Name: modeling stroke in mice: focal cortical lesions by photothrombosis
Uploaded: 2021-05-06T14:00:00
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Nous remercions tous nos partenaires de collaboration des consortiums Immunostroke (FOR 2879, From immune cells to stroke recovery) pour leurs suggestions et discussions. Ce travail a été financé par la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, Fondation allemande pour la recherche) dans le cadre de la stratégie d’excellence de l’Allemagne dans le cadre du Cluster de Munich pour la neurologie des systèmes (EXC 2145 SyNergy - ID 390857198) et dans le cadre des subventions LI-2534/6-1, LI-2534/7-1 et LL-112/1-1.

Les expériences rapportées dans cette vidéo ont été menées conformément aux directives nationales pour l’utilisation d’animaux de laboratoire, et les protocoles ont été approuvés par les comités gouvernementaux allemands (Regierung von Oberbayern, Munich, Allemagne). Les souris utilisées dans cette étude étaient des souris mâles C57Bl/6J, âgées de 10 à 12 semaines, et envoyées par Charles River Allemagne. Les animaux ont été logés à des températures contrôlées (22 °C ± 2 °C), avec une pé...

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	<li>GBD 2016 Causes of Death Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+age-sex+specific+mortality+for+264+causes+of+death,+1980-2016:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2016.">Global, regional, and national age-sex specific mortality for 264 causes of death, 1980-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016.</a> Lancet. 390 (10100), 1151-1210 (2017).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental Neuro Therapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).</li><li>Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+aggregation+in+the+cerebral+microcirculation:+effect+of+aspirin+and+other+agents.">Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents.</a> Circulation Research. 40 (3), 320-328 (1977).</li><li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. 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K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+induced+cerebral+ischemia+in+a+mouse+model.">Photochemically induced cerebral ischemia in a mouse model.</a> Surgical Neurology. 67 (6), 620-625 (2007).</li><li>Dietrich, W. D., Watson, B. D., Busto, R., Ginsberg, M. D., Bethea, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+induced+cerebral+infarction.+I.+Early+microvascular+alterations.">Photochemically induced cerebral infarction. I. Early microvascular alterations.</a> Acta Neuropathologica. 72 (4), 315-325 (1987).</li><li>Labat-gest, V., Tomasi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photothrombotic+ischemia:+a+minimally+invasive+and+reproducible+photochemical+cortical+lesion+model+for+mouse+stroke+studies.">Photothrombotic ischemia: a minimally invasive and reproducible photochemical cortical lesion model for mouse stroke studies.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (76), e50370 (2013).</li><li>McNutt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Journals+unite+for+reproducibility.">Journals unite for reproducibility.</a> Science. 346 (6210), 679 (2014).</li><li>Llovera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+a+preclinical+randomized+controlled+multicenter+trial+(pRCT):+Anti-CD49d+treatment+for+acute+brain+ischemia.">Results of a preclinical randomized controlled multicenter trial (pRCT): Anti-CD49d treatment for acute brain ischemia.</a> Science Translational Medicine. 7 (299), (2015).</li><li>Dirnagl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+concerted+appeal+for+international+cooperation+in+preclinical+stroke+research.">A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research.</a> Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).</li><li>Bath, P. M., Macleod, M. R., Green, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emulating+multicentre+clinical+stroke+trials:+a+new+paradigm+for+studying+novel+interventions+in+experimental+models+of+stroke.">Emulating multicentre clinical stroke trials: a new paradigm for studying novel interventions in experimental models of stroke.</a> International Journal of Stroke: Official Journal of the INternational Stroke Society. 4 (6), 471-479 (2009).</li><li>Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+The+ARRIVE+guidelines+for+reporting+animal+research.">Improving bioscience research reporting: The ARRIVE guidelines for reporting animal research.</a> Journal of Pharmacology &amp; Pharmacotherapeutics. 1 (2), 94-99 (2010).</li><li>Llovera, G., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+next+step+in+translational+research:+lessons+learned+from+the+first+preclinical+randomized+controlled+trial.">The next step in translational research: lessons learned from the first preclinical randomized controlled trial.