Name: a model of experimental steatosis in vitro: hepatocyte cell culture in lipid overload-conditioned medium
Uploaded: 2021-05-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium at JoVE.com

この作品は、コンセホ・ナシオナル・デ・シエンシア・イ・テクノロジア(Conacyt、CB-221137)によって資金提供されました。アドリアナ・カンポスは、プログラム・デ・ドクマド・エン・シエンシアス・バイオメディカ、ナシオナル・エウトノマ・デ・メヒコ大学の博士課程の学生で、コナシト(CVU:1002502)によってサポートされました。

1. 標準および条件付き培地製剤
<ol><li>標準的なRPMI 1640を調製するために、牛胎児血清(FBS、以前に熱不活性化)の10%(v/v)とペニシリン・ストレプトマイシン溶液の1%(v/v)を含むRPMI 1640培地を補います。0.22 μmフィルターを使用して、4°Cで培地を滅菌してください。</li>
	<li>パルミチンストック溶液を調製するために、牛血清アルブミン(脂質フリー)の1%を以前に補充した標準RPMI 1640にパルミチンの...

<ol>
	<li>Younossi, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-alcoholic+fatty+liver+disease+-+a+global+public+health+perspective.">Non-alcoholic fatty liver disease - a global public health perspective.</a> Journal of Hepatology. 70 (3), 531-544 (2019).</li><li>Younossi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+perspectives+on+nonalcoholic+fatty+liver+disease+and+nonalcoholic+steatohepatitis.">Global perspectives on nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis.</a> Hepatology. 69 (6), 2672-2682 (2019).</li><li>Eslam, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+definition+for+metabolic+dysfunction-associated+fatty+liver+disease:+An+international+expert+consensus+statement.">A new definition for metabolic dysfunction-associated fatty liver disease: An international expert consensus statement.</a> Journal of Hepatology. 73 (1), 202-209 (2020).</li><li>Eslam, M., Sanyal, A. J., George, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAFLD:+A+consensus-driven+proposed+nomenclature+for+metabolic+associated+fatty+liver+disease.">MAFLD: A consensus-driven proposed nomenclature for metabolic associated fatty liver disease.</a> Gastroenterology. 158 (7), 1999-2014 (2020).</li><li>Chalasani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+diagnosis+and+management+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease:+Practice+guidance+from+the+American+association+for+the+study+of+liver+diseases.">The diagnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease: Practice guidance from the American association for the study of liver diseases.</a> Hepatology. 67 (1), 328-357 (2018).</li><li>Calzadilla Bertot, L., Adams, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+course+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">The natural course of non-alcoholic fatty liver disease.</a> International Journal of Molecular Science. 17 (5), 774 (2016).</li><li>Reccia, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-alcoholic+fatty+liver+disease:+A+sign+of+systemic+disease.">Non-alcoholic fatty liver disease: A sign of systemic disease.</a> Metabolism. 72, 94-108 (2017).</li><li>Tomita, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+cholesterol+accumulation+in+hepatic+stellate+cells:+Mechanism+of+liver+fibrosis+aggravation+in+nonalcoholic+steatohepatitis+in+mice.">Free cholesterol accumulation in hepatic stellate cells: Mechanism of liver fibrosis aggravation in nonalcoholic steatohepatitis in mice.</a> Hepatology. 59 (1), 154-169 (2014).</li><li>Byrne, C. D., Targher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nafld:+A+multisystem+disease.">Nafld: A multisystem disease.</a> Journal of Hepatology. 62, 47-64 (2015).</li><li>Ipsen, D. H., Lykkesfeldt, J., Tveden-Nyborg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+hepatic+lipid+accumulation+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Molecular mechanisms of hepatic lipid accumulation in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Cellular and Molecular Life Sciences. 75 (18), 3313-3327 (2018).</li><li>Diehl, A. M., Day, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cause,+pathogenesis,+and+treatment+of+nonalcoholic+steatohepatitis.">Cause, pathogenesis, and treatment of nonalcoholic steatohepatitis.</a> New England Journal of Medicine. 377 (21), 2063-2072 (2017).</li><li>Zeng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+acid+ameliorates+palmitic+acid+induced+hepatocellular+lipotoxicity+by+inhibition+of+ER+stress+and+pyroptosis.">Oleic acid ameliorates palmitic acid induced hepatocellular lipotoxicity by inhibition of ER stress and pyroptosis.</a> Nutrition and Metabolism. 17, 11 (2020).</li><li>Ore, A., Akinloye, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress+and+antioxidant+biomarkers+in+clinical+and+experimental+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Oxidative stress and antioxidant biomarkers in clinical and experimental models of non-alcoholic fatty liver disease.</a> Medicina (Kaunas). 