Name: a model of experimental steatosis in vitro: hepatocyte cell culture in lipid overload-conditioned medium
Uploaded: 2021-05-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium at JoVE.com

Ce travail a été financé par le Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (Conacyt, CB-221137). Adriana Campos est doctorante au Programa de Doctorado en Ciencias Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México, et a été soutenue par Conacyt (CVU: 1002502).

1. Préparation de milieu standard et conditionné
<ol><li>Pour préparer le RPMI 1640 standard, compléter le milieu de culture RPMI 1640 avec 10% (v/v) de sérum bovin fœtal (FBS, précédemment inactivé par la chaleur) et 1% (v/v) de solution de pénicilline-streptomycine. Conserver le milieu à 4 °C.Stériliser à l’aide de filtres de 0,22 μm.</li>
	<li>Pour préparer une solution mère de palmitate, préparer une solution de palmitate de 50 mM dans le RPMI 1640 standard préalablement complété par 1% d’a...

<ol>
	<li>Younossi, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-alcoholic+fatty+liver+disease+-+a+global+public+health+perspective.">Non-alcoholic fatty liver disease - a global public health perspective.</a> Journal of Hepatology. 70 (3), 531-544 (2019).</li><li>Younossi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+perspectives+on+nonalcoholic+fatty+liver+disease+and+nonalcoholic+steatohepatitis.">Global perspectives on nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis.</a> Hepatology. 69 (6), 2672-2682 (2019).</li><li>Eslam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+definition+for+metabolic+dysfunction-associated+fatty+liver+disease:+An+international+expert+consensus+statement.">A new definition for metabolic dysfunction-associated fatty liver disease: An international expert consensus statement.</a> Journal of Hepatology. 73 (1), 202-209 (2020).</li><li>Eslam, M., Sanyal, A. J., George, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAFLD:+A+consensus-driven+proposed+nomenclature+for+metabolic+associated+fatty+liver+disease.">MAFLD: A consensus-driven proposed nomenclature for metabolic associated fatty liver disease.</a> Gastroenterology. 158 (7), 1999-2014 (2020).</li><li>Chalasani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+and+management+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease:+Practice+guidance+from+the+American+association+for+the+study+of+liver+diseases.">The diagnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease: Practice guidance from the American association for the study of liver diseases.</a> Hepatology. 67 (1), 328-357 (2018).</li><li>Calzadilla Bertot, L., Adams, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+course+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">The natural course of non-alcoholic fatty liver disease.</a> International Journal of Molecular Science. 17 (5), 774 (2016).</li><li>Reccia, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-alcoholic+fatty+liver+disease:+A+sign+of+systemic+disease.">Non-alcoholic fatty liver disease: A sign of systemic disease.</a> Metabolism. 72, 94-108 (2017).</li><li>Tomita, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+cholesterol+accumulation+in+hepatic+stellate+cells:+Mechanism+of+liver+fibrosis+aggravation+in+nonalcoholic+steatohepatitis+in+mice.">Free cholesterol accumulation in hepatic stellate cells: Mechanism of liver fibrosis aggravation in nonalcoholic steatohepatitis in mice.</a> Hepatology. 59 (1), 154-169 (2014).</li><li>Byrne, C. D., Targher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nafld:+A+multisystem+disease.">Nafld: A multisystem disease.</a> Journal of Hepatology. 62, 47-64 (2015).</li><li>Ipsen, D. H., Lykkesfeldt, J., Tveden-Nyborg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+hepatic+lipid+accumulation+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Molecular mechanisms of hepatic lipid accumulation in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 75 (18), 3313-3327 (2018).</li><li>Diehl, A. M., Day, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cause,+pathogenesis,+and+treatment+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Cause, pathogenesis, and treatment of nonalcoholic steatohepatitis.</a> New England Journal of Medicine. 377 (21), 2063-2072 (2017).</li><li>Zeng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+acid+ameliorates+palmitic+acid+induced+hepatocellular+lipotoxicity+by+inhibition+of+ER+stress+and+pyroptosis.">Oleic acid ameliorates palmitic acid induced hepatocellular lipotoxicity by inhibition of ER stress and pyroptosis.</a> Nutrition and Metabolism. 17, 11 (2020).</li><li>Ore, A., Akinloye, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+antioxidant+biomarkers+in+clinical+and+experimental+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Oxidative stress and antioxidant biomarkers in clinical and experimental models of non-alcoholic fatty liver disease.</a> Medicina (Kaunas). 55 (2), 26 (2019).</li><li>Paradies, G., Paradies, V., Ruggiero, F. M., Petrosillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress,+cardiolipin+and+mitochondrial+dysfunction+in+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Oxidative stress, cardiolipin and mitochondrial dysfunction in nonalcoholic fatty liver disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 20 (39), 14205-14218 (2014).</li><li>Aravinthan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+senescence+predicts+progression+in+non-alcohol-related+fatty+liver+disease.">Hepatocyte senescence predicts progression in non-alcohol-related fatty liver disease.</a> Journal of Hepatology. 58 (3), 549-556 (2013).</li><li>Gomez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+hepatocellular+in+vitro+model+to+investigate+steatosis.">A human hepatocellular in vitro model to investigate steatosis.</a> Chemico Biological Interactions. 165 (2), 106-116 (2007).</li><li>Wu, W. K. K., Zhang, L., Chan, M. T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy,+NAFLD+and+NAFLD-related+HCC.">Autophagy, NAFLD and NAFLD-related HCC.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 1061, 127-138 (2018).</li><li>Levy, G., Cohen, M., Nahmias, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+culture+models+of+hepatic+steatosis.">In vitro cell culture models of hepatic steatosis.</a> Methods in Molecular Biology. 1250, 377-390 (2015).</li><li>Kanuri, G., Bergheim, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease+(NAFLD).">In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD).</a> International Journal of Molecular Science. 14 (6), 11963-11980 (2013).</li><li>Ricchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effect+of+oleic+and+palmitic+acid+on+lipid+accumulation+and+apoptosis+in+cultured+hepatocytes.">Differential effect of oleic and palmitic acid on lipid accumulation and apoptosis in cultured hepatocytes.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 24 (5), 830-840 (2009).