Name: modeling stroke in mice: focal cortical lesions by photothrombosis
Uploaded: 2021-05-06T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis at JoVE.com

Vi tackar alla våra samarbetspartners i Immunostroke Consortia (FOR 2879, Från immunceller till strokeåterhämtning) för förslag och diskussioner. Detta arbete finansierades av Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG,German Research Foundation) inom ramen för Tysklands excellensstrategi inom ramen för Münchenklustret för systemneurologi (EXC 2145 SyNergy - ID 390857198) och inom ramen för bidragen LI-2534/6-1, LI-2534/7-1 och LL-112/1-1.

De experiment som rapporterades i denna video utfördes i enlighet med de nationella riktlinjerna för användning av försöksdjur, och protokollen godkändes av de tyska statliga kommittéerna (Regierung von Oberbayern, München, Tyskland). Mössen som användes i denna studie var manliga C57Bl/6J möss, 10-12 veckor gamla, och skickades av Charles River Tyskland. Djuren inhystes under kontrollerade temperaturer (22 °C ± 2 °C), med en 12 h ljus-mörk cykelperiod och tillgång till pelleterad mat och vatten ad li...

<ol>
	<li>GBD 2016 Causes of Death Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+age-sex+specific+mortality+for+264+causes+of+death,+1980-2016:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study+2016.">Global, regional, and national age-sex specific mortality for 264 causes of death, 1980-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2016.</a> Lancet. 390 (10100), 1151-1210 (2017).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx: The Journal of the American Society for Experimental Neuro Therapeutics. 2 (3), 396-409 (2005).</li><li>Rosenblum, W. I., El-Sabban, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+aggregation+in+the+cerebral+microcirculation:+effect+of+aspirin+and+other+agents.">Platelet aggregation in the cerebral microcirculation: effect of aspirin and other agents.</a> Circulation Research. 40 (3), 320-328 (1977).</li><li>Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+reproducible+brain+infarction+by+photochemically+initiated+thrombosis.">Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis.</a> Annals of Neurology. 17 (5), 497-504 (1985).</li><li>Bergeron, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+photochemical+cortical+lesions+in+rat+brain.">Inducing photochemical cortical lesions in rat brain.</a> Current Protocols in Neuroscience. , (2003).</li><li>Lee, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+induced+cerebral+ischemia+in+a+mouse+model.">Photochemically induced cerebral ischemia in a mouse model.</a> Surgical Neurology. 67 (6), 620-625 (2007).</li><li>Dietrich, W. D., Watson, B. D., Busto, R., Ginsberg, M. D., Bethea, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+induced+cerebral+infarction.+I.+Early+microvascular+alterations.">Photochemically induced cerebral infarction. I. Early microvascular alterations.</a> Acta Neuropathologica. 72 (4), 315-325 (1987).</li><li>Labat-gest, V., Tomasi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photothrombotic+ischemia:+a+minimally+invasive+and+reproducible+photochemical+cortical+lesion+model+for+mouse+stroke+studies.">Photothrombotic ischemia: a minimally invasive and reproducible photochemical cortical lesion model for mouse stroke studies.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (76), e50370 (2013).</li><li>McNutt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Journals+unite+for+reproducibility.">Journals unite for reproducibility.</a> Science. 346 (6210), 679 (2014).</li><li>Llovera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+a+preclinical+randomized+controlled+multicenter+trial+(pRCT):+Anti-CD49d+treatment+for+acute+brain+ischemia.">Results of a preclinical randomized controlled multicenter trial (pRCT): Anti-CD49d treatment for acute brain ischemia.</a> Science Translational Medicine. 7 (299), (2015).</li><li>Dirnagl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+concerted+appeal+for+international+cooperation+in+preclinical+stroke+research.">A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research.</a> Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).</li><li>Bath, P. M., Macleod, M. R., Green, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emulating+multicentre+clinical+stroke+trials:+a+new+paradigm+for+studying+novel+interventions+in+experimental+models+of+stroke.">Emulating multicentre clinical stroke trials: a new paradigm for studying novel interventions in experimental models of stroke.</a> International Journal of Stroke: Official Journal of the INternational Stroke Society. 4 (6), 471-479 (2009).</li><li>Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+bioscience+research+reporting:+The+ARRIVE+guidelines+for+reporting+animal+research.">Improving bioscience research reporting: The ARRIVE guidelines for reporting animal research.