Name: modeling stroke in mice: focal cortical lesions by photothrombosis
Uploaded: 2021-05-06T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis at JoVE.com

نشكر جميع شركائنا في التعاون في اتحادات ضربة المناعة (FOR 2879 ، من الخلايا المناعية إلى استرداد السكتة الدماغية) على الاقتراحات والمناقشات. تم تمويل هذا العمل من قبل دويتشه Forschungsgemeinschaft (DFG، مؤسسة البحوث الألمانية) في إطار استراتيجية التميز الألمانية في إطار مجموعة ميونيخ لطب الأعصاب النظم (EXC 2145 SyNergy - الهوية 390857198) وبموجب المنح LI-2534/6-1، LI-2534/7-1 و LL-112/1-1.

أجريت التجارب التي تم الإبلاغ عنها في هذا الفيديو وفقا للمبادئ التوجيهية الوطنية لاستخدام الحيوانات التجريبية، ووافقت اللجان الحكومية الألمانية على البروتوكولات (ريجيرونغ فون أوبربايرن، ميونيخ، ألمانيا). كانت الفئران المستخدمة في هذه الدراسة من الذكور C57Bl/6J الفئران، 10-12 أسابيع من العمر...

<ol>
	<li>GBD 2016 Causes of Death Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+age-sex+specific+mortality+for+264+causes+of+death,+1980-2016:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2016.">Global, regional, and national age-sex specific mortality for 264 causes of death, 1980-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016.</a> Lancet. 390 (10100), 1151-1210 (2017).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental Neuro Therapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).</li><li>Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+aggregation+in+the+cerebral+microcirculation:+effect+of+aspirin+and+other+agents.">Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents.</a> Circulation Research. 40 (3), 320-328 (1977).</li><li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis.">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Annals of Neurology. 17 (5), 497-504 (1985).</li><li>Bergeron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+photochemical+cortical+lesions+in+rat+brain.">Inducing photochemical cortical lesions in rat brain.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2003).</li><li>Lee, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+induced+cerebral+ischemia+in+a+mouse+model.">Photochemically induced cerebral ischemia in a mouse model.</a> Surgical Neurology. 67 (6), 620-625 (2007).</li><li>Dietrich, W. D., Watson, B. D., Busto, R., Ginsberg, M. D., Bethea, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+induced+cerebral+infarction.+I.+Early+microvascular+alterations.">Photochemically induced cerebral infarction. I. Early microvascular alterations.</a> Acta Neuropathologica. 72 (4), 315-325 (1987).</li><li>Labat-gest, V., Tomasi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photothrombotic+ischemia:+a+minimally+invasive+and+reproducible+photochemical+cortical+lesion+model+for+mouse+stroke+studies.">Photothrombotic ischemia: a minimally invasive and reproducible photochemical cortical lesion model for mouse stroke studies.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (76), e50370 (2013).</li><li>McNutt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Journals+unite+for+reproducibility.">Journals unite for reproducibility.</a> Science. 346 (6210), 679 (2014).</li><li>Llovera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+a+preclinical+randomized+controlled+multicenter+trial+(pRCT):+Anti-CD49d+treatment+for+acute+brain+ischemia.">Results of a preclinical randomized controlled multicenter trial (pRCT): Anti-CD49d treatment for acute brain ischemia.</a> Science Translational Medicine. 7 (299), (2015).</li><li>Dirnagl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+concerted+appeal+for+international+cooperation+in+preclinical+stroke+research.">A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research.</a> Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).</li><li>Bath, P. M., Macleod, M. R., Green, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emulating+multicentre+clinical+stroke+trials:+a+new+paradigm+for+studying+novel+interventions+in+experimental+models+of+stroke.">Emulating multicentre clinical stroke trials: a new paradigm for studying novel interventions in experimental models of stroke.</a> International Journal of Stroke: Official Journal of the INternational Stroke Society. 4 (6), 471-479 (2009).</li><li>Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+The+ARRIVE+guidelines+for+reporting+animal+research.">Improving bioscience research reporting: The ARRIVE guidelines for reporting animal research.</a> Journal of Pharmacology &amp; Pharmacotherapeutics. 1 (2), 94-99 (2010).</li><li>Llovera, G., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+next+step+in+translational+research:+lessons+learned+from+the+first+preclinical+randomized+controlled+trial.">The next step in translational research: lessons learned from the first preclinical randomized controlled trial.