Name: imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing
Uploaded: 2021-04-20T15:00:00
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우리는 이러한 실험에 사용되는 AAV 및 렌즈 바이러스를 생산하기위한 1 월과 댄 던컨 신경 학 연구소의 바이러스 코어 NRDDC에 감사드립니다. 또한, 우리는 마우스 축산 및 사용되는 마우스의 일반적인 유지 보수에 대한 비교 의학에 대한 베일러 대학 의학 센터에 감사드립니다. 20PRE35040011, 황동: 베일러 연구 옹호자들의 지원에 감사드립니다(PJH). 마지막으로, 로고X-선명도 전기전도 조직 정리 시스템을 실험실에 제공한 로고스에게 감사드립니다.

다음 프로토콜은 베일러 의과 대학에 대한 모든 동물 관리 지침을 따릅니다.
1. 해부 및 조직 준비
<ol><li>이소플루란 (또는 다른 IUCAC 승인 수단에 의해) 젖은 수건으로 닫힌 용기에 마우스를 배치하여 이소플루란의 과다 복용으로 마우스를 안락사.</li>
	<li>10mL의 얼음 차가운 PBS를 가진 25 G 바늘을 사용하여 동물을 트랜스카디로 사용하고, 그 다음으로 4% PFA의 10mL가 그 뒤를 따?...

<ol>
	<li>Abbott, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mind+of+a+mouse.">The Mind of a mouse.</a> Cell. 182 (6), 1372-1376 (2020).</li><li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 314 (1165), 1 (1986).</li><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+connectivity+among+morphologically+defined+cell+types+in+adult+neocortex.">Principles of connectivity among morphologically defined cell types in adult neocortex.</a> Science. 350 (6264), (2015).</li><li>Winnubst, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+1,000+projection+neurons+reveals+new+cell+types+and+organization+of+long-range+connectivity+in+the+mouse+brain.">Reconstruction of 1,000 projection neurons reveals new cell types and organization of long-range connectivity in the mouse brain.</a> Cell. 179 (1), 268-281 (2019).</li><li>Araya, R., Vogels, T. P., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+dendritic+spine+neck+changes+are+correlated+with+synaptic+strength.">Activity-dependent dendritic spine neck changes are correlated with synaptic strength.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (28), (2014).</li><li>Bosch, M., Hayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+plasticity+of+dendritic+spines.">Structural plasticity of dendritic spines.</a> Current Opinion in Neurobiology. 22 (3), 383-388 (2012).</li><li>Mart&#237;nez-Cerde&#241;o, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrite+and+spine+modifications+in+autism+and+related+neurodevelopmental+disorders+in+patients+and+animal+models.">Dendrite and spine modifications in autism and related neurodevelopmental disorders in patients and animal models.</a> Developmental Neurobiology. 77 (4), 393-404 (2017).</li><li>Arenkiel, B. R., Ehlers, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+and+imaging+technologies+for+circuit-based+neuroanatomy.">Molecular genetics and imaging technologies for circuit-based neuroanatomy.</a> Nature. 461 (7266), 900-907 (2009).</li><li>Kim, E. H., Chin, G., Rong, G., Poskanzer, K. E., Clark, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+probes+for+neurobiological+sensing+and+imaging.">Optical probes for neurobiological sensing and imaging.</a> Accounts of Chemical Research. 51 (5), 1023-1032 (2018).</li><li>Weissman, T. A., Pan, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainbow:+New+resources+and+emerging+biological+applications+for+multicolor+genetic+labeling+and+analysis.">Brainbow: New resources and emerging biological applications for multicolor genetic labeling and analysis.</a> Genetics. 199 (2), 293-306 (2014).</li><li>Haggerty, D. L., Grecco, G. G., Reeves, K. C., Atwood, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+viral+vectors+in+neuroscience+research.">Adeno-associated viral vectors in neuroscience research.</a> Molecular Therapy - Methods and Clinical Development. 17, 69-82 (2020).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497 (7449), 332-337 (2013).</li><li>Kanning, K. C., Kaplan, A., Henderson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neuron+diversity+in+development+and+disease.">Motor neuron diversity in development and disease.</a> Annual Review of Neuroscience. 33, 409-440 (2010).</li><li>Ledda, F., Paratcha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+dendritic+arbor+patterning.">Mechanisms regulating dendritic arbor patterning.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (24), 4511-4537 (2017).</li><li>Falougy, H. E., Filova, B., Ostatnikova, D., Bacova, Z., Bakos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+morphology+alterations+in+autism+and+possible+role+of+oxytocin.">Neuronal morphology alterations in autism and possible role of oxytocin.</a> Endocrine Regulations. 53 (1), 46-54 (2019).</li></ol>

