Name: imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing
Uploaded: 2021-04-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing at JoVE.com

Vi vill tacka den virala kärnan NRDDC vid Jan och Dan Duncan Neurological Institute för att ha producerat AAV och lentivirus som används i dessa experiment. Dessutom vill vi tacka Baylor College of Medicine Center for Comparative Medicine för mushållning och allmänt underhåll av de möss som används. Vi vill tacka American Heart Association för deras stöd under prisnummer 20PRE35040011 och BRASS: Baylor Research Advocates for Student Scientists för deras stöd (PJH). Slutligen vill vi tacka Logos för att ha försett vårt labb med Logos X-Clarity elektroforetiska vävnadsrensningssystem.

Följande protokoll följer alla djurvårdsriktlinjer för Baylor College of Medicine.
1. Dissekering och vävnadsberedning
<ol><li>Avliva musen med en överdos av isofluran genom att placera musen i en sluten behållare med en handduk indränkt i isofluran (eller på annat IUCAC-godkänt sätt).</li>
	<li>Perfusera djuret transkardiiellt med en 25 G nål med 10 ml iskall PBS, följt av 10 ml 4% PFA.</li>
	<li>Dissekera hjärnregionen (eller vävnaden) av intresse.</li>
	<li>Placera den diss...

<ol>
	<li>Abbott, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mind+of+a+mouse.">The Mind of a mouse.</a> Cell. 182 (6), 1372-1376 (2020).</li><li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philosophical transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 314 (1165), 1 (1986).</li><li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+connectivity+among+morphologically+defined+cell+types+in+adult+neocortex.">Principles of connectivity among morphologically defined cell types in adult neocortex.</a> Science. 350 (6264), (2015).</li><li>Winnubst, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstruction+of+1,000+projection+neurons+reveals+new+cell+types+and+organization+of+long-range+connectivity+in+the+mouse+brain.">Reconstruction of 1,000 projection neurons reveals new cell types and organization of long-range connectivity in the mouse brain.</a> Cell. 179 (1), 268-281 (2019).</li><li>Araya, R., Vogels, T. P., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-dependent+dendritic+spine+neck+changes+are+correlated+with+synaptic+strength.">Activity-dependent dendritic spine neck changes are correlated with synaptic strength.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (28), (2014).</li><li>Bosch, M., Hayashi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+plasticity+of+dendritic+spines.">Structural plasticity of dendritic spines.</a> Current Opinion in Neurobiology. 22 (3), 383-388 (2012).</li><li>Mart&#237;nez-Cerde&#241;o, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendrite+and+spine+modifications+in+autism+and+related+neurodevelopmental+disorders+in+patients+and+animal+models.">Dendrite and spine modifications in autism and related neurodevelopmental disorders in patients and animal models.</a> Developmental Neurobiology. 77 (4), 393-404 (2017).</li><li>Arenkiel, B. R., Ehlers, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+and+imaging+technologies+for+circuit-based+neuroanatomy.">Molecular genetics and imaging technologies for circuit-based neuroanatomy.</a> Nature. 461 (7266), 900-907 (2009).</li><li>Kim, E. H., Chin, G., Rong, G., Poskanzer, K. E., Clark, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+probes+for+neurobiological+sensing+and+imaging.">Optical probes for neurobiological sensing and imaging.</a> Accounts of Chemical Research. 51 (5), 1023-1032 (2018).</li><li>Weissman, T. A., Pan, Y. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brainbow:+New+resources+and+emerging+biological+applications+for+multicolor+genetic+labeling+and+analysis.">Brainbow: New resources and emerging biological applications for multicolor genetic labeling and analysis.</a> Genetics. 199 (2), 293-306 (2014).</li><li>Haggerty, D. L., Grecco, G. G., Reeves, K. C., Atwood, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adeno-associated+viral+vectors+in+neuroscience+research.">Adeno-associated viral vectors in neuroscience research.</a> Molecular Therapy - Methods and Clinical Development. 17, 69-82 (2020).</li><li>Chung, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+molecular+interrogation+of+intact+biological+systems.">Structural and molecular interrogation of intact biological systems.</a> Nature. 497 (7449), 332-337 (2013).</li><li>Kanning, K. C., Kaplan, A., Henderson, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+neuron+diversity+in+development+and+disease.">Motor neuron diversity in development and disease.</a> Annual Review of Neuroscience. 33, 409-440 (2010).</li><li>Ledda, F., Paratcha, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+regulating+dendritic+arbor+patterning.">Mechanisms regulating dendritic arbor patterning.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 74 (24), 4511-4537 (2017).</li><li>Falougy, H. E., Filova, B., Ostatnikova, D., Bacova, Z., Bakos, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+morphology+alterations+in+autism+and+possible+role+of+oxytocin.">Neuronal morphology alterations in autism and possible role of oxytocin.</a> Endocrine Regulations. 53 (1), 46-54 (2019).</li></ol>

