Name: imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing
Uploaded: 2021-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing at JoVE.com

Vi vil gerne takke den virale kerne NRDDC på Jan og Dan Duncan Neurologiske Institut for at producere AAVs og lentivirus, der anvendes i disse eksperimenter. Derudover vil vi gerne takke Baylor College of Medicine Center for Comparative Medicine for musehold og generel vedligeholdelse af de anvendte mus. Vi vil gerne takke American Heart Association for deres støtte under tildeling nummer 20PRE35040011, og BRASS: Baylor Research Advocates for Student Scientists for deres støtte (PJH). Endelig vil vi gerne takke Logos for at give vores laboratorium med Logos X-Clarity elektrophoretic væv clearing system.

Følgende protokol følger alle retningslinjer for dyrepleje for Baylor College of Medicine.
1. Dissektion og vævspræparat
<ol><li>Aflive musen med en overdosis af isoflurane ved at placere musen i en lukket beholder med et håndklæde gennemblødt i isoflurane (eller ved andre IUCAC-godkendte midler).</li>
	<li>Gennemgå dyret transcardially ved hjælp af en 25 G nål med 10 mL iskold PBS, efterfulgt af 10 mL af 4% PFA.</li>
	<li>Dissekere hjernen regionen (eller væv) af interesse.</li>
...

<ol>
	<li>Abbott, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mind+of+a+mouse.">The Mind of a mouse.</a> Cell. 182 (6), 1372-1376 (2020).</li><li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 314 (1165), 1 (1986).</li><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+connectivity+among+morphologically+defined+cell+types+in+adult+neocortex.">Principles of connectivity among morphologically defined cell types in adult neocortex.</a> Science. 350 (6264), (2015).</li><li>Winnubst, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+1,000+projection+neurons+reveals+new+cell+types+and+organization+of+long-range+connectivity+in+the+mouse+brain.">Reconstruction of 1,000 projection neurons reveals new cell types and organization of long-range connectivity in the mouse brain.</a> Cell. 179 (1), 268-281 (2019).</li><li>Araya, R., Vogels, T. P., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+dendritic+spine+neck+changes+are+correlated+with+synaptic+strength.">Activity-dependent dendritic spine neck changes are correlated with synaptic strength.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (28), (2014).</li><li>Bosch, M., Hayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+plasticity+of+dendritic+spines.">Structural plasticity of dendritic spines.</a> Current Opinion in Neurobiology. 22 (3), 383-388 (2012).</li><li>Mart&#237;nez-Cerde&#241;o, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrite+and+spine+modifications+in+autism+and+related+neurodevelopmental+disorders+in+patients+and+animal+models.">Dendrite and spine modifications in autism and related neurodevelopmental disorders in patients and animal models.</a> Developmental Neurobiology. 77 (4), 393-404 (2017).</li><li>Arenkiel, B. R., Ehlers, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+and+imaging+technologies+for+circuit-based+neuroanatomy.">Molecular genetics and imaging technologies for circuit-based neuroanatomy.</a> Nature. 461 (7266), 900-907 (2009).</li><li>Kim, E. H., Chin, G., Rong, G., Poskanzer, K. E., Clark, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+probes+for+neurobiological+sensing+and+imaging.">Optical probes for neurobiological sensing and imaging.</a> Accounts of Chemical Research. 51 (5), 1023-1032 (2018).</li><li>Weissman, T. A., Pan, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainbow:+New+resources+and+emerging+biological+applications+for+multicolor+genetic+labeling+and+analysis.">Brainbow: New resources and emerging biological applications for multicolor genetic labeling and analysis.</a> Genetics. 199 (2), 293-306 (2014).</li><li>Haggerty, D. L., Grecco, G. G., Reeves, K. C., Atwood, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+viral+vectors+in+neuroscience+research.">Adeno-associated viral vectors in neuroscience research.</a> Molecular Therapy - Methods and Clinical Development. 17, 69-82 (2020).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497 (7449), 332-337 (2013).</li><li>Kanning, K. C., Kaplan, A., Henderson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neuron+diversity+in+development+and+disease.">Motor neuron diversity in development and disease.</a> Annual Review of Neuroscience. 33, 409-440 (2010).</li><li>Ledda, F., Paratcha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+dendritic+arbor+patterning.">Mechanisms regulating dendritic arbor patterning.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (24), 4511-4537 (2017).</li><li>Falougy, H. E., Filova, B., Ostatnikova, D., Bacova, Z., Bakos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+morphology+alterations+in+autism+and+possible+role+of+oxytocin.">Neuronal morphology alterations in autism and possible role of oxytocin.</a> Endocrine Regulations. 53 (1), 46-54 (2019).</li></ol>

