Name: imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing
Uploaded: 2021-04-20T15:00:00
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Nos gustaría agradecer al núcleo viral NRDDC en el Instituto Neurológico Jan y Dan Duncan por producir los AAV y lentivirus utilizados en estos experimentos. Además, nos gustaría agradecer al Baylor College of Medicine Center for Comparative Medicine por la cría de ratones y el mantenimiento general de los ratones utilizados. Nos gustaría agradecer a la Asociación Americana del Corazón por su apoyo bajo el número de premio 20PRE35040011, y BRASS: Baylor Research Advocates for Student Scientists por su apoyo (PJH). Finalmente, nos gustaría agradecer a Logos por proporcionar a nuestro laboratorio el sistema de limpieza de tejido electroforético Logos X-Clarity.

El siguiente protocolo sigue todas las pautas de cuidado animal para Baylor College of Medicine.
1. Disección y preparación de tejidos
<ol><li>Eutanasiar al ratón con una sobredosis de isoflurano colocando el ratón en un recipiente cerrado con una toalla empapada en isoflurano (o por otros medios aprobados por la IUCAC).</li>
	<li>Perfundir al animal transcardialmente utilizando una aguja de 25 G con 10 mL de PBS helado, seguido de 10 mL de PFA al 4%.</li>
	<li>Diseccionar la región (o ...

<ol>
	<li>Abbott, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mind+of+a+mouse.">The Mind of a mouse.</a> Cell. 182 (6), 1372-1376 (2020).</li><li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 314 (1165), 1 (1986).</li><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+connectivity+among+morphologically+defined+cell+types+in+adult+neocortex.">Principles of connectivity among morphologically defined cell types in adult neocortex.</a> Science. 350 (6264), (2015).</li><li>Winnubst, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+1,000+projection+neurons+reveals+new+cell+types+and+organization+of+long-range+connectivity+in+the+mouse+brain.">Reconstruction of 1,000 projection neurons reveals new cell types and organization of long-range connectivity in the mouse brain.</a> Cell. 179 (1), 268-281 (2019).</li><li>Araya, R., Vogels, T. P., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+dendritic+spine+neck+changes+are+correlated+with+synaptic+strength.">Activity-dependent dendritic spine neck changes are correlated with synaptic strength.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (28), (2014).</li><li>Bosch, M., Hayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+plasticity+of+dendritic+spines.">Structural plasticity of dendritic spines.</a> Current Opinion in Neurobiology. 22 (3), 383-388 (2012).</li><li>Mart&#237;nez-Cerde&#241;o, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrite+and+spine+modifications+in+autism+and+related+neurodevelopmental+disorders+in+patients+and+animal+models.">Dendrite and spine modifications in autism and related neurodevelopmental disorders in patients and animal models.</a> Developmental Neurobiology. 77 (4), 393-404 (2017).</li><li>Arenkiel, B. R., Ehlers, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+and+imaging+technologies+for+circuit-based+neuroanatomy.">Molecular genetics and imaging technologies for circuit-based neuroanatomy.</a> Nature. 461 (7266), 900-907 (2009).</li><li>Kim, E. H., Chin, G., Rong, G., Poskanzer, K. E., Clark, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+probes+for+neurobiological+sensing+and+imaging.">Optical probes for neurobiological sensing and imaging.</a> Accounts of Chemical Research. 51 (5), 1023-1032 (2018).</li><li>Weissman, T. A., Pan, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainbow:+New+resources+and+emerging+biological+applications+for+multicolor+genetic+labeling+and+analysis.">Brainbow: New resources and emerging biological applications for multicolor genetic labeling and analysis.</a> Genetics. 199 (2), 293-306 (2014).</li><li>Haggerty, D. L., Grecco, G. G., Reeves, K. C., Atwood, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+viral+vectors+in+neuroscience+research.">Adeno-associated viral vectors in neuroscience research.</a> Molecular Therapy - Methods and Clinical Development. 17, 69-82 (2020).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497 (7449), 332-337 (2013).</li><li>Kanning, K. C., Kaplan, A., Henderson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neuron+diversity+in+development+and+disease.">Motor neuron diversity in development and disease.</a> Annual Review of Neuroscience. 33, 409-440 (2010).</li><li>Ledda, F., Paratcha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+dendritic+arbor+patterning.">Mechanisms regulating dendritic arbor patterning.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (24), 4511-4537 (2017).</li><li>Falougy, H. E., Filova, B., Ostatnikova, D., Bacova, Z., Bakos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+morphology+alterations+in+autism+and+possible+role+of+oxytocin.">Neuronal morphology alterations in autism and possible role of oxytocin.</a> Endocrine Regulations. 53 (1), 46-54 (2019).</li></ol>