55 (2), 26 (2019).</li><li>Paradies, G., Paradies, V., Ruggiero, F. M., Petrosillo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidative+stress,+cardiolipin+and+mitochondrial+dysfunction+in+nonalcoholic+fatty+liver+disease.">Oxidative stress, cardiolipin and mitochondrial dysfunction in nonalcoholic fatty liver disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 20 (39), 14205-14218 (2014).</li><li>Aravinthan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+senescence+predicts+progression+in+non-alcohol-related+fatty+liver+disease.">Hepatocyte senescence predicts progression in non-alcohol-related fatty liver disease.</a> Journal of Hepatology. 58 (3), 549-556 (2013).</li><li>Gomez, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+human+hepatocellular+in+vitro+model+to+investigate+steatosis.">A human hepatocellular in vitro model to investigate steatosis.</a> Chemico Biological Interactions. 165 (2), 106-116 (2007).</li><li>Wu, W. K. K., Zhang, L., Chan, M. T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy,+NAFLD+and+NAFLD-related+HCC.">Autophagy, NAFLD and NAFLD-related HCC.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 1061, 127-138 (2018).</li><li>Levy, G., Cohen, M., Nahmias, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+cell+culture+models+of+hepatic+steatosis.">In vitro cell culture models of hepatic steatosis.</a> Methods in Molecular Biology. 1250, 377-390 (2015).</li><li>Kanuri, G., Bergheim, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+models+of+non-alcoholic+fatty+liver+disease+(NAFLD).">In vitro and in vivo models of non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD).</a> International Journal of Molecular Science. 14 (6), 11963-11980 (2013).</li><li>Ricchi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+effect+of+oleic+and+palmitic+acid+on+lipid+accumulation+and+apoptosis+in+cultured+hepatocytes.">Differential effect of oleic and palmitic acid on lipid accumulation and apoptosis in cultured hepatocytes.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 24 (5), 830-840 (2009).</li><li>Lee, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+biomarkers+of+de+novo+lipogenesis+fatty+acids+and+incident+heart+failure+in+older+adults:+The+cardiovascular+health+study.">Serial biomarkers of de novo lipogenesis fatty acids and incident heart failure in older adults: The cardiovascular health study.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (4), 014119 (2020).</li><li>Alnahdi, A., John, A., Raza, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmentation+of+glucotoxicity,+oxidative+stress,+apoptosis+and+mitochondrial+dysfunction+in+Hepg2+cells+by+palmitic+acid.">Augmentation of glucotoxicity, oxidative stress, apoptosis and mitochondrial dysfunction in Hepg2 cells by palmitic acid.</a> Nutrients. 11 (9), 1979 (2019).</li><li>Chen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oleic+acid+protects+saturated+fatty+acid+mediated+lipotoxicity+in+hepatocytes+and+rat+of+non-alcoholic+steatohepatitis.">Oleic acid protects saturated fatty acid mediated lipotoxicity in hepatocytes and rat of non-alcoholic steatohepatitis.</a> Life Sciences. 203, 291-304 (2018).</li><li>Xing, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NLRP3+inflammasome+mediate+palmitate-induced+endothelial+dysfunction.">NLRP3 inflammasome mediate palmitate-induced endothelial dysfunction.</a> Life Sciences. 239, 116882 (2019).</li><li>Yan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin-like+Growth+Factor+Binding+Protein+7+accelerates+hepatic+steatosis+and+insulin+resistance+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Insulin-like Growth Factor Binding Protein 7 accelerates hepatic steatosis and insulin resistance in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 46 (12), 1101-1110 (2019).</li><li>Wang, J., Hu, R., Yin, C., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tanshinone+IIA+reduces+palmitate-induced+apoptosis+via+inhibition+of+endoplasmic+reticulum+stress+in+Hepg2+liver+cells.">Tanshinone IIA reduces palmitate-induced apoptosis via inhibition of endoplasmic reticulum stress in Hepg2 liver cells.</a> Fundamental and Clinical Pharmacology. 34 (2), 249-262 (2020).</li><li>Xiao, Z., Chu, Y., Qin, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGFBP5+modulates+lipid+metabolism+and+insulin+sensitivity+through+activating+ampk+pathway+in+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">IGFBP5 modulates lipid metabolism and insulin sensitivity through activating ampk pathway in non-alcoholic fatty liver disease.</a> Life Sciences. 256, 117997 (2020).