Före tillkomsten av samtida vävnad clearing tekniker bestod studier neuronal morfologi av tidsintensiva avsnitt, imaging och återuppbyggnad av intilliggande mycket tunna avsnitt. Användning av elektroforisk vävnad clearing i kombination med confocal imaging ger en fri bild av fullständig neuronal morfologi. Från intakt dendritiska träd, ner till den minsta synaptiska bouton, imaging och kvantifiering av neuronal morfologi har aldrig varit mer genomförbart.
Förberedelsen av rensad hj?...

Att förstå rumslig organisation, anslutningsmönster och morfologi av komplexa tredimensionella biologiska strukturer är avgörande för att avgränsa funktionerna hos specifika celler och vävnader. Detta gäller särskilt inom neurovetenskap, där enorma ansträngningar har ägnats åt att bygga högupplösta neuroanatomiska kartor över centrala nervsystemet1,2. Noggrann undersökning av nervcellerna som utgör dessa kartor ger olika morfologier, med anslutningar och platser som återspeglar funktionen hos dessa olika uppsättningar neuroner3,4. Dessutom kan undersökning av subcellulära strukturer, särskilt dendritiska ryggrader, informera synapsernas mognad och därmed återspegla utvecklingsprocesser och neurologiska sjukdomstillstånd5,6,7. Således är metoder som förbättrar bildupplösning och genomströmning avgörande för att bättre förstå hjärnans funktion på alla skalor.
De senaste framstegen har utökat den molekylära och genetiska verktygslådan för att markera och manipulera populationer av nervceller. Utvecklingen av nya fluorescerande markörer, i kombination med nya metoder för att införa dessa markörer i nervceller, möjliggör differentiell märkning av populationer av interagerande nervceller inom samma djur- eller hjärnprov8,9,10,11. Eftersom ljus sprids av ogenomskinliga lipider, och med tanke på det höga lipidinnehållet i hjärnvävnad, har bildåtergivningsneurokala populationer främst begränsats till tunna sektioner eller har förlitat sig på avancerade mikroscropy tekniker (t.ex. konfokal, multifoton och ljusplåt mikroskopi) för att avbilda djupa strukturer. Dessa ansträngningar har dock kraftigt stärkts av framsteg inom vävnadsrensning tekniker. Clear Lipid-exchanged Akrylamid-hybridiserad Rigid Imaging/immunostaining/in situ hybridiseringskompatibel Tissue-hYdrogel (CLARITY) är en sådan teknik, där vävnader av intresse infunderas med hydrogelmonomerer (akrylamid och bis akrylamid) och sedan tvättas med tvättmedel12. Hydrogelmonomererna hybridiserar för att skapa en stabil 3D-hydrogelställning som är optiskt transparent och genomsläpplig för makromolekylära etiketter. Nukleinsyror och proteiner hålls kvar i den hybridiserade matrisen, medan lipider avlägsnas med tvättmedlet(figur 1). Detta resulterar i en stabil vävnad som är tillräckligt styv för att bibehålla den ursprungliga formen och orienteringen av celler och icke-lipidmolekyler, medan optiskt transparent nog för att enkelt avbilda djupa strukturer med hög upplösning. Detta underhåll av vävnadsstruktur och orientering möjliggör avbildning av tjocka skivor, vilket bevarar cell-till-cell-anslutningar och rumsliga relationer. Eftersom placeringen och tillgängligheten av proteiner och nukleinsyror upprätthålls under clearingprocessen kan rensade vävnader dessutom hålla uttrycksbaserade markörer, liksom exogena etiketter. Clarity lämpar sig således som en potent metod för att avbilda stora mängder djupa hjärnstrukturer och kopplingarna mellan dessa strukturer med hög upplösning.
Användningen av CLARITY förbättrar kraftigt metoder för att imaging neuronal populationer. Denna teknik är särskilt skicklig på att generera stora mängder bilddata. CLARITY fungerar bra med flera former av proteinbaserad fluorescens. Detta protokoll använder en lentiviral-baserad metod för glest etikett celler med EGFP och tdTomato; Transgena reporter alleler som uttrycker tdTomato eller EGFP för att märka celler för återuppbyggnad har dock använts rutinmässigt. Det är viktigt att välja en fluorofor som är både fotostabil och ljus (t.ex. EGFP eller tdTomato). Dessutom ger användning av en stark promotor för att uttrycka fluorofor överlägsen kontrast och bildkvalitet. Nackdelarna med denna teknik uppstår som korrekt analysera denna stora mängd data kan vara både arbets- och tidsintensiv. Specialiserade mikroskop kan hjälpa till att förbättra data flödet och minska arbetsbelastningen. Att bygga, äga och/eller driva avancerade mikroskop är dock ofta kostnadsöverkomligt för många laboratorier. Detta arbete presenterar en hög genomströmning, relativt snabb och enkel metod för att visualisera stora mängder neural vävnad vid hög upplösning med CLARITY vävnad clearing av stora sektioner, kombinerat med standard confocal mikroskopi. Detta protokoll beskriver detta tillvägagångssätt genom följande steg: 1) dissekera och förbereda neural vävnaden, 2) rensa vävnaden, 3) montera vävnaden, 4) avbilda de beredda skivorna och 5) bearbeta fullständiga segmentbilder med hjälp av mikroskopi visualisering programvara återuppbyggnad och analys(figur 2). Dessa ansträngningar resulterar i högupplösta bilder som kan användas för att analysera populationer av nervceller, neuronala anslutningsmönster, 3D dendritisk morfologi, dendritisk ryggrad överflöd och morfologi, och molekylära uttryck mönster inom intakt hjärnvävnad.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 G x 1&#34; Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30% Acrylamide (No-Bis)</td>
			<td>National Diagnostics</td>
			<td>EC-810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tube</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>339653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoretic Tissue Clearing Solution</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C13001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histodenz</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2158-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogel Solution Kit</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C1310X</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde 16%</td>
			<td>EMS</td>
			<td>15710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS, 1x, 500 mL, 6 bottles/case</td>
			<td>fisher</td>
			<td>MT21040CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VA-044</td>
			<td>Wako</td>
			<td>925-41020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Polymerization System</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C20001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-CLARITY Tissue Clearing System II</td>
			<td>Logos</td>
			<td>C30001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging and quantification of intact neuronal dendrites via clarity tissue clearing

