Name: analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma
Uploaded: 2021-09-08T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Yazarlar, hayvan prosedürleri konusundaki yardımları için S. Burchielli'ye (FTGM, Pisa) teşekkür eder. Bu çalışma ISPRO-Istituto per lo Studio la Prevenzione e la Rete Oncologica tarafından LP'ye kurumsal fon sağlanarak desteklenmiştir; MFAG #17095, AIRC-Associazione Italiana Ricerca sul Cancro tarafından LP'ye verildi.

Burada açıklanan tüm yöntemler İtalya Sağlık Bakanlığı tarafından onaylanmıştır (hayvan protokolleri #754/2015-PR ve #684/2018-PR).
1. Melanom indüksiyonu
NOT: Bu çalışmada altı haftalık Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox fareler [B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten)] kullanılmıştır (bkz.
<ol><li>Far...

<ol>
	<li>Schvartsman, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Management+of+metastatic+cutaneous+melanoma:+updates+in+clinical+practice.">Management of metastatic cutaneous melanoma: updates in clinical practice.</a> Therapeutic Advances in Medical Oncology. 11, 1758835919851663 (2019).</li><li>Blum, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+examination+of+regional+lymph+nodes+significantly+improves+early+detection+of+locoregional+metastases+during+the+follow-up+of+patients+with+cutaneous+melanoma+-+Results+of+a+prospective+study+of+1288+patients.">Ultrasound examination of regional lymph nodes significantly improves early detection of locoregional metastases during the follow-up of patients with cutaneous melanoma - Results of a prospective study of 1288 patients.</a> Cancer. 88 (11), 2534-2539 (2000).</li><li>Olmedo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+lymph+node+ultrasound+prior+to+sentinel+lymph+node+biopsy+in+384+patients+with+melanoma:+a+cost-effectiveness+analysis.">Use of lymph node ultrasound prior to sentinel lymph node biopsy in 384 patients with melanoma: a cost-effectiveness analysis.</a> Actas Dermo-Sifiliograficas. 108 (10), 931-938 (2017).</li><li>Voit, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+morphology+criteria+predict+metastatic+disease+of+the+sentinel+nodes+in+patients+with+melanoma.">Ultrasound morphology criteria predict metastatic disease of the sentinel nodes in patients with melanoma.</a> Journal of Clinical Oncology. 28 (5), 847-852 (2010).</li><li>Hayes, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+cohort+study+of+ultrasound+surveillance+of+regional+lymph+nodes+in+patients+with+intermediate-risk+cutaneous+melanoma.">Prospective cohort study of ultrasound surveillance of regional lymph nodes in patients with intermediate-risk cutaneous melanoma.</a> British Journal of Surgery. 106 (6), 729-734 (2019).</li><li>Ipenburg, N. A., Thompson, J. F., Uren, R. F., Chung, D., Nieweg, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focused+ultrasound+surveillance+of+lymph+nodes+following+lymphoscintigraphy+without+sentinel+node+biopsy:+a+useful+and+safe+strategy+in+elderly+or+frail+melanoma+patients.">Focused ultrasound surveillance of lymph nodes following lymphoscintigraphy without sentinel node biopsy: a useful and safe strategy in elderly or frail melanoma patients.</a> Annals of Surgical Oncology. 26 (9), 2855-2863 (2019).</li><li>Jayapal, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+between+benign+and+metastatic+cervical+lymph+nodes+using+ultrasound.">Differentiation between benign and metastatic cervical lymph nodes using ultrasound.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences. 11, 338-346 (2019).</li><li>Dankort, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Damsky, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-catenin+signaling+controls+metastasis+in+Braf-activated+Pten-deficient+melanomas.">&#946;-catenin signaling controls metastasis in Braf-activated Pten-deficient melanomas.</a> Cancer Cell. 20 (6), 741-754 (2011).</li><li>Xie, X., Koh, J. Y., Price, S., White, E., Mehnert, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atg7+overcomes+senescence+and+promotes+growth+of+BrafV600E-driven+melanoma.">Atg7 overcomes senescence and promotes growth of BrafV600E-driven melanoma.</a> Cancer Discovery. 5 (4), 410-423 (2015).</li><li>Kohler, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+cutaneous+melanoma+induced+by+mutant+BRaf+arises+from+expansion+and+dedifferentiation+of+mature+pigmented+melanocytes.">Mouse cutaneous melanoma induced by mutant BRaf arises from expansion and dedifferentiation of mature pigmented melanocytes.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 679-693 (2017).</li><li>Yuan, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenformin+enhances+the+therapeutic+benefit+of+BRAF(V600E)+inhibition+in+melanoma.">Phenformin enhances the therapeutic benefit of BRAF(V600E) inhibition in melanoma.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (45), 18226-18231 (2013).</li><li>Marsh Durban, V., Deuker, M. M., Bosenberg, M. W., Phillips, W., McMahon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+AKT+dependency+displayed+by+mouse+models+of+BRAFV600E-initiated+melanoma.">Differential AKT dependency displayed by mouse models of BRAFV600E-initiated melanoma.</a> Journal of Clinical Investigation. 123 (12), 5104-5118 (2013).</li><li>Hooijkaas, A. I., Gadiot, J., vander Valk, M., Mooi, W. J., Blank, C. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+BRAFV600E+in+an+inducible+murine+model+of+melanoma.">Targeting BRAFV600E in an inducible murine model of melanoma.</a> American Journal of Pathology. 181 (3), 785-794 (2012).</li><li>Steinberg, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+inhibition+alleviates+immune+suppression+in+murine+autochthonous+melanoma.">BRAF inhibition alleviates immune suppression in murine autochthonous melanoma.</a> Cancer Immunology Research. 2 (11), 1044-1050 (2014).</li><li>Vitiello, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumoral+effects+of+attenuated+Listeria+monocytogenes+in+a+genetically+engineered+mouse+model+of+melanoma.">Antitumoral effects of attenuated Listeria monocytogenes in a genetically engineered mouse model of melanoma.</a> Oncogene. 38 (19), 3756-3762 (2019).</li><li>Moon, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Zhao, L., Zhan, Y. T., Rutkowski, J. L., Feuerstein, G. Z., Wang, X. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+2-and+3-dimensional+assessment+of+tumor+volume+and+vascular+density+by+ultrasonography+in+a+transgenic+mouse+model+of+mammary+carcinoma.">Correlation between 2-and 3-dimensional assessment of tumor volume and vascular density by ultrasonography in a transgenic mouse model of mammary carcinoma.</a> Journal of Ultrasound in Medicine. 29 (4), 587-595 (2010).</li></ol>