Før fremkomsten af moderne væv clearing teknikker, studere neuronal morfologi bestod af tidskrævende ektioner, billeddannelse, og genopbygning af tilstødende meget tynde sektioner. Brug af elektrophoretisk væv clearing i kombination med konfokal billeddannelse giver en uhindret visning af komplet neuronal morfologi. Fra intakte dendritiske træer, ned til den mindste synaptiske bouton, billeddannelse og kvantificering neuronal morfologi har aldrig været mere muligt.
Forberedelsen af rens...

Forståelse af den rumlige organisation, mønstre af konnektivitet og morfologi af komplekse tredimensionelle biologiske strukturer er afgørende for afgrænsning af specifikke cellers og vævs funktioner. Dette gælder især i neurovidenskab, hvor der er blevet dedikeret en enorm indsats til at opbygge neuroanatomiske kort over centralnervesystemet i høj opløsning1,2. Nøje undersøgelse af de neuroner, der omfatter disse kort giver varierede morfologier, med forbindelser og steder, der afspejler funktionen af disse forskellige sæt neuroner3,4. Desuden kan undersøgelse af subcellulære strukturer, især dendritiske pigge, informere modenheden af synapser og derved afspejle udviklingsprocesser og neurologiske sygdomstilstande5,6,7. Således er tilgange, der forbedrer billeddannelsesopløsning og gennemløb, afgørende for bedre forståelse af hjernefunktion på alle skalaer.
Nylige fremskridt har udvidet den molekylære og genetiske værktøjskasse til mærkning og manipulation af populationer af neuroner. Udviklingen af nye fluorescerende markører, kombineret med nye metoder til at indføre disse markører i neuroner, giver mulighed for differentieret mærkning af populationer af interagerende neuroner inden for samme dyr eller hjerneprøve8,9,10,11. Fordi lys er spredt af uigennemsigtige lipider, og i betragtning af det høje lipidindhold i hjernevæv, imaging neuronale populationer har primært været begrænset til tynde sektioner eller har påberåbt sig avancerede mikroscropy teknikker (f.eks confocal, multi-foton, og lys-ark mikroskopi) til billede dybe strukturer. Men disse bestræbelser er blevet stærkt styrket af fremskridt inden for væv clearing teknikker. Clear Lipid-udvekslet Acrylamid-hybridiseret Rigid Imaging/immunostaining/in situ hybridisering-kompatibel Tissue-hYdrogel (CLARITY) er en sådan teknik, hvor væv af interesse er infunderes med hydrogel monomers (acrylamid og bis-acrylamid) og derefter vaskes medvaskemidler 12. Hydrogel monomers hybridisere at skabe en stabil 3D hydrogel stillads, der er optisk gennemsigtig og gennemtrængelig for makromolekyle etiketter. Nukleinsyrer og proteiner opretholdes inden for den hybridiserede matrix, mens lipider fjernes af vaskemiddelvasken (Figur 1). Dette resulterer i et stabilt væv, der er stiv nok til at opretholde den oprindelige form og orientering af celler og ikke-lipidmolekyler, mens optisk gennemsigtige nok til nemt at afbilde dybe strukturer ved høj opløsning. Denne vedligeholdelse af vævsstruktur og orientering giver mulighed for billeddannelse af tykke skiver og derved bevare celle-til-celle-forbindelser og rumlige relationer. Da placeringen og tilgængeligheden af proteiner og nukleinsyrer opretholdes under clearingprocessen, er renset væv desuden i stand til at holde udtryksbaserede markører samt eksogene etiketter. Således, CLARITY egner sig som en potent metode til billeddannelse store mængder af dybe hjernestrukturer og forbindelserne mellem disse strukturer ved høj opløsning.
Brugen af CLARITY forbedrer i høj grad tilgange til billeddannelse neuronale populationer. Denne teknik er især dygtig til at generere store mængder billeddata. CLARITY fungerer godt med flere former for proteinbaseret fluorescens. Denne protokol anvender en lentiviral-baseret tilgang til tyndt etiketceller med EGFP og tdTomato; Der er dog rutinemæssigt blevet anvendt transgene reporter-alleler, der udtrykker tdTomato eller EGFP for at mærke celler til genopbygning. Det er vigtigt at vælge en fluorophore, der er både fotostabil og lys (f.eks. EGFP eller tdTomato). Derudover giver brug af en stærk promotor til at udtrykke fluorophoren overlegen kontrast og billedkvalitet. Ulemperne ved denne teknik opstår, da korrekt analyse af denne store mængde data kan være både arbejds- og tidsintensiv. Specialiserede mikroskoper kan hjælpe med at forbedre gennemløbet og reducere arbejdsbyrden. Men bygning, eje, og / eller drift avancerede mikroskoper er ofte omkostnings-uoverkommelige for mange laboratorier. Dette arbejde præsenterer en høj gennemløb, relativt hurtig og enkel metode til at visualisere store mængder neuralt væv ved høj opløsning ved hjælp af CLARITY væv clearing af store sektioner, kombineret med standard konfokal mikroskopi. Denne protokol beskriver denne fremgangsmåde gennem følgende trin: 1) dissekering og forberedelse af neurale væv, 2) clearing af vævet, 3) montering af vævet, 4) billeddannelse af de forberedte skiver og 5) behandling af fuld skive billeder ved hjælp af mikroskopi visualisering software rekonstruktion og analyse (Figur 2). Disse bestræbelser resulterer i billeder i høj opløsning, der kan bruges til at analysere populationer af neuroner, neuronale forbindelsesmønstre, 3D dendritisk morfologi, dendritisk rygsøjle overflod og morfologi og molekylære udtryksmønstre i intakt hjernevæv.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G x 1&#34; Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Acrylamide (No-Bis)</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>EC-810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoretic Tissue Clearing Solution</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C13001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histodenz</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2158-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel Solution Kit</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C1310X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16%</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1x, 500 mL, 6 bottles/case</td>
			<td>fisher</td>
			<td>MT21040CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VA-044</td>
			<td>Wako</td>
			<td>925-41020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Polymerization System</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Tissue Clearing System II</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C30001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing

Hjerneaktivitet, de elektrokemiske signaler, der overføres mellem neuroner, bestemmes af forbindelsesmønstrene i neuronale netværk og fra morfologien af processer og understrukturer inden for disse neuroner. Som sådan er meget af det, der er kendt om hjernefunktion, opstået sammen med udviklingen inden for billeddannelsesteknologier, der giver yderligere indsigt i, hvordan neuroner er organiseret og forbundet i hjernen. Forbedringer i vævsrydning har gjort det muligt at billeddannelse i høj opløsning af tykke hjerneskiver, lette morfologisk rekonstruktion og analyser af neuronale understrukturer, såsom dendritiske arbors og rygsøjler. I tandem giver fremskridt inden for billedbehandlingssoftware metoder til hurtigt at analysere store billeddatasæt. Dette arbejde præsenterer en relativt hurtig metode til behandling, visualisering og analyse af tykke skiver af mærket neuralt væv ved høj opløsning ved hjælp af CLARITY væv clearing, konfokal mikroskopi, og billedanalyse. Denne protokol vil lette bestræbelserne på at forstå de konnektivitetsmønstre og neuronale morfologier, der karakteriserer sunde hjerner, og de ændringer i disse egenskaber, der opstår i syge hjernetilstande.

Efter billedopsamling blev den repræsentative cellemorfologi analyseret ved hjælp af indlejret statistik og klassificering af scripts i analysesoftwaren. De indsamlede data (Figur 6A) afspejler, at neuron 2 har en større dendritisk struktur med en højere tæthed af rygsøjler. Som helhed tyder dataene på, at neuron 2 har en mere kompleks dendritisk struktur sammenlignet med neuron 1. For at underbygge dette resultat blev der udført standard Sholl-analyse, hvilket bekræfter, at neuron ...

Watch this Scientific Journal Video about Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing at JoVE.com

Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing

Neuronal dendritisk morfologi ligger ofte til grund for funktion. Faktisk manifesterer mange sygdomsprocesser, der påvirker udviklingen af neuroner, sig med en morfologisk fænotype. Denne protokol beskriver en enkel og kraftfuld metode til analyse af intakte dendritiske arbors og deres tilknyttede pigge.

Billeddannelse og kvantificering af intakte neuronale dendritter via CLARITY Tissue Clearing

Brain activity, the electrochemical signals passed between neurons, is determined by the connectivity patterns of neuronal networks, and from the ...

Denne protokol vil gøre det muligt for forskere at besvare vigtige spørgsmål om neuronale mønstre af tilslutningsmuligheder og rumlig organisation, der ligger til grund for funktion inden for et kredsløb. Den største fordel ved denne teknik er, at det muliggør visualisering af neuronale morfologier placeret dybt inde i intakt tredimensionelt væv. Denne metode er ligetil og dermed let reproducerbar.Første gangs eksperimenterere skal være komfortable med at udføre denne teknik. Det er bydende nødvendigt at have en klar vævsprøve for at opnå data af høj kvalitet. Den visuelle demonstration af passende vævsklarheds- og clearingteknikker vil muliggøre let reproducerbare resultater.Til at begynde med skal du placere det hydrogel-nedsænkede hjernevæv i en vakuumkuvøse i tre timer ved 37 grader Celsius med minus 90 kilopascal vakuum. Lad røret skrues af, så vakuumet kan dannes korrekt. Vask vævet med PBS i 10 minutter ved stuetemperatur med blid rysten.Placer den polymeriserede vævsprøve i elektroforesekammeret, holde styr på retningen af vævet i kammeret. Fyld kammeret og reservoiret med den medfølgende elektroforese SDS buffer. Kør prøven ved 70 volt, en ampere og 35 grader Celsius med konstant strøm i ca. to timer pr. milliliter væv.Kontroller prøven med jævne mellemrum for tilstrækkelig rydning af hjernevæv ved at fjerne den fra kammeret og erstatte den i samme