Hjärnaktivitet, de elektrokemiska signalerna som överförs mellan nervceller, bestäms av anslutningsmönstren för neuronala nätverk och från morfologin av processer och understrukturer inom dessa nervceller. Som sådan har mycket av det som är känt om hjärnans funktion uppstått tillsammans med utvecklingen av bildteknik som möjliggör ytterligare insikt i hur nervceller är organiserade och anslutna i hjärnan. Förbättringar i vävnad clearing har möjliggjort högupplöst bildframställning av tjocka hjärnskivor, underlätta morfologiska återuppbyggnad och analyser av neuronal understrukturer, såsom dendritiska arbors och spines. Tillsammans ger framsteg inom bildbehandlingsprogram metoder för att snabbt analysera stora bilddatauppsättningar. Detta arbete presenterar en relativt snabb metod för bearbetning, visualisering och analys av tjocka skivor av märkta neurala vävnad vid hög upplösning med CLARITY vävnad clearing, konfokal mikroskopi och bild analys. Detta protokoll kommer att underlätta ansträngningar för att förstå anslutningsmönster och neuronala morfologier som kännetecknar friska hjärnor, och de förändringar i dessa egenskaper som uppstår i sjuka hjärntillstånd.

Efter bildförvärv analyserades den representativa cellmorfologin med hjälp av inbäddad statistik och klassificering av skript i analysprogramvaran. De insamlade uppgifterna (figur 6A) återspeglar att neuron 2 har en större dendritisk struktur med högre densitet av ryggraden. Som helhet tyder data på att neuron 2 har en mer komplex dendritisk struktur jämfört med neuron 1. För att underbygga detta resultat utfördes standard Sholl-analys, som bekräftar att neuron 2 är mer dendrit...