</li><li>Avila, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+effects+of+conjugated+linoleic+acid+(CLA)+on+inflammatory+functions+of+bovine+monocytes.">In vitro effects of conjugated linoleic acid (CLA) on inflammatory functions of bovine monocytes.</a> Journal of Dairy Science. 103 (9), 8554-8563 (2020).</li><li>Malhi, H., Bronk, S. F., Werneburg, N. W., Gores, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+fatty+acids+induce+JNK-dependent+hepatocyte+lipoapoptosis.">Free fatty acids induce JNK-dependent hepatocyte lipoapoptosis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 281 (17), 12093-12101 (2006).</li><li>Oh, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+palmitic+acid+on+TNF-alpha-induced+cytotoxicity+in+SK-Hep-1+cells.">Effects of palmitic acid on TNF-alpha-induced cytotoxicity in SK-Hep-1 cells.</a> Toxicology In Vitro: An International Journal Published in Association with BIBRA. 26 (6), 783-790 (2012).</li><li>Stellavato, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assessment+of+nutraceutical+compounds+and+novel+nutraceutical+formulations+in+a+liver-steatosis-based+model.">In vitro assessment of nutraceutical compounds and novel nutraceutical formulations in a liver-steatosis-based model.</a> Lipids in Health and Disease. 17 (1), 24 (2018).</li><li>Pachikian, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implication+of+trans-11,+trans-13+conjugated+linoleic+acid+in+the+development+of+hepatic+steatosis.">Implication of trans-11, trans-13 conjugated linoleic acid in the development of hepatic steatosis.</a> PLoS One. 13 (2), 0192447 (2018).</li><li>Ferreira, T., Rasband, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyze.">Analyze.</a> ImageJ User Guide. , 132-135 (2012).</li><li>Geng, Y., Wu, Z., Buist-Homan, M., Blokzijl, H., Moshage, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hesperetin+protects+against+palmitate-induced+cellular+toxicity+via+induction+of+GRP78+in+hepatocytes.">Hesperetin protects against palmitate-induced cellular toxicity via induction of GRP78 in hepatocytes.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. , 404 (2020).</li><li>Geng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+metformin+against+palmitate-induced+hepatic+cell+death.">Protective effect of metformin against palmitate-induced hepatic cell death.</a> Biochimica et Biophysica Acta - Molecular Basis of Disease. 1866 (3), 165621 (2020).</li><li>Sarnyai, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+cis-+and+trans-monounsaturated+fatty+acids+on+palmitate+toxicity+and+on+palmitate-induced+accumulation+of+ceramides+and+diglycerides.">Effect of cis- and trans-monounsaturated fatty acids on palmitate toxicity and on palmitate-induced accumulation of ceramides and diglycerides.</a> International Journal of Molecular Science. 21 (7), 2626 (2020).</li><li>Chen, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrahydrocurcumin+ameliorates+free+fatty+acid-induced+hepatic+steatosis+and+improves+insulin+resistance+in+HepG2+cells.">Tetrahydrocurcumin ameliorates free fatty acid-induced hepatic steatosis and improves insulin resistance in HepG2 cells.</a> Journal of Food and Drug Analysis. 26 (3), 1075-1085 (2018).</li><li>Burhans, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+oleate+regulates+adipose+tissue+lipogenesis+and+fatty+acid+oxidation.">Hepatic oleate regulates adipose tissue lipogenesis and fatty acid oxidation.</a> Journal of Lipid Research. 56 (2), 304-318 (2015).</li><li>Abenavoli, L., Milanovic, M., Milic, N., Luzza, F., Giuffre, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olive+oil+antioxidants+and+non-alcoholic+fatty+liver+disease.">Olive oil antioxidants and non-alcoholic fatty liver disease.</a> Expert Reviews in Gastroenterology and Hepatology. 13 (8), 739-749 (2019).</li><li>Nagarajan, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+and+glucose+metabolism+in+hepatocyte+cell+lines+and+primary+mouse+hepatocytes:+A+comprehensive+resource+for+in+vitro+studies+of+hepatic+metabolism.">Lipid and glucose metabolism in hepatocyte cell lines and primary mouse hepatocytes: A comprehensive resource for in vitro studies of hepatic metabolism.</a> American Journal of Physiology - Endocrinology and Metabolism. 316 (4), 578-589 (2019).</li><li>Hodson, L., Skeaff, C. M., Fielding, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fatty+acid+composition+of+adipose+tissue+and+blood+in+humans+and+its+use+as+a+biomarker+of+dietary+intake.">Fatty acid composition of adipose tissue and blood in humans and its use as a biomarker of dietary intake.</a> Progress in Lipid Research. 47 (5), 348-380 (2008).</li></ol>