</a> Journal of Neurochemistry. 139, 271-279 (2016).</li><li>Gnyawali, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retooling+laser+speckle+contrast+analysis+algorithm+to+enhance+non-invasive+high+resolution+laser+speckle+functional+imaging+of+cutaneous+microcirculation.">Retooling laser speckle contrast analysis algorithm to enhance non-invasive high resolution laser speckle functional imaging of cutaneous microcirculation.</a> Scientific Reports. 7, 41048 (2017).</li><li>Swanson, G. M., Satariano, E. R., Satariano, W. A., Threatt, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Racial+differences+in+the+early+detection+of+breast+cancer+in+metropolitan+Detroit,+1978+to+1987.">Racial differences in the early detection of breast cancer in metropolitan Detroit, 1978 to 1987.</a> Cancer. 66 (6), 1297-1301 (1990).</li><li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurological Research. 19 (6), 641-648 (1997).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (47), e2423 (2011).</li><li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 1 (1), 53-60 (1981).</li><li>Chen, S. T., Hsu, C. Y., Hogan, E. L., Maricq, H., Balentine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+focal+ischemic+stroke+in+the+rat:+reproducible+extensive+cortical+infarction.">A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction.</a> Stroke. 17 (4), 738-743 (1986).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> Journal of Neuroscience Methods. 139 (2), 203-207 (2004).</li><li>Llovera, G., Roth, S., Plesnila, N., Veltkamp, R., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice:+permanent+coagulation+of+the+distal+middle+cerebral+artery.">Modeling stroke in mice: permanent coagulation of the distal middle cerebral artery.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (89), e511729 (2014).</li><li>Cramer, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+widefield+calcium+imaging+of+the+mouse+cortex+for+analysis+of+network+connectivity+in+health+and+brain+disease.">In vivo widefield calcium imaging of the mouse cortex for analysis of network connectivity in health and brain disease.</a> Neuroimage. 199, 570-584 (2019).</li><li>Heindl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+morphological+analysis+of+microglia+after+stroke.">Automated morphological analysis of microglia after stroke.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 106 (2018).</li><li>Nih, L. R., Gojgini, S., Carmichael, S. T., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-function+injectable+angiogenic+biomaterial+for+the+repair+of+brain+tissue+following+stroke.">Dual-function injectable angiogenic biomaterial for the repair of brain tissue following stroke.</a> Nature Materials. 17 (7), 642-651 (2018).</li><li>Rust, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nogo-A+targeted+therapy+promotes+vascular+repair+and+functional+recovery+following+stroke.">Nogo-A targeted therapy promotes vascular repair and functional recovery following stroke.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (28), 14270-14279 (2019).</li><li>Kitano, H., Kirsch, J. R., Hurn, P. D., Murphy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalational+anesthetics+as+neuroprotectants+or+chemical+preconditioning+agents+in+ischemic+brain.">Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 27 (6), 1108-1128 (2007).</li><li>Farr, T. D., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+qualitative+impairments+in+skilled+reaching+in+the+mouse+(Mus+musculus)+after+a+focal+motor+cortex+stroke.">Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke.</a> Stroke. 33 (7), 1869-1875 (2002).</li><li>Kassem-Moussa, H., Graffagnino, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonocclusion+and+spontaneous+recanalization+rates+in+acute+ischemic+stroke:+a+review+of+cerebral+angiography+studies.">Nonocclusion and spontaneous recanalization rates in acute ischemic stroke: a review of cerebral angiography studies.</a> Archives of Neurology. 59 (12), 1870-1873 (2002).</li><li>Sigler, A., Goroshkov, A., Murphy, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hardware+and+methodology+for+targeting+single+brain+arterioles+for+photothrombotic+stroke+on+an+upright+microscope.">Hardware and methodology for targeting single brain arterioles for photothrombotic stroke on an upright microscope.</a> Journal of Neuroscience Methods. 170 (1), 35-44 (2008).</li></ol>

يصف البروتوكول المقدم نموذج السكتة الدماغية التجريبي لداء الخلايا الضوئية من خلال إضاءة الجمجمة السليمة بالليزر 561 نانومتر ، مع حقنة سابقة داخل الصفاق من روز البنغال. وحتى وقت قريب، كان استخدام هذا النموذج منخفضا ولكنه آخذ في الازدياد باطراد.
الوفيات أثناء تحريض السكتة ال?...