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+biomarkers+of+de+novo+lipogenesis+fatty+acids+and+incident+heart+failure+in+older+adults:+The+cardiovascular+health+study.">Serial biomarkers of de novo lipogenesis fatty acids and incident heart failure in older adults: The cardiovascular health study.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (4), 014119 (2020).</li><li>Alnahdi, A., John, A., Raza, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+of+glucotoxicity,+oxidative+stress,+apoptosis+and+mitochondrial+dysfunction+in+Hepg2+cells+by+palmitic+acid.">Augmentation of glucotoxicity, oxidative stress, apoptosis and mitochondrial dysfunction in Hepg2 cells by palmitic acid.</a> Nutrients. 11 (9), 1979 (2019).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+acid+protects+saturated+fatty+acid+mediated+lipotoxicity+in+hepatocytes+and+rat+of+non-alcoholic+steatohepatitis.">Oleic acid protects saturated fatty acid mediated lipotoxicity in hepatocytes and rat of non-alcoholic steatohepatitis.</a> Life Sciences. 203, 291-304 (2018).</li><li>Xing, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NLRP3+inflammasome+mediate+palmitate-induced+endothelial+dysfunction.">NLRP3 inflammasome mediate palmitate-induced endothelial dysfunction.</a> Life Sciences. 239, 116882 (2019).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+Growth+Factor+Binding+Protein+7+accelerates+hepatic+steatosis+and+insulin+resistance+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Insulin-like Growth Factor Binding Protein 7 accelerates hepatic steatosis and insulin resistance in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 46 (12), 1101-1110 (2019).</li><li>Wang, J., Hu, R., Yin, C., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tanshinone+IIA+reduces+palmitate-induced+apoptosis+via+inhibition+of+endoplasmic+reticulum+stress+in+Hepg2+liver+cells.">Tanshinone IIA reduces palmitate-induced apoptosis via inhibition of endoplasmic reticulum stress in Hepg2 liver cells.</a> Fundamental and Clinical Pharmacology. 34 (2), 249-262 (2020).</li><li>Xiao, Z., Chu, Y., Qin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGFBP5+modulates+lipid+metabolism+and+insulin+sensitivity+through+activating+ampk+pathway+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">IGFBP5 modulates lipid metabolism and insulin sensitivity through activating ampk pathway in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Life Sciences. 256, 117997 (2020).</li><li>Avila, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+conjugated+linoleic+acid+(CLA)+on+inflammatory+functions+of+bovine+monocytes.">In vitro effects of conjugated linoleic acid (CLA) on inflammatory functions of bovine monocytes.</a> Journal of Dairy Science. 103 (9), 8554-8563 (2020).</li><li>Malhi, H., Bronk, S. F., Werneburg, N. W., Gores, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+induce+JNK-dependent+hepatocyte+lipoapoptosis.">Free fatty acids induce JNK-dependent hepatocyte lipoapoptosis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 281 (17), 12093-12101 (2006).</li><li>Oh, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+palmitic+acid+on+TNF-alpha-induced+cytotoxicity+in+SK-Hep-1+cells.">Effects of palmitic acid on TNF-alpha-induced cytotoxicity in SK-Hep-1 cells.</a> Toxicology In Vitro: An International Journal Published in Association with BIBRA. 26 (6), 783-790 (2012).</li><li>Stellavato, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assessment+of+nutraceutical+compounds+and+novel+nutraceutical+formulations+in+a+liver-steatosis-based+model.">In vitro assessment of nutraceutical compounds and novel nutraceutical formulations in a liver-steatosis-based model.</a> Lipids in Health and Disease. 17 (1), 24 (2018).</li><li>Pachikian, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implication+of+trans-11,+trans-13+conjugated+linoleic+acid+in+the+development+of+hepatic+steatosis.">Implication of trans-11, trans-13 conjugated linoleic acid in the development of hepatic steatosis.</a> PLoS One. 13 (2), 0192447 (2018).</li><li>Ferreira, T., Rasband, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyze.">Analyze.</a> ImageJ User Guide. , 132-135 (2012).</li><li>Geng, Y., Wu, Z., Buist-Homan, M., Blokzijl, H., Moshage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hesperetin+protects+against+palmitate-induced+cellular+toxicity+via+induction+of+GRP78+in+hepatocytes.">Hesperetin protects against palmitate-induced cellular toxicity via induction of GRP78 in hepatocytes.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. , 404 (2020).</li><li>Geng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+metformin+against+palmitate-induced+hepatic+cell+death.">Protective effect of metformin against palmitate-induced hepatic cell death.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. 1866 (3), 165621 (2020).</li><li>Sarnyai, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cis-+and+trans-monounsaturated+fatty+acids+on+palmitate+toxicity+and+on+palmitate-induced+accumulation+of+ceramides+and+diglycerides.">Effect of cis- and trans-monounsaturated fatty acids on palmitate toxicity and on palmitate-induced accumulation of ceramides and diglycerides.</a> International Journal of Molecular Science. 21 (7), 2626 (2020).</li><li>Chen, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrahydrocurcumin+ameliorates+free+fatty+acid-induced+hepatic+steatosis+and+improves+insulin+resistance+in+HepG2+cells.">Tetrahydrocurcumin ameliorates free fatty acid-induced hepatic steatosis and improves insulin resistance in HepG2 cells.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (3), 1075-1085 (2018).</li><li>Burhans, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+oleate+regulates+adipose+tissue+lipogenesis+and+fatty+acid+oxidation.">Hepatic oleate regulates adipose tissue lipogenesis and fatty acid oxidation.</a> Journal of Lipid Research. 56 (2), 304-318 (2015).</li><li>Abenavoli, L., Milanovic, M., Milic, N., Luzza, F., Giuffre, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olive+oil+antioxidants+and+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Olive oil antioxidants and non-alcoholic fatty liver disease.</a> Expert Reviews in Gastroenterology and Hepatology. 13 (8), 739-749 (2019).</li><li>Nagarajan, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+and+glucose+metabolism+in+hepatocyte+cell+lines+and+primary+mouse+hepatocytes:+A+comprehensive+resource+for+in+vitro+studies+of+hepatic+metabolism.">Lipid and glucose metabolism in hepatocyte cell lines and primary mouse hepatocytes: A comprehensive resource for in vitro studies of hepatic metabolism.</a> American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. 316 (4), 578-589 (2019).</li><li>Hodson, L., Skeaff, C. M., Fielding, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+composition+of+adipose+tissue+and+blood+in+humans+and+its+use+as+a+biomarker+of+dietary+intake.">Fatty acid composition of adipose tissue and blood in humans and its use as a biomarker of dietary intake.</a> Progress in Lipid Research. 47 (5), 348-380 (2008).</li></ol>

