Name: developing 3d organized human cardiac tissue within a microfluidic platform
Uploaded: 2021-06-15T15:00:00
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Nos gustaría agradecer al NSF CAREER Award #1653193, arizona Biomedical Research Commission (ABRC) New Investigator Award (ADHS18-198872), y al Flinn Foundation Award por proporcionar fuentes de financiamiento para este proyecto. La línea hiPSC, SCVI20, se obtuvo de Joseph C. Wu, MD, PhD en el Stanford Cardiovascular Institute financiado por NIH R24 HL117756. La línea hiPSC, IMR90-4, se obtuvo de WiCell Research Institute55,56.

Realice toda la manipulación celular y la preparación de reactivos dentro de un gabinete de bioseguridad. Asegúrese de que todas las superficies, materiales y equipos que entren en contacto con las células sean estériles (es decir, rocíe con etanol al 70%). Las células deben cultivarse en una incubadora humidificada de 37 °C, 5% de CO2. Todo el cultivo y diferenciación hiPSC se realiza en placas de 6 pocillos.
1. Creación de dispositivos microfluídicos (duración aproximada...

La formación de un modelo de tejido cardíaco humano in vitro con interacciones célula-célula mejoradas y estructura 3D biomimética es imprescindible para la investigación cardiovascular básica y las correspondientes aplicaciones clínicas1. Este protocolo contorneado explica el desarrollo del tejido cardiaco anisotrópico humano 3D dentro de un dispositivo microfluidic, usando el co-cultivo de CMs célula-derivados del vástago con los CF conectivos encapsulados dentro de un hidrog...

