Name: imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing
Uploaded: 2021-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing at JoVE.com

Vi vil takke den virale kjernen NRDDC ved Jan og Dan Duncan Neurological Institute for å produsere AAVs og lentivirus som brukes i disse eksperimentene. I tillegg vil vi takke Baylor College of Medicine Center for Comparative Medicine for musehold og generelt vedlikehold av musene som brukes. Vi vil takke American Heart Association for deres støtte under prisnummer 20PRE35040011, og BRASS: Baylor Research Advocates for Student Scientists for deres støtte (PJH). Til slutt vil vi takke Logos for å gi laboratoriet vårt Logos X-Clarity elektroforetisk vevsryddingssystem.

Følgende protokoll følger alle retningslinjer for dyrepleie for Baylor College of Medicine.
1. Disseksjon og vevspreparat
<ol><li>Avlive musen med en overdose isofluran ved å plassere musen i en lukket beholder med et håndkle gjennomvåt i isofluran (eller på andre IUCAC-godkjente midler).</li>
	<li>Perfuse dyret transkardielt ved hjelp av en 25 G nål med 10 ml iskald PBS, etterfulgt av 10 ml 4% PFA.</li>
	<li>Dissekere hjerneregionen (eller vevet) av interesse.</li>
	<li>Plasser det d...

<ol>
	<li>Abbott, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mind+of+a+mouse.">The Mind of a mouse.</a> Cell. 182 (6), 1372-1376 (2020).</li><li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 314 (1165), 1 (1986).</li><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+connectivity+among+morphologically+defined+cell+types+in+adult+neocortex.">Principles of connectivity among morphologically defined cell types in adult neocortex.</a> Science. 350 (6264), (2015).</li><li>Winnubst, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+1,000+projection+neurons+reveals+new+cell+types+and+organization+of+long-range+connectivity+in+the+mouse+brain.">Reconstruction of 1,000 projection neurons reveals new cell types and organization of long-range connectivity in the mouse brain.</a> Cell. 179 (1), 268-281 (2019).</li><li>Araya, R., Vogels, T. P., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+dendritic+spine+neck+changes+are+correlated+with+synaptic+strength.">Activity-dependent dendritic spine neck changes are correlated with synaptic strength.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (28), (2014).</li><li>Bosch, M., Hayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+plasticity+of+dendritic+spines.">Structural plasticity of dendritic spines.</a> Current Opinion in Neurobiology. 22 (3), 383-388 (2012).</li><li>Mart&#237;nez-Cerde&#241;o, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrite+and+spine+modifications+in+autism+and+related+neurodevelopmental+disorders+in+patients+and+animal+models.">Dendrite and spine modifications in autism and related neurodevelopmental disorders in patients and animal models.</a> Developmental Neurobiology. 77 (4), 393-404 (2017).</li><li>Arenkiel, B. R., Ehlers, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+and+imaging+technologies+for+circuit-based+neuroanatomy.">Molecular genetics and imaging technologies for circuit-based neuroanatomy.</a> Nature. 461 (7266), 900-907 (2009).</li><li>Kim, E. H., Chin, G., Rong, G., Poskanzer, K. E., Clark, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+probes+for+neurobiological+sensing+and+imaging.">Optical probes for neurobiological sensing and imaging.</a> Accounts of Chemical Research. 51 (5), 1023-1032 (2018).</li><li>Weissman, T. A., Pan, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainbow:+New+resources+and+emerging+biological+applications+for+multicolor+genetic+labeling+and+analysis.">Brainbow: New resources and emerging biological applications for multicolor genetic labeling and analysis.</a> Genetics. 199 (2), 293-306 (2014).</li><li>Haggerty, D. L., Grecco, G. G., Reeves, K. C., Atwood, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+viral+vectors+in+neuroscience+research.">Adeno-associated viral vectors in neuroscience research.</a> Molecular Therapy - Methods and Clinical Development. 17, 69-82 (2020).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497 (7449), 332-337 (2013).</li><li>Kanning, K. C., Kaplan, A., Henderson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neuron+diversity+in+development+and+disease.">Motor neuron diversity in development and disease.</a> Annual Review of Neuroscience. 33, 409-440 (2010).</li><li>Ledda, F., Paratcha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+dendritic+arbor+patterning.">Mechanisms regulating dendritic arbor patterning.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (24), 4511-4537 (2017).</li><li>Falougy, H. E., Filova, B., Ostatnikova, D., Bacova, Z., Bakos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+morphology+alterations+in+autism+and+possible+role+of+oxytocin.">Neuronal morphology alterations in autism and possible role of oxytocin.</a> Endocrine Regulations. 53 (1), 46-54 (2019).</li></ol>