Ce protocole vise à fournir une stratégie pour étudier la stéatose in vitro. La culture cellulaire est un outil puissant pour étudier les aspects cellulaires, moléculaires, biochimiques et toxicologiques des cellules exposées à différentes conditions. Avec cette approche, la stéatose peut être visualisée non seulement comme un stade de la maladie complexe qu’est la MAFLD, mais aussi comme la surexposition hépatocytaire aux lipides et les résultats possibles résultant d’une telle exposition. Pa...

La stéatose hépatique associée à un dysfonctionnement métabolique est très répandue dans le mondeentier 1,2; on estime que jusqu’à 25% de la population est touchée3. Cette maladie précédemment connue sous le nom de stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD), a mis à jour sa nomenclature pour la stéatose hépatique associée au dysfonctionnement métabolique (MAFLD) afin de refléter avec précision la pathogenèse liée à l’obésité, à la résistance à l’insuline, au diabète de type 2 et à la dyslipidémie, ainsi que les prises en charge possibles de la maladie3,4.
Quel que soit son nom, la maladie comprend un large spectre de changements histopathologiques caractérisés par une accumulation anormalement élevée de lipides dans le foie (>5% de graisse dans les hépatocytes5) et pourrait progresser à travers l’accumulation de lipides généralement trouvée dans la stéatose simple à la stéatohépatite, ce qui à son tour pourrait conduire au développement de fibrose, cirrhose, carcinome hépatocellulaire et insuffisance hépatique5,6,7,8. En raison de sa prévalence croissante, maFLD devrait devenir la première indication de transplantation hépatique et la principale cause de carcinome hépatocellulaire9.
Bien qu’elle ait été considérée comme une forme bénigne ou bénigne de stéatose hépatique, la stéatose hépatique est en fait la clé métabolique de MAFLD10. Différentes voies métaboliques sont affectées par l’accumulation de lipides dans le foie, y compris, mais sans s’y limiter, la synthèse, l’exportation et le métabolisme des lipides10. La résistance à l’insuline, le stress oxydatif, le stress réticulaire et le dysfonctionnement cellulaire sont fortement associés à la lipotoxicité hépatique11,12. D’autre part, les hépatocytes gras sont la cible d’espèces réactives de l’oxygène, rendant les métabolites sous forme de peroxydes lipidiques, de carbonyles protéiques et d’adductions d’acides nucléiques13. Au niveau cellulaire, les hépatocytes gras peuvent subir des dommages mitochondriaux14, la sénescence cellulaire15, l’apoptose16, la pyroptose12et l’autophagie17, entre autres événements.
Les hépatocytes sont hautement responsables du métabolisme, de la désintoxication et de la synthèse d’un large éventail de molécules. Beaucoup de ces fonctions pourraient être compromises par l’accumulation de lipides observée dans la stéatose. Par conséquent, il est d’une grande importance de disposer d’outils reproductibles qui permettent une évaluation précise de la stéatose. En ce sens, les modèles in vitro sont facilement applicables et hautement reproductibles. La stéatose in vitro a été utilisée avec différents objectifs16,18,19. Les cellules HepG2 sont largement utilisées comme lignée cellulaire hépatocytaire. Il a des avantages tels que facile à culture et bien caractérisé. Peut-être, le seul inconvénient des cellules HepG2 est le fait qu’il s’agit d’une lignée cellulaire cancérigène, donc cela doit être pris en compte lors de l’analyse des résultats. Ici, l’application d’un mélange d’acides gras largement utilisés en culture cellulaire: l’acide palmitique (PA) et l’acide oléique (OA) est montrée. L’AP et l’OA offrent des résultats différents dans la culture20. PA (C 16:0) est l’acide gras saturé le plus commun obtenu à partir de l’alimentation16. La PA est considérée comme un biomarqueur de la lipogenèse de novo,une étape cruciale dans le développement de la NAFLD21. Il est démontré que l’AP est très toxique22; par conséquent, il pourrait ne pas être recommandé d’induire la stéatose in vitro. L’arthrose (C 18:1) est un acide gras monoinsaturé. Contrairement à l’AP, il a été suggéré que l’arthrose possède des propriétés anti-inflammatoires et anti-oxydantes, étant capable de contrer la PA12. L’AP et l’ARTH sont les principaux acides gras présents dans les triglycérides, quel que soit l’état de santé ou la maladie16. Le tableau 1 fournit des exemples de la culture d’hépatocytes avec PA, OA et leur mélange, ainsi que les résultats rapportés12,23,24,25,26,27. D’autres acides gras ont également été utilisés en cultured’hépatocytes, notamment l’acide stéarique (C 18:0)28 , 29,30, l’acide linoléique (C 18:1) 28,30,31 et ses conjugués (CLA)28,32, l’acide palmitoléique (C 16: 1)29. Cependant, leur utilisation est moins fréquemment rapportée dans la littérature, peut-être parce que leur abondance hépatique est inférieure à celle de l’AP et de l’OA16.
En conjonction, les deux acides gras ressemblent à la stéatose in vitro, fournissant des cellules proliférantes, avec une mort cellulaire accrue et une viabilité inférieure par rapport aux conditions de contrôle. Il convient de mentionner que les sels respectifs de ces acides gras sont disponibles et peuvent également être utilisés. L’un des principaux problèmes lors de l’évaluation de la surcharge lipidique dans la culture de cellules hépatocytaires est donné dans la différenciation entre les modèles toxicologiques et un modèle qui représente le mieux la stéatose. De nombreux modèles peuvent être comptabilisés dans le premier cas. En fait, l’utilisation de l’AP seule pourrait être considérée parmi eux, et la mortalité élevée est le résultat le plus évident12,16,23,24,25,26,27. L’utilisation de doses élevées, même dans le cas de l’arthrose, peut également être considérée comme un modèle toxicologique. Le protocole présenté ici est plus conforme au développement de la stéatose car il montre une faible mortalité par rapport à celle observée dans d’autres modèles et permet de le suivre pendant plusieurs jours avec une accumulation progressive de lipides telle qu’elle se produit dans la NAFLD. La possibilité d’évaluer la stéatose légère et sévère par des conditions expérimentales est considérée comme un autre avantage.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Acides gras</td>
			<td colspan="2">Conditions</td>
			<td colspan="2">Résultats</td>
			<td>Référence</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">PAPA</td>
			<td colspan="2">Concentration : 200 μM</td>
			<td colspan="2">Accumulation de lipides</td>
			<td rowspan="3">Yan et al, 201925.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Temps d’exposition: 24 h</td>
			<td colspan="2">Dommages aux hépatocytes</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2"></td>