Antes del advenimiento de las técnicas contemporáneas de limpieza de tejidos, el estudio de la morfología neuronal consistía en seccionamientos intensivos en tiempo, imágenes y reconstrucción de secciones adyacentes muy delgadas. El uso de la limpieza electroforética del tejido en combinación con imágenes confocales proporciona una visión sin obstáculos de la morfología neuronal completa. Desde árboles dendríticos intactos, hasta el bouton sináptico más pequeño, la obtención de imágenes y la cuantifica...

Comprender la organización espacial, los patrones de conectividad y la morfología de estructuras biológicas tridimensionales complejas es esencial para delinear las funciones de células y tejidos específicos. Esto es especialmente cierto en neurociencia, en la que se ha dedicado un tremendo esfuerzo a construir mapas neuroanatómicos de alta resolución del sistema nervioso central1,2. El examen detallado de las neuronas que componen estos mapas arroja morfologías variadas, con conexiones y ubicaciones que reflejan la función de estos diversos conjuntos de neuronas3,4. Además, la investigación de las estructuras subcelulares, especialmente las espinas dendríticas, puede informar la madurez de las sinapsis, reflejando así los procesos de desarrollo y los estados de enfermedad neurológica5,6,7. Por lo tanto, los enfoques que mejoran la resolución y el rendimiento de las imágenes son esenciales para comprender mejor la función cerebral en todas las escalas.
Los avances recientes han ampliado el conjunto de herramientas moleculares y genéticas para marcar y manipular poblaciones de neuronas. El desarrollo de nuevos marcadores fluorescentes, combinado con nuevos métodos de introducción de estos marcadores en las neuronas, permite el etiquetado diferencial de poblaciones de neuronas que interactúan dentro de la misma muestra animal o cerebral8,9,10,11. Debido a que la luz es dispersada por lípidos opacos, y dado el alto contenido de lípidos del tejido cerebral, las poblaciones neuronales de imágenes se han limitado principalmente a secciones delgadas o se han basado en técnicas avanzadas de microescropia (por ejemplo, microscopía confocal, multiprofónica y de lámina de luz) para obtener imágenes de estructuras profundas. Sin embargo, estos esfuerzos se han visto reforzados en gran medida por los avances en las técnicas de limpieza de tejidos. Clear Lipid-exchanged Acrylamide-hybridized Rigid Imaging/immunostaining/insitu hybridization-compatible Tissue-hYdrogel (CLARITY) es una de esas técnicas, en la que los tejidos de interés se infunden con monómeros de hidrogel (acrilamida y bis-acrilamida) y luego se lavan con detergentes12. Los monómeros de hidrogel se hibridan para crear un andamio de hidrogel 3D estable que es ópticamente transparente y permeable a las etiquetas de macromoléculas. Los ácidos nucleicos y las proteínas se mantienen dentro de la matriz hibridada, mientras que los lípidos se eliminan mediante los lavados de detergente (Figura 1). Esto da como resultado un tejido estable que es lo suficientemente rígido como para mantener la forma y orientación originales de las células y las moléculas no lipídicas, mientras que ópticamente lo suficientemente transparente como para obtener fácilmente imágenes de estructuras profundas a alta resolución. Este mantenimiento de la estructura y orientación del tejido permite la obtención de imágenes de rodajas gruesas, preservando así las conexiones de célula a célula y las relaciones espaciales. Además, debido a que la ubicación y disponibilidad de proteínas y ácidos nucleicos se mantiene durante el proceso de limpieza, los tejidos despejados pueden contener marcadores basados en la expresión, así como etiquetas exógenas. Por lo tanto, CLARITY se presta como un método potente para obtener imágenes de grandes cantidades de estructuras cerebrales profundas y las conexiones entre estas estructuras a alta resolución.
El uso de CLARITY mejora en gran medida los enfoques para obtener imágenes de poblaciones neuronales. Esta técnica es especialmente experta en generar grandes cantidades de datos de imágenes. CLARITY funciona bien con múltiples formas de fluorescencia a base de proteínas. Este protocolo utiliza un enfoque basado en lentivirales para etiquetar escasamente las células con EGFP y tdTomato; sin embargo, los alelos reporteros transgénicos que expresan tdTomato o EGFP para etiquetar las células para la reconstrucción se han utilizado rutinariamente. Es importante elegir un fluoróforo que sea fotoestablo y brillante (por ejemplo, EGFP o tdTomato). Además, el uso de un promotor fuerte para expresar el fluoróforo produce un contraste y una calidad de imagen superiores. Los inconvenientes de esta técnica surgen ya que analizar adecuadamente esta gran cantidad de datos puede ser laborioso y requiere mucho tiempo. Los microscopios especializados pueden ayudar a mejorar el rendimiento y disminuir la carga de trabajo. Sin embargo, construir, poseer y / u operar microscopios avanzados a menudo son prohibitivos para muchos laboratorios. Este trabajo presenta un método de alto rendimiento, relativamente rápido y simple para visualizar grandes cantidades de tejido neural a alta resolución utilizando la limpieza de tejidos CLARITY de grandes secciones, combinada con microscopía confocal estándar. Este protocolo describe este enfoque a través de los siguientes pasos: 1) diseccionar y preparar el tejido neural, 2) limpiar el tejido, 3) montar el tejido, 4) obtener imágenes de las rebanadas preparadas y 5) procesar imágenes de cortes completos utilizando la reconstrucción y el análisis del software de visualización de microscopía(Figura 2). Estos esfuerzos dan como resultado imágenes de alta resolución que se pueden usar para analizar poblaciones de neuronas, patrones de conexión neuronal, morfología dendrítica 3D, abundancia y morfología de la columna vertebral dendrítica y patrones de expresión molecular dentro del tejido cerebral intacto.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G x 1&#34; Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Acrylamide (No-Bis)</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>EC-810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoretic Tissue Clearing Solution</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C13001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histodenz</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2158-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel Solution Kit</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C1310X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16%</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1x, 500 mL, 6 bottles/case</td>
			<td>fisher</td>
			<td>MT21040CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VA-044</td>
			<td>Wako</td>
			<td>925-41020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Polymerization System</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Tissue Clearing System II</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C30001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing

La actividad cerebral, las señales electroquímicas pasadas entre las neuronas, está determinada por los patrones de conectividad de las redes neuronales y por la morfología de los procesos y subestructuras dentro de estas neuronas. Como tal, gran parte de lo que se sabe sobre la función cerebral ha surgido junto con los desarrollos en tecnologías de imágenes que permiten una mayor comprensión de cómo las neuronas están organizadas y conectadas en el cerebro. Las mejoras en la limpieza de tejidos han permitido imágenes de alta resolución de cortes gruesos de cerebro, facilitando la reconstrucción morfológica y el análisis de subestructuras neuronales, como cenadores dendríticos y espinas. En conjunto, los avances en el software de procesamiento de imágenes proporcionan métodos para analizar rápidamente grandes conjuntos de datos de imágenes. Este trabajo presenta un método relativamente rápido de procesamiento, visualización y análisis de rebanadas gruesas de tejido neural etiquetado a alta resolución utilizando la limpieza de tejidos CLARITY, la microscopía confocal y el análisis de imágenes. Este protocolo facilitará los esfuerzos para comprender los patrones de conectividad y las morfologías neuronales que caracterizan a los cerebros sanos, y los cambios en estas características que surgen en los estados cerebrales enfermos.

Después de la adquisición de la imagen, la morfología celular representativa se analizó utilizando estadísticas integradas y clasificando scripts dentro del software de análisis. Los datos recopilados(Figura 6A)reflejan que la neurona 2 tiene una estructura dendrítica más grande con una mayor densidad de espinas. En general, los datos sugieren que la neurona 2 tiene una estructura dendrítica más compleja en comparación con la neurona 1. Para corroborar este resultado, se realizó ...

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Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing

La morfología dendrítica neuronal a menudo subyace a la función. De hecho, muchos procesos de enfermedad que afectan el desarrollo de las neuronas se manifiestan con un fenotipo morfológico. Este protocolo describe un método simple y poderoso para analizar cenadores dendríticos intactos y sus espinas asociadas.

Obtención de imágenes y cuantificación de dendritas neuronales intactas a través de CLARITY Tissue Clearing

Brain activity, the electrochemical signals passed between neurons, is determined by the connectivity patterns of neuronal networks, and from the ...

Este protocolo permitirá a los investigadores responder preguntas importantes sobre los patrones neuronales de conectividad y organización espacial que subyacen a la función dentro de un circuito. La principal ventaja de esta técnica es que permite la visualización de morfologías neuronales ubicadas en lo profundo del tejido tridimensional intacto. Este método es sencillo y, por lo tanto, fácilmente reproducible.Los experimentadores primerizos deben sentirse cómodos realizando esta técnica. Es imperativo tener una muestra de tejido clara para obtener datos de alta calidad. La demostración visual de la claridad adecuada de los tejidos y las técnicas de limpieza permitirán resultados fácilmente reproducibles.Para comenzar, coloque el tejido cerebral sumergido en hidrogel en una incubadora de vacío durante tres horas a 37 grados centígrados con menos 90 kilopascales de vacío. Deje la parte superior del tubo desenroscado para permitir que el vacío se forme correctamente. Lave el pañuelo con PBS durante 10 minutos a temperatura ambiente con un suave agitación.Coloque la muestra de tejido polimerizado en la cámara de electroforesis, haciendo un seguimiento de la orientación del tejido dentro de la cámara. Llene la cámara y el depósito con el tampón SDS de electroforesis suministrado. Ejecute la muestra a 70 voltios, un amperio y 35 grados Celsius con corriente constante durante aproximadamente dos horas por mililitro de tejido.Revise la muestra periódicamente para obtener suficiente limpieza del tejido cerebral retirándolo de la cámara y reemplazándolo en la misma orientación. Después de que la muestra haya terminado de limpiarse, lávela en PBS durante la noche a temperatura ambiente, reemplazando el PBS con PBS fresco