</a> Journal of Pharmacology &amp; Pharmacotherapeutics. 1 (2), 94-99 (2010).</li><li>Llovera, G., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+next+step+in+translational+research:+lessons+learned+from+the+first+preclinical+randomized+controlled+trial.">The next step in translational research: lessons learned from the first preclinical randomized controlled trial.</a> Journal of Neurochemistry. 139, 271-279 (2016).</li><li>Gnyawali, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retooling+laser+speckle+contrast+analysis+algorithm+to+enhance+non-invasive+high+resolution+laser+speckle+functional+imaging+of+cutaneous+microcirculation.">Retooling laser speckle contrast analysis algorithm to enhance non-invasive high resolution laser speckle functional imaging of cutaneous microcirculation.</a> Scientific Reports. 7, 41048 (2017).</li><li>Swanson, G. M., Satariano, E. R., Satariano, W. A., Threatt, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Racial+differences+in+the+early+detection+of+breast+cancer+in+metropolitan+Detroit,+1978+to+1987.">Racial differences in the early detection of breast cancer in metropolitan Detroit, 1978 to 1987.</a> Cancer. 66 (6), 1297-1301 (1990).</li><li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurological Research. 19 (6), 641-648 (1997).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (47), e2423 (2011).</li><li>Tamura, A., Graham, D. I., McCulloch, J., Teasdale, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 1 (1), 53-60 (1981).</li><li>Chen, S. T., Hsu, C. Y., Hogan, E. L., Maricq, H., Balentine, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+focal+ischemic+stroke+in+the+rat:+reproducible+extensive+cortical+infarction.">A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction.</a> Stroke. 17 (4), 738-743 (1986).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> Journal of Neuroscience Methods. 139 (2), 203-207 (2004).</li><li>Llovera, G., Roth, S., Plesnila, N., Veltkamp, R., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice:+permanent+coagulation+of+the+distal+middle+cerebral+artery.">Modeling stroke in mice: permanent coagulation of the distal middle cerebral artery.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (89), e511729 (2014).</li><li>Cramer, J. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+widefield+calcium+imaging+of+the+mouse+cortex+for+analysis+of+network+connectivity+in+health+and+brain+disease.">In vivo widefield calcium imaging of the mouse cortex for analysis of network connectivity in health and brain disease.</a> Neuroimage. 199, 570-584 (2019).</li><li>Heindl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+morphological+analysis+of+microglia+after+stroke.">Automated morphological analysis of microglia after stroke.</a> Frontiers in Cellular Neuroscience. 12, 106 (2018).</li><li>Nih, L. R., Gojgini, S., Carmichael, S. T., Segura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dual-function+injectable+angiogenic+biomaterial+for+the+repair+of+brain+tissue+following+stroke.">Dual-function injectable angiogenic biomaterial for the repair of brain tissue following stroke.</a> Nature Materials. 17 (7), 642-651 (2018).</li><li>Rust, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nogo-A+targeted+therapy+promotes+vascular+repair+and+functional+recovery+following+stroke.">Nogo-A targeted therapy promotes vascular repair and functional recovery following stroke.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (28), 14270-14279 (2019).</li><li>Kitano, H., Kirsch, J. R., Hurn, P. D., Murphy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalational+anesthetics+as+neuroprotectants+or+chemical+preconditioning+agents+in+ischemic+brain.">Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism: Official Journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 27 (6), 1108-1128 (2007).</li><li>Farr, T. D., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+qualitative+impairments+in+skilled+reaching+in+the+mouse+(Mus+musculus)+after+a+focal+motor+cortex+stroke.">Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke.</a> Stroke. 33 (7), 1869-1875 (2002).</li><li>Kassem-Moussa, H., Graffagnino, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonocclusion+and+spontaneous+recanalization+rates+in+acute+ischemic+stroke:+a+review+of+cerebral+angiography+studies.">Nonocclusion and spontaneous recanalization rates in acute ischemic stroke: a review of cerebral angiography studies.</a> Archives of Neurology. 59 (12), 1870-1873 (2002).</li><li>Sigler, A., Goroshkov, A., Murphy, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hardware+and+methodology+for+targeting+single+brain+arterioles+for+photothrombotic+stroke+on+an+upright+microscope.">Hardware and methodology for targeting single brain arterioles for photothrombotic stroke on an upright microscope.</a> Journal of Neuroscience Methods. 170 (1), 35-44 (2008).</li></ol>