			<td colspan="2">Élévation des transaminases</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">PAPA</td>
			<td colspan="2">Concentration : 50, 100 et 200 μM</td>
			<td colspan="2" rowspan="2">Accumulation de lipides</td>
			<td rowspan="2">Xing et al, 201924.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Temps d’exposition: 24 h</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">PAPA</td>
			<td colspan="2">Concentration : 250 μM, 500 μM, 750 μM et 1 000 μM</td>
			<td colspan="2">Accumulation de lipides</td>
			<td rowspan="2">Wang et al, 202026.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Temps d’exposition: 24 h</td>
			<td colspan="2">Réduction progressive de la viabilité cellulaire</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Mélange d’OA/PA</td>
			<td colspan="2">Concentration : 1 mM</td>
			<td colspan="2">Accumulation de lipides</td>
			<td rowspan="3">Xiao et al, 202027.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Temps d’exposition: 24 h</td>
			<td colspan="2">Ne signale pas de lipotoxicité</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tarif: 2OA:1PA</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="4">Mélange d’OA/PA</td>
			<td colspan="2">Première stimulation avec 200 μM et 400 μM de PA, puis deuxième stimulation avec 200 μM d’ARTH</td>
			<td colspan="2">Accumulation de lipides.</td>
			<td rowspan="4">Zeng et al, 202012.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Concentration:400 μM PA: 200 μM OA</td>
			<td colspan="2">Les signes de lipotoxicité induite par l’AP ont été réduits par la stimulation de l’arthrose.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tarif: 2PA:1OA</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Temps d’exposition: 24 h</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Mélange d’OA/PA</td>
			<td colspan="2">Concentration : 400 μM PA : 200 μM OA</td>
			<td colspan="2" rowspan="3">Accumulation de lipides</td>
			<td rowspan="3">Chen et al, 201823.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tarif: 2PA:1OA</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Temps d’exposition: 24 h</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Mélange d’OA/PA</td>
			<td colspan="2">Concentration :50 et 500 μM</td>
			<td colspan="2">Génération de deux types de stéatose: stéatose légère et stéatose sévère.</td>
			<td rowspan="3">Campos et Guzmán 2021</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Tarif: 2PA:1OA</td>
			<td colspan="2">Simule l’exposition chronique de la surcharge lipidique</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">Temps d’exposition: 24 h, 2 jours, 3 jours et 4 jours.</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
</tbody></table>Tableau 1. Culture d’hépatocytes dans des conditions stéatogènes. Le tableau présente le type d’acide gras utilisé, les conditions maintenues et les résultats observés dans la culture d’hépatocytes. PA : Acide palmitique. OA : Acide oléique.
Enfin, ce modèle est applicable non seulement à l’étude de la stéatose et de la stéatose hépatique, mais aussi aux voies métaboliques hépatiques, synthétiques et de désintoxication dans le contexte de la stéatose. En outre, la stéatose induite in vitro pourrait fournir des preuves pour l’identification de marqueurs potentiels de la maladie ainsi que de cibles thérapeutiques.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Biosafety cabinet</td>
			<td>ESCO Airstream</td>
			<td>AC2-452+C2:C26</td>
			<td>Class II&#160;Type A2&#160;Biological Safety Cabinet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle top filter</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>430513</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, polystyrene, sterile. 1 filter/Bag. 0.22 &#956;m, 500 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albimun (BSA)</td>
			<td>Gold Biotechnology, US</td>
			<td>A-421-10</td>
			<td>BSA Fatty Acid Free for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture media RPMI 1640</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>31800-022</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>A4766801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Marienfeld, DE</td>
			<td>640010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2 cell line</td>
			<td>ATCC, US</td>
			<td>HB-8065</td>
			<td>Hepatocellular carcinoma human cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidified incubator</td>
			<td>Thermo Electronic Corporation,US</td>
			<td>Model: 3110</td>
			<td>Temperature (37 &#176;C &#177; 1 &#176;C), humidity (90% &#177; 5%) , CO2 (5% &#177; 1%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope Eclipse</td>
			<td>NIKON, JPN</td>
			<td>Model: TE2000-S</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>I9030-4L</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O Kit</td>
			<td>Abcam, US</td>
			<td>ab150678</td>
			<td>Kit for histological visualization of neutral fat.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>P6148-500G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Antibiotics 10,000 U/mL Penicillin, 10,000 &#956;g/mL Streptomycin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Beckman, US</td>
			<td>Model: 360 PH/Temp/MV Meter</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt, AUS</td>
			<td>86.1253.001</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt, AUS</td>
			<td>&#160;86.1254.001</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>S5761-1KG</td>
			<td>Preparation of culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium oleate</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, US</td>
			<td>sc-215879A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium palmitate</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, US</td>
			<td>sc-215881</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syring filter</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>431219</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 28 mm, 0.2 &#956;m.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>T6146-25G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 0.05% /EDTA 0.53 mM</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>25-052-Cl</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well cell culture cluster</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>3524</td>
			<td>Flat bottom with lid. Tissue culture treated. Nonpyrogenic, polystyrene, sterile. 1/Pack.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well cell culture cluster</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>3599</td>
			<td>Flat bottom with lid. Tissue culture treated. Nonpyrogenic, polystyrene, sterile. 1/Pack.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a model of experimental steatosis in vitro: hepatocyte cell culture in lipid overload-conditioned medium