con la mayor frecuencia posible. Después del lavado final en PBS, lave el pañuelo durante cinco minutos en agua desionizada a temperatura ambiente tres veces.El tejido se volverá opaco y puede expandirse. Incubar el tejido en la solución de coincidencia de índice de refracción durante al menos cuatro horas a temperatura ambiente. Durante la incubación, construya una cámara de alojamiento adecuada para obtener imágenes de la muestra.Comience usando un portaobjetos de vidrio como base para el montaje, luego colóquelos de goma o plástico y asegúrelos con súper pegamento, asegurándose de que no haya agujeros. Coloque el tejido transparente en la cámara de montaje precargada con una solución de coincidencia de índice de refracción. Monte el pañuelo de forma segura colocando una cubierta de vidrio en la parte superior y sellándolo con esmalte de uñas.Imagine este tejido agregando una gota de solución de montaje de coincidencia de índice de refracción directamente sobre el vidrio. Para construir una cámara de imágenes de tejidos grandes para tejidos con más de cinco milímetros de grosor, use un plato de vidrio de 10 centímetros con una pared alta. Coloque un tubo cónico de 50 mililitros en el centro, asegurándose de que el diámetro del tubo sea lo suficientemente grande como para aceptar el barril de la lente objetivo utilizada.Haga 3% de agarosa en agua y viértala en el espacio entre el plato de vidrio y el tubo cónico, luego deje que se enfríe durante una hora. Esto formará un anillo de agarosa sólida. Adhiera de forma segura el tejido a la parte inferior de la cámara con súper pegamento y llene la cámara con una solución de coincidencia de índice de refracción, que puede comenzar a polimerizarse a menos que se conserve del aire y se almacene a cuatro grados centígrados.Adquirir la imagen utilizando un microscopio confocal. Encienda todos los equipos de imágenes relevantes. Coloque la muestra en el escenario.Aborde cuidadosamente los medios de inmersión con el objetivo y forme una columna continua de medios. Usando epifluorescencia, encuentre un campo de imágenes apropiado. Comience por establecer la resolución y la velocidad de escaneo.Si se obtienen imágenes con un microscopio confocal, cierre completamente el agujero de alfiler para obtener la sección óptica más pequeña y, por lo tanto, la mejor resolución Z. Aumente gradualmente la potencia del láser o la ganancia del sensor hasta obtener una imagen adecuada con una alta relación señal-ruido. Si utiliza imágenes estándar de dos colores EGFP o tdTomato, establezca la configuración de recolección de luz.Establezca los parámetros de la pila Z en función de los puntos de inicio y final observados del tejido. Establezca el tamaño del paso en función de la resolución Z deseada. Los tamaños de paso más pequeños producirán una mayor resolución Z, pero pueden conducir al blanqueamiento de la muestra.Cuando esté satisfecho con la configuración de adquisición de imágenes, adquiera la imagen. Asegúrese de que la imagen tenga una alta relación señal-ruido y muestre límites distintos de las estructuras. Después de la adquisición de la imagen, la morfología celular representativa se analizó utilizando estadísticas integradas y clasificando scripts dentro del software de análisis.Los datos recopilados reflejan que la Neurona 2 tiene una estructura más grande que la dendrítica con una mayor densidad de espinas en comparación con la Neurona 1. Para corroborar este resultado, se realizó un análisis estándar de Scholl, que afirma que la Neurona 2 es más compleja dendríricamente que la Neurona 1 como se denota por el mayor número de intersecciones de Scholl a 50 a 100 micrómetros del soma. La neurona 1 contiene una mayor proporción de espinas con formas más parecidas a filopodias y es un subtipo de columna inmaduro.Las espinas con cabezas definidas, llamadas espinas de hongo, probablemente contienen sinapsis más desarrolladas y maduras. Por lo tanto, la neurona 2 es más madura con una mayor densidad de espinas maduras. Después de la limpieza, los trozos de tejido se pueden teñir utilizando inmunohistoquímica tradicional.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Intact Histological Characterization of Brain-implanted Microdevices and Surrounding Tissue

