Name: a model of experimental steatosis in vitro: hepatocyte cell culture in lipid overload-conditioned medium
Uploaded: 2021-05-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (Conacyt, CB-221137). Adriana Campos er ph.d.-studerende ved Programa de Doctorado en Ciencias Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México, og blev støttet af Conacyt (CVU: 1002502).

1. Standard og konditioneret medium forberedelse
<ol><li>For at forberede standard RPMI 1640 skal du supplere RPMI 1640-kulturmediet med 10 % (v/v) fosterkvægserum (FBS, tidligere varmeinaktiveret) og 1 % (v/v) penicillin-Streptomycin-opløsning. Mediet opbevares ved 4 °C.Steriliser ved hjælp af 0,22 μm filtre.</li>
	<li>For at forberede palmitat lageropløsning, forberede en 50 mM opløsning af palmitat i standard RPMI 1640 tidligere suppleret med 1% af kvæg serum albumin (lipid fri). Et volumen på 5-10 mL af de...

<ol>
	<li>Younossi, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-alcoholic+fatty+liver+disease+-+a+global+public+health+perspective.">Non-alcoholic fatty liver disease - a global public health perspective.</a> Journal of Hepatology. 70 (3), 531-544 (2019).</li><li>Younossi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+perspectives+on+nonalcoholic+fatty+liver+disease+and+nonalcoholic+steatohepatitis.">Global perspectives on nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis.</a> Hepatology. 69 (6), 2672-2682 (2019).</li><li>Eslam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+definition+for+metabolic+dysfunction-associated+fatty+liver+disease:+An+international+expert+consensus+statement.">A new definition for metabolic dysfunction-associated fatty liver disease: An international expert consensus statement.</a> Journal of Hepatology. 73 (1), 202-209 (2020).</li><li>Eslam, M., Sanyal, A. J., George, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAFLD:+A+consensus-driven+proposed+nomenclature+for+metabolic+associated+fatty+liver+disease.">MAFLD: A consensus-driven proposed nomenclature for metabolic associated fatty liver disease.</a> Gastroenterology. 158 (7), 1999-2014 (2020).</li><li>Chalasani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+and+management+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease:+Practice+guidance+from+the+American+association+for+the+study+of+liver+diseases.">The diagnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease: Practice guidance from the American association for the study of liver diseases.</a> Hepatology. 67 (1), 328-357 (2018).</li><li>Calzadilla Bertot, L., Adams, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+course+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">The natural course of non-alcoholic fatty liver disease.</a> International Journal of Molecular Science. 17 (5), 774 (2016).</li><li>Reccia, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-alcoholic+fatty+liver+disease:+A+sign+of+systemic+disease.">Non-alcoholic fatty liver disease: A sign of systemic disease.</a> Metabolism. 72, 94-108 (2017).</li><li>Tomita, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+cholesterol+accumulation+in+hepatic+stellate+cells:+Mechanism+of+liver+fibrosis+aggravation+in+nonalcoholic+steatohepatitis+in+mice.">Free cholesterol accumulation in hepatic stellate cells: Mechanism of liver fibrosis aggravation in nonalcoholic steatohepatitis in mice.</a> Hepatology. 59 (1), 154-169 (2014).</li><li>Byrne, C. D., Targher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nafld:+A+multisystem+disease.">Nafld: A multisystem disease.</a> Journal of Hepatology. 62, 47-64 (2015).</li><li>Ipsen, D. H., Lykkesfeldt, J., Tveden-Nyborg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+hepatic+lipid+accumulation+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Molecular mechanisms of hepatic lipid accumulation in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 75 (18), 3313-3327 (2018).</li><li>Diehl, A. M., Day, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cause,+pathogenesis,+and+treatment+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Cause, pathogenesis, and treatment of nonalcoholic steatohepatitis.</a> New England Journal of Medicine. 377 (21), 2063-2072 (2017).</li><li>Zeng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+acid+ameliorates+palmitic+acid+induced+hepatocellular+lipotoxicity+by+inhibition+of+ER+stress+and+pyroptosis.">Oleic acid ameliorates palmitic acid induced hepatocellular lipotoxicity by inhibition of ER stress and pyroptosis.</a> Nutrition and Metabolism. 17, 11 (2020).