La stéatose hépatique associée au dysfonctionnement métabolique (MAFLD), précédemment connue sous le nom de stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD), est la maladie du foie la plus répandue dans le monde en raison de sa relation avec l’obésité, le diabète de type 2 et la dyslipidémie. La stéatose hépatique, l’accumulation de gouttelettes lipidiques dans le parenchyme hépatique, est une caractéristique clé de la maladie précédant l’inflammation observée dans la stéatohépatite, la fibrose et la maladie hépatique terminale. L’accumulation de lipides dans les hépatocytes pourrait interférer avec le métabolisme approprié des xénobiotiques et des molécules endogènes, ainsi que pour induire des processus cellulaires conduisant à l’avancée de la maladie. Bien que l’étude expérimentale de la stéatose puisse être réalisée in vivo,les approches in vitro pour l’étude de la stéatose sont des outils complémentaires avec différents avantages. La culture d’hépatocytes dans un milieu conditionné par surcharge lipidique est une excellente option reproductible pour l’étude de la stéatose hépatique permettant l’identification des processus cellulaires liés à l’accumulation de lipides, tels que les stress oxydatifs et réticulaires, l’autophagie, la prolifération, la mort cellulaire, etc., ainsi que d’autres tests, y compris l’efficacité des médicaments et les tests toxicologiques, parmi de nombreuses autres applications possibles. Ici, il s’agissait de décrire la méthodologie de la culture de cellules hépatocytaires dans un milieu conditionné par une surcharge lipidique. Les cellules HepG2 ont été cultivées dans un milieu RMPI 1640 conditionné avec du palmitate de sodium et de l’oléate de sodium. Il est important de noter que le rapport de ces deux lipides est crucial pour favoriser l’accumulation de gouttelettes lipidiques, tout en maintenant la prolifération cellulaire et un taux de mortalité modéré, comme cela se produit dans le foie pendant la maladie. La méthodologie, à partir de la préparation des stocks de solution lipidique, du mélange, de l’addition au milieu et de la culture d’hépatocytes est montrée. Avec cette approche, il est possible d’identifier les gouttelettes lipidiques dans les hépatocytes qui sont facilement observables par coloration O rouge huile, ainsi que les courbes des taux de prolifération / mortalité.