현대 조직 청산 기술의 출현 전에, 신경 형태를 공부하는 것은 시간 집약적인 단면, 화상 진찰 및 인접한 아주 얇은 단면도의 재건으로 이루어져 있습니다. 공초점 화상 진찰과 함께 전기 전구 클리어링을 사용하면 완전한 신경 형태에 대한 방해받지 않는 시각을 제공합니다. 그대로 수지상 나무에서 가장 작은 시냅스 부톤까지, 신경 형태에 이미징과 정량화하는 것은 그 어느 때보다 도드라졌습?...

복잡한 3차원 생물학적 구조의 공간 조직, 연결 패턴 및 형태에 대해 이해하는 것은 특정 세포 및 조직의 기능을 파기하는 데 필수적입니다. 이것은 신경 과학에서 특히 사실이다, 있는 엄청난 노력은 중추 신경계의 고해상도 신경 해부학지도를 구축하는 데 전념하고있다1,2. 이러한 지도를 구성하는 뉴런의 면밀한 검사는 다양한 형태학을 산출하며, 이러한 다양한 뉴런 세트의 기능을 반영하는 연결 및위치3,4. 더욱이, 세포외 구조, 특히 수지상 척추에 대한 조사는 시냅스의 성숙도를 알릴 수 있어 발달 과정 및 신경질환 상태를 반영하여5,6,7. 따라서 이미징 해상도와 처리량을 개선하는 접근 방식은 모든 척도에서 뇌 기능을 더 잘 이해하는 데 필수적입니다.
최근 발전은 뉴런의 인구를 표시하고 조작하기위한 분자 및 유전 도구 키트를 확장했다. 뉴런에 이러한 마커를 도입하는 새로운 방법과 결합 된 새로운 형광 마커의 개발은 동일한 동물 또는 뇌 샘플8,9,10,11내에서 상호 작용하는 뉴런의 인구의 차동 라벨링을 허용합니다. 빛은 불투명한 지질에 의해 흩어져 있고, 뇌 조직의 높은 지질 함량을 감안할 때, 이미징 신경 인구는 주로 얇은 섹션으로 제한되었거나 고급 현미경 기술 (예를 들어, 공초점, 다광자 및 광시트 현미경 검사법)에 의존하여 깊은 구조를 이미지화합니다. 그러나, 이러한 노력은 크게 조직 정리 기술에 어드밴스에 의해 강화 되었습니다. 클리어 지질 교환 아크릴아미드-혼성 경질 영상/면역스테인링/시투 혼성화 호환 티슈-하이드로겔(CLARITY)은 하이드로겔 모노머(아크릴아미드와 비스 아크릴아미드)를 주입한 후 세제12로세척하는 기술 중 하나입니다. 하이드로겔 모노머는 매시분자 라벨에 광학적으로 투명하고 투과성이 있는 안정적인 3D 하이드로겔 스캐폴드를 만들기 위해 혼성화한다. 핵산과 단백질은 혼성화된 매트릭스 내에서 유지되는 반면, 지질은 세제 세시에 의해 제거된다(도1). 이것은 세포와 비 지질 분자의 원래 모양과 방향을 유지하기에 충분히 단단한 안정된 조직을 초래하고, 광학적으로 고해상도로 깊은 구조를 쉽게 이미지할 수 있을 만큼 충분히 투명합니다. 조직 구조와 방향의 이러한 유지 보수는 두꺼운 슬라이스의 이미징을 허용하여 세포 대 세포 연결 및 공간 관계를 보존합니다. 더욱이, 단백질과 핵산의 위치 및 가용성이 청산 과정에서 유지되기 때문에, 클리어 조직은 발현 기반 마커뿐만 아니라 외인성 라벨을 보유할 수 있다. 따라서 CLARITY는 많은 양의 심층 뇌 구조와 고해상도에서 이러한 구조 사이의 연결을 이미징하는 강력한 방법으로 자신을 빌려줍니다.
CLARITY의 사용은 크게 이미징 신경 인구에 대한 접근을 향상시킵니다. 이 기술은 많은 양의 이미징 데이터를 생성하는 데 특히 능숙합니다. CLARITY는 여러 형태의 단백질 기반 형광과 잘 어립니다. 이 프로토콜은 EGFP 및 tdTomato를 사용하여 세포에 드물게 라벨을 붙이기 위해 렌즈피바이러스 기반 접근법을 활용합니다. 그러나, tdTomato 또는 EGFP를 표현하는 형질 전환 기자 는 정기적으로 사용되었습니다. 사진 안정적이고 밝은 형광소를 선택하는 것이 중요합니다 (예 : EGFP 또는 tdTomato). 또한, 강력한 프로모터를 사용하여 플루오로포어를 표현하면 뛰어난 콘트라스트와 이미지 품질을 얻을 수 있습니다. 이 기술의 단점은 이 많은 양의 데이터를 적절히 분석하는 것으로 발생하며, 이는 인건비와 시간 집약적일 수 있습니다. 특수 현미경은 처리량을 개선하고 작업 부하를 줄이는 데 도움이 될 수 있습니다. 그러나, 건물, 소유 및/또는 고급 현미경을 운영하는 것은 종종 많은 실험실에 대한 비용 금지입니다. 이 작품은 표준 공초점 현미경 검사법과 결합된 큰 단면의 CLARITY 조직 클리어링을 사용하여 고해상도로 많은 양의 신경 조직을 시각화하는 높은 처리량, 상대적으로 빠르고 간단한 방법을 제시합니다. 본 프로토콜은 다음 단계를 통해 이러한 접근법을 설명한다: 1) 해부 및 신경 조직 준비, 2) 조직을 청산, 3) 조직을 장착, 4) 준비된 조각을 이미징, 및 5) 현미경 시각화 소프트웨어 재구성 및 분석을 사용하여 전체 슬라이스 이미지를처리(그림 2). 이러한 노력은 뉴런의 인구, 신경 연결 패턴, 3D 수지상 형태, 수지상 척추 풍부 및 형태학, 그리고 그대로 뇌 조직 내에서 분자 발현 패턴을 분석하는 데 사용할 수있는 고해상도 이미지를 초래합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G x 1&#34; Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Acrylamide (No-Bis)</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>EC-810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoretic Tissue Clearing Solution</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C13001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histodenz</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2158-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel Solution Kit</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C1310X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16%</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1x, 500 mL, 6 bottles/case</td>
			<td>fisher</td>
			<td>MT21040CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VA-044</td>
			<td>Wako</td>
			<td>925-41020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Polymerization System</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Tissue Clearing System II</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C30001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing

뇌 활동, 신경 사이 전달 된 전기 화학 신호, 신경 네트워크의 연결 패턴에 의해 결정, 그리고 이러한 뉴런 내에서 프로세스 및 하위 구조의 형태에서. 따라서 뇌 기능에 대해 알려진 많은 것들이 뇌에서 뉴런이 조직되고 연결되는 방법에 대한 추가 통찰력을 허용하는 이미징 기술의 발전과 함께 발생했습니다. 조직 정리의 개선은 두꺼운 뇌 조각의 고해상도 이미징을 허용, 형태 학적 재건을 용이하게하고 신경 하위 구조의 분석, 수지상 식소 및 척추와 같은. 이미지 처리 소프트웨어의 발전은 대규모 이미징 데이터 집합을 신속하게 분석하는 방법을 제공합니다. 이 작품은 CLARITY 조직 클리어링, 공초점 현미경 검사및 이미지 분석을 사용하여 고해상도로 표지된 신경 조직의 두꺼운 조각을 처리, 시각화 및 분석하는 비교적 빠른 방법을 제시합니다. 이 프로토콜은 건강한 두뇌를 특징짓는 연결 패턴 및 신경 형태학및 병들인 두뇌 상태에서 생기는 이 특성에 있는 변경을 이해하기 위한 노력을 촉진할 것입니다.

이미지 수집 후, 대표적인 세포 형태는 임베디드 통계를 사용하여 분석 소프트웨어 내에서 스크립트를 분류했다. 수집된데이터(도 6A)는뉴런 2가 척추밀도가 높은 더 큰 수지상 구조를 갖는다는 것을 반영한다. 전체적으로, 데이터는 뉴런 2가 뉴런 1에 비해 더 복잡한 수지상 구조를 가지고 있음을 시사한다. 이러한 결과를 입증하기 위해, 표준 Sholl 분석이 수행되었으며, 이는...