</a> Journal of Neurochemistry. 139, 271-279 (2016).</li><li>Gnyawali, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retooling+laser+speckle+contrast+analysis+algorithm+to+enhance+non-invasive+high+resolution+laser+speckle+functional+imaging+of+cutaneous+microcirculation.">Retooling laser speckle contrast analysis algorithm to enhance non-invasive high resolution laser speckle functional imaging of cutaneous microcirculation.</a> Scientific Reports. 7, 41048 (2017).</li><li>Swanson, G. M., Satariano, E. R., Satariano, W. A., Threatt, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Racial+differences+in+the+early+detection+of+breast+cancer+in+metropolitan+Detroit,+1978+to+1987.">Racial differences in the early detection of breast cancer in metropolitan Detroit, 1978 to 1987.</a> Cancer. 66 (6), 1297-1301 (1990).</li><li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurological Research. 19 (6), 641-648 (1997).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (47), e2423 (2011).</li><li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 1 (1), 53-60 (1981).</li><li>Chen, S. T., Hsu, C. Y., Hogan, E. L., Maricq, H., Balentine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+focal+ischemic+stroke+in+the+rat:+reproducible+extensive+cortical+infarction.">A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction.</a> Stroke. 17 (4), 738-743 (1986).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> Journal of Neuroscience Methods. 139 (2), 203-207 (2004).</li><li>Llovera, G., Roth, S., Plesnila, N., Veltkamp, R., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice:+permanent+coagulation+of+the+distal+middle+cerebral+artery.">Modeling stroke in mice: permanent coagulation of the distal middle cerebral artery.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (89), e511729 (2014).</li><li>Cramer, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+widefield+calcium+imaging+of+the+mouse+cortex+for+analysis+of+network+connectivity+in+health+and+brain+disease.">In vivo widefield calcium imaging of the mouse cortex for analysis of network connectivity in health and brain disease.</a> Neuroimage. 199, 570-584 (2019).</li><li>Heindl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+morphological+analysis+of+microglia+after+stroke.">Automated morphological analysis of microglia after stroke.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 106 (2018).</li><li>Nih, L. R., Gojgini, S., Carmichael, S. T., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-function+injectable+angiogenic+biomaterial+for+the+repair+of+brain+tissue+following+stroke.">Dual-function injectable angiogenic biomaterial for the repair of brain tissue following stroke.</a> Nature Materials. 17 (7), 642-651 (2018).</li><li>Rust, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nogo-A+targeted+therapy+promotes+vascular+repair+and+functional+recovery+following+stroke.">Nogo-A targeted therapy promotes vascular repair and functional recovery following stroke.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (28), 14270-14279 (2019).</li><li>Kitano, H., Kirsch, J. R., Hurn, P. D., Murphy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalational+anesthetics+as+neuroprotectants+or+chemical+preconditioning+agents+in+ischemic+brain.">Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 27 (6), 1108-1128 (2007).</li><li>Farr, T. D., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+qualitative+impairments+in+skilled+reaching+in+the+mouse+(Mus+musculus)+after+a+focal+motor+cortex+stroke.">Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke.</a> Stroke. 33 (7), 1869-1875 (2002).</li><li>Kassem-Moussa, H., Graffagnino, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonocclusion+and+spontaneous+recanalization+rates+in+acute+ischemic+stroke:+a+review+of+cerebral+angiography+studies.">Nonocclusion and spontaneous recanalization rates in acute ischemic stroke: a review of cerebral angiography studies.</a> Archives of Neurology. 59 (12), 1870-1873 (2002).</li><li>Sigler, A., Goroshkov, A., Murphy, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hardware+and+methodology+for+targeting+single+brain+arterioles+for+photothrombotic+stroke+on+an+upright+microscope.">Hardware and methodology for targeting single brain arterioles for photothrombotic stroke on an upright microscope.</a> Journal of Neuroscience Methods. 170 (1), 35-44 (2008).</li></ol>

Le protocole présenté décrit le modèle expérimental de photothrommose par AVC en éclairant le crâne intact avec un laser de 561 nm, avec une injection intrapéritonéale précédente de Rose Bengal. Jusqu’à récemment, l’utilisation de ce modèle était faible mais ne cesse d’augmenter.
La mortalité pendant l’induction de l’AVC dans ce modèle est absente. La mortalité globale de moins de 5% survient pendant l’opération en raison de complications anesthésiologiques ou d...