Les hépatocytes cultivés dans le milieu stéatogène présentent une croissance sur toute la surface du puits; cependant, les hépatocytes gras présentent un taux de croissance inférieur à celui des cellules cultivées en milieu témoin. Le rapport et la concentration proposés d’arthrose et d’AP garantissent la survie cellulaire pendant la culture. L’ensemencement de 1 x10 5 cellules par puits dans des plaques de 24 puits permet une confluence optimale comme le montre la figure...

Watch this Scientific Journal Video about A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium at JoVE.com

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

Ce protocole se veut un outil d’étude de la stéatose et des changements moléculaires, biochimiques, cellulaires produits par la surexposition des hépatocytes aux lipides in vitro.

Un modèle de stéatose expérimentale in vitro: culture de cellules hépatocytaires dans un milieu conditionné par surcharge lipidique

Metabolic dysfunction-associated fatty liver disease (MAFLD), previously known as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), is the most prevalent liver ...

Ce protocole est applicable à l’étude de la stéatose hépatique ainsi qu’aux voies hépatiques, métaboliques, synthétiques et de toxification dans le contexte de la stéatose. Les principaux avantages de cette méthode sont sa reproductibilité et le peu de temps nécessaire pour obtenir des résultats. Ajoutez à cela le fait qu’il offre deux niveaux de stéatose, légère et sévère.La stéatose induite in vitro pourrait fournir des preuves pour l’identification de marqueurs potentiels pour le diagnostic de la maladie, ainsi que de cibles thérapeutiques. Cette méthode est destinée à être appliquée dans le résultat de la stéatose. Cependant, il peut être ajusté à un large éventail de cellules différentes affectées par des surexpositions aux lipides, comme lors de l’obésité et de la lipidémie.Préparez le RPMI 1640 standard. Complétez le milieu de culture RPMI 1640 avec 10% de FBS activé par la chaleur et 1% de solution de streptomycine de pénicilline. Stérilisez-le à l’aide de filtres de 0,22 micromètre et stockez le supplément à quatre degrés Celsius.Pour préparer une solution mère de palmitate, préparez une solution de palmitate de 50 millimolaires dans le RPMI 1640 standard complété par 1% de BSA sans lipides. Stériliser environ cinq à dix millilitres de la solution d’origine à l’aide de filtres de 0,22 micromètre et conserver à quatre degrés Celsius à l’abri de la lumière pendant un mois. Pour préparer la solution mère d’oléate, préparez une solution d’oléate de 50 millimolaires dans le RPMI 1640 supplémenté.Et stérilisez la solution d’élevage à l’aide de filtres de 0,22 micromètre. Conservez-le à moins 20 degrés Celsius, à l’abri de la lumière jusqu’à un mois. Pour préparer le milieu stéatogène à partir des stocks préalablement préparés, préparez 100 millimètres d’un mélange de 50 micromolaires d’une partie de palmitate et de deux parties d’oléate.Pour les niveaux doux, versez un mélange de 500 micromolaires d’une partie de palmitate et de deux parties d’oléate pour les niveaux sévères dans rpmI 1640 standard. Et stériliser à l’aide de filtres de 0,22 micromètre. Conserver à quatre degrés Celsius jusqu’à une semaine.Alternativement, pour préparer des solutions d’origine avec les acides gras respectifs en utilisant de l’albumine lipidique libre, dissoudre le palmitate ou l’oléate dans deux millilitres d’éthanol absolu, puis mélanger dans le volume final du RPMI standard 1640. Dissoudre l’oléate directement en le stockant dans un milieu de culture RPMI 1640 standard. Permettre l’évaporation de l’éthanol en incubant dans un bain-marie à 70 degrés Celsius et bien mélanger.Stérilisez les deux solutions d’élevage à l’aide de filtres de 0,22 micromètre et stockez la solution de palmitate à quatre degrés Celsius. Et solution d’oléate à moins 20 degrés Celsius. Placez 0,1 million de cellules Hep G2 par puits dans une plaque de 24 puits.Ajoutez un millilitre de RPMI 1640 standard. Pré-incuber à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone pendant 24 heures, permettant la fixation cellulaire. Après la préculture, jetez le support RPMI 1640 