Det presenterade protokollet beskriver den experimentella strokemodellen av fotothrombosis genom att belysa den intakta skallen med en 561 nm laser, med en tidigare intraperitoneal injektion av Rose Bengal. Fram till nyligen har användningen av denna modell varit låg men ökar stadigt.
Dödlighet under stroke induktion i denna modell är frånvarande. Den totala dödligheten på mindre än 5% uppstår under drift på grund av anestesiologiska komplikationer eller uppoffring efter uppfyllande...

Ischemisk stroke är fortfarande en huvudorsak till dödsfall och förvärvade vuxna funktionshinder i utvecklade länder på 2000-talet som står för cirka 2,7 miljoner dödsfall under 2017 överhela världen 1. Även med det vetenskapliga samfundets enorma ansträngningar finns det få behandlingar tillgängliga. Dessutom, med så höga uteslutningskriterier, är dessa redan begränsade alternativ inte tillgängliga för många patienter, vilket resulterar i ett brådskande behov av nya behandlingar för att förbättra funktionell återhämtning efter stroke.
Med tanke på in vitro-modellernas oförmåga att replikera hjärnans komplexa interaktioner är djurmodeller viktiga för preklinisk strokeforskning. Möss är den vanligaste djurmodellen inom strokeforskningsområdet. Majoriteten av dessa musmodeller syftar till att inducera hjärtinfarkt genom att blockera blodflödet inom den mellersta cerebrala artären (MCA) eftersom majoriteten av mänskliga strokeskador ligger i MCA-territoriet2. Även om dessa modeller bättre rekapitulera mänskliga stroke organskador, de innebär convulated operationer med hög infarkt volym variabilitet.
Sedan Rosenblum och El-Sabbans förslag om den fototrobakbotiska modellen 19773, och senare tillämpningen av denna modell på råttor Watson et al.4, har den blivit allmänt använd i ischemisk strokeforskning5,6. Den fototrokrobotiska strokemodellen inducerar en lokal och definierad när infarkt som ett resultat av fotoaktivering av ett ljuskänsligt färgämne som tidigare injicerats i blodflödet. Detta orsakar lokal trombos hos kärlen i de områden som utsätts för ljus. Kort, vid exponering för ljus från det injicerade ljuskänsliga färgämnet, induceras lokaliserad oxidativ skada i endotelcellmembranet, vilket leder till trombocytaggregering och trombbildning, följt av lokala störningar av cerebralt blodflöde7.
Den främsta fördelen med denna teknik ligger i dess enkelhet av utförande och möjligheten att rikta lesion till önskad region. Till skillnad från andra experimentella strokemodeller behövs mindre kirurgisk expertis för att utföra den fototromobotiska strokemodellen eftersom lesion induceras genom belysning av den intakta skallen. Dessutom kan de väl avgränsade gränserna ( figur 2A och figur 5B) och flexibiliteten att inducera lesionen till en specifik hjärnregion underlätta studier av cellulära svar inom det ischemiska eller intakta närområdet8. Av dessa skäl är detta tillvägagångssätt lämpligt för studier av cellulära och molekylära mekanismer för när plasticitet.
Under de senaste decennierna har den växande oron för bristen på reproducerbarhet mellan forskargrupper myntats den så kallade replikeringskrisen9. Efter samordningen av den första prekliniska randomiserade kontrollerade multicenterstudiestudien 201510, ett föreslaget verktyg för att förbättra prekliniskforskning 11,12,13, bekräftades det att en orsak till bristande reproducerbarhet mellan prekliniska studier från oberoende laboratorier var bristen på tillräcklig standardisering av experimentella strokemodeller och utfallsparametrar14. När immunostrokekonsortiet inrättades (https://immunostroke.de/), ett samarbete som syftar till att förstå hjärnimmuna interaktioner som ligger till grund för de mekanistiska principerna för strokeåterhämtning, var standardiseringen av alla experimentella strokemodeller bland varje forskargrupp därför nödvändig.
Beskrivs här är det standardiserade förfarandet för induktion av den fototrokrobotiska modellen som används i ovannämnda forskningskonsortium. Kort, ett djur genomgick bedövningsmedel, fick en Rose Bengal injektion (10 μL/g) intraperitonally, och den intakta skallen, 3 mm kvar från bregma, belystes omedelbart av en 561 nm laser i 20 min (Figur 1). Dessutom rapporteras en relaterad histologisk och beteendemässig metod för att analysera stroke resultatet i denna modell. Alla metoder är baserade på standardrutiner som utvecklats och använts i laboratoriet.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>561 nm wavelenght laser</td>