L’AVC ischémique reste l’une des principales causes de décès et d’invalidité acquise chez les adultes dans les paysdéveloppés au 21e siècle, représentant environ 2,7 millions de décès en 2017 dans le monde1. Malgré les immenses efforts de la communauté scientifique, peu de traitements sont disponibles. De plus, avec des critères d’exclusion aussi élevés, ces options déjà limitées ne sont pas accessibles à de nombreux patients, ce qui entraîne un besoin urgent de nouveaux traitements pour améliorer la récupération fonctionnelle après un AVC.
Compte tenu de l’incapacité des modèles in vitro à reproduire les interactions complexes du cerveau, les modèles animaux sont essentiels pour la recherche préclinique sur les accidents vasculaires cérébraux. Les souris sont le modèle animal le plus fréquemment utilisé dans le domaine de la recherche sur les accidents vasculaires cérébraux. La majorité de ces modèles murins visent à induire des infarctus en bloquant le flux sanguin dans l’artère cérébrale moyenne (ACM) puisque la majorité des lésions humaines d’AVC sont situées dans le territoire du MCA2. Bien que ces modèles récapitulent mieux les lésions d’AVC humain, ils impliquent des chirurgies convulsées avec une variabilité élevée du volume de l’infarctus.
Depuis la proposition de Rosenblum et El-Sabban du modèle photothrombotique en 19773,et plus tard l’application de ce modèle aux rats Watson et al.4,il est devenu largement utilisé dans la recherche sur l’AVC ischémique5,6. Le modèle d’AVC photothrombotique induit un infarctus cortical local et défini à la suite de la photoactivation d’un colorant sensible à la lumière préalablement injecté dans le flux sanguin. Cela provoque une thrombose locale des vaisseaux dans les zones exposées à la lumière. En bref, lors de l’exposition à la lumière du colorant photosensible injecté, une lésion oxydative localisée de la membrane cellulaire endothéliale est induite, entraînant une agrégation plaquettaire et la formation de thrombus, suivies d’une perturbation locale du flux sanguin cérébral7.
Le principal avantage de cette technique réside dans sa simplicité d’exécution et la possibilité de diriger la lésion vers la région souhaitée. Contrairement à d’autres modèles expérimentaux d’AVC, une expertise chirurgicale mineure est nécessaire pour effectuer le modèle d’AVC photothrombotique car la lésion est induite par l’éclairage du crâne intact. De plus, les bordures bien délimitées(Figure 2A et Figure 5B)et la flexibilité pour induire la lésion à une région spécifique du cerveau peuvent faciliter l’étude des réponses cellulaires au sein de l’aire ischémique ou corticale intacte8. Pour ces raisons, cette approche convient à l’étude des mécanismes cellulaires et moléculaires de la plasticité corticale.
Au cours des dernières décennies, l’inquiétude croissante concernant le manque de reproductibilité entre les groupes de recherche a été appelée la crise dite de la réplication9. Après la coordination de la première étude préclinique randomisée contrôlée multicentrique en 201510, un outil proposé pour améliorer la recherche préclinique11 , 12,13, il a été confirmé que l’une des causes de l’échec de la reproductibilité entre les études précliniques de laboratoires indépendants était le manque de normalisation suffisante des modèles expérimentaux d’AVC et des paramètres de résultats14. Par conséquent, lorsque le consortium ImmunoStroke a été créé (https://immunostroke.de/), une collaboration qui vise à comprendre les interactions cerveau-immunité sous-jacentes aux principes mécanistes de la récupération de l’AVC, la normalisation de tous les modèles expérimentaux d’AVC entre chaque groupe de recherche était essentielle.
La procédure normalisée pour l’induction du modèle photothrombotique telle qu’utilisée dans le consortium de recherche susmentionné est décrite ici. Brièvement, un animal a subi des anesthésiques, a reçu une injection de Rose Bengal (10 μL / g) par voie intrapéritonale, et le crâne intact, à 3 mm à gauche de bregma, a été immédiatement éclairé par un laser de 561 nm pendant 20 min(Figure 1). En outre, une méthode histologique et comportementale connexe pour analyser le résultat de l’AVC dans ce modèle est rapportée. Toutes les méthodes sont basées sur des procédures opérationnelles normalisées développées et utilisées en laboratoire.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>561 nm wavelenght laser</td>
			<td>Solna</td>
			<td>Cobolt HS-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>695092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia system for isoflurane</td>
			<td>Drager</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ApopTag Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>S7100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen pomade</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>1578681</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6J mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collimeter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>F240APC-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotons</td>
			<td>NOBA Verbondmitel Danz</td>
			<td>974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cresyl violet</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific CryoStarNX70</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>521005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 96%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>522078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 99%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>ETO-5000-99-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>432018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11616-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating blanket</td>
			<td>FHC DC Temperature Controller</td>
			<td>&#160;40-90-8D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbot</td>
			<td>B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopentane</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>59070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Speckle</td>
			<td>Perimed</td>
			<td>PeriCam PSI HR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayor Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>1410-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline PH: 7.4</td>
			<td>Apotheke Innestadt Uni Munchen</td>
			<td>P32799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protective glasses</td>
			<td>Laser 2000</td>
			<td>NIR-ZS2-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rose Bengal</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>198250-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roti-Histokit mounting medium</td>
			<td>Roth</td>
			<td>6638.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td>131321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomikroskop</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi DV4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotactic frame</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51500U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylacine</td>
			<td>Albrecht</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling stroke in mice: focal cortical lesions by photothrombosis