standard.Et ajoutez le milieu stéatogène. Jeter le surnageant et ajouter un milieu stéatogène frais toutes les 24 heures. Pour effectuer une évaluation de la viabilité et de la morphologie, jetez le surnageant et détachez les cellules du puits en ajoutant 500 microlitres de 0,05% de trypsine EDTA.Incuber pendant cinq minutes à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone. Recueillir les cellules ressuspendées dans un microtube. Et centrifuger à 300 fois G.Ensuite, jetez le surnageant, ajoutez 200 microlitres de RPMI 1640 standard et ressuspendez les cellules.Ajouter 15 microlitres de 0,4% de solution de bleu de trypan dans un microtube frais. Ajouter et mélanger 15 microlitres de la suspension cellulaire précédente. Compter les cellules colorées et non colorées dans un hémocytomètre et calculer les taux de viabilité et de mortalité.Mettez un couvercle de culture cellulaire dans chaque puits d’une plaque de 24 puits et ensemencez des cellules Hep G2 comme décrit dans le manuscrit du texte. Après l’incubation appropriée, lavez les cellules avec un millilitre de PBS et jetez le surnageant. Mélangez-les avec un millilitre de 4% de paraformaldéhyde dans du PBS et incubez pendant une heure à température ambiante.Jetez l’excès de paraformaldéhyde et rincez les cellules avec un millilitre d’eau distillée. Ajoutez ensuite un millilitre d’isopropanol à 70% et incubez pendant cinq minutes. Jeter l’excès d’isopropanol et ajouter un millilitre de solution Oil-Red O et incuber pendant 30 minutes.Jetez l’excès de solution Oil-Red O, puis rincez avec un millilitre d’eau distillée. Observez les cellules au microscope à un grossissement de 400x. Sélectionnez et capturez au hasard des photographies de 10 champs optiques à partir de la zone complète du puits.Répétez l’imagerie pour chaque puits. Pour évaluer le pourcentage de zone colorée rouge, ouvrez le logiciel ImageJ et importez les fichiers requis, puis cliquez sur ajuster et en utilisant l’outil « seuil de couleur », définissez le paramètre de teinte pour la détection de couleur rouge. Ajustez ensuite la saturation et la luminosité de l’image.Comparez la zone colorée avec la zone complète du champ optique, à l’aide de l’outil d’analyse des particules et calculez le pourcentage moyen de chaque puits. Accueillir 0,1 million d’hépatocytes par puits dans des plaques de 24 puits offre une confluence optimale. La viabilité diminuait progressivement à mesure que le temps de culture augmentait, atteignant le plus bas de 60% à quatre jours dans la stéatose sévère.En conséquence, le taux de mortalité était plus élevé dans les hépatocytes cultivés dans les conditions stéatogènes. Et il a progressivement augmenté avec le temps d’exposition aux lipides. Le nombre de cellules a progressivement augmenté en raison de la prolifération.Cependant, le taux de prolifération était plus faible dans la stéatose légère à trois et quatre jours. En revanche, la stéatose sévère était associée à une prolifération plus faible de 24 heures. La coloration des cellules avec de l’O rouge huile a démontré au moins une multiplication par deux des gouttelettes lipidiques dans les cellules cultivées dans des conditions stéatogènes.La graisse intracellulaire a augmenté en fonction du temps d’exposition de la culture dans le milieu stéatogène. Dans la stéatose légère, les teneurs en lipides ont augmenté à partir du deuxième jour, tandis que dans la stéatose sévère, elles étaient significativement élevées à partir de 24 heures. La culture cellulaire nécessite une expérience préalable.Cultiver des cellules Hep G2 dans un état standard avant d’utiliser ce protocole pourrait être utile. La préparation du stock d’acides gras est également un point crucial. L’acide palmitique est solide à température ambiante et doit être réchauffé avant sa gestion.Cette méthode devrait permettre l’analyse moléculaire de différentes voies, y compris, mais sans s’y limiter, la prolifération, l’apoptose, l’autophagie, le stress oxydatif et l’analyse pharmacologique et toxicologique.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Multi-photon imagerie de l&#39;invasion des cellules tumorales dans un modèle de souris orthotopique du carcinome épidermoïde oral