Før fremkomsten av moderne vevsryddingsteknikker besto studier av nevronal morfologi av tidkrevende seksjonering, avbildning og rekonstruksjon av tilstøtende svært tynne seksjoner. Bruk av elektroforetisk vevsrydding i kombinasjon med konfokal avbildning gir en uhindret oversikt over fullstendig nevronal morfologi. Fra intakte dendrittiske trær, ned til den minste synaptiske bouton, har avbildning og kvantifisering av nevronal morfologi aldri vært mer gjennomførbar.
Utarbeidelsen av rydd...

Forståelse av romlig organisering, tilkoblingsmønstre og morfologi av komplekse tredimensjonale biologiske strukturer er avgjørende for å avgrense funksjonene til bestemte celler og vev. Dette gjelder spesielt i nevrovitenskap, der enorm innsats har vært dedikert til å bygge høyoppløselige nevroanatomiske kart over sentralnervesystemet1,2. Nær undersøkelse av nevronene som består av disse kartene gir varierte morfologier, med forbindelser og steder som gjenspeiler funksjonen til disse forskjellige settene av nevroner3,4. Videre kan undersøkelse av subcellulære strukturer, spesielt dendritiske spines, informere modenheten til synapser, og dermed reflektere utviklingsprosesser og nevrologiske sykdomstilstander5,6,7. Dermed er tilnærminger som forbedrer avbildningsoppløsning og gjennomstrømning avgjørende for å bedre forstå hjernefunksjonen i alle skalaer.
Nylige fremskritt har utvidet det molekylære og genetiske verktøysettet for merking og manipulering av populasjoner av nevroner. Utviklingen av nye fluorescerende markører, kombinert med nye metoder for å introdusere disse markørene i nevroner, muliggjør differensialmerking av populasjoner av interagerende nevroner innenfor samme dyre- eller hjerneprøve8,9,10,11. Fordi lys er spredt av ugjennomsiktige lipider, og gitt det høye lipidinnholdet i hjernevev, har avbildning av nevronpopulasjoner primært vært begrenset til tynne seksjoner eller har stolt på avanserte mikrocropy teknikker (f.eks. konfidensere, multi-foton og lysarkmikrokopier) til bilde dype strukturer. Imidlertid har disse anstrengelsene blitt sterkt styrket av fremskritt innen vevsryddingsteknikker. Klar Lipid-byttet akrylamid-hybridisert Stiv imaging / immunostaining /in situ hybridisering-kompatibel Tissue-hYdrogel (CLARITY) er en slik teknikk, der vev av interesse er infundert med hydrogelmonomerer (akrylamid og bis-akrylamid) og deretter vasket med vaskemidler12. Hydrogelmonokromerene hybridiserer for å skape et stabilt 3D hydrogel stillas som er optisk gjennomsiktig og gjennomtrengelig for makromolekyletiketter. Nukleinsyrer og proteiner opprettholdes i den hybridiserte matrisen, mens lipider fjernes av vaskemiddelvaskene (figur 1). Dette resulterer i et stabilt vev som er stivt nok til å opprettholde den opprinnelige formen og orienteringen av celler og ikke-lipidmolekyler, mens optisk gjennomsiktig nok til å enkelt bilde dype strukturer ved høy oppløsning. Dette vedlikeholdet av vevsstruktur og orientering gjør det mulig å forestille seg tykke skiver, og dermed bevare celle-til-celle-forbindelser og romlige forhold. Videre, fordi plasseringen og tilgjengeligheten av proteiner og nukleinsyrer opprettholdes under ryddingsprosessen, er ryddet vev i stand til å holde uttrykksbaserte markører, samt eksogene etiketter. Dermed gir CLARITY seg som en potent metode for å forestille seg store mengder dype hjernestrukturer og forbindelsene mellom disse strukturene ved høy oppløsning.
Bruken av CLARITY forbedrer i stor grad tilnærminger til avbildning av nevronpopulasjoner. Denne teknikken er spesielt dyktig til å generere store mengder bildedata. CLARITY fungerer bra med flere former for proteinbasert fluorescens. Denne protokollen benytter en lentiviral-basert tilnærming til sparsomt etikettceller med EGFP og tdTomato; Imidlertid har transgene reporter alleler som uttrykker tdTomato eller EGFP for å merke celler for rekonstruksjon rutinemessig blitt brukt. Det er viktig å velge en fluorofor som er både fotostabil og lys (f.eks. EGFP eller tdTomato). I tillegg gir bruk av en sterk promotor for å uttrykke fluorofor overlegen kontrast og bildekvalitet. Ulempene med denne teknikken oppstår da riktig analyse av denne store mengden data kan være både arbeids- og tidkrevende. Spesialiserte mikroskoper kan bidra til å forbedre gjennomstrømningen og redusere arbeidsmengden. Imidlertid er bygging, eie og / eller drift av avanserte mikroskoper ofte kostnadsforbudende for mange laboratorier. Dette arbeidet presenterer en høy gjennomstrømning, relativt rask og enkel metode for å visualisere store mengder nevralt vev ved høyoppløselig ved hjelp av CLARITY vevsrydding av store seksjoner, kombinert med standard konfokal mikroskopi. Denne protokollen beskriver denne tilnærmingen gjennom følgende trinn: 1) dissekering og klargjøring av nevralvevet, 2) rydding av vevet, 3) montering av vevet, 4) avbildning av de forberedte skiver og 5) behandling av fullskivebilder ved hjelp av mikroskopi visualisering programvare rekonstruksjon og analyse (Figur 2). Disse anstrengelsene resulterer i høyoppløselige bilder som kan brukes til å analysere populasjoner av nevroner, nevronale tilkoblingsmønstre, 3D dendritisk morfologi, dendritisk ryggradsoverflod og morfologi, og molekylære uttrykksmønstre i intakt hjernevev.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G x 1&#34; Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Acrylamide (No-Bis)</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>EC-810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoretic Tissue Clearing Solution</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C13001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histodenz</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2158-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel Solution Kit</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C1310X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16%</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1x, 500 mL, 6 bottles/case</td>
			<td>fisher</td>
			<td>MT21040CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VA-044</td>
			<td>Wako</td>
			<td>925-41020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Polymerization System</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Tissue Clearing System II</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C30001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing

Hjerneaktivitet, de elektrokjemiske signalene som sendes mellom nevroner, bestemmes av tilkoblingsmønstrene til nevronnettverk, og fra morfologien til prosesser og understrukturer i disse nevronene. Som sådan har mye av det som er kjent om hjernefunksjon oppstått sammen med utviklingen i bildeteknologier som gir ytterligere innsikt i hvordan nevroner er organisert og forbundet i hjernen. Forbedringer i vevsrydding har gjort det mulig å avbilde tykke hjerneskiver med høy oppløsning, noe som letter morfologisk rekonstruksjon og analyser av nevronale understrukturer, som dendritiske arbors og spines. I tandem gir fremskritt innen bildebehandlingsprogramvare metoder for raskt å analysere store bildedatasett. Dette arbeidet presenterer en relativt rask metode for behandling, visualisering og analyse av tykke skiver av merket nevralt vev ved høy oppløsning ved hjelp av CLARITY vevsrydding, konfokal mikroskopi og bildeanalyse. Denne protokollen vil lette arbeidet med å forstå tilkoblingsmønstrene og nevronale morfologier som karakteriserer sunne hjerner, og endringene i disse egenskapene som oppstår i syke hjernetilstander.

Etter bildeinnhenting ble den representative cellemorfologien analysert ved hjelp av innebygd statistikk og klassifisering av skript i analyseprogramvaren. De innsamlede dataene (figur 6A) gjenspeiler at neuron 2 har en større dendrittisk struktur med høyere tetthet av ryggrader. Som helhet antyder dataene at neuron 2 har en mer kompleks dendrittisk struktur sammenlignet med nevron 1. For å sannsynliggjøre dette resultatet ble det utført standard Sholl-analyse, som bekrefter at neuron 2...

Watch this Scientific Journal Video about Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing at JoVE.com

Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing

Nevronal dendritisk morfologi ligger ofte til grunn for funksjon. Faktisk manifesterer mange sykdomsprosesser som påvirker utviklingen av nevroner med en morfologisk fenotype. Denne protokollen beskriver en enkel og kraftig metode for å analysere intakte dendritiske arbors og deres tilhørende spines.

Avbildning og kvantifisering av intakte nevronale dendritter via CLARITY Tissue Clearing

Brain activity, the electrochemical signals passed between neurons, is determined by the connectivity patterns of neuronal networks, and from the ...

Denne protokollen vil tillate forskere å svare på viktige spørsmål om nevronale mønstre for tilkobling og romlig organisering som ligger til grunn for funksjon i en krets. Den største fordelen med denne teknikken er at den muliggjør visualisering av nevronale morfologier som ligger dypt inne i intakt tredimensjonalt vev. Denne metoden er grei og dermed lett reproduserbar.Førstegangseksperimenter bør være komfortable med å utføre denne teknikken. Det er viktig å ha en klar vevsprøve for å få data av høy kvalitet. Den visuelle demonstrasjonen av passende vevsklarhet og ryddingsteknikker vil muliggjøre lett reproduserbare resultater.Til å begynne med, plasser det hydrogel-nedsenkede hjernevevet i en vakuuminkubator i tre timer ved 37 grader Celsius med minus 90 kilopascal vakuum. La rørtoppen stå skrudd av slik at vakuumet kan dannes riktig. Vask vevet med PBS i 10 minutter ved romtemperatur med mild risting.Plasser den polymeriserte vevsprøven i elektroforesekammeret, og hold oversikt over vevets orientering i kammeret. Fyll kammeret og reservoaret med den medfølgende elektroforese SDS-bufferen. Kjør prøven på 70 volt, en ampere og 35 grader Celsius med konstant strøm i omtrent to timer per milliliter vev.Kontroller prøven regelmessig for tilstrekkelig rydding av hjernevev ved å fjerne det fra kammeret og erstatte det i samme retning. Etter