</li><li>Ore, A., Akinloye, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+antioxidant+biomarkers+in+clinical+and+experimental+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Oxidative stress and antioxidant biomarkers in clinical and experimental models of non-alcoholic fatty liver disease.</a> Medicina (Kaunas). 55 (2), 26 (2019).</li><li>Paradies, G., Paradies, V., Ruggiero, F. M., Petrosillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress,+cardiolipin+and+mitochondrial+dysfunction+in+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Oxidative stress, cardiolipin and mitochondrial dysfunction in nonalcoholic fatty liver disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 20 (39), 14205-14218 (2014).</li><li>Aravinthan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+senescence+predicts+progression+in+non-alcohol-related+fatty+liver+disease.">Hepatocyte senescence predicts progression in non-alcohol-related fatty liver disease.</a> Journal of Hepatology. 58 (3), 549-556 (2013).</li><li>Gomez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+hepatocellular+in+vitro+model+to+investigate+steatosis.">A human hepatocellular in vitro model to investigate steatosis.</a> Chemico Biological Interactions. 165 (2), 106-116 (2007).</li><li>Wu, W. K. K., Zhang, L., Chan, M. T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy,+NAFLD+and+NAFLD-related+HCC.">Autophagy, NAFLD and NAFLD-related HCC.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 1061, 127-138 (2018).</li><li>Levy, G., Cohen, M., Nahmias, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+culture+models+of+hepatic+steatosis.">In vitro cell culture models of hepatic steatosis.</a> Methods in Molecular Biology. 1250, 377-390 (2015).</li><li>Kanuri, G., Bergheim, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease+(NAFLD).">In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD).</a> International Journal of Molecular Science. 14 (6), 11963-11980 (2013).</li><li>Ricchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effect+of+oleic+and+palmitic+acid+on+lipid+accumulation+and+apoptosis+in+cultured+hepatocytes.">Differential effect of oleic and palmitic acid on lipid accumulation and apoptosis in cultured hepatocytes.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 24 (5), 830-840 (2009).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+biomarkers+of+de+novo+lipogenesis+fatty+acids+and+incident+heart+failure+in+older+adults:+The+cardiovascular+health+study.">Serial biomarkers of de novo lipogenesis fatty acids and incident heart failure in older adults: The cardiovascular health study.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (4), 014119 (2020).</li><li>Alnahdi, A., John, A., Raza, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+of+glucotoxicity,+oxidative+stress,+apoptosis+and+mitochondrial+dysfunction+in+Hepg2+cells+by+palmitic+acid.">Augmentation of glucotoxicity, oxidative stress, apoptosis and mitochondrial dysfunction in Hepg2 cells by palmitic acid.</a> Nutrients. 11 (9), 1979 (2019).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+acid+protects+saturated+fatty+acid+mediated+lipotoxicity+in+hepatocytes+and+rat+of+non-alcoholic+steatohepatitis.">Oleic acid protects saturated fatty acid mediated lipotoxicity in hepatocytes and rat of non-alcoholic steatohepatitis.</a> Life Sciences. 203, 291-304 (2018).</li><li>Xing, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NLRP3+inflammasome+mediate+palmitate-induced+endothelial+dysfunction.">NLRP3 inflammasome mediate palmitate-induced endothelial dysfunction.</a> Life Sciences. 239, 116882 (2019).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+Growth+Factor+Binding+Protein+7+accelerates+hepatic+steatosis+and+insulin+resistance+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Insulin-like Growth Factor Binding Protein 7 accelerates hepatic steatosis and insulin resistance in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 46 (12), 1101-1110 (2019).</li><li>Wang, J., Hu, R., Yin, C., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tanshinone+IIA+reduces+palmitate-induced+apoptosis+via+inhibition+of+endoplasmic+reticulum+stress+in+Hepg2+liver+cells.">Tanshinone IIA reduces palmitate-induced apoptosis via inhibition of endoplasmic reticulum stress in Hepg2 liver cells.</a> Fundamental and Clinical Pharmacology. 34 (2), 249-262 (2020).</li><li>Xiao, Z., Chu, Y., Qin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGFBP5+modulates+lipid+metabolism+and+insulin+sensitivity+through+activating+ampk+pathway+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">IGFBP5 modulates lipid metabolism and insulin sensitivity through activating ampk pathway in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Life Sciences. 