L’AVC est l’une des principales causes de décès et d’invalidité acquise chez les adultes dans les pays développés. Malgré des recherches approfondies pour de nouvelles stratégies thérapeutiques, il reste des options thérapeutiques limitées pour les patients victimes d’un AVC. Par conséquent, davantage de recherches sont nécessaires pour les voies physiopathologiques telles que l’inflammation post-AVC, l’angiogenèse, la plasticité neuronale et la régénération. Compte tenu de l’incapacité des modèles in vitro à reproduire la complexité du cerveau, les modèles expérimentaux d’AVC sont essentiels pour l’analyse et l’évaluation ultérieure de nouvelles cibles médicamenteuses pour ces mécanismes. En outre, des modèles standardisés détaillés pour toutes les procédures sont nécessaires de toute urgence pour surmonter la crise dite de la réplication. Dans le cadre d’un effort au sein du consortium de recherche ImmunoStroke, un modèle murin photothrombotique standardisé utilisant une injection intrapéritonéale de Rose Bengal et l’éclairage du crâne intact avec un laser de 561 nm est décrit. Ce modèle permet la performance de l’AVC chez la souris avec une allocation à n’importe quelle région corticale du cerveau sans chirurgie invasive; permettant ainsi l’étude de l’AVC dans diverses zones du cerveau. Dans cette vidéo, les méthodes chirurgicales d’induction de l’AVC dans le modèle photothrombotique ainsi que l’analyse histologique sont démontrées.

Le modèle décrit ici est un modèle de course photothrombotique par injection de Rose Bengal et éclairage intact du crâne pendant 20 min, à une longueur d’onde constante de 561 nm et une puissance de sortie de 25 mW à la fibre. Bien que la chirurgie photothrombotique complète dure 30 minutes, l’animal est maintenu sous anesthésie basse et les lésions cérébrales sont modérées. Environ 10 minutes après le transfert dans leurs cages, tous les animaux étaient éveillés, se déplaçaient librement dans la ...

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Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis

Décrit ici est le modèle d’AVC photothrombotique, où un AVC est produit à travers le crâne intact en induisant une occlusion microvasculaire permanente à l’aide d’un éclairage laser après administration d’un colorant photosensible.

Modélisation de l’AVC chez la souris: lésions corticales focales par photothrombose

Stroke is a leading cause of death and acquired adult disability in developed countries. Despite extensive investigation for novel therapeutic strategies, ...