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Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing

신경 수지상 형태는 종종 기능의 근간을 이수합니다. 실제로, 뉴런의 발달에 영향을 미치는 많은 질병 프로세스는 형태학적 표현형으로 나타납니다. 이 프로토콜은 그대로 수지상 식소및 연관된 척추를 분석하는 간단하고 강력한 방법을 설명합니다.

선명도 조직 클리어링을 통한 손상되지 않은 뉴런 덴라이트의 이미징 및 정량화

Brain activity, the electrochemical signals passed between neurons, is determined by the connectivity patterns of neuronal networks, and from the ...

이 프로토콜은 연구원이 회로 내의 기능을 기초로 연결 및 공간 조직의 신경 패턴에 대한 중요한 질문에 대답 할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 그대로 3 차원 조직 내에서 깊은 곳에 위치한 신경 형태학의 시각화를 가능하게한다는 것입니다. 이 방법은 간단하고 따라서 쉽게 재현 할 수 있습니다.처음 실험자는이 기술을 수행하는 것이 편안해야합니다. 고품질 데이터를 얻기 위해서는 명확한 조직 샘플을 가져야 합니다. 적절한 조직 선명도 및 클리어링 기술의 시각적 데모는 쉽게 재현 가능한 결과를 가능하게 합니다.우선 하이드로겔에 잠긴 뇌 조직을 영하 90킬로파스칼 진공 상태에서 섭씨 37도에서 3시간 동안 진공 인큐베이터에 놓습니다. 진공이 제대로 형성될 수 있도록 튜브 상단을 나사로 두십시오. 부드러운 흔들림으로 실온에서 10 분 동안 PBS로 조직을 씻으시다.중합조직 시료를 전기전경실에 놓고 챔버 내조직의 방향을 추적한다. 공급된 전기전도 SDS 버퍼로 챔버와 저수지를 채웁니다. 70볼트, 1암페어, 섭씨 35도에서 시료를 실행하여 조직의 밀리리터당 약 2시간 동안 일정한 전류를 가집니다.챔버에서 제거하고 동일한 방향으로 교체하여 뇌 조직의 충분한 청산을 위해 주기적으로 샘플을 확인하십시오. 샘플이 정리를 마친 후 실온에서 하룻밤 동안 PBS로 세척하여 PBS를 가능한 한 자주 신선한 PBS로 대체하십시오. PBS에서 마지막 세척에 따라, 실온에서 탈이온 수에서 5 분 동안 티슈를 3 번 세척하십시오.조직은 불투명해지고 확장될 수 있습니다. 실온에서 적어도 4시간 동안 굴절지수 매칭 용액에서 조직을 배양한다. 인큐베이션 동안, 시료를 이미지화하기 위해 적합한 하우징 챔버를 구성한다.먼저 유리 슬라이드를 장착의 베이스로 사용한 다음 고무 또는 플라스틱 스페이서를 내려놓고 슈퍼 접착제로 고정하여 구멍이 없는지 확인합니다. 굴절률 매칭 용액으로 미리 채워진 장착 챔버에 명확한 조직을 배치합니다. 유리 커버슬립을 위에 놓고 매니큐어로 밀봉하여 조직을 단단히 장착합니다.유리 위에 직접 굴절 지수 매칭 마운팅 솔루션을 추가하여이 조직을 이미지. 5밀리미터 두께 이상의 조직을 위한 대형 조직 이미징 챔버를 구성하려면 벽이 높은 10센티미터 유리 접시를 사용하십시오. 50 밀리리터 원콘 튜브를 중앙에 놓고 튜브의 직경이 사용되는 객관적인 렌즈의 배럴을 받아들일 만큼 충분히 큰지 확인합니다.물에 3 %의 아가로즈를 만들고 유리 접시와 원뿔 관 사이의 공간에 부어 1 시간 동안 식힙니다. 이것은 고체 아가로즈의 반지를 형성합니다. 슈퍼 접착제를 사용하여 챔버의 바닥에 조직을 단단히 부착하고 굴절 지수 일치 용액으로 챔버를 채우고 공기에서 보존되고 섭씨 4도에 저장되지 않는 한 중합화되기 시작할 수 있습니다.공초점 현미경을 사용하여 이미지를 획득합니다. 모든 관련 이미징 장비를 켭니다. 샘플을 무대에 놓습니다.신중하게 목표와 몰입 미디어에 접근하고 미디어의 지속적인 열을 형성한다. 피형성 경위를 사용하여 적절한 이미징 필드를 찾습니다. 해상도를 설정하고 속도 설정을 스캔합니다.공초점 현미경을 사용하여 이미징하는 경우 핀홀을 완전히 닫아 가장 작은 광학 섹션을 확보하므로 최상의 Z 해상도를 얻습니다. 높은 신호 대 잡음 비율로 적절한 이미지를 얻을 때까지 레이저 전력 또는 센서 게인을 점차적으로 증가시다. 표준 EGFP 또는 tdTomato 2색 이미징을 사용하는 경우 라이트 컬렉션 설정을 설정합니다.조직의 관찰된 시작 점 및 끝점을 기반으로 Z 스택 매개변수를 설정합니다. 원하는 Z 해상도에 따라 단계 크기를 설정합니다. 더 작은 단계 크기는 더 큰 Z 해상도를 산출할 것이지만, 샘플 표백으로 이어질 수 있습니다.이미지 수집 설정에 만족하면 이미지를 획득합니다. 이미지가 높은 신호 대 노이즈 비율을 가지고 있으며 구조의 고유한 경계를 표시합니다. 이미지 수집 후, 대표적인 세포 형태는 임베디드 통계를 사용하여 분석 소프트웨어 내에서 스크립트를 분류했다.수집된 데이터는 Neuron 2가 뉴런 1에 비해 가시 밀도가 높은 수지상 구조보다 더 크다는 것을 반영합니다. 이러한 결과를 입증하기 위해, 표준 숄 분석이 수행되었으며, 이는 뉴런 2가 소마로부터 50 내지 100 마이크로미터의 Scholl 교차로의 증가수에 의해 표시된 뉴런 1보다 더 수지상적으로 복잡하다는 것을 확인시켜 주어. 뉴런 1은 더 많은 filopodia 같은 모양과 척추의 더 큰 비율을 포함하고 미숙한 척추 하위 유형입니다.버섯 척추라고 불리는 정의된 머리를 가진 척추는 더 발달되고 성숙한 시냅스를 함유하고 있습니다. 따라서, 뉴런 2는 성숙한 척추의 높은 밀도로 더 성숙하다. 클리어후, 조직 덩어리는 전통적인 면역 조직 화학을 사용하여 염색될 수 있다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Intact Histological Characterization of Brain-implanted Microdevices and Surrounding Tissue

