Name: imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing
Uploaded: 2021-04-20T15:00:00
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これらの実験で使用されるAAVとレンチウイルスを生産するためのヤンとダンダンカン神経研究所のウイルスコアNRDDCに感謝したいと思います。また、ベイラー医科大学の比較医学センターに対して、マウスの畜産と使用されたマウスの一般的なメンテナンスに感謝したいと思います。私たちは、賞番号20PRE35040011の下で彼らのサポートのためにアメリカ心臓協会に感謝したいと思います, そしてBRASS: 彼らのサポートのための学生科学者のためのベイラー研究提唱者 (PJH).最後に、私たちは、Logos X-Clarity電気泳動組織クリアリングシステムをラボに提供してくれたロゴスに感謝したいと思います。

以下のプロトコルは、ベイラー医科大学のすべての動物ケアガイドラインに従います。
1. 解剖と組織の準備
<ol><li>イオブルランに浸したタオル(または他のIUCAC承認手段)で閉じた容器にマウスを入れることで、イオブルランの過剰摂取でマウスを安楽死させます。</li>
	<li>10 mLの氷冷PBSを用いて25G針を使用して動物を透過して、続いて4%PFAの10mLを使用する。</li>
	<li>目的?...

<ol>
	<li>Abbott, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mind+of+a+mouse.">The Mind of a mouse.</a> Cell. 182 (6), 1372-1376 (2020).</li><li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 314 (1165), 1 (1986).</li><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+connectivity+among+morphologically+defined+cell+types+in+adult+neocortex.">Principles of connectivity among morphologically defined cell types in adult neocortex.</a> Science. 350 (6264), (2015).</li><li>Winnubst, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+1,000+projection+neurons+reveals+new+cell+types+and+organization+of+long-range+connectivity+in+the+mouse+brain.">Reconstruction of 1,000 projection neurons reveals new cell types and organization of long-range connectivity in the mouse brain.</a> Cell. 179 (1), 268-281 (2019).</li><li>Araya, R., Vogels, T. P., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+dendritic+spine+neck+changes+are+correlated+with+synaptic+strength.">Activity-dependent dendritic spine neck changes are correlated with synaptic strength.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (28), (2014).</li><li>Bosch, M., Hayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+plasticity+of+dendritic+spines.">Structural plasticity of dendritic spines.</a> Current Opinion in Neurobiology. 22 (3), 383-388 (2012).</li><li>Mart&#237;nez-Cerde&#241;o, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrite+and+spine+modifications+in+autism+and+related+neurodevelopmental+disorders+in+patients+and+animal+models.">Dendrite and spine modifications in autism and related neurodevelopmental disorders in patients and animal models.</a> Developmental Neurobiology. 77 (4), 393-404 (2017).</li><li>Arenkiel, B. R., Ehlers, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+and+imaging+technologies+for+circuit-based+neuroanatomy.">Molecular genetics and imaging technologies for circuit-based neuroanatomy.</a> Nature. 461 (7266), 900-907 (2009).</li><li>Kim, E. H., Chin, G., Rong, G., Poskanzer, K. E., Clark, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+probes+for+neurobiological+sensing+and+imaging.">Optical probes for neurobiological sensing and imaging.</a> Accounts of Chemical Research. 51 (5), 1023-1032 (2018).</li><li>Weissman, T. A., Pan, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainbow:+New+resources+and+emerging+biological+applications+for+multicolor+genetic+labeling+and+analysis.">Brainbow: New resources and emerging biological applications for multicolor genetic labeling and analysis.</a> Genetics. 199 (2), 293-306 (2014).</li><li>Haggerty, D. L., Grecco, G. G., Reeves, K. C., Atwood, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+viral+vectors+in+neuroscience+research.">Adeno-associated viral vectors in neuroscience research.</a> Molecular Therapy - Methods and Clinical Development. 17, 69-82 (2020).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497 (7449), 332-337 (2013).</li><li>Kanning, K. C., Kaplan, A., Henderson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neuron+diversity+in+development+and+disease.">Motor neuron diversity in development and disease.</a> Annual Review of Neuroscience. 33, 409-440 (2010).</li><li>Ledda, F., Paratcha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+dendritic+arbor+patterning.">Mechanisms regulating dendritic arbor patterning.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (24), 4511-4537 (2017).</li><li>Falougy, H. E., Filova, B., Ostatnikova, D., Bacova, Z., Bakos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+morphology+alterations+in+autism+and+possible+role+of+oxytocin.">Neuronal morphology alterations in autism and possible role of oxytocin.</a> Endocrine Regulations. 53 (1), 46-54 (2019).</li></ol>

現代の組織クリアリング技術の出現前に、神経形態学の研究は、隣接する非常に薄いセクションの時間のかかる断面化、イメージング、および再構築で構成されていました。共焦点画像と組み合わせて電気泳動組織クリアリングを使用すると、完全な神経形態の妨げられないビューを提供します。無傷の樹状樹木から、最小のシナプス・ブトンまで、神経細胞形態のイメージングと定量化は?...