Bu çalışmada elde edilen veriler, ultrason görüntülemenin metastatik melanomun Braf/Pten fare modelinin inguinal lenf nodlarının metastatik tutulumunu izleme yeteneğini kanıtlamaktadır. Daha önce gösterildiği gibi16, bu teknik özellikle ilaç tedavisinin etkinliğini değerlendirmek için yararlıdır. Bunun nedeni, t1 ve  t2'de toplanan ölçümleri t0'da toplananlarla karşılaştırarak, aynı hayvandaki lenf nodu hacmindeki değişimi...

Melanom, sıklıkla diğer cilt bölgelerine (deri altı metastazları) ve ayrıca lenf düğümlerine, akciğerlere, karaciğere, beyne ve kemiklere yayılan agresif bir cilt kanseri şeklidir1. Son on yılda, yeni ilaçlar klinik uygulamaya girmiş ve metastatik melanom hastalarının yaşam beklentisinin iyileştirilmesine katkıda bulunmuştur. Bununla birlikte, değişken yanıt süresi ve derecesi, ciddi yan etkiler ve edinilmiş direncin isyanı dahil olmak üzere sınırlamalar devam etmektedir1. Bu nedenle, metastatik yayılımı erken aşamalarında, yani lokal lenf düğümlerine ulaştığında tespit etmek çok önemlidir.
Lokal lenf düğümlerinin (sentinel lenf düğümleri) biyopsisi genellikle melanom hücrelerinin varlığını kontrol etmek için yapılır. Bununla birlikte, ultrason görüntüleme, klinik değerlendirmeden daha iyi performans gösterdiği ve gereksiz bir biyopsiden kaçınmaya yardımcı olabileceği için metastatik tutulumu tespit etmek için invaziv olmayan bir yöntem olarak kabul edilmektedir2,3,4. Ayrıca, ultrason görüntüleme, özellikle ileri yaş ve/veya komorbiditelerde5,6 lenf nodu sürveyansı için uygun görünmektedir. Ultrason analizi ile saptanan ve normal ve metastatik lenf nodları arasındaki farklılaşmaya izin veren özellikler, artan boyut (hacim), ovalden yuvarlaka şekil değişikliği, düzensiz marj, değişmiş ekojenik patern ve değişmiş (artmış) vaskülarizasyondan oluşur7.
Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox genetiği değiştirilmiş fareler (Braf/Pten fareleri) yakın zamanda metastatik melanom için dokuya özgü ve indüklenebilir bir model olarak bilimsel topluluğa sunulmuştur8. Bu hayvan modelinde, primer tümörler çok hızlı bir şekilde gelişir: vahşi tip (wt) Braf'tan BrafV600E'ye geçişin ve Pten kaybının indüklenmesinden sonraki 2-3 hafta içinde görünür hale gelirlerken, 4 hafta içinde 50-100 mm3'lük bir hacme ulaşırlar. Takip eden 2 hafta içinde, primer tümörün büyümesine, diğer cilt bölgelerinde, lenf düğümlerinde ve akciğerlerde metastatik yükte ilerleyici bir artış eşlik eder.
Braf/Pten fareleri, melanomagenezde rol oynayan sinyal yolaklarının diseksiyonu9,10, menşe melanom hücrelerinin tanımlanması11,12,13 ve hem hedefe yönelik tedavi hem de immünoterapi açısından yeni terapötik seçeneklerin test edilmesi dahil olmak üzere birçok amaç için yaygın olarak kullanılmaktadır8,14,15,16 . Spesifik olarak, zayıflatılmış Listeria monocytogenes'in (Lmat) bir anti-melanom aşısı olarak çalıştığını göstermek için Braf / Pten farelerini kullandık. Terapötik ortamda sistemik olarak uygulandığında, Lmat, tümör bölgelerinde seçici olarak biriktiği için genel toksisite ile ilişkili değildir. Ayrıca, primer melanom kütlesinde belirgin bir azalmaya ve lenf nodlarında ve akciğerlerde metastatik yükte bir azalmaya neden olur. Moleküler düzeyde, Lmat, melanom hücrelerinin apoptotik olarak öldürülmesine neden olur, bu da en azından kısmen, hücre otonom olmayan aktivitelere (CD4 + ve CD8 + T lenfositlerinin yerinde işe alınması) bağlıdır16.
Melanom modellemesi için Braf/Pten fareleri kullanıldığında, primer tümörlerin ve deri altı metastazlarının büyümesi kumpas ölçümleri ile izlenebilir. Bununla birlikte, lenf düğümlerinin ve akciğerlerin tutulumu, araştırmacıların zaman içinde aynı hayvanı takip etmelerini sağlayan alternatif bir teknik, muhtemelen invaziv olmayan bir teknik kullanılarak araştırılmalıdır. Bu yazıda, inguinal lenf nodlarının boyut (hacim) artışının uzunlamasına izlenmesi için ultrason görüntülemenin (Şekil 1) kullanımı, elde edilen verilerin müteakip 3D hacimsel analizi ile birlikte açıklanmaktadır.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-hydroxytamoxifen</td>
			<td>Merck</td>
			<td>H6278</td>
			<td>drug used for tumor induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ (Braf/Pten) mice</td>
			<td>The Jackson Laboratory</td>
			<td>013590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blu gel</td>
			<td>Sooft Ialia</td>
			<td></td>
			<td>ophthalmic solution gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BRAFV600E antibody</td>
			<td>Spring Bioscience Corporation</td>
			<td>E19290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IsoFlo (isoflorane)</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td></td>
			<td>liquid for gaseous anaesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MLANA antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>M2-7C10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sigma gel</td>
			<td>Parker</td>
			<td></td>
			<td>electrode gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transonic gel clear</td>
			<td>Telic SAU</td>
			<td></td>
			<td>ultrasound gel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Veet</td>
			<td>Reckitt Benckiser IT</td>
			<td></td>
			<td>depilatory cream</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact Dual Anesthesia System</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>Isoflurane-based anesthesia system equipped with nose cone and induction chamber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX550S</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS linear probe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo 3100</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Imaging Station</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>UHFUS imaging station and Advancing Physiological Monitoring Unit endowed with heated board</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vevo Lab</td>
			<td>Fujifilm, Visualsonics Inc.</td>
			<td></td>
			<td>software platform for ultrasound image post-processing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of lymph node volume by ultra-high-frequency ultrasound imaging in the braf/pten genetically engineered mouse model of melanoma