Watch this Scientific Journal Video about Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing at JoVE.com

Imaging and Quantification of Intact Neuronal Dendrites via CLARITY Tissue Clearing

Neuronal dendritisk morfologi ligger ofta bakom funktion. Faktum är att många sjukdomsprocesser som påverkar utvecklingen av nervceller manifesterar sig med en morfologisk fenotyp. Detta protokoll beskriver en enkel och kraftfull metod för att analysera intakt dendritiska arbors och deras tillhörande ryggrader.

Avbildning och kvantifiering av intakta neuronala dendriter via CLARITY Tissue Clearing

Brain activity, the electrochemical signals passed between neurons, is determined by the connectivity patterns of neuronal networks, and from the ...

Detta protokoll kommer att göra det möjligt för forskare att svara på viktiga frågor om neuronala mönster för anslutning och rumslig organisation som ligger till grund för funktion inom en krets. Den största fördelen med denna teknik är att det möjliggör visualisering av neuronala morfologier som ligger djupt inom intakt tredimensionell vävnad. Denna metod är enkel och därmed lätt reproducerbar.Första gången experimenterare bör vara bekväma med att utföra denna teknik. Det är absolut nödvändigt att ha ett tydligt vävnadsprov för att få högkvalitativa data. Den visuella demonstrationen av lämplig vävnad klarhet och clearing tekniker kommer att möjliggöra lätt reproducerbara resultat.Till att börja med, placera den hydrogel-nedsänkta hjärnvävnaden i en vakuuminkubator i tre timmar vid 37 grader Celsius med minus 90 kilopascal vakuum. Låt rörskivan skruvas av så att vakuumet kan bildas ordentligt. Tvätta vävnaden med PBS i 10 minuter i rumstemperatur med mild skakning.Placera det polymeriserade vävnadsprovet i elektroforeskammaren och håll reda på vävnadens orientering i kammaren. Fyll kammaren och behållaren med den medföljande elektrofores SDS-bufferten. Kör provet på 70 volt, en ampere och 35 grader Celsius med konstant ström i ungefär två timmar per milliliter vävnad.Kontrollera provet regelbundet för tillräcklig röjning av hjärnvävnad genom att ta bort den från kammaren och ersätta den i samma riktning. När provet har rensats klart, tvätta det i PBS över natten vid rumstemperatur och byt ut PBS med färsk PBS så ofta som möjligt. Efter den slutliga tvätten i PBS, tvätta vävnaden i fem minuter i avjoniserat vatten vid rumstemperatur tre gånger.Vävnaden blir ogenomskinlig och kan expandera. Inkubera vävnaden i brytningsindexmatchningslösningen i minst fyra timmar vid rumstemperatur. Under inkubationen, konstruera en lämplig huskammare för att avbilda provet.Börja med att använda en glasrutschbana som bas för montering, lägg sedan ner antingen gummi- eller plastutrymmen och säkra dem med superlim och se till att det inte finns några hål. Placera den genomskinliga vävnaden i monteringskammaren förfylld med brytningsindexmatchningslösning. Montera vävnaden ordentligt genom att placera ett glasöverdrag ovanpå och försegla den med nagellack.Föreställ dig denna vävnad genom att lägga till en droppe brytningsindexmatchande monteringslösning direkt ovanpå glaset. För att konstruera en stor vävnadsavbildningskammare för vävnader med mer än fem millimeters tjocklek, använd en 10 centimeter glasfat med hög vägg. Placera ett koniskt rör på 50 milliliter i mitten och se till att rörets diameter är tillräckligt stor för att ta emot pipan på den använda objektivlinsen.Gör 3% agaros i vatten och häll det i utrymmet mellan glasfatet och det koniska röret och låt det svalna i en timme. Detta kommer att bilda en ring av solid agaros. Fäst vävnaden ordentligt i botten av kammaren med superlim och fyll kammaren med brytningsindexmatchningslösning, som kan börja polymeriseras om den inte bevaras från luft och lagras vid fyra grader Celsius.Skaffa bilden med hjälp av ett konfokalt mikroskop. Slå på all relevant bildutrustning. Placera provet på scenen.Närma dig noggrant nedsänkningsmediet med målet och bilda en kontinuerlig kolumn av media. Använd epifluorescens, hitta ett lämpligt bildfält. Börja med att ställa in inställningarna för upplösning och skanning av hastighet.Om du avbildar med hjälp av ett konfokalt mikroskop, stäng pinhole helt för att få den minsta optiska sektionen och därmed den bästa Z-upplösningen. Öka gradvis lasereffekten eller sensorvinsten tills en lämplig bild erhålls med ett högt signal-till-brus-förhållande. Om du använder standard EGFP eller tdTomato tvåfärgsavbildning ställer du in ljussamlingsinställningarna.Ställ in Z-stackparametrarna baserat på vävnadens observerade start- och slutpunkter. Ställ in stegstorleken baserat på önskad Z-upplösning. Mindre stegstorlekar ger en större Z-upplösning, men kan leda till provblekning.När du är nöjd med bildförvärvsinställningarna, skaffa bilden. Se till att bilden har ett högt signal-till-brus-förhållande och visar tydliga gränser för strukturer. Efter bildförvärv analyserades den representativa cellmorfologin med hjälp av inbäddad statistik och klassificering av skript i analysprogramvaran.De insamlade uppgifterna återspeglar att Neuron 2 har större än dendritisk struktur med en högre densitet av ryggraden jämfört med Neuron 1. För att underbygga detta resultat utfördes standard Scholl-analys, som bekräftar att Neuron 2 är mer dendritiskt komplex än Neuron 1 som betecknas av det ökade antalet Scholl-korsningar vid 50 till 100 mikrometer från soma. Neuron 1 innehåller en större andel ryggrader med mer filopodialiknande former och är en omogen ryggradsundertyp.Spines med definierade huvuden, så kallade svampryggar, innehåller sannolikt mer utvecklade och mogna synapser. Således är Neuron 2 mer mogen med en högre densitet av mogna ryggrader. Efter clearing kan vävnadsbitarna färgas med traditionell immunohistokemi.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Intact Histological Characterization of Brain-implanted Microdevices and Surrounding Tissue