このプロトコルは、 体外でステアトーシスを研究するための戦略を提供することを目的としています。細胞培養は、細胞、分子、生化学的、および異なる条件にさらされた細胞の毒性学的側面を研究するための強力なツールです。このアプローチにより、脂肪症は、MAFLDである複雑な疾患の段階としてだけでなく、脂質への過剰暴露およびそのような暴露に起因する可能性のある結果?...

代謝機能障害に関連する脂肪肝は世界的に非常に普及しています1,2;人口の最大25%が3に影響を受けると推定されています。この疾患は、以前は非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)として知られており、肥満、インスリン抵抗性、糖尿病2型、脂質異常症に関連する病因を正確に反映するように代謝機能不全に対するその命名法を更新した。3,4.
名前に関係なく、この疾患は肝臓における脂質の異常に高い蓄積(肝細胞5の脂肪の>5%)を特徴とする組織病理学的変化の広いスペクトルを含み、単純な脂肪症に典型的に見られる脂質蓄積を通じて進行する可能性があり、線維症、肝硬変の発症につながる可能性がある。 肝細胞癌、肝不全5、6、7、8.その増加の有病率のために, MAFLDは、肝移植の最初の徴候と肝細胞癌の主要な原因になると予想されます9.
それは、良性または軽度の形態の脂肪肝疾患として考えられてきましたが、肝性脂肪症は、実際にはMAFLD10の代謝キーです。異なる代謝経路は、肝臓における脂質蓄積の影響を受け、脂質合成、輸出、代謝10を含むがこれらに限定されない。インスリン抵抗性、酸化ストレス、網状ストレス、および細胞機能障害は、肝脂肪毒性11,12に強く関連している。一方、脂肪肝細胞は、活性酸素種の標的であり、代謝産物を過酸化脂質としてレンダリングし、タンパク質カルボニル、および核酸の付加物を13にする。細胞レベルでは、脂肪肝細胞はミトコンドリア損傷14、細胞老化15、アポトーシス16、ピロプトーシス12、およびオートファジア17を受ける可能性がある。
肝細胞は、幅広い分子の代謝、解毒、合成に大きな責任を負います。これらの機能の多くは、脂肪症で観察される脂質蓄積によって損なわれる可能性があります。.したがって、ステアトーシスの正確な評価を可能にする再現性のあるツールを持つことは非常に重要です。この意味で、in vitroモデルは容易に適用可能で、非常に再現可能である。体外のステアトーシスは、異なる目標16、18、19で使用されています。HepG2細胞は肝細胞細胞株として広く用いられている。それは、文化が容易で、よく特徴づけられるなどの利点を有する。おそらく、HepG2細胞の唯一の欠点は、発がん性細胞株であるという事実であるため、結果を分析する際に考慮する必要があります。ここで、細胞培養において広く用いられている脂肪酸の混合物の適用:パルミチン酸(PA)およびオレイン酸(OA)が示されている。PA と OA の両方が文化20で異なる結果を提供します。PA(C 16:0)は、ダイエット16から得られる最も一般的な飽和脂肪酸である。PAは、NAFLD21の開発における重要なステップである脱ノボリポジェネシスのバイオマーカーと考えられています。PAは毒性が高い22であることが示されている。したがって、体外でステアトーシスを誘発することは推奨されない場合があります。OA(C 18:1)は、一価不飽和脂肪酸である。PAとは対照的に、OAは、PA12に対抗することができる抗炎症および抗酸化特性を有することが示唆されている。PAとOAの両方が、健康または疾患16の状態に関係なく、トリグリセリドに存在する主脂肪酸である。表1は、PA、OA、およびそれらの混合物を含む肝細胞培養の例と、報告された結果が12、23、24、25、26、27である。他の脂肪酸は、ステアリン酸(C 18:0)28、29、30、リノール酸(C 18:1)28、30、31及びそのコンジュゲート(CLA)28、32、パルミトール酸(C16:1)29を含む肝細胞培養にも使用されている。しかし、その使用は、おそらく彼らの肝の豊富さがPAおよびOA16よりも低いため、文献で最も頻繁に報告される。
併用すると、両方の脂肪酸はインビトロで脂肪化に似ており、細胞の増殖を提供し、対照条件と比較して細胞死が増加し、生存率が低い。これらの脂肪酸のそれぞれの塩が利用可能であり、同様に使用することができることを言及する価値があります。肝細胞培養における脂質過多量を評価する際の主な問題の1つは、毒性モデルと脂肪沈殿を最もよく表すモデルとの分化において与えられる。多くのモデルは、最初のケースで説明することができます。実際には、PAの単独使用はそれらの中で考慮されるかもしれないし、高い死亡率は最も明白な結果である12、16、23、24、25、26、27。OAの場合でも高用量の使用は、毒物学的モデルとしても考えることができます。ここに示すプロトコルは、他のモデルで観察されたものと比較して低い死亡率を示し、NAFLDで発生する進行性脂質蓄積と数日間に従うことを可能にするので、ステアトーシスの発達に従って高い。実験条件を通じて軽度および重度のステアトーシスを評価する可能性は、別の利点と考えられる。
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>脂肪酸</td>
			<td colspan="2">条件</td>
			<td colspan="2">結果</td>
			<td>参考</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">お父さん</td>
			<td colspan="2">濃度:200 μM</td>
			<td colspan="2">脂質蓄積</td>
			<td rowspan="3">ヤンら、201925.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">時間露光:24時間</td>
			<td colspan="2">肝細胞の損傷</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2"></td>
			<td colspan="2">トランスアミンデス標高</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">お父さん</td>
			<td colspan="2">濃度:50、100、200μM</td>
			<td colspan="2" rowspan="2">脂質蓄積</td>
			<td rowspan="2">Xingら, 201924.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">時間露光:24時間</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2">お父さん</td>
			<td colspan="2">濃度:250 μM、500 μM、750 μM、1,000 μM</td>
			<td colspan="2">脂質蓄積</td>
			<td rowspan="2">王ら, 202026.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">時間露光:24時間</td>
			<td colspan="2">細胞生存率の進行性の低下</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">OA/PAのミックス</td>
			<td colspan="2">濃度:1mM</td>
			<td colspan="2">脂質蓄積</td>
			<td rowspan="3">Xiaoらら、202027.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">時間露光:24時間</td>
			<td colspan="2">リポ毒性を報告しない</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">レート: 2OA:1PA</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="4">OA/PAのミックス</td>
			<td colspan="2">PAの200 μMおよび400 μMの最初の刺激、そしてOAの200 μMの第2の刺激</td>
			<td colspan="2">脂質蓄積。</td>
			<td rowspan="4">Zengら, 202012.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">濃度:400 μM PA:200 μM OA</td>
			<td colspan="2">PAによって誘発されたリポ毒性の証拠は、OAの刺激によって減少した。</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">レート: 2PA:1OA</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">時間露光:24時間</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">OA/PAのミックス</td>
			<td colspan="2">濃度:400 μM PA:200 μM OA</td>
			<td colspan="2" rowspan="3">脂質蓄積</td>
			<td rowspan="3">陳ら, 201823.</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">レート: 2PA:1OA</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">時間露光:24時間</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">OA/PAのミックス</td>