複雑な三次元生物構造の空間的構成、接続性のパターン、形態を理解することは、特定の細胞や組織の機能を解析するために不可欠です。これは、中枢神経系1,2の高解像度神経解剖学的地図を構築することに多大な努力が捧げられてきた神経科学において特に当てはまります。これらのマップを構成するニューロンを綿密に調べると、これらの多様なニューロンのセット3,4の機能を反映した接続と位置を持つ多様な形態が生じます。また、細胞下の構造、特に樹状脊椎の調査は、シナプスの成熟度を知らせることができ、それにより発達過程および神経疾患状態5、6、7を反映することができる。したがって、イメージングの分解能とスループットを向上させるアプローチは、すべてのスケールで脳機能をよりよく理解するために不可欠です。
最近の進歩は、ニューロンの集団をマーキングし、操作するための分子および遺伝的ツールキットを拡大しています。新しい蛍光マーカーの開発は、ニューロンにこれらのマーカーを導入する新しい方法と組み合わせることで、同じ動物または脳サンプル8、9、10、11内の相互作用ニューロンの集団の微分標識を可能にする。光は不透明な脂質によって散乱され、脳組織の脂質含有量が高いため、ニューロン集団のイメージングは主に細い切片に限定されているか、または高度なマイクロスクロピー技術(例えば、共焦点、多光子、光シート顕微鏡)に依存して画像深部構造に依存している。しかし、これらの取り組みは、組織クリア技術の進歩によって大幅に強化されています。透明脂質交換アクリルアミドハイブリダイドハイブリジッドイメージング/免疫染色/その場でハイブリダイゼーション適合組織-hYdrogel(CLARITY)は、対象となる組織にヒドロゲルモノマー(アクリルアミドおよびビスアクリルアミド)を注入し、次いで洗剤12で洗浄する技術の1つである。ヒドロゲルモノマーはハイブリダイズして、光学的に透明で高分子ラベルに透過性のある安定した3Dヒドロゲル足場を作り出します。核酸およびタンパク質は、ハイブリダイズマトリックス内で維持され、一方、脂質は洗浄剤洗浄によって除去される(図1)。これにより、細胞や非脂質分子の元の形状と配向を維持するのに十分な剛性の安定した組織が生じ、光学的に透明化され、高解像度で深部構造を容易に画像化できます。このように組織構造と配向を維持することで、厚いスライスのイメージングが可能になり、細胞間の接続と空間的関係が維持されます。また、クリアリングプロセス中にタンパク質や核酸の位置や入手可能性が維持されるため、クリアされた組織は、外因性標識だけでなく、発現ベースのマーカーを保持することができます。したがって、CLARITYは、大量の深部脳構造とこれらの構造間の接続を高解像度でイメージングするための強力な方法として自分自身を貸します。
CLARITYの使用は、ニューロン集団をイメージングするアプローチを大幅に改善します。この技術は、特に大量のイメージングデータを生成する上で熟達しています。CLARITYは、タンパク質ベースの蛍光の複数の形態でうまく機能します。このプロトコルはレンチウイルスベースのアプローチを利用して、細胞にEGFPとtdTomatoをスパースにラベル付けします。しかし、再構成のために細胞を標識するtdTomatoまたはEGFPを発現するトランスジェニックレポーターアレスが日常的に使用されてきた。光安定性と明るい(例えば、EGFPやtdTomato)の両方である蛍光色素を選択することが重要です。さらに、強力なプロモーターを使用して蛍光素を発現させることで、優れたコントラストと画質が得られます。この手法の欠点は、この大量のデータを適切に分析すると、労力と時間の両方が必要になる可能性がある場合に生じます。特殊な顕微鏡は、スループットの向上と作業負荷の軽減に役立ちます。しかし、高度な顕微鏡の構築、所有、運用は、多くの研究室にとってコストが高い場合が多い。この研究は、標準的な共焦点顕微鏡と組み合わせた大きなセクションのCLARITY組織クリアリングを使用して、高解像度で大量の神経組織を視覚化する高スループット、比較的迅速かつ簡単な方法を提示する。このプロトコルは、このアプローチを次の手順を通して説明します:1)神経組織を解剖して準備する、2)組織を取り除く、組織を取り付ける、4)準備されたスライスをイメージングする、および5)顕微鏡観察可視化ソフトウェアの再構築と分析を使用して完全なスライス画像を処理する(図2)。これらの取り組みは、ニューロンの集団、ニューロン接続パターン、3D樹状形態、樹状脊椎の豊富さと形態、および無傷の脳組織内の分子発現パターンを分析するために使用できる高解像度画像をもたらす。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G x 1&#34; Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Acrylamide (No-Bis)</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>EC-810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoretic Tissue Clearing Solution</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C13001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histodenz</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2158-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel Solution Kit</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C1310X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16%</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1x, 500 mL, 6 bottles/case</td>
			<td>fisher</td>
			<td>MT21040CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VA-044</td>
			<td>Wako</td>
			<td>925-41020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Polymerization System</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Tissue Clearing System II</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C30001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing

脳活動は、ニューロン間で受け渡される電気化学的信号であり、ニューロンネットワークの接続性パターンと、これらのニューロン内のプロセスおよびサブ構造の形態から決定される。したがって、脳機能について知られていることの多くは、ニューロンがどのように組織化され、脳内で接続されているかについてのさらなる洞察を可能にするイメージング技術の発展と一緒に生じています。組織除去の改善により、太い脳スライスの高解像度イメージングが可能になり、樹状樹状の樹状や脊椎などの神経部分構造の形態学的再構築と分析が容易になっています。並行して、画像処理ソフトウェアの進歩により、大規模なイメージングデータセットを迅速に分析できます。この研究は、CLARITY組織クリアリング、共焦点顕微鏡、画像解析を用いて、標識された神経組織の厚いスライスを高解像度で処理、視覚化、分析する比較的迅速な方法を提示する。このプロトコルは、健康な脳を特徴づける接続パターンと神経形態の理解に向けた取り組みを促進し、病気の脳状態で生じるこれらの特性の変化を促進する。

画像取得後、代表的な細胞形態を、組み込み統計を用いて解析し、解析ソフトウェア内でスクリプトを分類した。収集されたデータ(図6A)は、ニューロン2がより大きな樹状構造を有し、より高密度の脊椎を有することを反映している。全体として、データはニューロン2がニューロン1と比較してより複雑な樹状構造を有することを示唆している。この結果を立証するため...

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Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing

神経樹状形態は、しばしば機能の根底にある。実際、ニューロンの発達に影響を与える多くの疾患プロセスは、形態表現型で現れる。このプロトコルは、無傷の樹状樹状の樹状樹状の樹状樹状の、および関連する脊椎を分析するための簡単で強力な方法を記述します。

CLARITY組織クリアリングによるインタクトニューロンデンドライトのイメージングと定量化

Brain activity, the electrochemical signals passed between neurons, is determined by the connectivity patterns of neuronal networks, and from the ...