Intakt Histologisk karakterisering av Brain-implanterade Microdevices och omgivande vävnad

Research  into the design and utilization of brain-implanted microdevices, such as  microelectrode arrays, aims to produce clinically relevant devices ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

Imaging Serotonerga Fibrer i ryggmärgen hos möss med hjälp av CLARITY / CUBIC teknik

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Optical Clearing of the Mouse Central Nervous System Using Passive CLARITY

Optisk Clearing av Mouse centrala nervsystemet med passiv CLARITY

Traditionally, tissue visualization has required that the tissue of interest be serially sectioned and imaged, subjecting each tissue section to unique ...

Prolonged Incubation of Acute Neuronal Tissue for Electrophysiology and Calcium-imaging

Förlängd inkubation av akut neuronal vävnad för elektrofysiologi och kalcium-imaging

Acute neuronal tissue preparations, brain slices and retinal wholemount, can usually only be maintained for 6 - 8 h following dissection. This limits the ...

Two-photon Calcium Imaging in Neuronal Dendrites in Brain Slices

Två-foton kalcium Imaging i nervcellernas dendriter i hjärnan skivor

Calcium (Ca2+) imaging is a powerful tool to investigate the spatiotemporal dynamics of intracellular Ca2+ signals in neuronal dendrites. Ca2+ ...

Novel Passive Clearing Methods for the Rapid Production of Optical Transparency in Whole CNS Tissue

Romanen passiv Clearing metoder för snabb produktion av optisk transparens i hela CNS-vävnaden

Since the development of CLARITY, a bioelectrochemical clearing technique that allows for three-dimensional phenotype mapping within transparent tissues, ...

Monitoring Neuronal Survival via Longitudinal Fluorescence Microscopy

Övervakning Neuronal överlevnad via längsgående fluorescensmikroskopi

Standard cytotoxicity assays, which require the collection of lysates or fixed cells at multiple time points, have limited sensitivity and capacity to ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

En hydrofobisk vävnadsrensningsmetod för råtta hjärnvävnad

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Preparing Adult Drosophila melanogaster for Whole Brain Imaging during Behavior and Stimuli Responses

Förbereda vuxen Drosophila melanogaster för hela hjärnan imaging under beteende och Stimuli svar

We present a method developed specifically to image the whole Drosophila brain during ongoing behavior such as walking. Head fixation and dissection are ...

Immunostaining of Whole-Mount Retinas with the CLARITY Tissue Clearing Method

Immunostaining av helmonterade näthinnor med CLARITY Tissue Clearing Method

The tissue hydrogel delipidation method (CLARITY), originally developed by the Deisseroth laboratory, has been modified and widely used for immunostaining ...