لا تزال السكتة الدماغية السبب الرئيسي للوفاة وإعاقة البالغين المكتسبة في البلدان المتقدمة فيالقرن الحادي والعشرين والتي تسبب ما يقرب من 2.7 مليون حالة وفاة في عام 2017 في جميع أنحاء العالم1. حتى مع الجهود الهائلة التي يبذلها المجتمع العلمي ، لا تتوفر سوى القليل من العلاجات. وعلاوة على ذلك، مع مثل هذه المعايير الاستبعاد عالية، وهذه الخيارات محدودة بالفعل ليست في متناول العديد من المرضى، مما أدى إلى حاجة ملحة لعلاجات جديدة لتحسين الانتعاش الوظيفي بعد السكتة الدماغية.
وبالنظر إلى عدم قدرة النماذج المختبرية على تكرار التفاعلات المعقدة للدماغ، فإن النماذج الحيوانية ضرورية لأبحاث السكتة الدماغية قبل السريرية. الفئران هي النموذج الحيواني الأكثر استخداما في مجال أبحاث السكتة الدماغية. وتهدف غالبية هذه النماذج الماوس للحث على احتشاءات عن طريق منع تدفق الدم داخل الشريان الدماغي الأوسط (MCA) منذ تقع غالبية الآفات السكتة الدماغية البشرية في إقليم MCA2. على الرغم من أن هذه النماذج تلخص بشكل أفضل آفات السكتة الدماغية البشرية ، إلا أنها تنطوي على عمليات جراحية ملتصقة مع تباين كبير في حجم العقائد.
منذ روزبلوم واقتراح الصبان من نموذج photothrombotic في 19773, وتطبيق هذا النموذج في وقت لاحق للفئران واتسونوآخرون. نموذج السكتة الدماغية الضوئية يحفز احتشاء القشرية المحلية والمحددة نتيجة لphotoactivation صبغة حساسة للضوء حقن سابقا في تدفق الدم. وهذا يسبب تجلط الأوعية المحلية في المناطق المعرضة للضوء. لفترة وجيزة ، عند التعرض للضوء من الصبغة الحساسة للضوء المحقونة ، يتم تحريض الإصابة التأكسدية الموضعية لغشاء الخلية البطانية ، مما يؤدي إلى تجميع الصفائح الدموية وتشكيل الجلطة ، يليها اضطراب محلي لتدفق الدم الدماغي7.
تكمن الميزة الرئيسية لهذه التقنية في بساطتها في التنفيذ وإمكانية توجيه الآفة إلى المنطقة المرغوبة. على عكس نماذج السكتة الدماغية التجريبية الأخرى ، هناك حاجة إلى خبرة جراحية طفيفة لأداء نموذج السكتة الدماغية الضوئية حيث يتم تحريض الآفة من خلال إضاءة الجمجمة السليمة. وعلاوة على ذلك، فإن الحدود المحددة جيدا(الشكل 2A والشكل 5B)والمرونة للحث على الآفة إلى منطقة معينة في الدماغ يمكن أن تسهل دراسة الاستجابات الخلوية داخل المنطقة القشرية الإقفارية أو السليمة8. لهذه الأسباب، وهذا النهج هو مناسبة لدراسة الآليات الخلوية والجزيئية من اللدونة القشرية.
على مدى العقود القليلة الماضية ، والقلق المتزايد بشأن عدم إعادة الإنتاج بين مجموعات البحوث قد صاغ ما يسمى أزمة النسخ المتماثل9. بعد تنسيق أول دراسة تجريبية متعددة المراكز معشاة قبل السريرية في عام 201510، وهي أداة مقترحة لتحسين الأبحاث قبل السريرية11و12و13، تم التأكيد على أن أحد أسباب عدم الاستنساخ بين الدراسات قبل السريرية من مختبرات مستقلة هو عدم وجود توحيد كاف لنماذج السكتة الدماغية التجريبية ومعلمات النتائج14. وبناء على ذلك، عندما تم تأسيس اتحاد ضربة المناعة (https://immunostroke.de/)، وهو تعاون يهدف إلى فهم التفاعلات بين الدماغ والمناعة الكامنة وراء المبادئ الميكانيكية لاستعادة السكتة الدماغية، كان توحيد جميع نماذج السكتة الدماغية التجريبية بين كل مجموعة بحثية أمرا أساسيا.
وصف هنا هو الإجراء الموحد لتحريض نموذج فوتوثروثوتيك كما هو مستخدم في اتحاد البحوث المذكورة أعلاه. لفترة وجيزة، خضع التخدير، تلقى حقنة روز البنغال (10 ميكرولتر / ز) داخل الصفاق، والجمجمة سليمة، 3 ملم اليسار من bregma، أضاءت على الفور من قبل ليزر 561 نانومتر لمدة 20 دقيقة (الشكل 1). بالإضافة إلى ذلك، يتم الإبلاغ عن طريقة الهسطولوجيا والسلوكية ذات الصلة لتحليل نتائج السكتة الدماغية في هذا النموذج. وتستند جميع الأساليب على إجراءات التشغيل القياسية التي وضعت واستخدمت في المختبر.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>561 nm wavelenght laser</td>
			<td>Solna</td>
			<td>Cobolt HS-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>695092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia system for isoflurane</td>
			<td>Drager</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ApopTag Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>S7100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen pomade</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>1578681</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6J mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collimeter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>F240APC-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotons</td>
			<td>NOBA Verbondmitel Danz</td>
			<td>974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cresyl violet</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific CryoStarNX70</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>521005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 96%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>522078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 99%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>ETO-5000-99-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>432018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11616-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating blanket</td>
			<td>FHC DC Temperature Controller</td>
			<td>&#160;40-90-8D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbot</td>
			<td>B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopentane</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>59070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Speckle</td>
			<td>Perimed</td>
			<td>PeriCam PSI HR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayor Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>1410-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline PH: 7.4</td>
			<td>Apotheke Innestadt Uni Munchen</td>
			<td>P32799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protective glasses</td>
			<td>Laser 2000</td>
			<td>NIR-ZS2-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rose Bengal</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>198250-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roti-Histokit mounting medium</td>
			<td>Roth</td>
			<td>6638.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td>131321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomikroskop</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi DV4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotactic frame</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51500U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylacine</td>
			<td>Albrecht</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling stroke in mice: focal cortical lesions by photothrombosis