256, 117997 (2020).</li><li>Avila, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+conjugated+linoleic+acid+(CLA)+on+inflammatory+functions+of+bovine+monocytes.">In vitro effects of conjugated linoleic acid (CLA) on inflammatory functions of bovine monocytes.</a> Journal of Dairy Science. 103 (9), 8554-8563 (2020).</li><li>Malhi, H., Bronk, S. F., Werneburg, N. W., Gores, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+induce+JNK-dependent+hepatocyte+lipoapoptosis.">Free fatty acids induce JNK-dependent hepatocyte lipoapoptosis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 281 (17), 12093-12101 (2006).</li><li>Oh, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+palmitic+acid+on+TNF-alpha-induced+cytotoxicity+in+SK-Hep-1+cells.">Effects of palmitic acid on TNF-alpha-induced cytotoxicity in SK-Hep-1 cells.</a> Toxicology In Vitro: An International Journal Published in Association with BIBRA. 26 (6), 783-790 (2012).</li><li>Stellavato, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assessment+of+nutraceutical+compounds+and+novel+nutraceutical+formulations+in+a+liver-steatosis-based+model.">In vitro assessment of nutraceutical compounds and novel nutraceutical formulations in a liver-steatosis-based model.</a> Lipids in Health and Disease. 17 (1), 24 (2018).</li><li>Pachikian, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implication+of+trans-11,+trans-13+conjugated+linoleic+acid+in+the+development+of+hepatic+steatosis.">Implication of trans-11, trans-13 conjugated linoleic acid in the development of hepatic steatosis.</a> PLoS One. 13 (2), 0192447 (2018).</li><li>Ferreira, T., Rasband, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyze.">Analyze.</a> ImageJ User Guide. , 132-135 (2012).</li><li>Geng, Y., Wu, Z., Buist-Homan, M., Blokzijl, H., Moshage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hesperetin+protects+against+palmitate-induced+cellular+toxicity+via+induction+of+GRP78+in+hepatocytes.">Hesperetin protects against palmitate-induced cellular toxicity via induction of GRP78 in hepatocytes.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. , 404 (2020).</li><li>Geng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+metformin+against+palmitate-induced+hepatic+cell+death.">Protective effect of metformin against palmitate-induced hepatic cell death.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. 1866 (3), 165621 (2020).</li><li>Sarnyai, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cis-+and+trans-monounsaturated+fatty+acids+on+palmitate+toxicity+and+on+palmitate-induced+accumulation+of+ceramides+and+diglycerides.">Effect of cis- and trans-monounsaturated fatty acids on palmitate toxicity and on palmitate-induced accumulation of ceramides and diglycerides.</a> International Journal of Molecular Science. 21 (7), 2626 (2020).</li><li>Chen, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrahydrocurcumin+ameliorates+free+fatty+acid-induced+hepatic+steatosis+and+improves+insulin+resistance+in+HepG2+cells.">Tetrahydrocurcumin ameliorates free fatty acid-induced hepatic steatosis and improves insulin resistance in HepG2 cells.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (3), 1075-1085 (2018).</li><li>Burhans, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+oleate+regulates+adipose+tissue+lipogenesis+and+fatty+acid+oxidation.">Hepatic oleate regulates adipose tissue lipogenesis and fatty acid oxidation.</a> Journal of Lipid Research. 56 (2), 304-318 (2015).</li><li>Abenavoli, L., Milanovic, M., Milic, N., Luzza, F., Giuffre, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olive+oil+antioxidants+and+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Olive oil antioxidants and non-alcoholic fatty liver disease.</a> Expert Reviews in Gastroenterology and Hepatology. 13 (8), 739-749 (2019).</li><li>Nagarajan, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+and+glucose+metabolism+in+hepatocyte+cell+lines+and+primary+mouse+hepatocytes:+A+comprehensive+resource+for+in+vitro+studies+of+hepatic+metabolism.">Lipid and glucose metabolism in hepatocyte cell lines and primary mouse hepatocytes: A comprehensive resource for in vitro studies of hepatic metabolism.</a> American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. 316 (4), 578-589 (2019).</li><li>Hodson, L., Skeaff, C. M., Fielding, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+composition+of+adipose+tissue+and+blood+in+humans+and+its+use+as+a+biomarker+of+dietary+intake.">Fatty acid composition of adipose tissue and blood in humans and its use as a biomarker of dietary intake.</a> Progress in Lipid Research. 47 (5), 348-380 (2008).</li></ol>