			<td colspan="2">濃度:50 μM</td>
			<td colspan="2">2種類のステアトーシスの生成:軽度のステアトーシスと 重度のステアトーシス。</td>
			<td rowspan="3">カンポスとグスマン 2021</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">レート: 2PA:1OA</td>
			<td colspan="2">脂質過負荷の慢性博覧をシミュレート</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">時間暴露:24時間、2日、3日、4日。</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
</tbody></table>表 1.肝細胞培養は、ステア原性の状態で。 表は、使用される脂肪酸の種類、維持された条件、および肝細胞培養における観察された結果を示す。PA:パルミチ酸。OA:オレイン酸。
最後に、このモデルは、脂肪、脂肪肝の研究だけでなく、脂肪のコンテキストで肝代謝、合成、および解毒経路にも適用されます。また、 インビトロ 誘発性ステアトーシスは、疾患の潜在的なマーカーおよび治療標的を同定するための証拠を提供するかもしれない。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Biosafety cabinet</td>
			<td>ESCO Airstream</td>
			<td>AC2-452+C2:C26</td>
			<td>Class II&#160;Type A2&#160;Biological Safety Cabinet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bottle top filter</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>430513</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, polystyrene, sterile. 1 filter/Bag. 0.22 &#956;m, 500 mL.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albimun (BSA)</td>
			<td>Gold Biotechnology, US</td>
			<td>A-421-10</td>
			<td>BSA Fatty Acid Free for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture media RPMI 1640</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>31800-022</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>A4766801</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemocytometer</td>
			<td>Marienfeld, DE</td>
			<td>640010</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepG2 cell line</td>
			<td>ATCC, US</td>
			<td>HB-8065</td>
			<td>Hepatocellular carcinoma human cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidified incubator</td>
			<td>Thermo Electronic Corporation,US</td>
			<td>Model: 3110</td>
			<td>Temperature (37 &#176;C &#177; 1 &#176;C), humidity (90% &#177; 5%) , CO2 (5% &#177; 1%)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope Eclipse</td>
			<td>NIKON, JPN</td>
			<td>Model: TE2000-S</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>I9030-4L</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O Kit</td>
			<td>Abcam, US</td>
			<td>ab150678</td>
			<td>Kit for histological visualization of neutral fat.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>P6148-500G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Antibiotics 10,000 U/mL Penicillin, 10,000 &#956;g/mL Streptomycin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Beckman, US</td>
			<td>Model: 360 PH/Temp/MV Meter</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>ThermoFisher-Gibco, US</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt, AUS</td>
			<td>86.1253.001</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 5 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological Pipettes</td>
			<td>Sarstedt, AUS</td>
			<td>&#160;86.1254.001</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 10 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>S5761-1KG</td>
			<td>Preparation of culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium oleate</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, US</td>
			<td>sc-215879A</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium palmitate</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology, US</td>
			<td>sc-215881</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syring filter</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>431219</td>
			<td>&#160;Non-pyrogenic, sterile, 28 mm, 0.2 &#956;m.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich, US</td>
			<td>T6146-25G</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 0.05% /EDTA 0.53 mM</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>25-052-Cl</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 well cell culture cluster</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>3524</td>
			<td>Flat bottom with lid. Tissue culture treated. Nonpyrogenic, polystyrene, sterile. 1/Pack.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well cell culture cluster</td>
			<td>Corning, US</td>
			<td>3599</td>
			<td>Flat bottom with lid. Tissue culture treated. Nonpyrogenic, polystyrene, sterile. 1/Pack.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a model of experimental steatosis in vitro: hepatocyte cell culture in lipid overload-conditioned medium