Los enfoques de ingeniería de tejidos han sido ampliamente explorados, en los últimos años, para acompañar los hallazgos clínicos in vivo en la medicina regenerativa y el modelado de enfermedades1,2. Se ha puesto un énfasis significativo particularmente en el modelado de tejido cardíaco in vitro debido a las dificultades inherentes en el abastecimiento de tejido cardíaco primario humano y la producción de sustitutos in vitro fisiológicamente relevantes, lo que limita la comprensión fundamental de los complejos mecanismos de las enfermedades cardiovasculares (ECV)1,3. Los modelos tradicionales a menudo han involucrado ensayos de cultivo de monocapa 2D. Sin embargo, la importancia de cultivar células cardíacas dentro de un entorno 3D para imitar tanto el paisaje nativo del miocardio como las interacciones celulares complejas se ha caracterizado ampliamente4,5. Además, la mayoría de los modelos producidos hasta ahora han incluido un monocultivo de MC diferenciados de las células madre. Sin embargo, el corazón se compone de múltiples tipos celulares6 dentro de una compleja arquitectura3D 7,lo que justifica la necesidad crítica de mejorar la complejidad de la composición tisular dentro de los modelos in vitro 3D para imitar mejor los constituyentes celulares del miocardio nativo.
Hasta la fecha, se han explorado muchos enfoques diferentes para producir modelos biomiméticos 3D del miocardio8. Estos enfoques van desde configuraciones experimentales que permiten el cálculo en tiempo real de la fuerza generada, desde monocultivo CMs sembrados en películas delgadas (consideradas películas delgadas musculares (MTFs))9,hasta co-cultivo de células cardíacas en matrices de hidrogel 3D suspendidas entre voladizos independientes (considerados tejidos cardíacos de ingeniería (EHTs))10. Otros enfoques se han centrado en la implementación de técnicas de micromoldeo para imitar la anisotropía miocárdica, desde monocultivo CMs en un hidrogel 3D suspendido entre microposts salientes en un parche tisular11,hasta monocultivo CMs sembrados entre microgrooves dentado12,13. Existen ventajas y desventajas inherentes a cada uno de estos métodos, por lo tanto, es pertinente utilizar la técnica que se alinee con la aplicación prevista y la cuestión biológica correspondiente.
La capacidad de aumentar la maduración de los MC derivados de células madre es esencial para el éxito de la ingeniería in vitro de adulto-como el tejido miocárdico y la traducción de los hallazgos posteriores a las interpretaciones clínicas. Con este fin, los métodos para madurar CMs han sido ampliamente explorados, tanto en 2D como en 3D14,15,16. Por ejemplo, la estimulación eléctrica incorporada en los EHTs, la alineación forzada de los MC con la topografía superficial, las señales de señalización, los factores de crecimiento del co-cultivo y/o las condiciones de hidrogel 3D, etc., conducen a un cambio a favor de la maduración de CM en al menos uno de los siguientes: morfología celular, manejo de calcio, estructura sarcórpica, expresión génica o fuerza contráctil.
De estos modelos, los enfoques que utilizan plataformas microfluídicas conservan ciertas ventajas en la naturaleza, como el control de gradientes, la entrada limitada de celdas y los reactivos mínimos necesarios. Además, muchas réplicas biológicas pueden ser generadas a la vez utilizando plataformas microfluídicas, sirviendo para diseccionar mejor el mecanismo biológico de interés y aumentar el tamaño de la muestra experimental en favor de la potencia estadística17,18,19. Además, el uso de la fotolitografía en el proceso de fabricación de dispositivos microfluídicos permite la creación de características precisas (por ejemplo, topografías) a nivel micro y nano, que sirven como señales mesoscópicas para mejorar la estructura celular circundante y la arquitectura de tejidos a nivel macro18,20,21, 22 para diferentes aplicaciones en regeneración de tejidos y modelado de enfermedades.
Demostramos previamente el desarrollo de un nuevo modelo de tejido cardíaco 3D en chip que incorpora topografía superficial, en forma de microposts elípticos innatos, para alinear las células cardíacas co-cultivadas encapsuladas en hidrogel en un tejido anisotrópico interconectado20. Después de 14 días de cultivo, los tejidos formados dentro del dispositivo microfluídico son más maduros en su fenotipo, perfil de expresión génica, características de manejo de calcio y respuesta farmacéutica en comparación con los controles isótropos monocapa y 3D23. El protocolo descrito en este documento describe el método para crear este co-cultivado en 3D, alineado (es decir, anisotrópico) tejido cardíaco humano dentro del dispositivo microfluídico utilizando CMs derivados de hiPSC. Específicamente, explicamos los métodos para diferenciar y purificar hiPSCs hacia CMs, la suplementación de hCFs con CMs para producir una población establecida de co-cultivo, la inserción de la población celular encapsulada dentro del hidrogel de colágeno en los dispositivos microfluídicos, y el análisis posterior de los tejidos construidos 3D a través de ensayos contráctiles e inmunofluorescentes. Los micro-tejidos de ingeniería 3D resultantes son adecuados para diversas aplicaciones, incluidos estudios de biología fundamental, modelado de ECV y pruebas farmacéuticas.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>0.65 mL centrifuge tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>87003-290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mm Biopsy punch</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95039-090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mm Biopsy punch</td>
			<td>VWR</td>
			<td>95039-088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Falcon tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89039-670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18x18mm coverslips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-308</td>
			<td>The coverslips should be No.1, to allow for high magnification imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>101176-014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well flat botttom tissue-culture plates</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82050-844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 minus insulin</td>
			<td>LifeTech</td>
			<td>A1895602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 plus insulin</td>
			<td>LifeTech</td>
			<td>17504001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR99021</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10188-030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen I, rat tail</td>
			<td>Corning</td>
			<td>47747-218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM F12</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>11330057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>21600069</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E8</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A1517001</td>
			<td>can also be made in house</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>VWR</td>
			<td>45001-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FGM3</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10172-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFR-Matrigel</td>
			<td>VWR</td>
			<td>47743-718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8898-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10152-212</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hESC-Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>BD354277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IPA</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IWP2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I0536-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82003-820</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTCS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>440299-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaN3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5881-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep</td>
			<td>VWR</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish (150x15mm)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish (60x15mm)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25384-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol Red</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3532-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>MT10040CM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 minus glucose</td>
			<td>VWR</td>
			<td>45001-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon Wafers (100mm)</td>
			<td>University Wafer</td>
			<td>1196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium lactate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L4263-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU8 2075</td>
			<td>Microchem</td>
			<td>Y111074 0500L1GL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SU8 Developer</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>NC9901158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard Elastomer</td>
			<td>Essex Brownell</td>
			<td>DC-184-1.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T75 flasks</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82050-856</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12604021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.5%)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>15400054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9416-50ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y-27632</td>
			<td>Stem Cell Technologies</td>
			<td>72304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EVG620 Aligner</td>
			<td>EVG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasma cleaner PDC-32G</td>
			<td>Harrick Plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss AxioObserver Z1 microscope</td>
			<td>Nikon</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica SP8 Confocal microscope</td>
			<td>Leica</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