Caracterización histológica de avería Microdevices Brain-implantado y el tejido circundante

Research  into the design and utilization of brain-implanted microdevices, such as  microelectrode arrays, aims to produce clinically relevant devices ...

Investigación

Neurociencias

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

Las fibras serotoninérgicos proyección de imagen en la médula espinal de ratón El uso de la claridad / Técnica CÚBICO

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

Clearing óptico del sistema nervioso central del ratón Utilizando CLARITY pasiva

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

La incubación prolongado de aguda neuronal de tejidos para la Sección de Electrofisiología y calcio de imágenes

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

Proyección de imagen de calcio de dos fotones en las dendritas neuronales en rebanadas de cerebro

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Novel Passive Clearing Methods for the Rapid Production of Optical Transparency in Whole CNS Tissue

Nuevo pasivo claro los métodos para la producción rápida de transparencia óptica en todo el tejido del SNC

Since the development of CLARITY, a bioelectrochemical clearing technique that allows for three-dimensional phenotype mapping within transparent tissues, ...

Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy

Monitoreo de la supervivencia Neuronal a través de microscopía de fluorescencia Longitudinal

Standard cytotoxicity assays, which require the collection of lysates or fixed cells at multiple time points, have limited sensitivity and capacity to ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

Un método de limpieza de tejido hidrófobo para el tejido cerebral de rata

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...

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