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox genetiği değiştirilmiş fareler (Braf/Pten fareleri), metastatik melanomun in vivo modeli olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Tamoksifen tedavisi ile primer tümör indüklendikten sonra, indüksiyondan sonraki 4-6 hafta içinde metastatik yükte bir artış gözlenir. Bu yazıda, inguinal lenf nodlarının metastatik tutulumundaki artışı, hacimlerindeki artışı ölçerek izlemek için Ultra-Yüksek Frekanslı UltraSound (UHFUS) görüntülemenin nasıl kullanılabileceği gösterilmektedir.
UHFUS sistemi, anestezi uygulanmış fareleri UHFUS lineer prob (22-55 MHz, eksenel çözünürlük 40 μm) ile taramak için kullanılır. Kasık lenf düğümlerinden (hem sol hem de sağ taraftan) B modu görüntüleri, hayvanları dorsal yassılığa yerleştirerek kısa eksenli bir görünümde elde edilir. Ultrason kayıtları, motorlu bir mekanik kol üzerinde 44 μm adım boyutu kullanılarak elde edilir. Daha sonra, iki boyutlu (2D) B-mod alımları, ultrason görüntüsü sonrası işlem için yazılım platformuna aktarılır ve elde edilen kesitsel 2D görüntülerde inguinal lenf düğümleri yarı otomatik olarak tanımlanır ve bölümlere ayrılır. Son olarak, üç boyutlu (3D) hacmin toplam rekonstrüksiyonu, mutlak bir ölçüm olarak da ifade edilen lenf nodu hacminin oluşturulması ile birlikte otomatik olarak elde edilir.
Bu non-invaziv in vivo teknik çok iyi tolere edilir ve 2 hafta boyunca aynı deney hayvanı üzerinde çoklu görüntüleme seanslarının planlanmasına izin verir. Bu nedenle, farmakolojik tedavinin metastatik hastalık üzerindeki etkisini değerlendirmek idealdir.

Tyr::CreER+,BrafCA/+,4-HT'li Ptenlox/lox farelerin cilt boyamasından sonra, genomik düzeyde wt Braf'tan BrafV600E'ye bir geçiş olması nedeniyle Cre aktivitesi indüklenirken, Pten kaybolur (Şekil 3A). 2-3 hafta içinde, fareler% 100 penetransa sahip yerinde primer tümörler geliştirir. 4-HT tedavisinden (t0) dört hafta sonra, primer tümörler 50-100 mm3'lük bir hacme ulaşır ve büyümeleri 2 hafta daha kaliperlerle ?...

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma at JoVE.com

Analysis of Lymph Node Volume by Ultra-High-Frequency Ultrasound Imaging in the Braf/Pten Genetically Engineered Mouse Model of Melanoma

Melanom, hızla diğer organlara yayılan çok agresif bir hastalıktır. Bu protokol, metastatik melanomun Braf / Pten fare modelindeki inguinal lenf düğümlerinin hacmini izlemek için 3D render ile birlikte ultra yüksek frekanslı ultrason görüntülemenin uygulanmasını açıklamaktadır.

Braf/Pten Genetiği Mühendisliğiyle Tasarlanmış Melanom Fare Modelinde Ultra Yüksek Frekanslı Ultrason Görüntüleme ile Lenf Düğümü Hacminin Analizi

Tyr::CreER+,BrafCA/+,Ptenlox/lox&#160;genetically engineered mice (Braf/Pten mice) are widely used as an in vivo model of metastatic melanoma. Once a ...