السكتة الدماغية هي السبب الرئيسي للوفاة وإعاقة البالغين المكتسبة في البلدان المتقدمة. على الرغم من التحقيق المكثف للاستراتيجيات العلاجية الجديدة ، لا تزال هناك خيارات علاجية محدودة لمرضى السكتة الدماغية. لذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من البحوث للمسارات المرضية مثل التهاب ما بعد السكتة الدماغية ، وتولد الأوعية ، واللدونة العصبية ، والتجديد. ونظرا لعدم قدرة النماذج المختبرية على إعادة إنتاج تعقيد الدماغ، فإن نماذج السكتة الدماغية التجريبية ضرورية لتحليل وتقييم أهداف الأدوية الجديدة لهذه الآليات وتقييمها لاحقا. وبالإضافة إلى ذلك، هناك حاجة ماسة إلى نماذج موحدة مفصلة لجميع الإجراءات للتغلب على ما يسمى بأزمة النسخ المتماثل. كجهد داخل اتحاد أبحاث ImmunoStroke ، يتم وصف نموذج ماوس فوتوثرومبوتيك موحد باستخدام حقنة داخل الصفاق من روز البنغال وإضاءة الجمجمة السليمة بليزر 561 نانومتر. يسمح هذا النموذج بأداء السكتة الدماغية في الفئران مع تخصيصها لأي منطقة قشرية في الدماغ دون جراحة جراحية غازية. وبالتالي، تمكين دراسة السكتة الدماغية في مناطق مختلفة من الدماغ. في هذا الفيديو ، يتم عرض الطرق الجراحية لتحريض السكتة الدماغية في النموذج الضوئي جنبا إلى جنب مع التحليل النسيجي.

النموذج الموصوف هنا هو نموذج السكتة الدماغية الضوئية عن طريق حقن روز البنغال وإضاءة الجمجمة سليمة لمدة 20 دقيقة، في الطول الموجي ثابت 561 نانومتر و 25 كيلوواط قوة الانتاج في الألياف. على الرغم من أن الجراحة الفوتوثروبومبوتيك الكاملة تستمر 30 دقيقة ، إلا أن الحيوان يبقى تحت تخدير منخفض وتلف ال?...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis at JoVE.com

Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis

الموصوف هنا هو نموذج السكتة الدماغية الضوئية ، حيث يتم إنتاج السكتة الدماغية من خلال الجمجمة سليمة عن طريق تحفيز انسداد الأوعية الدموية الدقيقة الدائمة باستخدام إضاءة الليزر بعد إدارة صبغة حساسة للضوء.