代謝機能障害関連脂肪肝疾患(MAFLD)は、以前は非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)として知られており、肥満、糖尿病2型、および脂質異常症との関係により、世界中で最も流行している肝疾患です。肝脂肪症は、肝臓の小板減少の蓄積、脂肪肝炎、線維症、および末期肝疾患で観察される炎症に先行する疾患の重要な特徴である。肝細胞の脂質蓄積は、異種生物および内因性分子の適切な代謝を妨げるだけでなく、疾患の進行につながる細胞プロセスを誘導する可能性がある。ステアトーシスの実験的研究は 生体内で行うことができるが、精間症の研究に 対するインビトロ アプローチは、異なる利点を有する補完的なツールである。脂質過負荷状態培地中の肝細胞培養は、酸化および網状ストレス、オートファジア、増殖、細胞死、細胞死などの脂質蓄積に関連する細胞プロセスの同定を可能にする肝脂肪症の研究のための優れた再現可能な選択肢であり、薬物の有効性、および毒物学的検査を含む他の多くの可能な用途の中で可能な他のアプリケーションの中で。ここでは、脂質過負荷状態培地における肝細胞培養の方法論を説明することを目的とした。ヘプG2細胞はパルミチン酸ナトリウム及びオレイン酸ナトリウムを用いてRMPI 1640培地で培養した。重要なことに、これら2つの脂質の比率は、疾患の間に肝臓で起こるように、細胞増殖および適度な死亡率を維持しながら、脂質液滴蓄積を支持するために重要である。方法論としては、脂質溶液ストックの調製から、混合物、培地への添加、および肝細胞培養が示される。このアプローチにより、油赤O染色によって容易に観察できる肝細胞中の脂質滴、ならびに増殖/死亡率の曲線を同定することができる。