Yöntemimiz, inguinal lenf nodlarının metastatik tutulumundaki artışın, hacimlerindeki artışı ölçerek izlenmesini sağlar. Bu invaziv olmayan yöntem çok iyi tolere edilir, bu nedenle iki hafta boyunca aynı deney hayvanında birden fazla görüntüleme seansı planlanabilir. Bu yöntem, farmakolojik tedavinin metastatik hastalık üzerindeki etkisini değerlendirmek için idealdir.Bu yöntemi Braf/Pten melanom modeline uyguladık, ancak prensip olarak, metastatik kanserin çeşitli klinik öncesi fare modellerinde çeşitli ilaçların etkinliğini değerlendirmek için uyarlanabilir. Prosedürü gösteren, laboratuvarımdan doktora sonrası bir araştırmacı olan Dr. Marianna Vitiello ve IFC-CNR'de araştırmacı olan Dr. Claudia Kusmic olacak. Melanom indüksiyonu için, üst sırtın yaklaşık bir santimetrekarelik traşlanmış cildine üst üste üç gün boyunca üç mikrolitre beş milimolar 4-hidroksitamoksifen uygulayın.Cilt boyamasından altı hafta sonra, primer tümörün hacmini ve nihayetinde deri altı metastazlarını ölçmek için kumpaslar kullanın. Daha sonra, inguinal lenf düğümlerinin hacmini ölçmek için ultrason görüntüleme kullanın. Primer tümör ve lenf düğümlerini görsel muayene ile analiz ettikten sonra, histolojik çalışmalar için bunları tüketin.Anesteziyi onayladıktan sonra, hayvanı ultra yüksek frekanslı ultrason görüntüleme istasyonunun ısıtılmış bir tahtasına aktarın ve hayvanı sırtüstü pozisyonda tutun. Farenin vücut sıcaklığını fizyolojik aralıkta tutmak için petrol jölesi ile yağlanmış bir rektal prob kullanarak kart sıcaklığını ayarlayın. Ön ve arka pençeleri iletken macunla kaplayın ve tahtaya gömülü EKG plakası elektrotlarına bantlayın.Fizyolojik parametrelerin doğru şekilde alındığını ve görüntülendiğini kontrol edin. Bir tüy dökücü ajan uygulayarak her iki kasık bölgesinden saçları çıkarın ve akustik bir bağlantı ortamı ile kaplayın. Ardından, ultra yüksek frekanslı ultrason lineer probunu görüntüleme istasyonuna gömülü özel bir 3D motora sıkıştırarak probun otomatik ve kademeli olarak hareket etmesini sağlar.Kasık lenf nodunun kısa erişimli görüntülerini elde etmek için ultrason probunun konumunu uygun şekilde yönlendirin ve ayarlayın ve ilgi alanını odak bölgesine yerleştirin. Tarama Mesafesi'ni iki ila beş milimetre arasında, Adım Boyutu'nu lenf nodu dilimi başına 46 ila 114 tarama adımı ve hayvan başına bir ila üç dakikalık bir edinme süresiyle 44 mikrometreye ayarlayın. Kasık lenf nodunun tüm hacmini 2D B modu görüntülerin bir dizisi olarak tarayın, solunum ve kardiyak kapılı sinüs döngüleri açısından 3D veriler üretmek için dönüştürücünün mikrometre ölçeğinde adım boyutlarıyla doğrusal hareketi ile birden fazla seviyede görüntüler elde edin.Görüntülemeden