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Recherche

Médecine

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Transplantation de cellules souches dans un In vitro Simulation d&#39;ischémie / reperfusion modèle

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Évaluer les changements tératogènes dans un modèle de poisson zèbre de l&#39;exposition d&#39;alcoolisation fœtale

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

In vitro Mesothelial Clearance Assay that Models the Early Steps of Ovarian Cancer Metastasis

Test in vitro avec dégagement mésothéliales que les modèles les étapes précoces de métastases du cancer de l&#39;ovaire

Ovarian cancer is the fifth leading cause of cancer related deaths in the United States1. Despite a positive initial response to therapies, 70 to 90 ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxiques stimulation de Microslices cerveau comme un<em&gt; In vitro</em&gt; Modèle de l&#39;AVC

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Neural Transplantation de cellules souches dans la partie expérimentale Modèle contusion de la moelle épinière des blessures

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Optimized Analysis of In Vivo and In Vitro Hepatic Steatosis

Analyse optimisée des<em&gt; In Vivo</em&gt; et<em&gt; In vitro</em&gt; Stéatose hépatique

Establishing a system of procedures to qualitatively and quantitatively characterize in vivo and in vitro hepatic steatosis is important for metabolic ...

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

Using In Vitro Live-cell Imaging to Explore Chemotherapeutics Delivered by Lipid-based Nanoparticles

À l’aide de In Vitro imagerie de cellules vivantes pour explorer les agents chimiothérapeutiques livré par nanoparticules à base de lipides

Conventional imaging techniques can provide detailed information about cellular processes. However, this information is based on static images in an ...

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

Un modèle de Culture cellulaire des artères de résistance

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection et la Culture Explant allantoïde murin pour l’analyse In Vitro de l’attachement allantoïdien

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...