Denne protokol har til formål at give en strategi til undersøgelse af steatose in vitro. Cellekultur er et kraftfuldt værktøj til at studere cellulære, molekylære, biokemiske og toksikologiske aspekter af de celler, der udsættes for forskellige forhold. Med denne tilgang kan steatose visualiseres ikke kun som et stadium af den komplekse sygdom, der er MAFLD, men også som hepatocyt overeksponering for lipider og de mulige resultater som følge af en sådan eksponering. Derfor er dens anvendelse ikke begr?...

Fedtlever forbundet med metabolisk dysfunktion er meget udbredt på verdensplan1,2; Det anslås , at op til 25 % af befolkningen er berørtaf 3. Denne sygdom, der tidligere var kendt som ikke-alkoholisk fedtleversygdom (NAFLD), har opdateret sin nomenklatur til metabolisk dysfunktion associeret fedtleversygdom (MAFLD) for nøjagtigt at afspejle patogenesen relateret til fedme, insulinresistens, diabetes type 2 og dyslipidæmi samt de mulige styringer af sygdommen3,4.
Uanset navnet omfatter sygdommen et bredt spektrum af histopatologiske ændringer karakteriseret ved unormalt høj ophobning af lipider i leveren (>5% fedt i hepatocytterne5) og kan udvikle sig gennem lipidakkumuleringen, der typisk findes i simpel steatose til steatohepatitis, hvilket igen kan føre til udvikling af fibrose, skrumpelever, hepatocellulært karcinom og leversvigt5,6,7,8. På grund af den stigende udbredelse forventes MAFLD at blive den første indikation af levertransplantation og den hyppigste årsag til hepatocellulært karcinom9.
Selv om det er blevet betragtet som en godartet eller mild form for fedtlever sygdom, lever steatose er i virkeligheden den metaboliske nøgle i MAFLD10. Forskellige metaboliske veje påvirkes af lipidakkumulering i leveren, herunder men ikke begrænset til lipidsyntese, eksport og metabolisme10. Insulinresistens, oxidativ stress, retikulær stress og cellulær dysfunktion er stærkt forbundet med lever lipotoxicitet11,12. På den anden side er fede hepatocytter målet for reaktive iltarter, hvilket gør metabolitter som lipidperoxider, proteincarbonyller og adducts af nukleinsyrer13. På celleniveau kan fede hepatocytter gennemgå mitokondrieskader14, cellulær senescence15,apoptose16, pyroptose12og autofagi17, blandt andre begivenheder.
Hepatocytter er meget ansvarlige for metabolisme, afgiftning og syntese af en bred vifte af molekyler. Mange af disse funktioner kan blive kompromitteret af lipid ophobning observeret i steatose. Derfor er det af stor betydning at have reproducerbare værktøjer, der muliggør en nøjagtig evaluering af steatose. I denne forstand er in vitro-modeller let anvendelige og meget reproducerbare. Steatosis in vitro er blevet brugt med forskellige mål16,18,19. HepG2-cellerne er meget udbredt som hepatocytcellelinje. Det har fordele som at være let at kultur og godt karakteriseret. Måske er den eneste ulempe ved HepG2-celler det faktum, at det er en kræftfremkaldende cellelinje, så dette skal overvejes, når man analyserer resultaterne. Her vises anvendelsen af en blanding af fedtsyrer, der i vid udstrækning anvendes i cellekulturen: palmitic syre (PA) og oliesyre (OA). Både PA og OA tilbyder forskellige resultater i kultur20. PA (C 16:0) er den mest almindelige mættede fedtsyrer fremstillet af kosten16. PA betragtes som en biomarkør for de-novo lipogenese, et afgørende skridt i udviklingen af NAFLD21. Pa har vist sig at være megetgiftigt 22; Derfor kan det ikke anbefales at fremkalde steatose in vitro. OA (C 18:1) er en enkeltumættet fedtsyre. I modsætning til PA, OA er blevet foreslået at besidde anti-inflammatoriske og anti-oxidant egenskaber, at være i stand til at modvirke PA12. Både PA og OA er de vigtigste fedtsyrer, der findes i triglycerider, uanset tilstanden af sundhed eller sygdom16. Tabel 1 indeholder eksempler på hepatocytkulturen med PA, OA og deres blanding samt de rapporterede resultater12,23,24,25,26,27. Andre fedtsyrer er også blevet anvendt i hepatocytkultur, herunder stearinsyre (C 18:0)28,29,30, linolsyre (C 18:1)28,30,31 og dens konjugates (CLA)28,32, palmitolesyre (C 16:1)29. Men deres anvendelse er mindst hyppigt rapporteret i litteraturen, måske fordi deres lever overflod er lavere end PA og OA16.
I forbindelse ligner begge fedtsyrer steatose in vitro, hvilket giver spredte celler med øget celledød og lavere levedygtighed sammenlignet med kontrolbetingelser. Det er værd at nævne, at de respektive salte af disse fedtsyrer er tilgængelige og kan også bruges. Et af de største problemer ved vurderingen af lipid overbelastning i hepatocyt cellekultur er givet i differentiering mellem toksikologiske modeller og en model, der bedst repræsenterer steatose. Mange modeller kan redegøres i det første tilfælde. Faktisk kan brugen af PA alene betragtes blandt dem, og den høje dødelighed er det mest tydelige resultat12,16,23,24,25,26,27. Brugen af høje doser selv i tilfælde af OA kan også betragtes som en toksikologisk model. Protokollen vist her er i højere overensstemmelse med steatose udvikling, da det viser lav dødelighed i forhold til den, der observeres i andre modeller og gør det muligt at blive fulgt i løbet af flere dage med progressiv lipid ophobning, som det sker i NAFLD. Muligheden for at vurdere mild og svær steatose gennem eksperimentelle tilstande betragtes som en anden fordel.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Fedtsyrer</td>
			<td colspan="2">Kår</td>
			<td colspan="2">Resultater</td>
			<td>Henvisning</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration: 200 μM</td>
			<td colspan="2">Lipid ophobning</td>
			<td rowspan="3">Yan et al, 201925.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
			<td colspan="2">Hepatocyte skader</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2"></td>
			<td colspan="2">Transaminaser elevation</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration: 50, 100 og 200 μM</td>
			<td colspan="2" rowspan="2">Lipid ophobning</td>
			<td rowspan="2">Xing et al, 201924.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration: 250 μM , 500 μM , 750 μM og 1.000 μM</td>