このプロトコルは、研究者が回路内で機能の根底にある接続性と空間組織のニューロンパターンに関する重要な質問に答えることを可能にする。この技術の主な利点は、無傷の3次元組織の奥深くに位置するニューロン形態の視覚化を可能にすることです。この方法は簡単で、簡単に再現できます。初めての実験者は、この技術を実行して快適でなければなりません。高品質のデータを得るためには、透明な組織サンプルを持つことが不可欠です。適切な組織の明瞭さとクリア技術の視覚的なデモンストレーションは容易に再生可能な結果を可能にする。まず、ヒドロゲル水没した脳組織を真空インキュベーターに3時間、マイナス90キロパスカル真空で摂氏37度に入れます。真空が正しく形成されるようにチューブトップを緩めておいてください。PBSで10分間、穏やかな揺れで室温で洗浄します。重合した組織試料を電気泳動室に入れ、チャンバ内の組織の向きを追跡する。チャンバとリザーバに、供給された電気泳動SDSバッファーを充填します。サンプルを70ボルト、アンペア1個、摂氏35度で、一定の電流で1ミリリットルの組織で約2時間実行します。チャンバーから取り出して同じ方向に置き換えることで、サンプルを定期的にチェックして十分な脳組織のクリアを行います。試料のクリアが終了した後、PBSを室温で一晩洗浄し、できるだけ頻繁にPBSを新鮮なPBSに交換します。PBSでの最後の洗浄に続いて、室温で5分間、脱イオン水で洗浄します。組織は不透明になり、膨張する可能性があります。屈折率整合溶液中の組織を室温で少なくとも4時間インキュベートする。インキュベーション中に、サンプルを画像化するのに適したハウジングチャンバーを構築します。取り付けのベースとしてガラススライドを使用して開始し、ゴムまたはプラスチックのスペーサーのいずれかを置き、穴がないことを確認し、スーパー接着剤でそれらを固定します。透明なティッシュを屈折率の一致解決で事前に満たされた土台の部屋に置く。ガラスカバースリップを上に置き、マニキュアで密封して、ティッシュをしっかりと取り付けます。ガラスの上に直接屈折率一致付け取り付け溶液の滴を加えることによって、この組織を画像化します。厚さが5ミリメートルを超える組織用の大きな組織イメージングチャンバーを構築するには、壁が高い10センチメートルのガラス皿を使用します。50 ミリリットルの円錐形チューブを中央に配置し、チューブの直径が、使用する対物レンズのバレルを受け入れるのに十分な大きさであることを確認します。水に3%アガロースを作り、ガラス皿と円錐形のチューブの間のスペースに注ぎ、1時間冷まします。これは固体アガロースのリングを形成します。スーパー接着剤を使用してチャンバーの底に組織をしっかりと接着し、空気から保存し、摂氏4度で保存しない限り、ポリマー化し始める屈折率一致溶液でチャンバーを充填します。共焦点顕微鏡を用いて画像を取得します。関連するすべての画像機器をオンにします。サンプルをステージに置きます。慎重に目的と浸漬メディアにアプローチし、メディアの連続カラムを形成します。蛍光を用いて、適切な画像分野を見つける。まず、解像度とスキャン速度の設定を行います。共焦点顕微鏡を使用してイメージングする場合は、ピンホールを完全に閉じて最小の光学セクションを得て、したがって最良のZ解像度を得る。信号対雑音比が高い適切な画像が得られるまで、レーザーパワーまたはセンサーゲインを徐々に増加させます。標準のEGFPまたはtdTomato 2色イメージングを利用する場合は、ライトコレクション設定を行います。組織の観測開始点と終点に基づいてZスタックパラメータを設定します。希望の Z 解像度に基づいてステップ サイズを設定します。ステップサイズを小さくするとZ解像度が大きくなりますが、サンプルの漂白につながる可能性があります。画像取得設定に満足した場合は、画像を取得します。画像の信号対雑音比が高く、構造の境界が明確であることを確認します。画像取得後、代表的な細胞形態を、組み込み統計を用いて解析し、解析ソフトウェア内でスクリプトを分類した。収集されたデータは、ニューロン2がニューロン1と比較して脊椎の密度が高い樹状構造よりも大きいことを反映しています。この結果を立証するために、標準的なショル分析が行われ、ニューロン2は、ソーマから50〜100マイクロメートルでショル交差点の増加数によって示されるようにニューロン1よりも樹状的に複雑であると断言した。ニューロン1は、より多くのフィロポディアのような形をした脊椎のより大きな割合を含み、未熟な脊椎サブタイプである。定義された頭を持つ棘, キノコの棘と呼ばれます, おそらく、より発達し、成熟したシナプスが含まれています.したがって、ニューロン2は成熟した脊椎の密度が高いとより成熟している。クリア後、組織チャンクは、従来の免疫組織化学を用いて染色することができる。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Intact Histological Characterization of Brain-implanted Microdevices and Surrounding Tissue

脳移植マイクロデバイス及び周辺組織の無傷の組織学的性状

Research  into the design and utilization of brain-implanted microdevices, such as  microelectrode arrays, aims to produce clinically relevant devices ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

CLARITY / CUBIC技術を用いたマウスの脊髄にセロトニン繊維のイメージング

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

パッシブCLARITYを使用したマウス中枢神経系の光学クリア

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

電気生理学およびカルシウムイメージングのための急性神経組織の長期のインキュベーション

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

脳スライスにおける神経樹状突起における 2 光子カルシウム イメージング

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Novel Passive Clearing Methods for the Rapid Production of Optical Transparency in Whole CNS Tissue

新規パッシブ全体の中枢神経系組織における光透過性の急速な生産のための方法をクリア

Since the development of CLARITY, a bioelectrochemical clearing technique that allows for three-dimensional phenotype mapping within transparent tissues, ...

Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy

縦の蛍光顕微鏡による神経細胞の生存を監視

Standard cytotoxicity assays, which require the collection of lysates or fixed cells at multiple time points, have limited sensitivity and capacity to ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

ラット脳組織の疎水性組織除去法

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

行動と刺激反応の間に全脳イメージングのための成人ショ ウジョウバエメラノガスター を準備する

We present a method developed specifically to image the whole Drosophila brain during ongoing behavior such as walking. Head fixation and dissection are ...

Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method

CLARITY組織クリアリング法による全マウントレティナの免疫染色

The tissue hydrogel delipidation method (CLARITY), originally developed by the Deisseroth laboratory, has been modified and widely used for immunostaining ...