developing 3d organized human cardiac tissue within a microfluidic platform

La principal causa de muerte en todo el mundo persiste como la enfermedad cardiovascular (ECV). Sin embargo, modelar la complejidad fisiológica y biológica del músculo cardíaco, el miocardio, es notoriamente difícil de lograr in vitro. Principalmente, los obstáculos se encuentran en la necesidad de cardiomiocitos humanos (MC) que son adultos o exhiben fenotipos similares a los adultos y pueden replicar con éxito la complejidad celular del miocardio y la intrincada arquitectura 3D. Desafortunadamente, debido a las preocupaciones éticas y a la carencia del tejido cardiaco humano paciente-derivado primario disponible, combinado con la proliferación mínima de CMs, el abastecimiento de CMs humanos viables ha sido un paso limitador para la ingeniería cardiaca del tejido. Con este fin, la mayoría de las investigaciones han hecho la transición hacia la diferenciación cardíaca de las células madre pluripotentes inducidas por humanos (hiPSCs) como la fuente primaria de los MC humanos, lo que resulta en la amplia incorporación de hiPSC-CMs dentro de los ensayos in vitro para el modelado de tejido cardíaco.
Aquí en este trabajo, demostramos un protocolo para el desarrollo de un tejido cardíaco humano derivado de células madre maduras 3D dentro de un dispositivo microfluídico. Específicamente se explica y demostrar visualmente la producción de un modelo de tejido cardíaco anisotrópico in vitro en 3D en un chip de CMs derivados de hiPSC. Se describe principalmente un protocolo de purificación para seleccionar para CMs, el co-cultivo de células con una relación definida a través de la mezcla de CMs con CFs humanos (hCFs), y la suspensión de este co-cultivo dentro del hidrogel a base de colágeno. Además, demostrar la inyección de hidrogel cargado de células dentro de nuestro dispositivo microfluídico bien definido, incrustado con micropostes elípticos escalonados que sirven como topografía de la superficie para inducir un alto grado de alineación de las células circundantes y la matriz de hidrogel, imitando la arquitectura del miocardio nativo. Imaginamos que el modelo de tejido cardíaco anisotrópico en chip propuesto en 3D es adecuado para estudios de biología fundamental, modelado de enfermedades y, a través de su uso como herramienta de detección, pruebas farmacéuticas.

Para obtener una población altamente purificada de CMs a partir de hiPSCs, se utiliza una versión modificada que implica una combinación del protocolo de diferenciaciónLian 33 y los pasos de purificación34 de Tohyama (consulte la Figura 1A para la línea de tiempo experimental). Los hiPSCs necesitan ser colonia-como, ~85% confluente, y uniformemente repartidos a través del pozo de la cultura 3-4 días después del paso, en el inicio de la...

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Developing 3D Organized Human Cardiac Tissue within a Microfluidic Platform

El objetivo de este protocolo es explicar y demostrar el desarrollo de un modelo microfluídico tridimensional (3D) de tejido cardíaco humano altamente alineado, compuesto por cardiomiocitos derivados de células madre co-cultivados con fibroblastos cardíacos (CF) dentro de un hidrogel biomimético a base de colágeno, para aplicaciones en ingeniería de tejido cardíaco, detección de fármacos y modelado de enfermedades.

Desarrollo de tejido cardíaco humano organizado en 3D dentro de una plataforma microfluídica

The leading cause of death worldwide persists as cardiovascular disease (CVD). However, modeling the physiological and biological complexity of the heart ...