sonra, daha fazla çevrimdışı analiz için elde edilen görüntüleri ham formatta dijital olarak saklayın. Ultrason görüntülerinin son işlenmesi için, 3D inguinal lenf nodu görüntülerinin veri kümesini açın, çok dilimli yöntemi seçin ve 3D alma sırasında yakalanan her görüntüye karşılık gelen tüm karelerin hem geçerli karelerini hem de küçük resimlerini görselleştirmek için Başlat düğmesine basın. Kontur görünümüne yüklemek için lenf nodunun belirgin olduğu ilk karenin küçük resmini seçin.Konturlama görünümünde, lenf nodu sınırı boyunca noktalar bırakmak için fareye sol tıklayın. İstenilen nokta sayısı ayarlandıktan sonra, konturu tamamlamak için sağ yalayın. İlk kontur tamamlandıktan sonra, kontur için bir sonraki görüntüyü seçmek üzere küçük resim görünümünü kullanın.Gerekirse, her 3B birim için gereken manuel izleme sayısını azaltmak için konturlar arasındaki birkaç görüntüyü atlayın. Tüm birim ana hatlarıyla belirtilene kadar bu işlemi tekrarlayın, ardından Son'a tıklayın. 3B mod pencere çalışma alanındayken, lenf nodu hacminin sayısal değerini görselleştirmek için görüntü görüntüleme alanının altındaki hacim ölçümü simgesine tıklayın ve lenf nodu hacminin 3B oluşturulmasıyla yüzey görünümünü etkinleştirin.Farelerin 4-hidroksitamoksifen ile muamele edilmesi, CreER enzim aktivitesini indükleyerek genomik düzeyde vahşi tip Braf'tan mutasyona uğramış Braf V600E'ye geçişe neden olurken, Pten kaybolur. 4-hidroksitamoksifen tedavisinden dört hafta sonra, primer tümörler 50 ila 100 kübik milimetrelik bir hacme ulaşır ve büyümeleri iki hafta daha kaliperler tarafından ölçülebilir, böylece kasık lenf düğümlerinde gözlenen pigmentasyonda kademeli bir artış gösterir. Melanin birikintileri her zaman, melanom antijeni MelanA ve Braf V600E'nin immünohistokimyasal boyanmasıyla doğrulandığı gibi, metastaz yapmış melanom hücrelerinin varlığından kaynaklanmaktadır.Segmentasyon fazının sonunda, tüm bölümler lenf nodunun dış konturunun bindirmesini gösterdi. 4-HT tedavisinden dört, beş ve altı hafta sonra analiz edilen sağ inguinal lenf nodunun 3D görüntüleri burada gösterilmiştir. Aynı hayvanın sol ve sağ inguinal lenf nodlarının zaman içindeki hacmindeki artış da ölçülmüştür.Ultrason görüntülemenin uygun immünohistokimyasal boyama ile birleştirilmesi önerilir, böylece kanser hücrelerinin varlığı moleküler düzeyde doğrulanır. Lenf nodlarının yanı sıra, subkutan metastaz hacmi de ultrason görüntüleme kullanılarak zaman içinde izlenebilir. İki haftalık zaman dilimi, incelenen ilacın etkilerini takdir etmek için çok kısaysa, daha periferik bir indüksiyon bölgesi veya daha az tümöre eğilimli bir genotip seçin.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