			<td colspan="2">Lipid ophobning</td>
			<td rowspan="2">Wang et al, 202026.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
			<td colspan="2">Gradvis reduktion af celle levedygtighed</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Blanding af OA/PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration: 1 mM</td>
			<td colspan="2">Lipid ophobning</td>
			<td rowspan="3">Xiao et al, 202027.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
			<td colspan="2">Rapporterer ikke lipotoxicitet</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Pris: 2OA:1PA</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="4">Blanding af OA/PA</td>
			<td colspan="2">Først stimulering med 200 μM og 400 μM PA og derefter anden stimulering med 200 μM OA</td>
			<td colspan="2">Lipid ophobning.</td>
			<td rowspan="4">Zeng et al, 202012.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Koncentration:400 μM PA: 200 μM OA</td>
			<td colspan="2">Tegn på lipotoxicitet forårsaget af PA blev reduceret ved stimulering af OA.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Pris: 2PA:1OA</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Blanding af OA/PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration: 400 μM PA: 200 μM OA</td>
			<td colspan="2" rowspan="3">Lipid ophobning</td>
			<td rowspan="3">Chen et al, 201823.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Pris: 2PA:1OA</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Blanding af OA/PA</td>
			<td colspan="2">Koncentration :50 og 500 μM</td>
			<td colspan="2">Generering af to typer steatose: mild steatose og alvorlig steatose.</td>
			<td rowspan="3">Campos og Guzmán 2021</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Pris: 2PA:1OA</td>
			<td colspan="2">Simulerer kronisk redegørelse for lipid overbelastning</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tidseksponering: 24 timer, 2 dage, 3 dage og 4 dage.</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1. Hepatocyt kultur i steatogenic betingelser. Tabellen præsenterer den type fedtsyre, der anvendes, de betingelser, der opretholdes, og de observerede resultater i hepatocyt kultur. PA: Palmitic syre. OA: Oliesyre.
Endelig gælder denne model ikke kun for studiet af steatose og fedtlever, men også for hepatiske metaboliske, syntetiske og afgiftning veje i forbindelse med steatose. Også, in vitro induceret steatose kan give dokumentation for identifikation af potentielle markører for sygdommen samt terapeutiske mål.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Biosafety cabinet</td>
			<td>ESCO Airstream</td>
			<td>AC2-452+C2:C26</td>
			<td>Class II&#160;Type A2&#160;Biological Safety Cabinet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle top filter</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>430513</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, polystyrene, sterile. 1 filter/Bag. 0.22 &#956;m, 500 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albimun (BSA)</td>
			<td>Gold Biotechnology, US</td>
			<td>A-421-10</td>
			<td>BSA Fatty Acid Free for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture media RPMI 1640</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>31800-022</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>A4766801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Marienfeld, DE</td>
			<td>640010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2 cell line</td>
			<td>ATCC, US</td>
			<td>HB-8065</td>
			<td>Hepatocellular carcinoma human cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidified incubator</td>
			<td>Thermo Electronic Corporation,US</td>
			<td>Model: 3110</td>
			<td>Temperature (37 &#176;C &#177; 1 &#176;C), humidity (90% &#177; 5%) , CO2 (5% &#177; 1%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope Eclipse</td>
			<td>NIKON, JPN</td>
			<td>Model: TE2000-S</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>I9030-4L</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O Kit</td>
			<td>Abcam, US</td>
			<td>ab150678</td>
			<td>Kit for histological visualization of neutral fat.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>P6148-500G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Antibiotics 10,000 U/mL Penicillin, 10,000 &#956;g/mL Streptomycin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Beckman, US</td>
			<td>Model: 360 PH/Temp/MV Meter</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt, AUS</td>
			<td>86.1253.001</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt, AUS</td>
			<td>&#160;86.1254.001</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>S5761-1KG</td>
			<td>Preparation of culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium oleate</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, US</td>
			<td>sc-215879A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium palmitate</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, US</td>
			<td>sc-215881</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syring filter</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>431219</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 28 mm, 0.2 &#956;m.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>T6146-25G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 0.05% /EDTA 0.53 mM</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>25-052-Cl</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well cell culture cluster</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>3524</td>
			<td>Flat bottom with lid. Tissue culture treated. Nonpyrogenic, polystyrene, sterile. 1/Pack.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well cell culture cluster</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>3599</td>
			<td>Flat bottom with lid. Tissue culture treated. Nonpyrogenic, polystyrene, sterile. 1/Pack.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a model of experimental steatosis in vitro: hepatocyte cell culture in lipid overload-conditioned medium