すべてのウェルの表面上の発育を表示するステア原性培地で培養された肝細胞;しかし、脂肪肝細胞は、対照培地で培養された細胞と比較して低い増殖速度を示す。OAとPAの提案された比率および濃度は、培養中の細胞生存を保証する。24 ウェルプレートにウェルあたり 1 x 105 個 のセルを播種すると 、図 1に示すように最適な合流点が提供されます。
<p class="jo...

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A Model of Experimental Steatosis In Vitro: Hepatocyte Cell Culture in Lipid Overload-Conditioned Medium

このプロトコルは、肝細胞の脂質への過剰暴露によって産生される脂肪、生化学的、細胞変化をイン ビトロでステアトーシスおよび分子、生化学的、細胞変化を研究するためのツールとなるものである。

実験性脂肪化のモデル :脂質過負荷状態培地における肝細胞細胞培養

Metabolic dysfunction-associated fatty liver disease (MAFLD), previously known as non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), is the most prevalent liver ...

このプロトコルは、肝性、代謝、合成、およびステアトーシスの文脈における毒素化経路の研究に適用可能である。この方法の主な利点は、その再現性と結果を得るために必要な短い時間です。それは、軽度、および重度の2つのレベルのステアトーシスを提供しているという事実を追加します。インビトロ誘発性ステアトーシスは、疾患の診断のための潜在的なマーカーの同定のための証拠を提供するかもしれない, ならびに治療標的.この方法は、ステアトーシスの結果に適用されることを意図しています。しかし、肥満や脂質血症の間など、脂質過剰暴露の影響を受けるさまざまな細胞の広い範囲に調整することができる。標準 RPMI 1640 を準備します。10%の熱活性化FBS、およびペニシリンストレプトマイシン溶液の1%を含むRPMI 1640培地を補う。0.22マイクロメートルフィルターを使用して滅菌し、摂氏4度でサプリメントを保存します。パルミチンのストック溶液を調製するために、標準RPMI 1640にパルミテートの50ミリモル溶液を調製し、1%の脂質フリーBSAを補充した。0.22マイクロメートルフィルターを使用して約5〜10ミリリットルのストック液を殺菌し、最大1ヶ月間光から保護された摂氏4度で保管します。オレイン酸ストック溶液を調製するために、補充されたRPMI 1640にオレエートの50ミリモル溶液を調製する。0.22マイクロメートルフィルターを使用して、ストック液を殺菌します。マイナス20度で保存し、最大1ヶ月間光から保護します。以前に調製した在庫からステアトラゲン培地を調製するには、パルミエート1部と2部のオレイン酸の50マイクロモルミックスの100ミリメートルを調製します。穏やかなレベルの場合は、標準RPMI 1640の重度のレベルのためにパルミチン酸1つの部分と2つの部分オレエートの500マイクロモルミックスを注ぎます。0.22マイクロメートルフィルターを使用して滅菌します。摂氏4度で1週間まで保管してください。あるいは、遊離脂質アルブミンを用いてそれぞれの脂肪酸を用いてストック溶液を調製し、パルミチンまたはオレ酸塩を2ミリリットルの絶対エタノールに溶解し、次いで標準RPMI 1640の最終体積に混合する。標準RPMI 1640培地に保存して直接オレ化を溶解する。摂氏70度の水浴でインキュベートしてエタノールの蒸発を可能にし、十分に混ぜます。0.22マイクロメートルフィルターを使用して両方のストックソリューションを滅菌し、パルミテストック溶液を摂氏4度で保存します。