retning. Når prøven er færdig med at rydde, vaskes den i PBS natten over ved stuetemperatur og pbs erstattes med frisk PBS så ofte som muligt. Efter den endelige vask i PBS vaskes vævet i fem minutter i deioniseret vand ved stuetemperatur tre gange.Vævet vil blive uigennemsigtigt og kan udvide sig. Inkuber vævet i brydningsindekset, der matcher opløsningen i mindst fire timer ved stuetemperatur. Under inkubationen konstrueres et passende huskammer til at afbilde prøven.Start med at bruge et glas slide som base for montering, derefter fastsætte enten gummi eller plast afstandsstykker og sikre dem med super lim, og sørg for, at der ikke er nogen huller. Placer det klare væv i monteringskammeret fyldt med brydningsindeks matching opløsning. Fastgør vævet ved at placere et glascoverlip på toppen og forsegle det med neglelak.Billede dette væv ved at tilføje en dråbe brydningsindeks matchende monteringsopløsning direkte oven på glasset. For at konstruere et stort vævsbilledkammer til væv med mere end en fem millimeter tykkelse skal du bruge en 10 centimeter glasskål med en høj væg. Placer en 50 milliliter konisk rør i midten, og sørg for, at diameteren af røret er stor nok til at acceptere tønden af den anvendte objektive linse.Lav 3% agarose i vand og hæld det i rummet mellem glasskålen og det koniske rør, og lad det derefter køle af i en time. Dette vil danne en ring af solid agarose. Fastgør vævet sikkert til bunden af kammeret ved hjælp af superlim og fyld kammeret med brydningsindeks matching opløsning, som kan begynde at polymerisere, medmindre det bevares fra luften og opbevares ved fire grader Celsius.Hent billedet ved hjælp af et konfokalt mikroskop. Tænd for alt relevant billedudstyr. Sæt prøven på scenen.Nænsomt henfaldsmedierne med målet og danne en kontinuerlig kolonne af medier. Ved hjælp af epifluorescence skal du finde et passende billedfelt. Start med at indstille indstillingerne for opløsning og scanningshastighed.Hvis billeddannelse ved hjælp af en konfokal mikroskop, lukke pinhole for at opnå den mindste optiske sektion og dermed den bedste Z opløsning. Gradvist øge laser magt eller sensor gain indtil et passende billede er opnået med et højt signal-til-støj-forhold. Hvis du bruger standard-EGFP- eller tdTomato-tofarvet billedbehandling, skal du angive indstillingerne for lyssamlingen.Indstil Z-stack parametre baseret på de observerede start- og slutpunkter i vævet. Angiv trinstørrelsen baseret på den ønskede Z-opløsning. Mindre trin størrelser vil give en større Z opløsning, men kan føre til prøve blegning.Når du er tilfreds med indstillingerne for billedopsamling, skal du anskaffe billedet. Sørg for, at billedet har et højt signal-til-støj-forhold og viser forskellige grænser for strukturer. Efter billedopsamling blev den repræsentative cellemorfologi analyseret ved hjælp af indlejret statistik og klassificering af scripts i analysesoftwaren.De indsamlede data afspejler, at Neuron 2 har større end dendritisk struktur med en højere tæthed af rygsøjler sammenlignet med Neuron 1. For at underbygge dette resultat blev standard Scholl-analysen udført, hvilket bekræfter, at Neuron 2 er mere dendritisk kompleks end Neuron 1 som angivet af det øgede antal Scholl-kryds ved 50 til 100 mikrometer fra somaen. Neuron 1 indeholder en større andel af pigge med mere filopodia-lignende former og er en umoden rygsøjle subtype.Pigge med definerede hoveder, kaldet champignon pigge, sandsynligvis indeholder mere udviklede og modne synapser. Således neuron 2 er mere moden med en højere tæthed af modne pigge. Efter clearing, væv bidder kan farves ved hjælp af traditionelle immunohisto kemi.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Intact Histological Characterization of Brain-implanted Microdevices and Surrounding Tissue