at prøven er ferdig klar, vask den i PBS over natten ved romtemperatur, og erstatt PBS med fersk PBS så ofte som mulig. Etter den endelige vasken i PBS, vask vevet i fem minutter i deionisert vann ved romtemperatur tre ganger.Vevet blir ugjennomsiktig og kan ekspandere. Inkuber vevet i brytningsindeksmatchingsløsningen i minst fire timer ved romtemperatur. Under inkubasjonen konstruerer du et passende huskammer for å avbilde prøven.Begynn med å bruke en glasssklie som base for montering, legg deretter ned enten gummi- eller plast avstandsstykker og fest dem med superlim, og sørg for at det ikke er noen hull. Plasser det klare vevet i monteringskammeret ferdigfylt med brytningsindeksmatchingsløsning. Monter vevet sikkert ved å plassere et glassdeksler på toppen og forsegle det med neglelakk.Bilde dette vevet ved å legge til en dråpe brytningsindeks matchende monteringsløsning direkte på toppen av glasset. For å konstruere et stort vevsavbildningskammer for vev med mer enn en fem millimeter tykkelse, bruk en 10 centimeter glassfat med høy vegg. Plasser et konisk rør på 50 milliliter i midten, og sørg for at diameteren på røret er stor nok til å akseptere fatet til objektivlinsen som brukes.Lag 3% agarose i vann og hell det i rommet mellom glassfatet og det koniske røret, og la det avkjøles i en time. Dette vil danne en ring av solid agarose. Fest vevet sikkert til bunnen av kammeret ved hjelp av superlim og fyll kammeret med brytningsindeksmatchingsløsning, som kan begynne å polymerisere med mindre det er bevart fra luft og lagret ved fire grader Celsius.Skaff deg bildet ved hjelp av et konfokalt mikroskop. Slå på alt relevant bildeutstyr. Plasser prøven på scenen.Gå forsiktig til nedsenkningsmediene med målet og danner en kontinuerlig kolonne med medier. Bruk epifluorescence, finn et passende bildefelt. Start med å angi innstillinger for oppløsning og skannehastighet.Hvis du ser på bildet ved hjelp av et konfokalt mikroskop, lukker du pinholeet helt for å oppnå den minste optiske delen og dermed den beste Z-oppløsningen. Øk laserkraften eller sensorforsterkningen gradvis til et passende bilde oppnås med et høyt signal-til-støy-forhold. Hvis du bruker standard EGFP eller tdTomato tofarget avbildning, angir du innstillingene for lyssamling.Angi Z-stack-parametrene basert på de observerte start- og sluttpunktene i vevet. Angi trinnstørrelsen basert på ønsket Z-oppløsning. Mindre trinnstørrelser vil gi en større Z-oppløsning, men kan føre til prøvebleking.Når du er fornøyd med innstillingene for bildeanskaffelse, må du skaffe deg bildet. Sørg for at bildet har et høyt signal-til-støy-forhold og viser tydelige grenser for strukturer. Etter bildeinnhenting ble den representative cellemorfologien analysert ved hjelp av innebygd statistikk og klassifisering av skript i analyseprogramvaren.De innsamlede dataene gjenspeiler at Neuron 2 har større enn dendritisk struktur med høyere tetthet av spines sammenlignet med Neuron 1. For å sannsynliggjøre dette resultatet ble det utført standard Scholl-analyse, som bekrefter at Neuron 2 er mer dendritisk kompleks enn Neuron 1 som betegnet av det økte antallet Scholl-kryss på 50 til 100 mikrometer fra soma. Neuron 1 inneholder en større andel spines med mer filopodia-lignende former og er en umoden ryggradsundertype.Spines med definerte hoder, kalt soppspinner, inneholder sannsynligvis mer utviklede og modne synapser. Dermed er Neuron 2 mer moden med en høyere tetthet av modne spines. Etter rydding kan vevsbitene farges ved hjelp av tradisjonell immunhiistokjemi.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Intact Histological Characterization of Brain-implanted Microdevices and Surrounding Tissue