Las enfermedades cardiovasculares siguen siendo la primera causa de muerte en todo el mundo. Los modelos in vitro tradicionales se basan en el cultivo monocapa. Sin embargo, el corazón, específicamente el músculo cardíaco o el miocardio, es complejo en su anisotropía 3D y composición celular.Por lo tanto, es crítico mejorar la complejidad de la composición del tejido dentro de modelos ines vitro para imitar mejor los componentes celulares y la estructura del miocardio. Aquí en este trabajo, demostramos un protocolo para el desarrollo de un tejido cardíaco humano derivado de células madre maduras 3D dentro de un nuevo dispositivo microfluídico. Este dispositivo incorpora un canal de tejido principal 3D con microposts elípticos innatos que inducen altos grados de alineación de las células cardíacas encapsuladas en hidrogel circundantes.El canal principal está flanqueado por canales de medios con puertos de inyección que permiten una difusión de nutrientes en todo el tejido. Debido al cuidado requerido en la manipulación de los dispositivos microfluídicos, la representación visual de este protocolo es útil para establecer correctamente el tejido cardiaco 3D dentro de un dispositivo microfluidic con los microposts encajados para la alineación aumentada del tejido. Para disociar el fibroblasto cardíaco humano, primero saque el matraz de la incubadora.Poner dentro del gabinete de bioseguridad y comenzar a aspirar los medios gastados del matraz. A continuación, tome tres ML de PBS 1X para lavar el matraz. Cierre la tapa y gire el matraz para que el fondo esté recubierto correctamente de PBS.Aspirar el PBS. Tomar tres MLs de tripsina de 37 grados y añadir al matraz. A continuación, incline el matraz y gire para que el fondo esté completamente recubierto.Luego poner en la incubadora durante cuatro a seis minutos. Neutralice la tripsina con la MGF3 tomando tres ML y agregándolas al matraz. Pipetear la solución hacia arriba y hacia abajo para desalojar las células que queden en la parte posterior del matraz.Recoja la suspensión celular en un tubo Falcon de 15 ML. Tome 10 microlitros de la suspensión celular y dispense en un hemocitómetro para contar las células con un microscopio. Centrifugar la suspensión de la célula a 250 G durante cuatro minutos.Después de la centrifugación, aspirar el sobrenadante teniendo cuidado de no perturbar el pellet celular. Resuspend el pellet de la célula con FGM3 fresco para hacer un deseado 75 millones de células por ml suspensión. Resuspend las células, a continuación, establecer el tubo hacia abajo con una tapa holgadamente ajustado.Para disociar los cardiomiocitos, saque la placa de la incubadora y aspire el medio. Tome seis ML de PBS y lave los pozos para que haya un ML de PBS en cada pozo. Aspirar el PBS, teniendo cuidado de no molestar a las células unidas a la placa.Agregue seis ML de trypLE Express calentado para que haya un ML en cada pozo de una placa de seis pozos. Incubar las células con el triptLE durante 10 minutos. Después de 10 minutos, neutralice el trypLE con seis ML de RPMI más B27 más insulina para que esté agregando un ML de RMPI a cada pocillo.Use una pipeta de ML para recoger la solución y dispararla contra la parte posterior de los pozos para asegurarse de que todas las células se levanten. Recoja la suspensión celular en un tubo Falcon de 15 ML. Centrifugar el tubo a 300 G durante tres minutos.Después de la centrifugación, aspirar el medio y el trypLE. Este paso es importante para lavar los cardiomiocitos sensibles. Este paso asegura que todo el trypLE se ha ido en la formación de tejido cardíaco 3D.Resuspend la pelotilla de la célula en cinco MLs de RPMI más B27 más la insulina. Utilice una pipeta de un ML para pipetear la solución hacia arriba y hacia abajo para asegurar una suspensión de celda homogénea. Tome 10 microlitros de la suspensión celular para contar con el hemocitómetro.Centrifugar las células a 300 G durante tres minutos. Aspirar los medios después de la centrifugación por segunda vez. Agregue la cantidad adecuada de RPMI más B27 más insulina para lograr una suspensión de 75 millones de células por ML, luego resuspend.Para preparar la solución de colágeno para la encapsulación, tenga todos los reactivos en una caja de hielo en la campana. Luego tome 75 microlitros del colágeno común. El colágeno es muy viscoso, por lo que lentamente se toma con la pipeta, luego dispensar en un tubo de microcentrífuga en el hielo.Tome 13,85 microlitros de RPMI y añádalos al colágeno en el tubo Falcon. Luego tomar 10 microlitros de rojo fenol y añadir a la mezcla sobre hielo y resuspend. Por último, tome 1,15 microlitros de un NaOH normal y añadir a la suspensión para neutralizar.A continuación, tome una punta de pipeta de 200 microlitr y vuelva a suspender la suspensión. El siguiente paso es la encapsulación de las células dentro del metrogel de colágeno. Luego tome una alícuota de ocho microlitros de CMs y agregue a un tubo Falcon fresco sobre hielo.Luego tome dos microlitros de CS y agregue a esa mezcla celular. Resuspend la suspensión de la célula y agarre 5.6 microlitros de la suspensión de la célula y ponga en un tubo halcón fresco. Luego toma el colágeno que acabas de preparar, toma cuatro microlitros del colágeno, luego toma 2.4 microlitros de metrogel.Pipetear la mezcla hacia arriba y hacia abajo para asegurar una distribución homogénea de la suspensión de hidrogel de la célula. Una vez que la inyección de gel está preparada, puede insertar en los dispositivos. Tome una nueva punta y resuspend.Tome la placa de Petri de los dispositivos, inserte la punta en el puerto de inyección e inyecte lenta y constantemente. Verás como el canal del dispositivo se llena con la suspensión de hidrogel de la célula. Una vez que se llene el otro puerto, detenga la inyección y retire la punta.Después de la inyección, voltee los dispositivos con pinzas y colóquelo dentro de la placa de Petri más grande con agua en la incubadora durante nueve minutos. Después de nueve minutos, saque los dispositivos de la incubadora y voltee en posición vertical, luego vuelva a colocar en la incubadora durante nueve minutos más para completar la polimerización por hidrogel. Ahora es el momento de agregar los medios.Por lo tanto, tome RMPI más B27 e inserte la punta en el puerto de medios y comience a empujar lentamente. A continuación, hágalo en el puerto de medios opuesto. Usted puede encontrar que el medio no está inyectando, por lo que puede poner una gota de medios en la parte superior del puerto y luego tomar la pipeta y utilizar la presión negativa para tirar de los medios a través del otro lado.Así que verás como los medios comienzan a ser arrastrados a través del canal. Una vez que los medios se han agregado a todos los canales de medios, los dispositivos se volverán a colocar en la incubadora a 37 grados. El dispositivo microfluídico se muestra en la esquina superior izquierda.Los días uno, siete y 14 de la cultura se muestran esta imagen. Después de 14 días de cultivo, las células deben condensarse en estructuras altamente alineadas que se forman alrededor de los microposts. Los rastros del día 14 se muestran aquí en C de la contracción espontánea, así como imágenes inmunofluorescentes de la actinina manchada y de los tejidos manchados marcador cardiaco.Lo que se debe ver son fibras de actina altamente alineadas que se forman después de 14 días en cultivo, así como sarcómeros maduros estriados paralelos y uniones de brecha localizadas. Durante este procedimiento, es fundamental mantener todos los materiales a bajas temperaturas en el hielo durante la inyección de hidrogel celular para prevenir la polimerización prematura. Los dispositivos microfluídicos deben manejarse con cuidado, tanto durante la fabricación, inyección y cultivo de tejidos extendidos.Las inyecciones celulares deben ser un proceso constante para garantizar que todo el canal se haya llenado mientras se realiza rápidamente para evitar la polimerización prematura o el secado del hidrogel antes de la adición de medios.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