Metabolisk dysfunktion-associeret fedtlever sygdom (MAFLD), tidligere kendt som ikke-alkoholiske fedtlever sygdom (NAFLD), er den mest udbredte leversygdom på verdensplan på grund af sin sammenhæng med fedme, diabetes type 2, og dyslipidæmi. Lever steatose, ophobning af lipid dråber i leveren parenkym, er et centralt element i sygdommen forud for betændelse observeret i steatohepatitis, fibrose, og slutstadiet leversygdom. Lipid ophobning i hepatocytter kan forstyrre korrekt metabolisme af xenobiotika og endogene molekyler, samt at fremkalde cellulære processer, der fører til fremme af sygdommen. Selvom den eksperimentelle undersøgelse af steatose kan udføres in vivo, er in vitro-tilgange til studiet af steatose komplementære værktøjer med forskellige fordele. Hepatocyt kultur i lipid overbelastning-betinget medium er en glimrende reproducerbar mulighed for studiet af lever steatose tillader identifikation af cellulære processer relateret til lipid ophobning, såsom oxidative og retikulære belastninger, autofagi, spredning, celledød, etcetera, samt andre test, herunder lægemiddeleffektivitet, og toksikologiske test, blandt mange andre mulige anvendelser. Her var det formålet at beskrive metoden for hepatocyt cellekultur i lipid overbelastning-betinget medium. HepG2 celler blev dyrket i RMPI 1640 medium konditioneret med natrium palmitat og natrium oleat. Vigtigere, forholdet mellem disse to lipider er afgørende for at favorisere lipid dråbe ophobning, samtidig med at cellespredning og en moderat dødelighed, som opstår i leveren under sygdommen. Metoden, fra udarbejdelsen af lipidopløsningslagrene, blandingen, tilføjelsen til mediet og hepatocytkulturen vises. Med denne tilgang, er det muligt at identificere lipid dråber i hepatocytter, der er let observerbare af olie-rød O farvning, samt kurver af spredning / dødelighed.