النمذجة السكتة الدماغية في الفئران: الآفات القشرية البؤرية عن طريق Photothrombosis

Stroke is a leading cause of death and acquired adult disability in developed countries. Despite extensive investigation for novel therapeutic strategies, ...

قد نهج نموذج السكتة الدماغية photothrombosis مناسبة للدراسات الخلوية والجزيئية من اللدونة القشرية بسبب الحدود المحدودة والمرونة للحث على الإصابة في مناطق مختلفة من القشرة. تميز ثلاث مزايا مبدئية نموذج الورم الضوئي عن نماذج السكتة الدماغية الأخرى ، وإمكانية توجيه الآفة إلى المنطقة المرغوبة ، وقابلية الاستنساخ العالية ، وانخفاض معدل الوفيات. ال دوس البنغال ارتفع السليم أمر بالغ الأهمية لنجاح واستقرار النموذج.تعتمد النتائج على المواصفات التقنية مثل طاقة الليزر وتوقيت التطبيق المتقاطع والشلن البصري للقشرة غير المتأثرة. تبدأ عن طريق حل ارتفع البنغال في محلول ملحي 0.9٪ لتركيز النهائي من 10 ملليغرام لكل ملليلتر. تعقيم دقيق لجميع الأدوات باستخدام معقم الرصاص الساخن وتطهير جميع الأسطح قبل وبعد الجراحة مع رذاذ مطهر الميكروبات.إعداد حقنة مليئة محلول ملحي للحفاظ على منطقة العملية رطب وإعداد غاز التخدير. قياس وزن الجسم من الماوس لضبط جرعة من ارتفع البنغال ليتم حقنها. تعيين الملاحظات المرتبطة وسادة التدفئة التي تسيطر عليها للحفاظ على درجة حرارة جسم الماوس.بمجرد تخدير الفأرة وإصلاحها بالكامل في الإطار المجسم ، أدخل مسبار المستقيم برفق لمراقبة درجة حرارة جسم الماوس طوال العملية الجراحية. تطبيق مرهم العين Dex panthenol على كل من العينين وتنظيف الجلد والفراء المحيطة بها مع عامل تطهير. استخدام مقص لجعل واحد 2-2 ونصف سنتيمتر شق طولي والتراجع لفضح الجمجمة.استخدام القطن لإزالة بلطف periosteum وتحديد موقع الغرز التاجية. ارتداء نظارات واقية أثناء التبديل على الليزر 561 نانومتر ووضع علامة زائد ثلاثة ملليمترات إلى اليسار، ثم إيقاف الليزر وربط الملصق مع ثقب قطرها أربعة ملليمتر في الإحداثيات ملحوظ. حقن الفأر داخل الباريتال مع ارتفع البنغال.ضع شعاع الليزر على مسافة أربعة إلى خمسة سنتيمترات من الجمجمة. قم بتشغيل الليزر وأضيء الجمجمة لمدة 20 دقيقة. إعادة ترطيب الجمجمة عن طريق تطبيق قطرتين من 0.9٪ المالحة.بعد خياطة الجرح، ضع الماوس في غرفة الإنعاش عند 37 درجة مئوية للتعافي من التخدير. بعد ساعة واحدة، ضع الماوس مرة أخرى في القفص في غرفة درجة الحرارة التي تسيطر عليها. تم استخدام وصمة عار الكريستال البنفسجي إلى أقسام الدماغ التاجية التسلسلية لتحليل دخول حجم العقورة بعد 24 ساعة من تحريض السكتة الدماغية.كان تقلب نموذج السكتة الدماغية هذا منخفضا ، وكان متوسط حجم الخطى 29.3 ملليمترا مكعبا ، وهو ما يمثل 23٪ من نصف الكرة الدماغي الواحد. تسببت آفة التجلط الضوئي في ضعف محركي حسي معتدل وطويل الأجل تشير إليه النتيجة العصبية المركبة. كان لحيوانات السكتة الدماغية تغيير كبير في النتيجة العصبية بعد 24 ساعة من الجراحة.على الرغم من استمرار الاختلافات ، تحسنت فئران السكتة الدماغية بمرور الوقت. في الفئران التي تعرضت لروز البنغال بالإضافة إلى الإضاءة ، انخفض وزن الجسم ودرجة حرارة الجسم بعد 24 ساعة من الجراحة. ومع ذلك ، في غضون ثلاثة أيام بعد الجراحة ، لوحظ الشفاء.تم تأكيد التغيرات الإقفارية باستخدام التصوير بالليزر. وأشارت النتائج إلى أن إضاءة البنغال الوردي أو الليزر وحدها لم تنتج آفة في حين أن التطبيق المتزامن لكليهما ولد منطقة مستديرة من hypoperfused محاطة بمنطقة أوليغوميريك الضيقة. كشف تلطيخ الكريستال البنفسجي والنفق لتقييم حجم العصى بعد 24 ساعة من الجراحة عن عدم تلف الأنسجة سواء في جراحات إضاءة البنغال الوردية أو الليزر.من ناحية أخرى ، ولدت ارتفع البنغال بالإضافة إلى إضاءة الليزر آفة ترسيمها بشكل جيد. من المهم قياس وزن جسم الحيوان لضبط حقنة البنغال الوردية. الشرط الصحيح للمحولات الطبيب الشرعي مهم للحث على آفة متسقة بين الحيوانات.وبما أن هذا البروتوكول يترك الجمجمة سليمة ويمكن حتى أن يتم من خلال النوافذ القحفية، يمكن دمجها مع حقل واسع أو فوتون متعدد في التصوير الحي.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