뇌 이식 Microdevices과 주변 조직의 손상 조직 학적 특성

Research  into the design and utilization of brain-implanted microdevices, such as  microelectrode arrays, aims to produce clinically relevant devices ...

연구

신경과학

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

CLARITY를 사용하여 마우스 척수에서 세로토닌 섬유 이미징 / CUBIC 기술

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

수동 CLARITY를 사용하여 마우스 중추 신경계의 광학 지우기

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

전기 생리학 및 칼슘 이미징에 대한 급성 신경 조직의 장기간 배양

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

두뇌 조각에서 신경 모 수석에서 2 광자 칼슘 이미지

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Novel Passive Clearing Methods for the Rapid Production of Optical Transparency in Whole CNS Tissue

소설 수동 전체 CNS 조직에 광학 투명도의 급속 한 생산을 위한 방법 삭제

Since the development of CLARITY, a bioelectrochemical clearing technique that allows for three-dimensional phenotype mapping within transparent tissues, ...

Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy

경도 형광 현미경 검사 법을 통해 신경 생존 모니터링

Standard cytotoxicity assays, which require the collection of lysates or fixed cells at multiple time points, have limited sensitivity and capacity to ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

쥐 뇌 조직을 위한 소수성 조직 청산 방법

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

행동과 자극 반응 도중 전체 두뇌 화상 진찰을 위한 성인 Drosophila melanogaster를 준비합니다

We present a method developed specifically to image the whole Drosophila brain during ongoing behavior such as walking. Head fixation and dissection are ...

Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method

선명도 조직 클리어링 방법으로 전산 망막의 면역 염색

The tissue hydrogel delipidation method (CLARITY), originally developed by the Deisseroth laboratory, has been modified and widely used for immunostaining ...