Sporadik Kolorektal Kanserin Genetik Olarak Geliştirilmiş Fare Modeli

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Utilizing High Resolution Ultrasound to Monitor Tumor Onset and Growth in Genetically Engineered Pancreatic Cancer Models

Yüksek çözünürlüklü ultrason monitör tümör başlangıçlı ve büyüme genetiği pankreas kanseri modellerinde kullanmak

The LSL-KrasG12D/+; LSL-Trp53R172H/+; Pdx-1-Cre (KPC) mouse model represents an established and frequently used transgenic model to evaluate novel ...

In Vitro Establishment of a Genetically Engineered Murine Head and Neck Cancer Cell Line using an Adeno-Associated Virus-Cas9 System

Adeno-Associated Virus-Cas9 Sistemi Kullanılarak Genetiği Değiştirilmiş Bir Murine Baş ve Boyun Kanseri Hücre Hattı In Vitro Kurulması

The use of primary normal epithelial cells makes it possible to reproducibly induce genomic alterations required for cellular transformation by ...

Ultrasound-Guided Orthotopic Implantation of Murine Pancreatic Ductal Adenocarcinoma

Murine Pankreatik Duktal Adenokarsinomun Ultrason Eşliğinde Ortotopik İmplantasyonu

The recent success of immune checkpoint blockade in melanoma and lung adenocarcinoma has galvanized the field of immuno-oncology as well as revealed the ...

Quantification of Tumor Cell Adhesion in Lymph Node Cryosections

Lenf Nodu Kriyosiyonlarında Tümör Hücre Adezyonunun Ölçülmesi

Tumor-draining lymph nodes (LNs) are not merely filters of tumor-produced waste. They are one of the most common regional sites of provisional residence ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Ultrason Görüntüleme ile Farelerde Akciğer Tümörü İlerlemesinin Saptanması

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Sentinel Lymph Node Mapping and Biopsy for Endometrial Cancer at Early Stage with Laparoscopy

Laparoskopi ile Erken Evrede Endometriyal Kanser için Sentinel Lenf Nodu Haritalama ve Biyopsi

Sentinel lymph node (SLN) mapping and biopsy is a promising technique for visualizing and evaluating lymph node status in cancer. This approach has been ...

A Robust Discovery Platform for the Identification of Novel Mediators of Melanoma Metastasis

Melanom Metastazının Yeni Arabulucularının Belirlenmesi için Sağlam Bir Keşif Platformu

Metastasis is a complex process, requiring cells to overcome barriers that are only incompletely modeled by in vitro assays. A systematic workflow was ...

Molecular and Immunologic Techniques in a Genetically Engineered Mouse Model of Gastrointestinal Stromal Tumor

Gastrointestinal Stromal Tümörün Genetiği Değiştirilmiş Bir Fare Modelinde Moleküler ve İmmünolojik Teknikler

Gastrointestinal stromal tumor (GIST) is the most common human sarcoma and is typically driven by a single mutation in the KIT receptor. Across tumor ...

Non-Invasive PET/MR Imaging in an Orthotopic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma

Hepatosellüler Karsinomun Ortotopik Fare Modelinde Non-İnvaziv PET/MR Görüntüleme

Preclinical experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate human disease represent an important tool to study tumorigenesis and ...