التنسيق النموذجي نقص تروية الدماغ عن طريق خياطة اللف انسداد الشريان الدماغي الأوسط في الجرذ

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

في الرحم بعد Electroporation للثقافة متعلق بالخلايا العصبية الأولية لدراسة وظائف الجينات في مجموعة فرعية من العصبونات القشرية

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Measurement of Total Calcium in Neurons by Electron Probe X-ray Microanalysis

قياس إجمالي الكالسيوم في الخلايا العصبية بواسطة الكترون مسبار الأشعة السينية التحليل المجهري

In this article the tools, techniques, and instruments appropriate for quantitative measurements of intracellular elemental content using the technique ...

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

النمذجة الخلايا النجمية إمراض<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em&gt; استخدام القشرية النجمية أو الخلايا الجذعية العصبية من الشرطي، الفئران المهندسة وراثيا

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

Experimental Demyelination and Remyelination of Murine Spinal Cord by Focal Injection of Lysolecithin

التجريبية إزالة الميالين وعودة الميالين من الحبل الشوكي الفئران عن طريق حقن البؤري من ليزوليسيتين

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease of the central nervous system characterized by plaque formation containing lost ...

Quantification of Filamentous Actin (F-actin) Puncta in Rat Cortical Neurons

Quantification of Filamentous Actin F-actin Puncta in Rat Cortical Neurons

الكمي لشعيري أكتين (F-الأكتين) نقاط وفي الجرذ العصبونات القشرية

Filamentous actin protein (F-actin) plays a major role in spinogenesis, synaptic plasticity, and synaptic stability. Changes in dendritic F-actin rich ...

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

تمكين إعداد النافذة الجانبية المزمنة الجمجمة<em&gt; في فيفو</em&gt; الملاحظة التالية القاصي الأوسط الشلل انسداد الشريان في الفئران

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

Modeling Charcot-Marie-Tooth Disease In Vitro by Transfecting Mouse Primary Motoneurons

Modeling Charcot-Marie-Tooth Disease In Vitro by Transfecting Mouse Primary Motoneurons

النمذجة شاركو-ماري الأسنان المرض في المختبر من قبل ترانسفيكتينج موتونيورونس الابتدائي الماوس

Neurodegeneration of spinal motoneurons (MNs) is implicated in a large spectrum of neurological disorders including amyotrophic lateral sclerosis, ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

في فيفو اثنين-فوتون تصوير الخلايا العصبية القشرية في الفئران حديثي الولادة

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery

النمذجة السكتة الدماغية في الفئران: انسداد الشريان الدماغي الأوسط عابرة عن طريق الشريان السباتي الخارجي

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options ...