そして、マイナス20°Cでストックソリューションをオレート。24ウェルプレートに1ウェルあたり0.1百万Hep G2細胞を座る。標準RPMI 1640を1ミリリットル加えます。摂氏37度、炭酸ガス5%を24時間事前にインキュベートし、細胞の付着を可能にします。前培養後、標準RPMI 1640培地を廃棄する。そして、ステアトゲン培地を追加します。上清を捨て、24時間ごとに新鮮なステア原性培地を追加します。生存率と形態評価を行うために、上清を捨て、0.05%トリプシンEDTAの500マイクロリットルを加えることによってウェルから細胞を取り外します。摂氏37度と炭酸ガス5%で5分間インキュベートします。マイクロチューブに再懸濁細胞を収集します。そして遠心分離機を300倍G.で、その上清を捨て、200マイクロリットルの標準RPMI 1640を加え、細胞を再懸濁する。新鮮なマイクロチューブに0.4%のトリパンブルー溶液の15マイクロリットルを加えます。前の細胞懸濁液の15マイクロリットルを加え、混合する。血球計で染色された細胞と非染色細胞を数え、生存率と死亡率を計算します。24ウェルプレートに細胞培養カバースリップを入れ、テキスト原稿に記載されているようにHep G2細胞をシードします。適切なインキュベーションの後、PBSの1ミリリットルで細胞を洗浄し、上清を捨てます。PBSで4%パラホルムアルデヒドの1ミリリットルと混合し、室温で1時間インキュベートします。余分なパラホルムアルデヒドを捨て、蒸留水を1ミリリットルで細胞をすすいでください。その後、70%イソプロパノールの1ミリリットルを加え、5分間インキュベートします。余分なイソプロパノールを捨て、オイルレッドO溶液を1ミリリットル加え、30分間インキュベートします。余分な油赤O溶液を捨て、蒸留水1ミリリットルですすいます。顕微鏡下の細胞を400倍の倍率で観察します。ウェルの完全な領域から10個の光学フィールドの写真をランダムに選択してキャプチャします。すべての井戸に対してイメージングを繰り返します。赤い染色領域の割合を評価するには、ImageJソフトウェアを開き、必要なファイルをインポートし、調整をクリックして、色のしきい値を使用して"ツールは、赤の色検出のための色合いパラメータを定義します。次に、画像の彩度と明るさを調整します。「粒子を分析」ツールを使用して、光学フィールドの完全な面積と染色面積を比較し、すべてのウェルの平均割合を計算します。24ウェルプレートのウェルあたり0.1万人の肝細胞を座席に置き、最適な合流を提供します。生存率は、培養の時間が増加するにつれて徐々に減少し、重度の断層化の4日間で最低の60%に達した。従って、ステア原性条件下で培養した肝細胞において死亡率が高かった。そして、それは脂質への暴露の時間とともに徐々に増加した。細胞数は増殖の結果として徐々に増加した。しかし、3日と4日で軽度の脊椎間症では増殖率が低かった。対照的に、重度のステアトーシスは、24時間による増殖の低下と関連していた。オイルレッドOを用いた染色細胞は、脂肪原性条件下で培養された細胞における脂質滴の少なくとも2倍の増加を実証した。細胞内脂肪は、脂肪原性培地における培養の暴露の時間に従って増加した。軽度の脂肪取りでは、脂質含量は2日目から増加し、重度の脂肪症では24時間から有意に高かった。細胞培養には以前の経験が必要です。このプロトコルを使用する前に、標準的な条件でHep G2細胞を培養することが有用である可能性があります。脂肪酸ストックの調製も重要なポイントです。パルミチ酸は室温で固体であり、管理する前に温める必要があります。この方法は、増殖、アポトーシス、オートファギア、酸化ストレス、薬理学的および毒性分析を含むが、これらに限定されない異なる経路の分子分析を可能にするべきである。

Research

JoVE Journal

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