Intakt Histologisk Karakterisering av Brain-implantert Microdevices og omkringliggende vev

Research  into the design and utilization of brain-implanted microdevices, such as  microelectrode arrays, aims to produce clinically relevant devices ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

Imaging Serotonerge Fibers i Mouse Spinal Cord Bruke CLARITY / CUBIC Technique

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

Optisk Clearing av musen sentralnervesystemet Bruke Passiv CLARITY

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

Langvarig Inkubasjon av akutt nervevev for Elektro og kalsium-imaging

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

To-fotonet kalsium Imaging i Neuronal Dendrites i hjernen skiver

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Novel Passive Clearing Methods for the Rapid Production of Optical Transparency in Whole CNS Tissue

Romanen passiv fjerne metoder for rask produksjon av optisk åpenhet i hele CNS vev

Since the development of CLARITY, a bioelectrochemical clearing technique that allows for three-dimensional phenotype mapping within transparent tissues, ...

Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy

Overvåking Neuronal overlevelse via langsgående fluorescens mikroskopi

Standard cytotoxicity assays, which require the collection of lysates or fixed cells at multiple time points, have limited sensitivity and capacity to ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

En hydrofob vevsryddingsmetode for rottehjernevev

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Forbereder voksen drosophila melanogaster for hele hjerneavbildning under atferd og stimuli responser

We present a method developed specifically to image the whole Drosophila brain during ongoing behavior such as walking. Head fixation and dissection are ...

Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method

Immunstaining av hel-mount netthinner med CLARITY vev clearing metode

The tissue hydrogel delipidation method (CLARITY), originally developed by the Deisseroth laboratory, has been modified and widely used for immunostaining ...