High-throughput Protein Expression Generator Using a Microfluidic Platform

Proteínas de alto rendimiento del generador de expresiones utilizando una plataforma de microfluidos

Rapidly increasing fields, such as systems biology, require the development and implementation of new technologies, enabling high-throughput and ...

Investigación

Bioingeniería

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Tissue Engineering of a Human 3D in vitro Tumor Test System

Ingeniería de tejidos de un humano 3D<em&gt; In vitro</em&gt; Sistema de Prueba de Tumores

Cancer is one of the leading causes of death worldwide.  Current therapeutic strategies are predominantly developed in 2D culture  systems, which ...

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

Exprimir la célula como un robusto, Microfluidic intracelular Delivery Platform

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture

El chip de varios órganos - Una plataforma de microfluidos para el largo plazo co-cultivo de múltiples tejidos

The ever growing amount of new substances released onto the market and the limited predictability of current in vitro test systems has led to a high need ...

A Microfluidic Platform for High-throughput Single-cell Isolation and Culture

Una plataforma microfluídica para el aislamiento de gran procesamiento de celda única y Cultura

Studying the heterogeneity of single cells is crucial for many biological questions, but is technically difficult. Thus, there is a need for a simple, yet ...

Microfluidic Platform with Multiplexed Electronic Detection for Spatial Tracking of Particles

Plataforma de microfluidos con multiplexado de detección electrónica para el seguimiento espacial de las partículas

Microfluidic processing of biological samples typically involves differential manipulations of suspended particles under various force fields in order to ...

Creation of Cardiac Tissue Exhibiting Mechanical Integration of Spheroids Using 3D Bioprinting

Creación de tejido cardiaco que exhibe la integración mecánica de esferoides usando bioprinting 3D

This protocol describes 3D bioprinting of cardiac tissue without the use of biomaterials, using only cells. Cardiomyocytes, endothelial cells and ...

Assembly and Tracking of Microbial Community Development within a Microwell Array Platform

Montaje y Seguimiento de Desarrollo Comunitario Microbiano dentro de una Plataforma de Matriz de Micropedulos

The development of microbial communities depends on a combination of complex deterministic and stochastic factors that can dramatically alter the spatial ...

Comparable Decellularization of Fetal and Adult Cardiac Tissue Explants as 3D-like Platforms for In Vitro Studies

Descelularización comparable de explantes de tejido cardíaco Fetal y adulto como 3D-como plataformas para estudios In Vitro

Current knowledge of extracellular matrix (ECM)-cell communication translates to large two-dimensional (2D) in vitro culture studies where ECM components ...

A Microfluidic Platform for Longitudinal Imaging in Caenorhabditis elegans

A Microfluidic Platform for Longitudinal Imaging in Caenorhabditis elegans

Una plataforma de microfluidos para la proyección de imagen Longitudinal en Caenorhabditis elegans

In the last decade, microfluidic techniques have been applied to study small animals, including the nematode Caenorhabditis elegans, and have proved ...