			<td>Solna</td>
			<td>Cobolt HS-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>695092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia system for isoflurane</td>
			<td>Drager</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ApopTag Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>S7100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen pomade</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>1578681</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6J mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collimeter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>F240APC-A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotons</td>
			<td>NOBA Verbondmitel Danz</td>
			<td>974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cresyl violet</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific CryoStarNX70</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>521005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 96%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>522078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 99%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>ETO-5000-99-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>Macherey-Nagel</td>
			<td>432018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11616-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating blanket</td>
			<td>FHC DC Temperature Controller</td>
			<td>&#160;40-90-8D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbot</td>
			<td>B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopentane</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>59070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Speckle</td>
			<td>Perimed</td>
			<td>PeriCam PSI HR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayor Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>1410-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline PH: 7.4</td>
			<td>Apotheke Innestadt Uni Munchen</td>
			<td>P32799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protective glasses</td>
			<td>Laser 2000</td>
			<td>NIR-ZS2-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rose Bengal</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>198250-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roti-Histokit mounting medium</td>
			<td>Roth</td>
			<td>6638.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td>131321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomikroskop</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi DV4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotactic frame</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51500U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylacine</td>
			<td>Albrecht</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling stroke in mice: focal cortical lesions by photothrombosis

Stroke är en ledande dödsorsak och förvärvad vuxen funktionsnedsättning i utvecklade länder. Trots omfattande undersökning för nya terapeutiska strategier, det finns fortfarande begränsade terapeutiska alternativ för stroke patienter. Därför behövs mer forskning för patofysiologiska vägar som inflammation efter stroke, angiogenes, neuronal plasticitet och regenerering. Med tanke på in vitro-modellernas oförmåga att reproducera hjärnans komplexitet är experimentella strokemodeller avgörande för analys och efterföljande utvärdering av nya läkemedelsmål för dessa mekanismer. Dessutom behövs det snabbt detaljerade standardiserade modeller för alla procedurer för att övervinna den så kallade replikeringskrisen. Som ett försök inom ImmunoStroke forskningskonsortium beskrivs en standardiserad fotothrombotic mus modell med en intraperitoneal injektion av Rose Bengal och belysningen av den intakta skallen med en 561 nm laser. Denna modell möjliggör prestanda av stroke hos möss med tilldelning till någon när region i hjärnan utan invasiv kirurgi; således, vilket möjliggör studier av stroke i olika delar av hjärnan. I denna video demonstreras de kirurgiska metoderna för stroke induktion i den fototrobotiska modellen tillsammans med histologiska analys.