L’approche du modèle d’AVC de photothrommose peut convenir aux études cellulaires et moléculaires de la plasticité corticale en raison des frontières limitées et de la flexibilité pour induire des lésions dans différentes zones du cortex. Trois principaux avantages distinguent le modèle de photothrommbose des autres modèles d’AVC, la possibilité de diriger la lésion vers la région souhaitée, sa reproductibilité élevée et sa faible mortalité. Un dosage approprié du bengale rose est essentiel pour le succès et la stabilité du modèle.Les résultats dépendent de spécifications techniques telles que la puissance laser, la synchronisation des applications croisées et le shilling optique du cortex non affecté. Commencez par dissoudre le bengale rose dans une solution saline à 0,9% pour une concentration finale de 10 milligrammes par millilitre. Stérilisez méticuleusement tous les instruments à l’aide d’un stérilisateur au plomb chaud et désinfectez toutes les surfaces avant et après la chirurgie avec un spray désinfectant microbien.Préparez une seringue remplie de solution saline pour maintenir la zone d’opération hydratée et préparer le gaz d’anesthésie. Mesurez le poids corporel de la souris pour ajuster la dose de bengale rose à injecter. Réglez le coussin chauffant contrôlé par rétroaction associé pour maintenir la température corporelle de la souris.Une fois que la souris est complètement anesthésiée et fixée dans le cadre stéréotaxique, insérez doucement la sonde rectale pour surveiller la température corporelle de la souris tout au long de l’intervention chirurgicale. Appliquez la pommade pour les yeux au panthénol Dex sur les deux yeux et nettoyez la peau et la fourrure environnante avec un agent désinfectant. Utilisez des ciseaux pour faire une seule incision longitudinale de deux à deux centimètres et demi et rétractez-vous pour exposer le crâne.Utilisez du coton pour retirer doucement le périoste et localiser les sutures coronales. Portez des lunettes de protection lorsque vous allumez le laser de 561 nanomètres et marquez le plus trois millimètres à gauche, puis éteignez le laser et accrochez l’autocollant avec un trou de quatre millimètres de diamètre dans les coordonnées marquées. Injecter à la souris intrapariétale du bengale rose.Placez le faisceau laser à une distance de quatre à cinq centimètres du crâne. Allumez le laser et illuminez le crâne pendant 20 minutes. Réhydratez le crâne en appliquant deux gouttes de solution saline à 0,9%.Après avoir guéri la plaie, placez la souris dans une chambre de récupération à 37 degrés Celsius pour récupérer de l’anesthésie. Après une heure, replacez la souris dans la cage dans une pièce à température contrôlée. La coloration violette cristalline aux sections coronales du cerveau en série a été utilisée pour l’analyse d’entrée de volume de l’infarctus après 24 heures de l’induction de l’AVC.La variabilité de ce modèle d’AVC était faible et le volume moyen de l’infarctus était de 29,3 millimètres cubes, ce qui représentait 23% de l’hémisphère cérébral. La lésion phototrombeuse a provoqué une déficience motrice sensorielle modérée et à long terme indiquée par le score neuro composite. Les animaux victimes d’un AVC ont eu un changement significatif dans le score neurologique 24 heures après la chirurgie.Même si les différences persistaient, les souris AVC se sont améliorées au fil du temps. Chez les souris soumises à l’éclairage rose bengal plus, le poids corporel et la température corporelle ont diminué 24 heures après la chirurgie. Cependant, dans les trois jours suivant l’opération, une récupération a été observée.Les changements ischémiques ont été confirmés à l’aide de l’imagerie laser. Les résultats ont indiqué que l’éclairage rose bengal ou laser seul ne produisait pas de lésion tandis que l’application simultanée des deux générait une zone hypoperfusée ronde entourée par la zone oligomère étroite. Le violet cristallin et la coloration en tunnel pour l’évaluation du volume de l’infarctus 24 heures après la chirurgie n’ont révélé aucune lésion tissulaire, que ce soit dans les chirurgies d’éclairage rose bengal ou laser.D’autre part, le bengale rose plus l’éclairage laser ont généré une lésion bien délimitée. Il est important de mesurer le poids corporel de l’animal pour ajuster l’injection de bengale rose. L’état correct des commutateurs de coroner est important pour induire une lésion constante entre les animaux.Étant donné que ce protocole laisse le crâne intact et peut même être effectué à travers les fenêtres crâniennes, il peut être combiné avec l’imagerie in vivo à grand champ ou multiphotons.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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Recherche

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