Hepatocytter, der dyrkes i det steatogene medium, viser vækst over hele brøndens overflade; imidlertid viser fede hepatocytter lavere vækstrate sammenlignet med celler, der dyrkes i kontrolmediet. Det foreslåede forhold og koncentrationen af OA og PA garanterer celleoverlevelse under kultur. Såning 1 x 105 celler pr. brønd i 24-brønds plader giver optimal sammenløb som vist i figur 1.
Levedygtigheden i kultiverede celler var lavere i de steatoge...

Watch this Scientific Journal Video about A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium at JoVE.com

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

Denne protokol er beregnet til at være et værktøj til at studere steatose og molekylær, biokemiske, cellulære ændringer produceret af overeksponering af hepatocytter til lipider in vitro.

En model af eksperimentel Steatosis In Vitro:Hepatocyt Cell Kultur i Lipid Overbelastning-Conditioned Medium

Metabolic dysfunction-associated fatty liver disease (MAFLD), previously known as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), is the most prevalent liver ...

Denne protokol gælder for studiet af lever steatose samt for lever-, metaboliske, syntetiske, og giftingsveje i forbindelse med steatose. De vigtigste fordele ved denne metode er dens reproducerbarhed og den korte tid, der er nødvendig for at opnå resultater. Tilføj i det faktum, at det giver to niveauer af steatose, mild, og svær.In vitro induceret steatose kan give dokumentation for identifikation af potentielle markører for diagnosticering af sygdommen, samt terapeutiske mål. Denne metode er beregnet til at blive anvendt i steatoseresultatet. Det kan dog justeres til en bred vifte af forskellige celler, der er påvirket af lipid overeksponeringer, som under fedme og lipidemia.Forbered standard RPMI 1640. Suppler RPMI 1640 kulturmedium med 10% af varmeaktiveret FBS og 1% af penicillin streptomycinopløsning. Sterilisere det ved hjælp af 0,22 mikrometer filtre og gemme tillægget på fire grader Celsius.For at forberede en palmitat lageropløsning forberede en 50 millimolar opløsning af palmitat i standard RPMI 1640 suppleret med 1% af lipid fri BSA. Sterilisere omkring fem til ti milliliter af lageropløsningen ved hjælp af 0,22 mikrometerfiltre og opbevares ved fire grader Celsius beskyttet mod lys i op til en måned. Til fremstilling af oleatlageropløsning skal du fremstille en 50 millimolar opløsning af oleat i den supplerede RPMI 1640.Og sterilisere lageropløsningen ved hjælp af 0,22 mikrometerfiltre. Opbevar det på minus 20 grader Celsius, beskyttet mod lys i op til en måned. For at forberede steatogenic medium fra de tidligere forberedte lagre, forberede 100 millimeter af en 50 mikromolar blanding af en del palmitat og to del oleat.For milde niveauer, hæld en 500 mikromolar blanding af en del palmitat og to del oleat for alvorlige niveauer i standard RPMI 1640. Og sterilisere ved hjælp af 0,22 mikrometerfiltre. Opbevar på fire grader Celsius i op til en uge.Alternativt, for at forberede lagerløsninger med de respektive fedtsyrer ved hjælp af gratis lipid albumin, opløses enten palmitat eller oleat i to milliliter absolut ethanol og blandes derefter i det sidste volumen af standard RPMI 1640. Opløs oleate direkte ved opbevaring i standard RPMI 1640 kulturmedium. Tillad fordampning af ethanol ved at inkubere i et vandbad ved 70 grader Celsius og bland grundigt.Steriliser begge lagerløsninger ved hjælp af 0,22 mikrometerfiltre og opbevar palmitatlageropløsningen ved fire grader Celsius. Og oleate lagerløsning ved minus 20 grader Celsius. Sæde 0,1 millioner Hep G2 celler pr brønd i en 24-brønd plade.Tilføj en milliliter standard RPMI 1640. Præinkubere ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid i 24 timer, så celle vedhæftet fil. Efter forkulturen skal du kassere standard RPMI 1640-mediet.Og tilsæt det steatogene medium. Kassér supernatanten og tilsæt et frisk steatogent medium hver 24. time. For at udføre levedygtighed og morfologivurdering skal du kassere supernatanten og løsne cellerne fra brønden ved at tilføje 500 mikroliter på 0,05% trypsin EDTA.Inkuber i fem minutter ved 37 grader Celsius og 5% kuldioxid. Saml de ophængte celler i et mikrorør. Og centrifuge ved 300 gange G.Derefter kassere supernatant, tilføje en 200 mikroliter af