Modellen som beskrivs här är en fototrobotisk slagmodell av Rose Bengal injektion och intakt skallbelysning i 20 min, vid en konstant 561 nm våglängd och 25 mW utgångseffekt vid fibern. Även om den kompletta fototrobotiska operationen varar 30 minuter, hålls djuret under låg anestesi och hjärnskadan är måttlig. Ungefär 10 min efter överföring till sina burar var alla djur vakna, rörde sig fritt i buret och interagerade med kullkamrater.
Infarkt volymtry utfördes med cresyl viol...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis at JoVE.com

Modeling Stroke in Mice: Focal Cortical Lesions by Photothrombosis

Beskrivs här är den fototrobiska stroke modellen, där en stroke produceras genom den intakta skallen genom att inducera permanent mikrovaskulär ocklusion med laser belysning efter administrering av ett ljuskänsligt färgämne.

Modelleringsslag hos möss: Fokala kortikala lesioner genom fotokrobtik

Stroke is a leading cause of death and acquired adult disability in developed countries. Despite extensive investigation for novel therapeutic strategies, ...

Fotothrombosis stroke modell strategi kan genom lämpliga för cellulära och molekylära studier av när plasticitet på grund av de begränsade gränserna och flexibilitet att inducera skada i olika delar av cortex. Tre principfördelar skiljer fotothrombosismodellen från andra strokemodeller, möjligheten att rikta lesionen till önskad region, det är hög reproducerbarhet och låg dödlighet. Korrekt rosbengal dosering är avgörande för framgången och för stabiliteten i modellen.Resultaten beror på teknisk specifikation som laserkraft, korsapplikationstidpunkt och optisk shilling av den opåverkade cortex. Börja med att lösa upp rosbengal i 0,9%saltlösning för en slutlig koncentration på 10 milligram per milliliter. Sterilisera noggrant alla instrument med en varm blysterilisering och desinficera alla ytor före och efter operationen med en mikrobiell desinfektionsspray.Förbered en spruta fylld med saltlösning för att bibehålla operationsområdet hydratiserat och förbereda anestesigasen. Mät musens kroppsvikt för att justera dosen av rosenbengal som ska injiceras. Ställ in den tillhörande återkopplingsstyrda värmedynan för att bibehålla muskroppens temperatur.När musen är helt sövd och fixerad i stereotaktisk ram, sätt försiktigt in rektalsonden för att övervaka musens kroppstemperatur under hela det kirurgiska ingreppet. Applicera Dex panthenol ögonsalva på båda ögonen och rengör huden och den omgivande pälsen med desinfektionsmedel. Använd sax för att göra ett enda två till två och en halv centimeter längsgående snitt och dra tillbaka för att exponera skallen.Använd bomull för att försiktigt ta bort periosteum och lokalisera koronan suturer. Använd skyddsglasögon medan du slår på 561 nanometerslasern och markera plus tre millimeter till vänster, stäng sedan av lasern och haka klistermärket med fyra millimeters diameterhål i de markerade koordinaterna. Injicera musen intraparietal med rosenbengal.Placera laserstrålen på ett avstånd av fyra till fem centimeter från skallen. Slå på lasern och tänd skallen i 20 minuter. Rehydrera skallen genom att applicera två droppar på 0,9% saltlösning.Efter att ha suturing såret, placera musen i en återhämtningskammare på 37 grader Celsius för att återhämta sig från anestesi. Efter en timme placerar du musen tillbaka i buret i ett temperaturkontrollerat rum. Kristall violett fläck till seriell koronona hjärnsektioner användes för infarct volym ingång analys efter 24 timmar av stroke induktion.Variationen i denna stroke modell var låg, och den genomsnittliga infarkt volymen var 29,3 kubik millimeter, vilket motsvarar 23%av en hjärna halvklotet. Phototrombosis lesion orsakade en måttlig och långsiktig sensorisk motorisk nedskrivning anges av sammansatta neuro poäng. Stroke djur hade en betydande förändring i neuro poäng 24 timmar efter operationen.Även om skillnaderna kvarstod förbättrades strokemössen med tiden. Hos möss som utsätts för rosenbengal plus belysning minskade kroppsvikten och kroppstemperaturen 24 timmar efter operationen. Men inom tre dagar efter operationen observerades återhämtning.Skandinaviska förändringar bekräftades med laser imaging. Resultaten anges att rosen bengal eller laser belysning ensam inte producerar en lesion medan samtidig tillämpning av båda genererade ett runt hypoperfused område omgiven av den smala oligomeric zonen. Kristall violett och tunnel färgning för bedömning av infarct volym 24 timmar efter kirurgi visade inga vävnad skador varken i rosen bengal eller laser belysning operationer.Å andra sidan genererade rosenbengal plus laserbelysning en väl avgränsad lesion. Det är viktigt att mäta djurets kroppsvikt för att justera rosenbengalinjektionen. Rätt tillstånd hos coroner switchers är viktigt för att inducera en konsekvent lesion mellan djur.Eftersom detta protokoll lämnar skallen intakt och kan även utföras genom hjärnskålen fönster, Det kan kombineras med brett fält eller flera foton in vivo imaging.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Fokal cerebral ischemi modellen genom endovaskulär suture Ocklusion av Mellanöstern Cerebral artär i Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

