bort hår från båda inguinallymfknutor genom att applicera ett depilatoriskt medel och täck dem med ett akustiskt kopplingsmedium. Kläm sedan fast den ultrahögfrekventa ultraljuds linjärsonden i en specialiserad 3D-motor inbäddad i bildstationen, vilket möjliggör automatisk och stegvis rörelse av sonden.Korrekt orientera och justera positionen för ultraljudssonden för att få kortåtkomst bilder av den inguinallymfknutor lymfkörteln och placera regionen av intresse focal zone. Ställ in skanningsavståndet mellan två och fem millimeter, stegstorlek till 44 mikrometer med ett resultat på 46 till 114 skanningssteg per lymfkörtelskiva och en förvärvstid på en till tre minuter per djur. Skanna hela volymen av den inguinallymfknutna lymfkörteln som en sekvens av 2D B-lägesbilder, förvärva bilder på flera nivåer genom linjär rörelse av givaren med stegstorlekar på en mikrometerskala för att generera 3D-data när det gäller andning och hjärt-gated cine loopar.Efter avbildning lagrar du de förvärvade bilderna digitalt i råformat för ytterligare offlineanalyser. För efterbehandling av ultraljudsbilder öppnar du datauppsättningen för 3D-inguinallymfknutor lymfkörtelbilder, väljer multisegmentmetod och trycker på Start-knappen för att visualisera både aktuella bildrutor och miniatyrbilder för alla bildrutor som motsvarar varje bild som togs under 3D-förvärvet. Välj miniatyren av den första bildrutan där lymfkörteln är uppenbar för att ladda den i konturvyn.I konturvyn vänsterklickar du på musen för att släppa punkter längs lymfkörtelns kant. När önskat antal punkter har ställts in, slicka höger för att slutföra konturen. När den första konturen är klar använder du miniatyrvyn för att välja nästa bild för konturering.Om det behövs hoppar du över flera bilder mellan konturerna för att minska antalet manuella spår som behövs för varje 3D-volym. Upprepa den här processen tills hela volymen har beskrivits och klicka sedan på Slutför. När du är i 3D-lägesfönstret klickar du på volymmätningsikonen under bildvisningsområdet för att visualisera lymfkörtelvolymens numeriska värde och aktiverar ytvyn med 3D-renderingen av lymfkörtelvolymen.Behandling av möss med 4-hydroxytamoxifen inducerar CreER enzymaktivitet, vilket orsakar en övergång på genomisk nivå från wild-type Braf till muterad Braf V600E, medan Pten går förlorad. Fyra veckor efter 4-hydroxytamoxifen behandling, primära tumörer når en volym av 50 till 100 kubik millimeter och deras tillväxt kan mätas med kalibrar i ytterligare två veckor, vilket visar en gradvis ökning av pigmentering observeras i ljumskiga lymfkörtlar. Melanin insättningar beror alltid på förekomsten av metastasized melanom celler, som bekräftas av immunohistochemical färgning av melanom antigen MelanA och Braf V600E.I slutet av segmenteringsfasen visade alla sektioner överlägget av lymfkörtelns yttre kontur. 3D renderingar av en rätt inguinallymfknutor lymfkörteln, analyseras vid fyra, fem och sex veckor efter 4-HT behandling visas här. Ökningen av volymen av vänster och höger inguinallymfknutor lymfkörtlar av samma djur över tiden kvantifierades också.Det rekommenderas att koppla ultraljud imaging med lämplig immunohistochemical färgning, så att förekomsten av cancerceller bekräftas på molekylär nivå. Förutom lymfkörtlar kan volymen av subkutan metastasering också övervakas över tid med hjälp av ultraljud imaging. Om tidsramen på två veckor är för kort för att uppskatta effekterna av det läkemedel som studeras, välj en mer perifer induktionsplats eller en mindre tumörbenägen genotyp.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

En genetiskt konstruerad musmodell av sporadisk kolorektal cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

Utnyttja högupplöst ultraljud för att övervaka tumör uppkomsten och tillväxten i genmanipulerade pankreascancer modeller

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

In vitro inrättande av en genetiskt modifierad murin huvud och hals cancer cellinjer med ett Adeno-associerat virus-Cas9 system

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Ultraljud-guidad ortotopisk implantation av murin Pancreatic ductal adenocarcinom

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

Kvantifiering av tumörcellviddhesion i lymfkörteln Cryosections

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Upptäckt av lungtumörprogression hos möss av ultraljudsavbildning

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Sentinel Lymph Node Mapping and Biopsy for Endometrial Cancer at Early Stage with Laparoscopy

Sentinel Lymfkörtel mappning och biopsi för endometriecancer i tidigt skede med laparoskopi

Sentinel lymph node (SLN) mapping and biopsy is a promising technique for visualizing and evaluating lymph node status in cancer. This approach has been ...

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

En robust upptäcktsplattform för identifiering av nya medlare av melanommetastaser

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

Molekylära och immunologiska tekniker i en genetiskt konstruerad musmodell av gastrointestinal stromal tumör

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

Non-Invasive PET/MR Imaging in an Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma

Icke-invasiv PET / MR-avbildning i en ortotopisk musmodell av hepatocellulärt karcinom

Preclinical experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate human disease represent an important tool to study tumorigenesis and ...