standard RPMI 1640, og genbruge cellerne.Tilsæt 15 mikroliter af 0,4% af trypan blå opløsning i et frisk mikrorør. Tilsæt og bland 15 mikroliter af den tidligere celleaffjedring. Tæl de farvede og ikke-farvede celler i et hæmocytometer og beregn levedygtigheden og dødeligheden.Sæt en celle kultur dække slip i hver brønd i en 24-brønd plade og frø Hep G2 celler som beskrevet i teksten manuskript. Efter den relevante inkubation vaskes cellerne med en milliliter PBS og supernatanten kasseres. Bland dem med en milliliter på 4% paraformaldehyd i PBS og inkuber i en time ved stuetemperatur.Kassér den overskydende paraformaldehyd og skyl cellerne med en milliliter destilleret vand. Tilsæt derefter en milliliter på 70% isopropanol og inkuber i fem minutter. Kassér den overskydende isopropanol og tilsæt en milliliter olierød O-opløsning, og inkuber i 30 minutter.Kassér den overskydende olierøde O-opløsning, og skyl derefter med en milliliter destilleret vand. Overhold cellerne under mikroskopet ved en forstørrelse på 400x. Tilfældigt vælge og fange fotografier af 10 optiske felter fra det komplette område af brønden.Gentag billeddannelsen for hver brønd. Hvis du vil vurdere procentdelen af rødt farvet område, skal du åbne ImageJ-software og importere påkrævede filer og derefter klikke på juster og bruge farvetærsklen", definere nuanceparameteren til redigering af røde farver. Juster derefter mætning og lysstyrke for billedet.Sammenlign det farvede område med hele området af det optiske felt ved hjælp af analysepartiklernes værktøj og beregn den gennemsnitlige procentdel af hver brønd. Siddepladser 0,1 millioner hepatocytter per brønd i 24-brønd plader giver optimal sammenløb. Levedygtigheden gradvist faldt som tidspunktet for kulturen steg, nåede den laveste på 60% på fire dage i alvorlig steatose.Derfor var dødeligheden højere i hepatocytter, der dyrkes under steatogenice forhold. Og det steg gradvist med tidspunktet for eksponering for lipider. Antallet af celler steg gradvist som følge af spredning.Men, spredning sats var lavere i mild steatose på tre og fire dage. I modsætning hertil var alvorlig steatose forbundet med lavere spredning med 24 timer. Farvning celler med olie-rød O demonstreret mindst en dobbelt stigning af lipid dråber i celler dyrkes under steatogenic betingelser.Intracellulært fedt steg i henhold til tidspunktet for eksponering af kultur i det steatogene medium. I mild steatose blev lipidindholdet øget fra dag to, mens de i alvorlig steatose var signifikant høje fra 24 timer. Cellekultur kræver tidligere erfaring.Dyrkning Hep G2 celler i en standard tilstand, før du bruger denne protokol kunne være nyttigt. Fremstilling af fedtsyrelageret er også et afgørende punkt. Palmitic syre er fast ved stuetemperatur, og det skal opvarmes, før dets ledelse.Denne metode bør gøre det muligt at molekylær analyse af forskellige veje, herunder, men ikke begrænset til, spredning, apoptose, autofagi, oxidativ stress og farmakologisk og toksikologisk analyse.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stamcelletransplantation i en In vitro Simuleret Iskæmi / reperfusion Model

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Evaluering Teratogene Ændringer i en Zebrafisk Model af Føtalt Alkohol Eksponering

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro mesothelial Clearance Assay at modeller de tidlige stadier af kræft i æggestokkene Metastase

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoksiske Stimulering af Brain Microslices som en<em&gt; In vitro</em&gt; Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Neural stamcelletransplantation i Eksperimentel Contusive Model for Rygmarvsskader

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimeret Analyse af<em&gt; In vivo</em&gt; og<em&gt; In vitro</em&gt; Nedsat Steatose

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Ved hjælp af In Vitro Live-celle Imaging for at udforske kemoterapeutika leveret af Lipid-baserede nanopartikler

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

En celle kultur Model af modstand arterier

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissektion og eksplantat kultur af Murine Allantois til In Vitro -analyse af allantois vedhæftet fil

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...