I livmodern elektroporation följt av primär Neuronala Kultur för att studera geners funktion i Delmängd av kortikal Neuroner

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Measurement of Total Calcium in Neurons by Electron Probe X-ray Microanalysis

Mätning av totalt kalcium i nervceller från Electron Probe röntgenmikroanalys

In this article the tools, techniques, and instruments appropriate for quantitative measurements of intracellular elemental content using the technique ...

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Modellering Astrocytoma Pathogenesis<em&gt; In Vitro</em&gt; Och<em&gt; In Vivo</em&gt; Använda Kortikal Astrocyter eller neurala stamceller från Villkorlig, Genmanipulerade möss

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

Experimental Demyelination and Remyelination of Murine Spinal Cord by Focal Injection of Lysolecithin

Experimentell Demyelinisering och remyelinisering av murina ryggmärgs genom Focal Injektion av Lysolecitin

Multiple sclerosis is an inflammatory demyelinating disease of the central nervous system characterized by plaque formation containing lost ...

Quantification of Filamentous Actin (F-actin) Puncta in Rat Cortical Neurons

Quantification of Filamentous Actin F-actin Puncta in Rat Cortical Neurons

Kvantifiering av fintrådiga aktin (F-aktin) puncta i Rat kortikala Neuroner

Filamentous actin protein (F-actin) plays a major role in spinogenesis, synaptic plasticity, and synaptic stability. Changes in dendritic F-actin rich ...

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Lateral Kronisk Kraniell fönster Framställning Aktiverar<em&gt; In Vivo</em&gt; Observation Efter Distal Middle Cerebral artärocklusion hos möss

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

Modeling Charcot-Marie-Tooth Disease In Vitro by Transfecting Mouse Primary Motoneurons

Modeling Charcot-Marie-Tooth Disease In Vitro by Transfecting Mouse Primary Motoneurons

Modellering Charcot-Marie-Tooth sjukdom In Vitro av Transfecting mus primära Motoneurons

Neurodegeneration of spinal motoneurons (MNs) is implicated in a large spectrum of neurological disorders including amyotrophic lateral sclerosis, ...

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Two-photon Imaging of Cortical Neurons in Neonatal Mice

In Vivo Två-foton avbildning av kortikala nervceller hos neonatala möss

Two-photon imaging is a powerful tool for the in vivo analysis of neuronal circuits in the mammalian brain. However, a limited number of in vivo imaging ...

Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery

Modellering stroke hos möss: Transient Middle Cerebral Artery Ocklusion via den yttre halsartären

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options ...