Intakt Histologisk Karakterisering af Brain-implanterede Microdevices og det omgivende væv

Research  into the design and utilization of brain-implanted microdevices, such as  microelectrode arrays, aims to produce clinically relevant devices ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

Imaging Serotonerge Fibers i Mouse Spinal Cord Brug af CLARITY / CUBIC Teknik

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

Optisk Clearing af Mouse centralnervesystemet Brug Passiv CLARITY

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

Langvarig Inkubation af akut neuronalt væv for Elektrofysiologi og Calcium-billeddannelse

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

To-foton Calcium Imaging i Neuronal dendritter i hjernen skiver

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Novel Passive Clearing Methods for the Rapid Production of Optical Transparency in Whole CNS Tissue

Roman passiv Clearing metoder til hurtig fremstilling af optiske gennemsigtighed i hele CNS væv

Since the development of CLARITY, a bioelectrochemical clearing technique that allows for three-dimensional phenotype mapping within transparent tissues, ...

Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy

Overvågning Neuronal overlevelse via langsgående Fluorescens mikroskopi

Standard cytotoxicity assays, which require the collection of lysates or fixed cells at multiple time points, have limited sensitivity and capacity to ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

En hydrofobisk vævsclearingmetode til rottehjernevæv

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Forberedelse voksen Drosophila melanogaster til hele hjernen Imaging under adfærd og Stimuli Svar

We present a method developed specifically to image the whole Drosophila brain during ongoing behavior such as walking. Head fixation and dissection are ...

Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method

Immunostaining af helmonteringskinner med KLARHED Vævsclearingmetoden

The tissue hydrogel delipidation method (CLARITY), originally developed by the Deisseroth laboratory, has been modified and widely used for immunostaining ...